全 文 ：一 仪洲 一 , 庆医科大学学报 2阅 5年第 30 卷第 ` 期 ( J o u m al of Cho n gq in g M de加 ! U n湘份勺 创” 5 .州 . 30 N .O 6)
文章编号 : 02 53 一 3 626 ( 2X() 5 ) 06 一 0 854 一 03
茅募总皂昔的含量测定
任凌燕 , 李惠芝 , 王继生 ,年宗荫
( 重庆医科大学药学系 , 重庆 4以X) 16)
【摘 要】目的 :建立茅毒总皂昔的含量测定方法 。 方法 :通过对样品采用不同溶剂及不同提取方法所得的提取液显色后 , 以
分光光度法测定总皂昔的含量 。 结果 :本法测定的线性范围为 2 一 17 6哪 ( r 二 0 . 9 7 ) ;平均回收率为 10 2
.
1%
,
RS D
二 2
.
82 %
(
n 二 6 ) ;样品以 70 % 乙醉回流提取所得的总皂昔含量最高 。 结论 : 该方法灵敏 、可靠 ,显色后的样品比较稳定 , 可用于茅毒药
材的质量控制及品质评价 。
【关扭词】茅毒 ;总皂昔 ;含量测定 ;分光光度法
【中国圈书分类法分类号】9R 27 . 2 【文献标识码】A [收稿 日期】20() 5 一以 一 1
C o n et n t d e t e rm in at io n o f T o t a l S a Po n in s f r o m R u b u s Pa vr if o liu s L
双E那 L i飞粼a n , e t a l
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n ht e二罗 fO 22 一 176此 ( r 二 0月 9 97 ) , an d ht e va e r ag e cer o v e口 w as 102 . 1% , RS wD as 2 . 82% ( n = 6 ) . hT e e o n t e n t Of t o alt s a po .
n in s w as h ig h e s t b y ht e m e ht od Of 7 0%
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茅毒为蔷薇科悬钩子属植物茅毒 ( Rub us aP 二 i -
fo il us L
.
) 的干燥全草 ,具有清热凉血 、止血 、散结止
痛 、利尿消肿等功效 。 本品含有皂昔 、糖 、酚性物质 、
糠质 、挥发油 、 微量元素等多种成分川 。 而近代药
理研究表明 ,茅幕水提物对于局灶性脑缺血具有预
防治疗作用 〔’ ] ;我们进一步研究发现其中总皂昔类
成分为治疗脑缺血作用的主要活性成分 。 目前已从
茅薄中分离出 2 种三菇类皂昔化合物 , 鉴定为 in ga
一 i e h ig o s id 。 r : 和 , a u v i s s im o s id e R . [ ’ ] , 但对其总皂
昔的含量测定还没有相关方法的研究 。 鉴于 目前尚
无茅毒皂昔类成分的法定对照品 , 我们选用了与茅
薄皂昔类成分基本母核结构接近的齐墩果酸为对照
品 ,采用分光光度法测定总皂昔含量 ,从而为茅毒品
质评价及其新药开发奠定基础 。
仪器 、材料和试剂
1
.
1 仪器
U v 一 25 01 ( CP ) S 紫外分光光度计 ( 日本岛津公司 ) 。
Sart
o
ir us 朋司iyt o AZX() 。 电子天平 ( 万分之一 ) 、 旋涡混合器
V o rt e x ( x w
一 8 0 A ) (江苏海门市麒麟医用仪器厂 ) 、 ZX 98 一 l
旋转薄膜蒸发仪 ( 上海惠工有限公司 ) 、 C5S 01 型超级恒温水
浴锅 (重庆市实验设备厂 ) 。
1
.
2 材料
茅萄全草药材样品由重庆市中药研究院生药室采集并
鉴定 ,齐墩果酸对照品 ( 中国药品生物制品鉴定所 ,批号 :
1 价 o 一 2X() 3以 ,供含量测定用 ) 。
1
.
