全 文 ：［收稿日期］ 20141225(008)
［第一作者］ 张琳，硕士，从事中药质量标准研究，Tel:15822942635，E-mail:824570454@ qq． com
［通讯作者］ * 侯文彬，硕士生导师，研究员，从事天然药物研究，Tel:022-23006903，E-mail:houwb@ tjipr． com
毛郁金药材 HPLC指纹图谱
张琳1，周福军2，3，单淇2，3，郭青玲4，侯文彬2，3*
( 1. 天津医科大学，天津 300070; 2. 天津药物研究院，天津 300193;
3. 天津市中药质量控制技术工程实验室，天津 300193; 4. 天津中医药大学，天津 300193)
［摘要］ 目的:建立毛郁金药材的 HPLC 指纹图谱方法，为其质量控制提供依据。方法:采用 Agela Promosil C18色谱柱
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，以乙腈-0. 5%冰乙酸水为流动相进行梯度洗脱，流速 1. 0 mL·min －1，柱温 30 ℃，检测波长 250 nm，
分析时间 65 min。对 10 批毛郁金药材进行指纹图谱检测，并对不同产地的药材进行相似度评价和系统聚类分析。结果:建立
了毛郁金药材的 HPLC指纹图谱，确立了 12 个共有峰，相似度评价结果表明，各产地毛郁金药材相似度均 ＞ 0. 9。聚类系统分
析将来自不同产地的 10 批药材分为 3 类。结论:该方法简便，快速，准确，可作为毛郁金药材的质量控制参考。
［关键词］ 毛郁金;高效液相;指纹图谱;聚类分析
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2015)14-0062-04
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2015140062
HPLC Fingerprint of Curcumae Aromatic Radix ZHANG Lin1， ZHOU Fu-jun2，3， SHAN Qi2，3，
GUO Qing-ling4，HOU Wen-bin2，3* (1. Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China;2. Tianjin Institute
of Pharmaceutical Research，Tianjin 300193，China;3. Tianjin Engineering Laboratory for Quality Control
Technology of Chinese Herbal Medicines，Tianjin 300193，China;4. Tianjin University of Traditional Chinese
Medicine，Tianjin 300193，China)
［Abstract］ Objective:To establish the HPLC fingerprint method of Curcuma aromatica，for its quality
control． Method:Agela Promosil C18 (4. 6 mm ×250 mm，5 μm)column was used and eluted with the mobile
phase of acetonitrile-0. 5% acetic acid solution in a gradient mode，the flow rate was 1. 0 mL·min －1，column
temperature was 30 ℃ ． The detection wavelength was at 250 nm，the analytical time was 65 min． 10 batches of
Curcumae Aromatica Radix were detected，the similarity evaluation and system cluster analysis were conducted for
the Curcumae Aromatica Radix different origin． Result:The HPLC fingerprint of Curcumae Aromatica Radix was
established． 12 common peaks were indentified in the fingerprint． The similarity comparison indicated that the
similarities were all over 0. 90. The 10 batches of Curcumae Aromatica Radix from different regions can be divided
into 3 categories by the hierarchical cluster analysis． Conclusion:The method is simple，rapid，accurate and can
be used for quality control of Curcumae Aromatica Radix．
［Key words］ Curcumae Aromatica Radix;HPLC;fingerprint;cluster analysis
毛郁金是我国重要的民族药材之一，主要分布
于广西横县、灵山、南宁等地，具有破血行气、通经止
痛作用，主治胸肋刺痛、风湿肩背疼痛、跌扑肿痛
