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香露兜组织培养及植株再生技术的研究
王景飞,潘 梅,黄 赛,吕德任,戚华沙
(海南省农业科学院热带园艺研究所,海南 海口 571100)
摘 要:以香露兜的地上茎作为外植体,通过比较不定芽诱导分化、增殖、生根及移栽试验,筛选出
组培和植株再生方法。结果表明,培养基 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,有利于香露兜芽诱导,
诱导率为 100%;MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+ 活性炭 0.5 g/L,为香露兜丛生芽增殖的最佳培
养基,增殖系数达 5.67;MS 基本培养基添加 NAA 0.5 mg/L,适宜诱导生根获得再生植株;生根苗移
栽于河沙+园土 +椰糠 (V1 ∶ V1 ∶ V1) 组合,成活率达 93.33%。
关键词:香露兜;组织培养;增殖;生根
露兜 (Pandanus amaryllifolius Roxb.),为露兜树
科露兜树属植物,地上茎分枝,有气根,叶长剑形,
长约 30…cm,宽约 1.5…cm,叶缘偶见微刺,叶尖刺稍
密,叶背面先端有微刺,叶鞘有窄白膜,花果未见 [1],
是观赏性极高的常绿草本植物。香露兜原产地为印尼
马古鲁群岛,主要分布在东半球热带和亚热带地区,
在我国海南部分市县有种植。香露兜是露兜树种中唯
一带有芳香气味的植物,叶片含有粽香味道,在海南
流行用其叶片做各种小吃,在东南亚不少国家用其叶
汁做糕点、饮料的香料 [2]。近年来有关香露兜植物的研
究主要是引种、资源开发评价和挥发油化学成分等 [2-4],
栽培繁殖方面在国内未见文献报道。本研究采用组培
快繁技术繁殖试管苗,从芽诱导、丛生芽增殖、生根
壮苗及移栽方面进行研究,筛选出适宜的快繁技术方
法,以期为香露兜的深入研究提供一定的理论参考和
技术支持。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验材料采自海南省农业科学院热带园艺研究所
苗圃。
1.2 试验方法
1.2.1 灭菌及接种方法… 选择生长旺盛、无病害的
健康植株,剥去节上叶片,切取地上茎作为外植体,
置于洗洁精溶液中摇荡 2…min,再用自来水冲洗;沥
干水后,在超净工作台上,先用75%的乙醇浸泡15…s,
无菌水冲洗 3次,再用 0.10% 升汞浸泡 14…min,无
第一作者简介:王景飞(1978-),男,助理园艺师;从事
植物组织培养技术及应用研究。
通讯作者:戚华沙,助理园艺师。E-mail:957620320@
qq.com
菌水冲洗 5次。每次取一块茎段,切除两边顶端,将
茎段放置在诱导培养基上。
1.2.2 培养条件… 在各个培养阶段中,培养物均置
于光照强度为 1…500 ~ 2…000…lx 日光灯照明条件下,
培养温度为 25℃,每天光照 10…h。
1.2.3 培养基配制方法… 以 MS为基本培养基,在
不同阶段培养基中添加不同的激素。所有培养基均含
有 30.0…g/L的食用白糖、0.6…g/L的卡拉胶,pH值
5.8。分装好的培养基经高温高压 (121℃,0.14…MPa)…
灭菌 20…min。
1.3 试验设计
1.3.1 6-BA 与 NAA 不同浓度配比对香露兜不定芽
诱导的影响… 以 MS 作为基础培养基,添加 6-BA…
0.5…mg/L、1.0…mg/L、1.5…mg/L与NAA…0.2…mg/L、…
0.5…mg/L 组成 6 种不同配比处理。每个处理接种…
10 袋,每袋接种 3个外植体,3次重复,定期观察生
长情况,30…d 后统计不定芽诱导情况。
1.3.2 不同种类细胞分裂素对香露兜丛生芽增殖
的影响… 以 MS 作为基础培养基,分别添加浓度为
