全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2011 年
收稿日期：2010－09－26
作者简介：王 斌（1972－），男，江苏宿迁人，副教授，硕士，主要研究方向为分析化学，（电话）13357842581（电子信箱）wangbin578898＠126．com。
第 50 卷第 9 期
2011年 5 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 50 No.9
May．，2011
凤尾草，又称鸡爪草，属凤尾蕨科的小型陆生
蕨，叶二型；不育叶为一回羽状复叶，羽片条形，上
部羽片基部下延，在中轴两侧形成狭翅，下部羽片
常有二至三叉，形似凤尾，故而得名［1］。 凤尾草中全
草含黄酮类、甾醇、氨基酸、内酯或酯类等生理活性
成分，全草都可以供药用，它具有清热利湿、凉血解
毒、强筋活络等功效［2］，能增强免疫力、延缓衰老等，
无论在临床应用还是保健类食品开发方面都有广
阔的开发前景。 因此对凤尾草的研究和开发成为国
内外目前的研究热点之一［3－5］。本试验从凤尾草黄酮
类化合物提取影响因素方面进行了研究，为凤尾草
的深入研究和天然药物的开发提供了一定的理论
依据。
1 材料与方法
1．1 材料
凤尾草：采摘于江苏省宿迁学院院内墙角下。
1．2 主要试剂和仪器
0.01 mol/L 盐酸、60%甲醇、60%（体积分数，下
同）乙醇、60%（体积分数，下同）丙酮，均为分析纯，
纯品由国药集团化学试剂有限公司（上海）生产；芦
丁标准品，由中国药品生物制品检定所提供。
UV－2102C 型紫外－可见分光光度计 ［尤尼柯
（上海）仪器有限公司］；FA2004N 电子分析天平（上
海精密科学仪器有限公司）；KQ－250B 型超声波清
洗器；温控水浴锅；大孔吸附树脂。
1．3 方法
1．3．1 黄酮类化合物的提取 称取 10.00 g 凤尾草
样品，研磨破碎后，用 60%甲醇按 1∶10（m ／ V，g∶mL）
的比例混合均匀，于 40℃下提取 60 min 后，在 40℃
的水浴中超声波辅助提取 3 次，每次 10 min，抽滤。
收集到的滤液于 40℃下减压浓缩得到红色黏稠的
粗提液，经树脂纯化、洗脱后，再次进行减压浓缩即
得到黄酮类化合物浓缩液［6］，将浓缩液用 0.01 mol/L
超声波辅助法提取凤尾草中黄酮类化合物的
影响因素研究
王 斌 1，徐守霞2
（1．宿迁学院计算机科学系，江苏 宿迁 223800；2．宿迁高等师范学校生物教研室，江苏 宿迁 223800）
摘要：采用超声波辅助法提取了凤尾草中的黄酮类化合物，研究了影响凤尾草黄酮类化合物提取的多种
因素。试验结果表明，在提取温度为 40℃，提取时间为 40 min 且用 60%（体积分数，下同）甲醇作为提取剂
时提取率最高。
关键词：凤尾草；黄酮类化合物；影响因素
中图分类号：R284．2 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2011）09－1878-02
Study on Influencing Factors of Ultrasonic Extraction of Flavonoids from
Pteris multifida
WANG Bin1，XU Shou－xia2
（1． Department of Computer Science，Suqian College，Suqian 223800，Jiangsu，China；
2． Department of Biology，Suqian Higher Normal School，Suqian 223800，Jiangsu，China）
Abstract： Ultrasonic method was used to extract flavonoids from Pteris multifida； and the influencing factors of extraction
were analyzed． The test result showed that the maximum extraction effect was achieved when extracting for 40 min under 40 ℃ using
60%（V/V，the same below） methanol as the extraction agent．
Key words： Pteris multifida； flavonoids； influencing factors
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2011.09.022
第 9 期
盐酸和 60％甲醇配成 pH 值为 3．0 的备用液， 摇匀
供分析试验用。
1．3．2 黄酮类化合物含量的测定 芦丁标准储备
液：称取 0．010 0 g 芦丁标准品，置于 50 mL 的容量
瓶中， 加 0.01 mol/L 盐酸和 60％甲醇使其溶解 ［7，8］，
调节 pH值为 3．0并稀释至刻度，摇匀备用。 分别移
取 1．0、1．5、2．0、2．5、3．0、3．5 mL 的芦丁标准储备液，
于 10mL 容量瓶中，定容。 在波长 520 nm 处分别测
定其吸光度，结果见图 1。准确吸取待测凤尾草的提
取液 2．0 mL 定容至 50 mL。 在波长 520 nm 处测其
吸光度。 由标准曲线回归方程计算出凤尾草中黄酮
类化合物的浓度，根据稀释倍数计算出凤尾草中黄
酮类化合物的总含量［9，10］。
2 结果与分析
2．1 凤尾草黄酮类化合物的光谱特性
由吸收光谱图 2 可知，凤尾草黄酮类化合物在
400～700 nm 之间有一最大吸收峰，该最大吸收峰峰
值出现在 520 nm 处。 由于凤尾草黄酮类化合物对
酸度很敏感， 不同酸度会导致其最大吸收峰的移
动 ［11］，因此以下各试验要在相同的条件下，选择其
对应的最大吸收峰进行测定。
2．2 提取剂对凤尾草黄酮类化合物提取率的影响
称取 3 份 5．00 g 的凤尾草样品，分别以 60%甲