3 试剂
香草醛 、 冰醋酸 、 高抓酸 、 醋酸乙醋 、 甲醇 、 乙醇 , 均为分
析纯 。
作者介绍 :任凌燕 ( 1978 一 ) , 女 , 硕士研究生 ,
主要研究方向 : 药物分析及新药开发 。
甚金项目 :重庆市科技攻关重大专项 ( 2砚X岭 一 肠 ) 。
2 方法与结果
茅毒总皂普的提取
乙醇回流提取 精密称取干燥的茅葛全草
,山2
DOI : 10. 13406 /j . cnki . cyxb. 2005. 06. 021
孟庆医科大学学报 2 0 5年第 30 卷第 6 期 ( J o u rn a l o f C h o n g q in g M e d ie a l U n iv e r s ity 20 5 . v o一加 N o . 6 ) 一 既 5 一
1.5 0 盯
0
.
7 50
AL”s
粗粉 4 . 0 9 , 置 2 5 0 m l 圆底烧瓶中 , 加 l o m l7 0% 乙
醇 ,水浴加热回流提取 h4 , 滤过 ,残渣加人 80 m l7 0%
乙醇继续回流 Z h ,滤过 ,合并两次滤液 , 减压浓缩至
无醇味 , 转移至分液漏斗中 , 用 石油醚 ( 6 0 一 9 0 ℃ )
萃取脱脂 ( 4 0 、 30 、 2 0m l ) 3 次 , 将下层浓缩定容至
5 0 m l
。 精密吸取 10 ml 于分液漏斗中 ,用水饱和的正
丁醇萃取 3 次 , 每次 10 ml , 静置 , 弃去水层 , 合并正
丁醇液 ,加 10 ml 正丁醇饱和的水洗涤 ,弃去水洗液 ,
将正丁醇溶液水浴减压蒸干 ,残渣用 甲醇溶解 ,定量
转移至 10 ml 容量瓶中 , 定容 ,摇匀 ;再精密吸取此溶
液 Zml 于 25 ml 容量瓶中 ,用甲醇定容至刻度 ,摇匀 ,
即得 6 . 4 m梦 ml 茅葛乙醇回流提取液 。
2
.
1
.
2 甲醇回流提取 精密称取干燥的茅幕全草
粗粉 4 . 0 9 ,置 2 5 o m l 圆底烧瓶中 ,加 l o m l 甲醇 ,水
浴加热回流提取 h4 ,滤过 ,残渣加人 80 ml 甲醇继续
回流 Zh , 滤过 ,合并两次滤液 ,滤液处理操作同 2 . 1 .
1 项下 , 即得 6 . 4 m岁ml 茅幕甲醇回流提取液 。
2
.
1
.
3 乙醇索氏提取 精密称取干燥的茅募全草
粗粉 4 . 0 9 , 置索氏提取器中 ,加 180 m 170 % 乙醇 , 回
流提取 h6 , 滤过 ,滤液处理操作同 2 . 1 . 1 项下 , 即得
6
.
4 m酬ml 茅葛乙醇索氏提取液 。
2
.
1
.
4 乙醇超声提取 精密称取干燥的茅墓全草
粗粉 4 . 0 9 ,置 2 5 0 m l 具塞三角瓶中 ,加 l o o m l7 0 % 乙
醇 ,超声提取 l卜, 滤过 ,残渣加人 80 m 170 % 乙醇继续
超声提取 l h , 滤过 ,合并两次滤液 ,滤液处理操作同
2
.
1
.
1项下 , 即得 6 . 4 m岁ml 茅墓乙醇超声提取液 。
2
.
2 总皂普的含量测定
2
.
2
.
1 对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照
品 1 . o m g , 置 25 ml 容量瓶中 ,用 甲醇溶解并稀释至
刻度 ,摇匀 ; 即得浓度为 0 . 4 m岁mI 的齐墩果酸对
照品溶液 。
2
.
2
.