2.0…mg/L 的 KT、TDZ、6-BA。每处理接种 10 袋,
每袋接种 3个外植体,3次重复,定期观察袋苗生长
情况,50…d 后统计增殖系数。
1.3.3 不同浓度 6-BA 对香露兜丛生芽增殖的影
响… 以MS作为基础培养基,附加NAA…0.2…mg/L、
活性炭 0.5… g/L,6-BA 设 7 个处理:0.5…mg/L、
1.0…mg/L、1.5…mg/L、2.0…mg/L、2.5…mg/L、…
3.0…mg/L、4.0…mg/L。每个处理接种 10 袋,每袋
接种 3个外植体,3次重复,定期观察袋苗生长情况,
50…d 后统计芽数。
1.3.4 不同生长素对香露兜生根的影响… 选取株高
约 3…cm的无根苗作为外植体,以MS为基础培养基,
设置 6种生长素处理:IBA…0.5…mg/L、1.0…mg/L、…
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中国园艺文摘 2016 年第 11 期
1.5…mg/L;NAA…0.5…mg/L、1.0…mg/L、1.5…mg/L,
每处理接种 10 袋,每袋 3株,3 次重复,培养 30…d
后统计生根生长状况。
1.3.5 组培苗的炼苗与移栽… 选取株高约 4 ~…
5… cm、根数 5 条以上的生根苗,放置拱棚内炼苗,…
7…d后开袋取出袋苗,用清水冲洗根部残留的培养基,
分别栽植于以下基质中:①河沙,②河沙 + 园土
(V1 ∶ V1),③河沙 +椰糠 (V1 ∶ V1),④河沙 +园土 +…
椰糠 (V1 ∶ V1 ∶ V1)。每种基质移栽 30 株,3 次重复,
种后浇透水,加盖透明塑料薄膜。植后前 5…d,于每
日 17 ∶ 00 ~次日 9 ∶ 00 掀开一半薄膜,覆盖前向叶面
喷水保持基质湿润,第6…d取下塑料薄膜,以后每2…d…
浇水 1次,培养 30…d 统计移栽苗生长状况。
1.4 统计方法
采用 IBM…SPSS…Statistics19 软件进行方差分析。
2 结果与分析
2.1 6-BA 与 NAA 不同浓度配比对香露兜芽诱
导的影响
从表 1可以看出,6-BA…0.5…mg/L、1.0…mg/L
与 NAA…0.2…mg/L 浓度配比芽诱导率最大,达
100%,芽分化数多,分别为2.25个和 2.52个,且叶
芽舒展有活力,呈绿色;其次为6-BA…1.5…mg/L与…
NAA…0.2…mg/L 浓度配比,诱导率为 96.67%,芽
分化数为 1.40 个;6-BA…0.5…mg/L、1.0…mg/L、
1.5…mg/L 与 NAA…0.5…mg/L 浓度配比诱导率介于
81.67% ~ 90.00% 之间,芽分化数为 1.22 ~ 1.57
个。经方差分析,6-BA…0.5…mg/L、1.0…mg/L、
1.5…mg/L 与 NAA…0.2…mg/L 浓度配比不定芽诱导
率表现差异不显著;6-BA…0.5…mg/L、1.0…mg/L
与 NAA…0.2…mg/L 组合诱导芽数表现差异不显著,
而 6-BA…1.0…mg/L 添加 NAA…0.2…mg/L 组合分
化芽数最多。因此,适合香露兜不定芽诱导的培养基
为MS+6-BA…1.0…mg/L+NAA…0.2…mg/L。
2.2 不同种类细胞分裂素对香露兜丛生芽增殖
的影响
由表 2可知,不同种类细胞分裂素对香露兜丛生
芽增殖影响不同,其中KT细胞分裂素对香露兜丛生
芽增殖的影响效果最差,长势弱,且芽细小,增殖系
数为 2.56;6-BA 细胞分裂素对香露兜丛生芽增殖
的影响效果最好,长势良好,芽壮且多,增殖系数
为 2.97;TDZ 细胞分裂素增殖系数为 2.88,其影响
效果介于KT与 6-BA之间。经方差分析,6-BA与
TDZ 增殖系数表现差异不显著,6-BA 细胞分裂素
处理增殖系数达最高值。因此,适合香露兜丛生芽增
