全 文 ：· 研究与交流 ·
　2008年第32卷　第3期　第 132　 页　 药学进展
132　 　2008, Vol.32 , No.3　
　 ProgressinPharmaceuticalSciences　
[接受日期 ] 　2007-12-28
[基金项目 ] 　国家十一五科技支撑计划项目(2006BAI08B04-
01);国家 973计划中医理论专项(2005CB523503)
＊通讯作者:　罗国安 ,教授;
研究方向:　药物分析和中药质量控制;
Tel:010-62772265;　E-mail:Luoga@mail.tsinghua.edu.com
豨莶液的定性定量测定方法
吕琳昂 1, 2 , 　胡志方1 , 　王义明 2 , 　罗国安 2＊
(1.江西中医学院药学系 ,江西 南昌 330004;2.清华大学分析中心 ,北京 100084)
[摘要 ] 　目的:建立控制豨莶液质量的方法。方法:采用 HPLC法定量测定豨莶液中的奇任醇含量。色谱条件:色谱
柱为 AlsphereODS(4.6 mm×250 mm, 5 μm), 流动相为乙腈-水-醋酸-三乙胺(25∶75∶0.1∶0.2), 流速为 1.0
mL/min,检测波长为 215nm,进样量为 10μL,柱温为 20℃。定性鉴别采用薄层色谱法。结果:在本色谱条件下, 奇任
醇在 0.4168～ 1.6672μg范围内呈良好的线性关系。平均回收率为 99.78 %(RSD=1.51 %, n=6)。薄层色谱中豨
莶草的色谱斑点清晰 、无干扰。结论:本法定性定量结合 ,准确可靠, 重现性好 ,快速简便 ,可用于豨莶液的质量控制。
[关键词 ] 　豨莶液;测定方法;高效液相色谱法;薄层色谱法;奇任醇;质量控制
[中图分类号 ] 　R917　　[文献标识码 ] 　A　　[文章编号 ] 1001-5094(2008)03-0132-03
TheMethodofQualityControlforAFormulationof
TraditionalChineseMedicineXixianYe
L Lin-ang1, 2 , 　HUZhi-fang1 , 　WANGYi-ming2 , 　LUOGuo-an2
(1.DepartmentofPharmacy, JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedinice, Nanchang330004,
China;2AnalysisCenter, TsinghuaUniversity, Beijing100084, China)
[ Abstract]　Objective:ToestablishamethodofcontrolingthequalityforXixianYethatisaformu-
lationofTraditionalChineseMedicinemadeofHerbaSiegesbeckiae.Methods:HPLCwasadoptedfor
determiningtheKirenolcontentofthisformulation, inwhichAlsphereODSC18 column(4.6 mm×250
mm, 5 μm)andacetonitrile-water-aceticacid-triethylamine(25∶75∶0.1∶0.2)wereusedasthemobile
phaseataflowrateof1.0 mL/min, withadetectionwavelengthof215 nmandainjectionvolumeof
10μLandcolumntemperatureof20 ℃.Moreover, TLCwasadoptedforqualitativeidentificationof
XixianYe.Results:Underthesechromatographicconditions, agoodlinearityrelationshipwiththe
peakareaswasexhibited(r=0.999 5)whilethesamplesizeofKirenolwasintherangeof0.416 8 ～
1.667 2μg.TheaveragerecoveryofKirenolwas99.78% (RSD=1.51%, n=6).Andalegiblespot
ofHerbaSiegesbeckiaewasgotbyTLC.Conclusion:Thismethodisaccurateandreliable.Itcanefec-
tivelycontrolthequalityoftheChineseTraditionalMedicineFormulation———XixianYe.