2 测定波长的选择 分别精密吸取已知浓度
的齐墩果酸对照 品溶液 0 . 巧 ml 及样品乙醇回流提
取液 0 . s ml 于具塞试管中 ,水浴挥干溶剂 ,依次加人
0
.
2 m l 新配制的 5% 香草醛冰醋酸溶液 、 0 . s ml 高氯
酸 ,摇匀 , 于 60 ℃ 水浴加热 巧 m in ,取出 , 流水冷却中
止反应 ;加人 s ml 乙酸乙醋 ,摇匀 , 随行试剂作空 白 ,
于 4 0 0 一 80 0 n m 波长范围内扫描 ,结果见 图 l 。 齐墩
果酸对照品溶液和样品溶液与香草醛 一 高氯酸反应
生成的混合物的吸收光谱基本一致 , 齐墩果酸对照
品 5 4 7 n m 处有最大吸收 ,样品虽在 5 4 7 n m 处不是最
大吸收 , 但有强的吸收 , 故仍选择 5 4 7 n m 为测定波
长 ,测得的结果以齐墩果酸为基准计算总皂昔的含
6 0 0
.
0 8 0
.
0
W
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l
e , l g th (
n r , 1
)
图 l 吸收光谱图 1. 齐墩果酸 2 . 茅茸样品
2
.
2
.
3 标准曲线的制备 精密吸取齐墩 果酸对照
品溶液 ( 0 . 4 4 m酬 m l ) 0 . 0 0 、 0 . 0 5 、 0 . 1 、 0 . 2 、 0 . 3 、
0
.
4 ml 分别加人 6 支具塞试管中 , 即各试管中对照品
的量分别 为 0 . X() 、 0 . 0 2 2 、 0 . 0科 、 0 . 0 8 8 、 0 . 13 2 、
0
.
17 6 m g
, 水浴挥干溶剂后各依次加入 0 . Zml 新配
制的 5% 香草醛冰醋酸溶液 、 0 . s ml 高氯酸 ,摇匀 , 于
6 0℃ 水浴加热 巧 m in , 取出 , 流水冷却中止反应 ; 加
人 s m l 乙酸乙酷 , 摇匀 , 随行试剂作空 白 , 30 m in 后
于 5 4 7 n m 处测定吸光度 。 浓度 与吸光度的线性方
程为 : A = 4 0 . 5 3 C 一 0 . 0 15 7 3 , r = 0 . 9 9 9 7 ( n = 6 ) 。 结
果表明 :在 2 一 176 林g 范围内 , 齐墩 果酸对照 品显
色后的吸光度与浓度呈 良好线性关系 。
2
.
2
.
4 方法学考察 精密吸取齐墩果酸对照品溶液
( 0
.
4 4 m酬 m l ) 0 . 2 m l 于具塞试管中 ,按标准曲线法
显色 , 随行试剂作空 白 , 于 5 4 7 n m 波长处计时测定 ,
隔 s m in 测定一次吸光度值 , 共测定 85 m in , 结果见
表 1 , 对照品显色后的吸光度值在 30 一 6 0而 n 内稳
定 , RS D = 0 . 18% ( n = 7 ) 。 精密吸取齐墩果酸对照
品溶液 ( 0 . 4 m岁m l) 各 0 . Z ml , 共 5 份 , 按标准曲线
法进行测定 ,精密度 RS D 二 1 . 2 % 。 精密称取同一
产地药材粉末约 4 . 0 9 ,共 3 份 ,按 2 . 1 . 1项下乙醇回
流提取方法试验 ,精密吸取茅每样品溶液 0 . s ml , 按
标准曲线法测定吸光度 , 重现性 RS D 二 0 . 08 % ( n =
3 )
。 取已知含量的样品溶液 6 份 , 分别加人齐墩果
酸对照品溶液适 量 , 按标准曲线法 测定 , 结果见表
2
,其平均回收率为 10 2 . 1% , n s D = 2 . 5 2% ( n = 6 ) 。
2
.
2
.