醇、60%乙醇、60%丙酮为提取剂定容至 50 mL，其中
加入 0.01 mol/L 盐酸调节 pH值为 3．0。 按上述凤尾
草提取剂的制取方法提取凤尾草液。各取 0．1 mL测
其吸光度，计算提取率。 不同提取剂对凤尾草黄酮
类化合物提取率的影响见表 1。表 1表明，采用 60%
甲醇作为提取剂，其提取效果均与 60%乙醇、60%丙
酮作为提取剂差异显著，采用甲醇为提取剂提取率
最高。 因此，选择 60%甲醇作为提取剂。
2．3 提取温度对凤尾草黄酮类化合物提取率的影
响
称取 6 份 5．00 g 样品研磨后，分别以 60%甲醇
为溶剂定容至 50 mL， 其中加入 0.01 mol/L 盐酸调
节 pH 值为 3．0，于 40℃下提取 60 min 后，再分别在
20、30、40、50、60、70℃水浴中超声波辅助提取 3 次，
每次 10 min，合并滤液，得凤尾草提取液。 测定并计
算提取率。 不同提取温度对凤尾草黄酮类化合物提
取率的影响见图 3。由图 3可见，黄酮类化合物的提
取率随提取温度的升高总体呈下降趋势，但以提取
温度为 40℃时最高。 另在试验中观察到，当提取温
度分别为 50℃和 60℃时，凤尾草提取液中出现白色
絮状沉淀，且甲醇的沸点为 64～65℃，在提取温度为
60℃时甲醇会大量挥发。分析结果表明，20、30、40℃
处理间差异不显著， 而 50、60℃处理与 20、30、40℃
处理差异显著。 故选择提取温度为 40℃。
2．4 提取时间对黄酮类化合物提取率的影响
称取 4 份 5．00 g 样品，都以 60%丙酮为提取剂
定容至 50 mL，其中加入 0.01 mol/L 盐酸调节 pH 值
为 3．0，40℃分别提取 20、40、60、80 min。各取 0．1 mL
测其吸光度，计算提取率。
由表 2 可见，随提取时间的增加，黄酮类化合
物的提取率呈先增大后减小的趋势，其中提取时间
约为 40 min 时提取率最大。 据报道，超声波可缩短
提取时间，提高提取率，但其在一定频率和功率下
也可使有机大分子降解［12］。 可以推断，在频率24 kHz
1.0
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0
吸
光
度
（ A
）
0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08
浓度//mg/mL
图 1 芦丁标准储备液的标准曲线
y=12.213 0x+0.072 3
r=0.999 4
图 2 凤尾草黄酮类化合物的紫外可见吸收光谱图
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0
吸
光
度
（ A
）
400 500 600 700
波长//nm
平均值
95．57
87．90
45．95
表 1 不同提取剂对凤尾草黄酮类化合物提取率的影响
60%甲醇
60%乙醇
60%丙酮
重复 1
95．23
87．51
45．76
重复 2
95．45
88．06
45．52
重复 3
96．02
88．13
46．57
提取率//%
图 3 不同提取温度对凤尾草黄酮类化合物提取率的影响
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
黄
酮
类
化
合
物
提
取
率
//%
0 20 30 40 50 60 70
提取温度//℃
（下转第 1883页）
王 斌等：超声波辅助法提取凤尾草中黄酮类化合物的影响因素研究 1879
第 9 期
（责任编辑 田宇曦）
时过长时间的超声波处理将导致黄酮类化合物的
分解。 因此，确定提取时间约为 40 min。
2．5 样品分析
精密称取 10．00 g凤尾草鲜草，按前述方法制备
样品溶液，在波长 520 nm 处测其吸光度，分析结果
凤尾草中黄酮类化合物的含量为 1．863 2 mg ／ g。
3 结论
通过试验得知，超声波辅助提取凤尾草中的黄
酮类化合物的最佳条件为：60%甲醇为提取剂、pH
值为 3．0 的酸性条件、提取时间为 40 min、提取温度
为 40℃、超声次数为 3次、每次 10 min。 凤尾草中含
有丰富的黄酮类化合物， 用超声波辅助提取时间
短，原料利用率高，是一种值得采用的方法。
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进展，2006，6（5）：11－13．
平均值
33.16
39.01
35.77
32.23
表 2 不同提取时间对凤尾草黄酮类化合物提取率的影响
重复 1
33.95
38.44
36.44
32.35
重复 2
34.03
39.91
35.98
31.51
重复 3
31.51
38.67
34.89
32.84
提取率//%提取时间
min
20
40
60
80
（上接第 1879页）
（责任编辑 王晓芳）
户进行防御，提高了系统的安全性。 在页面设计的
过程中，用到 JS（JavaScript）等相关技术，对用户输
入的数据进行合法性验证， 减轻服务器的处理压
力。 整个系统设计过程中，考虑了用户使用和操作
的方便性，报表输出后也方便存储和修改。
经过测试和分析，系统具有以下两个方面的优
点：①用于湖北省莲藕施肥推荐咨询，针对性和实
用性强。 ②用户只需提供土壤养分测试值、莲藕品
种、产量潜力和收获类型等信息，而后 3 个参数农
户可自行获得或选择， 只要对土壤养分进行测试，
就可得到相应的施肥推荐，体现了系统参数易得的
优点。
虽然经过精心设计与开发，但因时间及知识面
原因，系统仍存在一些缺点和不足，比如批量处理
时，文件格式有较严格的要求，可能会给用户带来
一定的麻烦； 此外系统的健壮性还需要进一步改
善，数据库操作部分还需要进一步优化设计。 随着
研究范围的扩大和研究技术的不断完善，如果结合
专家知识库和 GIS 最新研究成果，将系统开发成基
于 GIS 的适用于全国不同莲藕产区的施肥推荐专
家咨询系统，将具有更高的使用价值和商业价值［12］。
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