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中
药
研
究
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覆盆子活性成分山奈酚的含量测定
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★ 谢一辉1＊＊ 丁妍华1 练波1 余斌2 樊浩1＊＊＊ (1．江西中医药大学 南昌 330004;2．江西省化学工
业学校 南昌 330012)
摘要:目的:建立覆盆子改善肾阳虚型痴呆活性成分山奈酚的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为 Diamon-
sil C18(250mm ×4． 6mm，5μm) ，流动相:乙腈 － 0． 1%磷酸水(30 ∶ 70) ，流速 1 mL /min，柱温 30℃，检测波长 266nm，进样量
20μL。结果:山奈酚质量在 0． 0782 ～ 5． 000μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r = 0． 9999) ，平均加样回收率为 99． 50%，
ＲSD = 2． 1%。结论:试验方法简便、快速、实验结果准确可靠，该方法可作为覆盆子有效成分山奈酚含量测定的方法。
关键词:覆盆子;高效液相色谱法;山奈酚;老年痴呆
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A
Quantitative Determination of Active Ingredient Kaempferol in Ｒubus Chingii Hu
XIE Yi － hui1，DING Yan － hua1，LIAN Bo1，YU Bin2，FAN Hao1
1． Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004，China;
2． Jiangxi Chemical Industry School，Nanchang 330012，China．
Abstract:Objective:To establish method for the quantitative determination of anti － aging active ingredient kaempferol in Ｒubus Chin-
gii Hu． Methods:Using high performance liquid chromatography． The column was Diamonsil C18(250mm × 4． 6mm，5μm) ，mobile
phase:acetonitrile － 0． 1% phosphoric acid in water (30∶ 70) ，flow rate:1mL /min，column temperature:30℃，detection wavelength:
266nm，the injection volume:20μL． Ｒesults:The quality of Kaempferol ranged from 0． 0782μg to 5． 000μg． Peak area showed a good
linear relationship (r = 0． 9999)and the average sample recovery rate was 99． 50%，ＲSD = 2． 1% ． Conclusion:The method is simple，
rapid and accurate，which can be used as an effective method for the quantitative determination of anti － aging active ingredient
kaempferol in Ｒubus Chingii Hu．
Key words:Ｒubus Chingii Hu;PHLC;Kaempferol;Senile Dementia
覆盆子为蔷薇科植物华东覆盆子 Ｒubus chingii
Hu近成熟的果实。性微温、味甘、酸，归肝、肾经，具
补肝益肾、固精缩尿、明目之功效，许多抗衰古方中
含有覆盆子。据现代药理研究，覆盆子具有改善学
习记忆能力、延缓衰老［1］、抗诱变［2］、促进淋巴细胞
增殖、温肾助阳等作用，其含有多种抗氧化、调节免
疫功能和调整物质代谢等作用的成分［3］。
课题组前期研究表明:覆盆子以及覆盆子有效
组分可显著地改善肾阳虚型痴呆大鼠在 morris水迷
宫中的定位航行与空间探索能力，有效地保护肾阳
虚痴呆动物的海马 CA1 区神经元使其免受损伤，明
显减少细胞 tau 蛋白异常表达［4］，起到改善肾阳虚
型痴呆大鼠学习记忆能力［5 － 6］，改善肾阳虚型痴呆
等功效较为显著。研究表明覆盆子有效成分为乙酸
乙酯部位中黄酮类成分，而山奈酚是覆盆子黄酮中
含量最高、活性最强的活性成分［7］。从覆盆子中提