殖的细胞分裂素为 6-BA。
表 1 6-BA 和 NAA 不同浓度配比对香露兜芽诱导的影响
调节剂 (mg/L)
芽诱导率 (%) 分化芽数 ( 个 ) 芽生长势
6-BA NAA
0.5 0.2 100±0…a 2.25±0.11…a 长势良好,芽抽长,呈绿色
1.0 0.2 100±0…a 2.52±0.19…a 长势良好,芽抽长,呈绿色
1.5 0.2 96.67±1.66…a 1.40±0.08…b 长势良好
0.5 0.5 88.33±1.66…b 1.57±0.13…b 长势一般
1.0 0.5 90.00±2.88…b 1.42±0.07…b 长势良好
1.5 0.5 81.67±1.66…c 1.22±0.11…b 长势一般
注:同列不同小写字母表示在 0.05 水平差异显著。下同。
表2 不同种类细胞分裂素对香露兜丛生芽增殖的影响
细胞分裂素
(2.0…mg/L)
起始芽数
(个 )
增殖后芽数
(个 )
增殖系数 生长状况
KT 90 230 2.56±0.03…b 长势弱,芽细小
TDZ 90 259 2.88±0.17…a 长势良好,芽壮
6-BA 90 267 2.97±0.11…a 长势良好,芽壮
2.3 不同浓度的 6-BA 对香露兜丛生芽增殖的
影响
由表 3 可知,以MS 为基础培养基,附加NAA…
0.2…mg/L 及活性炭 0.5…g/L,不同浓度 6-BA对香
露兜丛生芽增殖影响表现水平差异显著,其中单芽接
入培养基中培养 12…d后部分材料开始长出新芽,30…d…
后长出丛生芽增长明显,培养 50…d 的生长情况差异
明显。其中以 6-BA…3.0…mg/L 的增殖效果最好,
增殖系数达 5.67,生长状况长势良好,芽壮;6-BA
浓度在 0.5 ~ 3.0…mg/L 范围内,随着 6-BA 浓度
的增加丛生芽增殖系数逐渐增加,6-BA…4.0…mg/L
时增殖系数降低,可见在一定范围内,高浓度 6-BA
对香露兜丛生芽增殖有一定的促进作用。经方差分
析,6-BA…3.0…mg/L 对香露兜丛生芽增殖影响与
其他浓度处理存在显著差异,增殖系数达最高值。因
此,最合适香露兜丛生芽增殖培养基为MS+6-BA…
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3.0…mg/L+NAA…0.2…mg/L+ 活性炭 0.5…g/L。
表 3 不同浓度的 6-BA 对香露兜丛生芽增殖的影响
6-BA浓度
(mg/L)
起始芽数
( 个 )
增殖后芽数
( 个 )
增殖系数… 生长状况
0.5 90 234 2.60±0.25…c 长势一般
1.0 90 240 2.67±0.12…c 长势一般
1.5 90 258 2.87±0.13…c 长势一般
2.0 90 267 2.97±0.12…c 长势一般
2.5 90 383 4.26±0.20…b 长势良好,芽壮
3.0 90 510 5.67±0.74…a 长势良好,芽壮
4.0 90 318 3.53±0.18…bc 长势良好,芽壮
2.4 不同浓度的生长素对香露兜根系发育的影响
由表 4 可知,以MS 为基本培养基,添加NAA…
0.5、1.0和 1.5…mg/L生根率均达100%,NAA的3个
浓度处理水平差异不显著,添加 IBA…0.5、1.0 和
1.5…mg/L 生根率在 93.33% ~ 98.00% 之间,其中
IBA…0.5…mg/L 生根率为 93.33%,与 IBA…1.0 和…
1.5…mg/L 处理水平差异显著;从根数来看,NAA
生长素处理比 IBA 生长素处理得到的根数多,其中
NAA 在 0.5 ~ 1.5…mg/L 浓度范围内,随着 NAA
浓度的增加,根数从 6.10 条逐渐减少至 4.10 条,
IBA 在 0.5 ~ 1.5…mg/L 浓度范围内,随着 IBA 浓