[ Keywords]　XixianYe;HerbaSiegesbeckiae;Kirenol;RP-HPLC;TLC;Qualitycontrol
　　豨莶液由豨莶草单味药加工制成 , 原方收载于
1991年 《卫生部药品标准 》中药成方制剂第二册 ,
具有祛风除湿的作用 ,临床上用于风湿痹痛 ,腰膝酸
软 ,四肢麻木。原标准中除了性状 、检查项外 ,尚未
任何鉴别 、含量测定项 ,为更好地控制该制剂质量 ,
本文采用奇任醇为对照品 ,用薄层层析法建立了定
性方法 ,采用反相高效液相色谱法建立了含量测定
方法 ,对药品的质量进行全面控制 。
　2008, Vol.32 , No.3　 133　
　 ProgressinPharmaceuticalSciences　 药学进展
· 研究与交流 ·
　2008年第32卷　第 3期　第 133　 页　
1　仪器与试药
SHIMADZU-LC-2010A高效液相色谱仪 (配有
SPD-M10A型二极管阵列检测器 、四元梯度泵 、在线
脱气装置 、自动进样器);CLASS-VP色谱工作站(日
本岛津科技有限公司);BP211D型电子天平(十万分
之一 , 德国 Sartorius公司);KQ-500E型超声波清洗
器(昆山市超声仪器有限公司);Mili-Q超纯水(法国
密理博贸易有限公司);Watreman0.45μm滤膜 。
奇任醇对照品(中国药品生物制品检定所 , 批
号:111726-200601, 供含量测定用);豨莶液样品
(天津中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂 ,
批号:20060819, 20061012, 20070220);乙腈(Fisher
公司 , 色谱纯);水为超纯水;冰醋酸 、三乙胺(北京
化工厂 ,分析纯)。
2　定性鉴别
取豨莶液 20 mL,置水浴上蒸至近干 ,加硅藻土
5 g搅拌均匀 ,加甲醇 10 mL,超声处理 15分钟 ,滤
过 ,滤液作为供试品溶液。另取奇任醇对照品 ,加甲
醇制成每 1mL含 0.1 mg的溶液 ,作为对照品溶液 。
参照薄层色谱法(《中国药典 》 2005年版一部附录
VIB)[ 1]试验 ,吸取上述供试品溶液 5 μL、对照品溶
液 2 μL,分别点于同一硅胶 G薄层板上 ,以三氯甲
烷-甲醇(4∶1)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 5%
香草醛硫酸溶液 ,加热至蓝紫色斑点显色清晰 。供
试品色谱中 ,在与对照品色谱相应的位置上 ,显相同
颜色的斑点 ,且无干扰 。结果见图 1。
1.奇任醇对照品溶液(referencesubstanceofKirenol);2.豨莶草药材
对照溶液(HerbaSiegesbeckiaemedicinalmaterial);3.豨莶液样品
(sampleof“XixianYe” 20060819);4.豨莶液样品(sampleof“Xixian
Ye” 20061012);5.豨莶液样品(sampleof“XixianYe” 20070220)
图 1　豨莶液薄层色谱图
(Figure1.TheTLCgraphof“XixianYe” andcontrol)
3　含量测定
参照文献 [ 2, 3] ,建立豨莶液的含量测定方法 。
3.1　色谱条件
色谱柱为 AlsphereODS色谱柱(4.6 mm×250
mm, 5μm), 流动相为乙腈-水-醋酸-三乙胺(25∶
75∶0.1∶0.2),流速为 1.0 mL/min,检测波长为 215
nm, 进样量为 10 μL,柱温为 20℃。
3.2　溶液的制备
3.2.1　对照品溶液的制备　精密称取在 110°C干
燥至恒重的奇任醇对照品约 10.42mg, 置 25mL量
瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇匀 , 精密量取 1 mL,置 5
mL量瓶中 ,加甲醇至刻度 , 摇匀 , 即得(每 1 mL中
含奇任醇 83.36 μg)。
3.2.2　供试品溶液的制备 　精密量取豨莶液 1
mL,置 10 mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,滤
过 ,取续滤液 ,即得 。
3.3　专属性试验
取奇任醇对照品溶液和供试品溶液各 10 μL,分
别进样 ,结果显示 ,本法专属性良好(见图 2、图 3)。
图 2　奇任醇对照品 HPLC图谱
(Figure2.TheHPLCchromatogramsofKirenol)