等［1］。现代药理实验证明，毛郁金还具有抗炎［2］、
免疫抑制［3］、镇痛止血［4］、抗氧化［5］等作用。毛郁
金根茎中主要含有姜黄素类［6］和挥发油类成分，此
外还包括树脂类、甾醇类、多肽类、三萜类等成分。
目前国内对毛郁金药材的研究仅为化学成分研
究，冯洁等［7］对毛郁金挥发油成分进行 GC-MS 分
析，黄艳等［8］通过多种色谱柱从毛郁金 95%乙醇
提取物中分离并鉴定了 17 种化合物，而未见其指
纹图谱研究。本实验通过对 10 批来源不同的毛
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郁金药材进行 HPLC 指纹图谱分析，以期整体、全
面地控制毛郁金药材的质量，为今后其开发利用
提供科学依据。
1 材料
P680 型高效液相色谱仪，(包括 P680 型输液
泵、ASI-100 型自动进样器、柱温箱及紫外检测器，
chromeleon色谱工作站，美国戴安)。BK-240A 型超
声波清洗机(巴克超声波科技集团有限公司)，
BP211 型电子分析天平(德国赛多利斯)。莪术二
酮对照品(成都普菲德生物技术有限公司，批号
130713)，莪术二醇、原莪术醇对照品均为自制，所
有对照品纯度均 ＞ 98%。乙腈(美国 Fisher 化学试
剂公司，色谱纯)，冰乙酸(天津市康科德科技有限
公司，分析纯)，甲醇(天津市康科德科技有限公司，
分析纯)，水为纯净水(杭州娃哈哈集团限公司)。
10 批毛郁金药材产地见表 1。所有药材均经天津药
物研究院中药部侯文彬研究员鉴定为姜科植物毛郁
金 Curcuma aromatica的干燥根茎。
表 1 毛郁金药材来源
Table 1 Origins of Curcuma Aromatica Radix
No． 产地 No． 产地
S1 广西横县
S2 广西桂林
S3 湖北黄冈
S4 广西桂林
S5 湖南新田
S6 广西横县
S7 广西桂林
S8 湖北黄冈
S9 湖北黄冈
S10 湖北黄冈
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 采用 Agela Promosil C18色谱柱
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm)，检测波长 250 nm，进样
量 20 μL，柱温 30 ℃，流速 1. 0 mL·min －1，流动相
乙腈(A)-0. 5%冰乙酸水(B)梯度洗脱(0 ～ 50 min，
15% ～ 85% A;50 ～ 50. 1 min，85% ～ 15% A;
50. 1 ～ 65 min，15%A)。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液 精密称取莪术二酮、莪术二
醇、原莪术醇对照品适量，分别加甲醇制成0. 199 0
g·L －1的莪术二酮对照品溶液，0. 015 2 g·L －1的莪
术二醇对照品溶液，0. 029 5 g·L －1的原莪术醇对照
品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液 取毛郁金药材粉末约 0. 5 g，
精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，
密塞，称定质量，超声提取 30 min，放冷，再称定质
量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液用
0. 45 μm微孔滤膜滤过即得。
2. 3 方法学考察
2. 3. 1 精密度试验 取毛郁金(S1)供试品溶液，
连续进样 6 次，分别对共有峰的相对保留时间和相
对峰面积进行考察。结果表明，各共有峰的相对保
留时间的 RSD均 ＜ 1. 5%，相对峰面积的 RSD 均 ＜
3. 4%。表明该方法精密度良好。
2. 3. 2 重复性试验 取毛郁金(S1)药材样品 6
份，按 2. 2. 2 项下方法操作制备供试品溶液，进样分
析，测得各共有峰的相对保留时间的 RSD 均 ＜
1. 8%，相对峰面积的 RSD 均 ＜ 3. 8%。表明该方法
重复性良好。
2. 3. 3 稳定性试验 取毛郁金(S1)供试品溶液，分
别于 0，2，4，6，12，24 h 进行分析，考察其共有峰的相
对保留时间和相对峰面积。结果表明，各共有峰相对
保留时间的 RSD 均 ＜ 1. 6%，相对峰面积 RSD 均 ＜
3. 5%，表明供试品溶液在 24 h内基本稳定。
2. 4 毛郁金药材指纹图谱的建立［9-10］
2. 4. 1 毛郁金样品 HPLC 指纹图谱测定 按 2. 1 项
下色谱条件测定 10 批样品，根据检测结果建立毛郁
金药材的 HPLC指纹图谱，见图 1 ～ 4。以保留时间
9. 73 min的 1 号峰作为参照峰 S，共确立 12 个共有
峰，并对各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积进
行计算，其中各共有峰相对保留时间的 RSD 均 ＜
0. 15%，但各相对峰面积的 RSD 均较大，说明不同
产地的药材成分含量相差较大，结果见表 2，3。
图 1 毛郁金对照药材 HPLC指纹谱
Fig． 1 Reference fingerprint of Curcuma Aromatica Radix
图 2 莪术二酮对照品 HPLC
Fig． 2 HPLC chromatograms of cudione
2. 4. 2 相似度分析 将 10 批不同来源的毛郁金药
材的色谱数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系