度的增加,根数从 1.63 条逐渐增加至 2.70 条;从
最长根长来看,IBA 生长素处理比 NAA 生长素处
理的最长根长,其中 IBA…1.5…mg/L 处理的最长根
最长,达 3.81…cm,NAA…1.5…mg/L最长根最短,为…
1.22…cm;从株高来看,各处理株高均在 5.09…cm 以
上,其中 IBA…1.5…mg/L 株高最高,为 8.10… cm。
综合比较分析认为,适合香露兜根系发育的培养基为
MS+NAA…0.5…mg/L。
表 4 不同种类生长素对香露兜根系发育的影响
生长素种类
生根率 (%) 根数 ( 根 ) 最长根 (cm) 株高 (cm)
IBA(mg/L) NAA(mg/L)
0.5 0 93.33±2.21…b 1.63±0.07…e 3.17±0.14…b 7.27±0.12…b
1.0 0 96.67±0.45…a 1.97±0.08…e 3.54±0.13…ab 7.56±0.12…ab
1.5 0 98.00±0.99…a 2.70±0.17…d 3.81±0.13…a 8.10±0.28…a
0 0.5 100±0…a 6.10±0.45…a 2.65±0.27…c 6.55±0.27…c
0 1.0 100±0…a 5.16±0.19…b 1.58±0.81…d 5.12±0.06…d
0 1.5 100±0…a 4.10±0.30…c 1.22±0.06…d 5.09±0.03…d
2.5 组培苗的炼苗与移栽
在试验过程中发现,香露兜组培苗比较容易移
栽,4 种基质的成活率达 83.33% 以上,其中河沙 +
椰糠组合处理、河沙 +园土 +椰糠组合处理和河沙
处理成活率分别为 96.67%、93.33% 和 91.67%,三
者之间表现水平差异不显著,河沙 +园土组合处
理与其他处理表现水平差异显著,成活率最低,为
83.33%;从株高来看,河沙+园土组合处理的株高最
高,达9.24…cm,其次为河沙+园土+椰糠组合处理,
株高达 8.76…cm,两者之间表现水平差异不显著,河
沙处理与河沙+椰糠组合处理的株高分别为 6.94…cm…
和 6.91…cm,两者之间表现水平差异不显著(见表 5)。
综合比较分析认为,用河沙+园土+椰糠组合处理进
行移栽,既能保证植株的成活率,又有利于植株的生
长。因此,适合香露兜组培苗移栽的基质为河沙+园
土+椰糠组合处理。
表 5 不同基质对香露兜移栽的影响
基质 移栽株数 (株 ) 成活株数 ( 株 ) 成活率 (%) 株高 (cm)
河沙 90 82 91.11±1.66…a 6.94±0.49…b
河沙 +园土 (V1 ∶ V1) 90 75 83.33±1.66…b 9.24±0.12…a
河沙 +椰糠 (V1 ∶ V1) 90 87 96.67±1.66…a 6.91±0.51…b
河沙 +园土 +椰糠 (V1 ∶ V1 ∶ V1) 90 84 93.33±1.66…a 8.76±0.15…a
3 讨论
在本试验中,以MS为基本培养基,添加不同浓
度的 IBA和NAA生长素,作为研究香露兜根系发育
的影响因子。研究结果发现,单一的NAA有利于根
数的生长,单一的 IBA 有利于最长根长及株高的生
长,6个处理不能够均有利于根数、最长根长和株高
3个观测因子。在其他植物试验中有研究表明,不同
生长素组合有利于诱导生根壮苗。其中有戚华沙等人…
(下转 79 页)
…
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中国园艺文摘 2016 年第 11 期
气象因素等指标细化后进行调查分析,才能更准确地
显示出受冻害程度及原因。
参考文献:
[1] 郑双全,林向东,刘敬灶等.福建三明市城市绿道一、二
期园林绿化植物种类及生长状况分析[J].中国园艺文
摘,2016,32(9):71-75.