图 3　豨莶液样品 HPLC图谱
(Figure3.TheHPLCchromatogramsof“XixianYe”)
· 新药介绍 ·
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134　 　2008, Vol.32 , No.3　
　 ProgressinPharmaceuticalSciences　
3.4　线性关系的考察
分别精密吸取 “3.2.1”项下对照品溶液 5, 8,
10, 12, 15, 20μL溶液 , 注入高效液相色谱仪中 , 按
“3.1”项下色谱条件测定色谱峰面积 , 以奇任醇对照
品进样量(X)为横坐标 , 色谱峰面积值(Y)为纵坐
标 , 绘制标准曲线 , 经线性回归 ,得回归方程为:
Y=808 645.44X-62 213.65;r=0.999 5
由测定结果表明 ,当奇任醇对照品进样量在
0.416 8 ～ 1.667 2μg范围内时 ,线性关系良好 。
3.5　精密度试验
精密吸取豨莶液供试品溶液 10 μL进样 , 重复
进样 6次 , 按上述色谱条件测得奇任醇峰面积 ,
RSD为 1.52, 结果表明本方法的精密度良好 。
3.6　稳定性试验
精密吸取豨莶液供试品溶液 , 分别于 0、2、4、8、
16、24小时各进样 10 μL, 按上述色谱条件测得奇
任醇峰面积 , RSD为 1.78。结果表明 , 奇任醇峰面
积在 24小时内无明显变化 , 供试品溶液稳定性好。
3.7　重复性试验
取同一批号豨莶液 ,按含量测定项下方法操作 ,
平行试验 6次 ,测得的奇任醇含量的 RSD为 1.82,
表明本方法重现性好 ,在同一条件下 , 6次测得的结
果基本一致。
3.8　奇任醇回收率试验
采用加样回收法 ,精密称取已知含量的样品 6
份 , 分别精密添加一定量的奇任醇对照品溶液 , 按
“3.2.2”项下方法制成供试品溶液 , 各取 10 μL进
样 , 测定奇任醇含量 , 结果见表 1。实验结果表明 ,
本方法回收率好。
表 1　加样回收率试验结果(Table1.Resultsofrecoverytest)(n=6)
编号 取样量(mL)
样品中奇任醇含量
(mg/mL)
对照品加入量
(mg)
测得量
(mg/mL)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
1 0.5 0.4486 0.5002 0.950 100.18
2 0.5 0.4486 0.5002 0.946 99.53
3 0.5 0.4486 0.5002 0.943 98.82
4 0.5 0.4486 0.5002 0.936 97.50
5 0.5 0.4486 0.5002 0.957 101.56
6 0.5 0.4486 0.5002 0.954 101.11
99.78 1.51
3.9　样品测定
取豨莶液样品(3批), 按上述色谱条件和方法
测定奇任醇的含量 , 测定结果见表 2。
表 2　样品含量测定结果
(Table2.Resultsofcontentdetermination)(n=3)
批号 平均值(mg/g) RSD(%)
20060819 0.922 0.74
20061012 0.913 0.62
20070220 0.909 0.68
测试结果提示:三批样品中的奇任醇含量并无
明显差异。
4 　讨　论
在本研究中 , 以奇任醇为对照品 ,制剂的定性
鉴别采用薄层层析法;定量分析采用反相 HPLC法 ,
样品不需预处理 ,稀释后可直接进样。方法简便可
行 ,可有效地控制豨莶液的质量。在选择流动相时 ,
也曾用甲醇-水 、乙腈-水 、乙腈-水 -冰醋酸等作流
动相 ,但样品分离峰形均不及所选的乙腈-水-醋酸
-三乙胺(25∶75∶0.1∶0.2)流动相效果好。在优化
色谱保留时间时 ,奇任醇峰前一直有一干扰峰较难
分开 ,在保留时间 18 min时虽能将其分开 ,但精密
度不好 ,影响奇任醇峰的积分处理 。本实验所建立
的方法分离度好 ,符合方法学精密度要求。
[参考文献 ]
[ 1] 　国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[ M] .
北京:化学工业出版社 , 2005:255.
[ 2] 　程志红 , 俞桂新 , 王峥涛.豨莶草的质量标准研究
[ J] .中国中药杂志 , 2005, 30(4):257-259.
[ 3] 　俞桂新 , 金若敏 , 王峥涛 , 等.豨莶草抗血栓有效组分
成分分析 [ J] .中药材 , 2006, 29(3):235-237.