统”(2004A)版相似度软件，以均值法生成对照指纹
图谱。10 批样品与对照指纹图谱相似度在0. 943 ～
0. 995，提示药材质量相对较稳定，结果见表 4。
2. 5 系统聚类分析 将不同来源的毛郁金 HPLC
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图 3 莪术二醇(1)，原莪术醇(2)对照品 HPLC
Fig． 3 HPLC chromatograms of aerugi-diol and procurcumenol
图 4 10 批毛郁金药材 HPLC指纹谱
Fig． 4 HPLC fingerprint of 10 batches of Curcuma Aromatica Radix
表 2 10 批药材共有峰相对保留时间
Table 2 Relative retention time of common peaks of 10 batches of Curcuma Aromatica Radix
No． 1(S) 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
S1 1. 000 0 1. 409 5 1. 494 9 1. 595 7 2. 523 7 3. 096 7 3. 252 1 3. 336 4 3. 459 9 3. 576 1 3. 853 9 4. 858 0
S2 1. 000 0 1. 409 0 1. 494 3 1. 595 1 2. 522 1 3. 094 6 3. 249 7 3. 335 0 3. 458 4 3. 573 5 3. 852 0 4. 856 1
S3 1. 000 0 1. 410 1 1. 495 4 1. 596 1 2. 523 1 3. 095 6 3. 249 7 3. 335 0 3. 457 3 3. 572 5 3. 851 0 4. 854 1
S4 1. 000 0 1. 410 1 1. 495 4 1. 594 0 2. 522 1 3. 094 6 3. 248 7 3. 334 0 3. 456 3 3. 572 5 3. 851 0 4. 855 1
S5 1. 000 0 1. 408 6 1. 494 9 1. 593 4 2. 520 5 3. 091 4 3. 246 4 3. 331 6 3. 453 8 3. 569 8 3. 848 0 4. 850 1
S6 1. 000 0 1. 410 1 1. 495 4 1. 594 0 2. 522 1 3. 094 6 3. 249 7 3. 334 0 3. 457 3 3. 572 5 3. 852 0 4. 855 1
S7 1. 000 0 1. 409 7 1. 494 9 1. 594 5 2. 520 5 3. 093 4 3. 247 4 3. 332 6 3. 456 9 3. 570 8 3. 849 1 4. 852 2
S8 1. 000 0 1. 410 5 1. 494 9 1. 596 7 2. 523 7 3. 098 8 3. 253 1 3. 338 5 3. 463 0 3. 576 1 3. 856 0 4. 862 1
S9 1. 000 0 1. 410 9 1. 495 4 1. 597 3 2. 525 2 3. 103 0 3. 256 4 3. 341 9 3. 466 5 3. 579 8 3. 859 9 4. 868 2
S10 1. 000 0 1. 411 3 1. 495 9 1. 599 0 2. 527 8 3. 106 2 3. 259 8 3. 345 4 3. 471 1 3. 583 5 3. 862 9 4. 872 2
表 3 10 批药材共有峰相对峰面积
Table 3 Relative peak area of common peaks of 10 batches of Curcuma Aromatica Radix
No． 1(S) 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
S1 1. 000 0 0. 396 0 0. 474 8 0. 154 2 0. 669 8 0. 100 5 1. 573 9 0. 879 2 0. 180 4 0. 301 1 0. 379 5 0. 225 4
S2 1. 000 0 0. 883 8 0. 789 1 0. 275 9 1. 098 9 0. 784 0 7. 741 5 3. 456 7 0. 290 1 1. 118 2 0. 987 4 0. 920 9
S3 1. 000 0 0. 437 7 0. 383 7 0. 145 9 0. 259 5 0. 106 2 3. 640 6 1. 230 8 0. 205 3 0. 160 2 0. 590 3 0. 364 3
S4 1. 000 0 0. 410 9 0. 447 1 0. 120 4 0. 487 1 0. 140 0 3. 708 7 1. 464 4 0. 205 7 0. 336 3 0. 593 2 0. 469 4
S5 1. 000 0 0. 436 0 0. 275 1 0. 169 5 0. 200 4 0. 067 3 1. 490 4 0. 705 1 0. 088 2 0. 111 5 0. 358 2 0. 156 4
S6 1. 000 0 0. 417 9 0. 332 8 0. 132 2 0. 285 7 0. 115 2 4. 465 8 1. 480 0 0. 393 9 0. 201 3 0. 601 4 0. 449 7