[2] 中国在线植物志.http://www.eflora.cn/.
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竹子种类及生长状况调查[J].世界竹藤通讯,2016,
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[5] 梁天干,黄克福,郑清芳等.福建竹类[M].福州:福建科
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[6] 王友国,段明革.南方园林植物冻害成因分析与防治研
究[J].农技服务,2009,26(3):55-56.
Investigation and analysis of freezing injury of the landscaping plants in the first and
second phases of urban greenways in Sanming City, Fujian
ZHENG Shuang-quan
Abstract: From January 21th to January 29th, 2016, the first and second phases of urban greenways in Sanming City suffered
extreme low temperature of -4.2℃ , and the landscaping plants freeze injury is serious. The common landscaping plants
are 328 species, belonging to 89 families. 38 species of the landscaping plants suffered different extent of frost damage,
especially the evergreen shrub and perennial herbaceous plants belong to Myrtaceae, Verbenaceae, Leguminosae, Gramineae,
Bignoniaceae got the serious harm. In order to reduce the economic losses, we should carefully choose and introduce the species,
timely prevent and treat, strictly manage the design and construction. This is the key to solve the damage.
Key words: green road; greening; plant; freezing; Sanming City
(上接 24 页)
…研究铁皮石斛用 IBA…1.5…mg/L与NAA…1.5…mg/L…
浓度组合时,平均根数达 4.50 条 / 株,平均每株的
根长为 2.65… cm,而且根系粗壮、发达 [5];李桂锋
等人研究铁皮石斛用单一的 NAA会使培养植物茎
秆粗壮、节间短,单一的 IBA 会使培养植物茎秆细
长,不太健康 [6];黄浩等人研究表明,野生红芽大戟
最佳的生根诱导激素配组为MET…1.4…mg/L+IBA…
0.2…mg/L,生根率、平均生根条数和平均根粗达最
大,分别为 89%、6.27 条和 0.78…mm,使用单一的
生长素对生根壮苗产生的效果差 [7]。关于调节复合生
长素是否对香露兜生根发育有利,仍需做进一步研究。
参考文献:
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卷)[M].北京:科学出版社,1992.
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组培苗生根诱导的影响[J].安徽农业科学,2007,35
(22):6813-6815.
Study on tissue culture and plantlet regeneration of Pandanus amaryllifolius Roxb.
WANG Jing-fei, PAN Mei, HUANG Sai, LV De-ren, QI Hua-sha
Abstract: Taking the stems of Pandanus amaryllifolius Roxb as explants, the experiments of adventitious bud induced
differentiation, propagation, rooting and transplanting were carried out in order to screen out the methods for tissue culture
and plantlet regeneration. The results showed that the best initiation medium for bud differentiation was MS + 6-BA
1.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L, and the induction rate achieved 100%. The best subculture medium for bud differentiation
was MS + 6-BA 3.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L + 0.5 g/L activated carbon, and the multiplication rate was 5.67. MS + NAA
0.5 mg/L was the best rooting medium. The survival rate of rooted plantlet transplanted to the substrate combined with
sand+ surface soil + cocopeat (V1 ∶ V1 ∶ V1) achieved 93.33%.
Key words: Pandanus amaryllifolius Roxb.; tissue culture; proliferation; rooting