5 茅墓总皂昔的含量测定 精密吸取茅墓 4 种
不同提取液 0 . s ml 分别于 5 支具塞试管中 , 按标准
曲线法测定吸光度 , 然后根据线性方程计算其总皂
昔含量 , 结果见表 3 ,结果表明 : 用 70 % 乙醇回流提
一 6岛 一 , 庆医科大学学报 2侧撼 年第加卷第 ` 期《 Jou m al of C ho n gq ign Mde 加 1 U n湘 sr 即 2侧竹 .丫劝1.肠 NO . ` }
取法的提取率明显高于其它 3 种提取法 。
3 讨 论
衰 1 称定性试验结果
时间 ( m i )n 吸收度 时间 ( m i n ) 吸收度
职洲602柳594738450678
l 0
15
0
.
55 3
0
.
5印
0
.
5 68
0
.
5 79
0
.
5以 )
0
.
5 98
0
.印 2
0
.以抖
0
.以抖
20534
衰 2 回收率试脸结果 ( n = 6)
编号 . 样品中总皂昔量 / m g
1 0
.侧刃 5
2 0
.以刃 5
3 0
. 以刃 5
4 0
.仪刃 5
5 0
.
(双 ) 5
6 0
. 以刃 5
加入量
/m g
0
.
0 13 2
0
.
0 13 2
0
.
0 2研
0
.
0 264
0
.
03 96
0
.
0 396
吸光度
0
.
4 84
测定的
量 / m g
0
.
0 74()
0
.
0 74 3
0
.
0 864
回收率
/%
102
.
3
104
.
5
茅幕为小灌木植物 , 药理试验表明茅毒总皂昔
是其抗脑缺血作用的主要有效部位 , 所以建立 以总
皂昔含量作为药材品质评价的一项指标 。 但 目前国
内尚无茅墓皂昔类成分的法定对照品 ,故选用了与
茅毒皂昔类成分基本母核结构接近的齐墩果酸为对
照品 ,采用分光光度法计算总皂昔含量 。 虽然测定
结果有一定出人 ,但由于它们的显色原理一致 ,在暂
无法定标准品的情况下 ,为了控制药材质量 , 仍然具
有一定的可行性 。
通过对茅葛采用不同溶剂及不同提取方法所得
的提取液显色后 , 以分光光度法测定吸光度并计算
总皂昔的含量 ,发现以 7 0% 乙醇回流提取所得的总
皂昔含量最高 。
总皂昔测定中 ,样品在显色后 so 一 60 im n 内稳
定 ,线性范围为 2 一 17 6此 ( r 二 0 . 9 997 ) ,精密度试
验的 RS D 二 1 , 2 % , 平均回收率为 102 . 1% , 表明以
上分光光度法精密度 、 重现性 、稳定性均较好 ,可 以
用于该药材的质量控制 。
0
.
0 867
0
.
102 0
0
.
10 15
9 8
.
1
9
.
2 参 考 文 献
104
.
8
10 3
.
6
衰 3 不同提取方法茅碑总皂昔的含 t
茅每总皂昔的含量
【l] 江苏新医学院编 . 中药大辞典下册【M 〕. 上海 : 上海科
学技术出版社 , 一956 ; 265 2 .
〔2 ] 郑永玲 , 胡常林 . 茅幕提取物治疗局灶性脑缺血的实
验研究〔J1 . 中医药研究 , 20 2 ; 18 ( 2 ) : 37 一 3.9
【3 ] 王先荣 , 杜安全 , 王红萍 . 中药茅每化学成分的研究
[ J〕. 中国中药杂志 , 一卯4 ;一9 ( s ) : 456 一 457 .
ù
U`00,ù内JC86沙611141、-J气à了Où6.…o0nù甘
提取方法
甲醉回流提取
70% 乙醉回流提取
70 % 乙醉连续回流提取
70% 乙醇超生提取
1
.
3 7%
2
.
5 1%
1
.
8 5%
1
.
59%