S7 1. 000 0 0. 457 8 0. 367 4 0. 158 8 0. 183 9 0. 071 9 1. 593 1 0. 718 1 0. 136 6 0. 116 2 0. 361 7 0. 166 5
S8 1. 000 0 0. 457 4 0. 346 6 0. 102 0 0. 152 3 0. 076 0 2. 609 4 0. 950 1 0. 185 8 0. 124 3 0. 418 6 0. 298 4
S9 1. 000 0 0. 479 9 0. 349 5 0. 086 8 0. 130 9 0. 093 9 2. 307 0 0. 841 1 0. 174 2 0. 075 1 0. 448 0 0. 387 9
S10 1. 000 0 0. 473 3 0. 341 3 0. 092 1 0. 131 4 0. 094 7 2. 510 2 0. 856 5 0. 189 3 0. 083 0 0. 487 2 0. 373 3
图谱中 12 个共有峰峰面积标准化组成 10 × 12 阶原
始数据矩阵，运用 SPSS 19. 0 软件，采用组间联接
法，利用 Euclidean距离为测度，进行系统聚类分析，
见图 5。根据聚类分析结果，可将 10 批毛郁金药材
分为 3 类，其中 S2，S3，S4，S6，S8，S9，S10 聚为Ⅰ类，
S5，S7 聚为Ⅱ类，S1 为Ⅲ类。
3 讨论
考察比较了甲醇，70%乙醇和 90%乙醇等不同
溶剂和超声、回流、冷浸等方法，其中以甲醇超声 30
min提取的样品色谱峰信息较丰富。分别考察了甲
醇-水、乙腈-水、甲醇-冰乙酸水、乙腈-冰乙酸水等流
动相系统，结果显示本实验采用的流动相具有较高
的分离度。对莪术二酮、莪术二醇、原莪术醇 3 种对
照品溶液在 200 ～ 400 nm 紫外波长进行扫描，发现
在 250 nm波长处均有吸收，综合考虑分离度和色谱
峰信息等方面，选择 250 nm作为检测波长。
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表 4 毛郁金药材指纹图谱相似度评价
Table 4 Similarity analysis of HPLC fingerprint of Curcuma Aromatica Radix
No． S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 对照
S1 1. 000 0. 883 0. 912 0. 933 0. 957 0. 894 0. 961 0. 931 0. 938 0. 929 0. 950
S2 0. 883 1. 000 0. 948 0. 946 0. 855 0. 944 0. 863 0. 929 0. 920 0. 924 0. 943
S3 0. 912 0. 948 1. 000 0. 991 0. 945 0. 994 0. 949 0. 988 0. 984 0. 990 0. 992
S4 0. 933 0. 946 0. 991 1. 000 0. 947 0. 990 0. 956 0. 985 0. 980 0. 981 0. 993
S5 0. 957 0. 855 0. 945 0. 947 1. 000 0. 925 0. 994 0. 964 0. 970 0. 968 0. 970
S6 0. 894 0. 944 0. 994 0. 990 0. 925 1. 000 0. 935 0. 986 0. 974 0. 978 0. 985
S7 0. 961 0. 863 0. 949 0. 956 0. 994 0. 935 1. 000 0. 972 0. 979 0. 972 0. 976
S8 0. 931 0. 929 0. 988 0. 985 0. 964 0. 986 0. 972 1. 000 0. 991 0. 990 0. 995
S9 0. 938 0. 920 0. 984 0. 980 0. 970 0. 974 0. 979 0. 991 1. 000 0. 997 0. 994
S10 0. 929 0. 924 0. 990 0. 981 0. 968 0. 978 0. 972 0. 990 0. 997 1. 000 0. 994
对照 0. 950 0. 943 0. 992 0. 993 0. 970 0. 985 0. 976 0. 995 0. 994 0. 994 1. 000
图 5 10 批药材指纹图谱聚类分析
Fig． 5 Clustering analysis of fingerprint of 10 batches of Curcuma
Aromatica Radix
建立了毛郁金药材的指纹图谱，该方法具有良
好的精密度、重复性和稳定性，确立了 12 个共有峰，
其中可用对照品确定的有 3 个，分别为莪术二醇，莪
术二酮，原莪术醇，但其他共有峰的归属还有待进一
步研究。
相似度评价结果表明，10 批药材相似度均 ＞
0. 9，表明不同产地的毛郁金药材质量比较稳定，但
从相对峰面积比来看，药材成分含量差异较大。采
用聚类分析将不同来源的毛郁金药材分为 3 类，发
现分类结果与产地分布并不完全吻合，结合相似度
评价结果说明来源不同的毛郁金药材的质量存在一
定差异，可能还和药材的种植、采收和贮藏等因素有
关，需进一步进行考察研究。
［参考文献］
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［责任编辑 顾雪竹］
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