取的单体成分进行神经细胞保护实验显示，山奈酚
显著性保护神经细胞免受 H2O2 的损伤，而且在所
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江西中医药大学学报 2 0 1 5年 4月第 2 7卷第 2期
JOUＲNAL OF JIANGXI UNIVEＲSITY OF TCM 2015 Vol. 27 No. 2
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基金项目:江西省自然科学基金项目(20142BAB205025) ;江西中医药大学“道地药材及特色中药资源研究专项”。
第一作者:谢一辉(1958—) ，男，教授，硕士生导师。研究方向:中药活性成分分析。E － mail:243619851@ qq． com。
通信作者:樊浩(1980—)男，副教授，博士。研究方向:中药现代鉴定技术、生物传感器。E － mail:105095500@ qq． com。
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有单体成分中活性最高。后期将进行覆盆子活性成
分防治老年肾阳虚型痴呆的作用机制和组分配伍研
究。为保证后续研究的实验结果真实、可靠、稳定，
必须要求覆盆子药材所含量成分，特别是最主要的
活性成分山奈酚含量稳定。有必要建立覆盆子活性
成分山奈酚的含量测定方法。对覆盆子质量进行科
学准确评价，有利于后续对覆盆子进行深入研究，也
有利于临床用药的安全有效。
1 仪器与材料
Agilent 1200 高效液相色谱仪;Sartorius BS214
－ D天平(万分之一) ;Mettler AE240 天平(十万分
之一) ;高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公
司) ;GZX －9146MBE型数显鼓风干燥箱(上海博讯
实业有限公司) ;HH －2 数显恒温水浴锅(国华电器
有限公司) ;自动三重蒸馏水器(上海亚荣生化仪器
有限公司) ;SHZ － D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市
英峪予华仪器厂) ;ＲE － 52 旋转蒸发仪(上海青浦
沪西仪器厂) ;Du － 650 紫外可见光谱仪(美国贝克
曼公司)。
山奈酚对照品(自提，PHLC 归一化纯度为:
99. 59%) ;甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析
纯。覆盆子药材购于樟树、九江、湖南等地，经刘庆
华老师鉴定为蔷薇科植物华东覆盆子 Ｒubus chingii
Hu近成熟的果实。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件及系统适应性试验 色谱柱:Dia-
monsil C18(250mm × 4． 6mm，5μm) ，流动相乙腈 －
0. 1%磷酸水(30∶ 70) ，流速 1mL /min，柱温 30℃，检
测波长 266nm，进样量:20μL。在上述色谱条件下，
理论塔板数按山奈酚计算不低 6 000，山奈酚与相
邻组分峰的分离度均大于 1． 5。色谱图见图 1 － 2。
图 1 覆盆子样品 HPLC图
图 2 山奈酚对照品 HPLC图
2． 2 对照品溶液的制备 称取山奈酚对照品约
10mg，精密称定。置于 10mL 容量瓶中，用甲醇溶
液，并稀释至刻度线，摇匀，配制成 1 mg /mL。
2． 3 供试品溶液的制备 精密称取覆盆子粉末约
2g，精密称定。加甲醇 60mL于水浴回流 1h，放冷至
室温，滤过，滤液于蒸发皿中蒸干，精密加入甲醇
2mL，称重，水浴加热使残渣溶解，放冷，加甲醇补
足重量，即得。
2． 4 线性关系的考察 取上述对照品液，配制成 9
个不同浓度的山奈酚对照品液，含量分别是:1000，
500，250，125，62． 5，31． 25，15． 63，7． 81，3． 91μg /mL。
取上述对照品液各 20μL，按 2． 1 色谱条件测定各对
照液的峰面积。以对照品重量为横坐标，其色谱峰
面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，得到山奈酚回归
方程式为:Y = 2618． 05X － 50． 625，r = 0. 9999，结果
表明山奈酚在 0． 0782 ～ 5． 000μg范围内呈良好的线
性关系。
2． 5 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液，按
2. 1 色谱条件测定，每次进样 20μL，连续进样 6 针，
测定山奈酚峰面积值，峰面积 ＲSD为 1． 7%，表明仪
器精密度良好。
2． 6 重复性试验 取覆盆子粉末 6 份，每份约 2g，
精密称定。按 2． 3 项下方法制备供试品溶液，按
2. 1 色谱条件测定。结果显示:山奈酚平均含量约
为 20μg /g，ＲSD值为 0． 86%(n = 6) ，表明该法重复
性好。
2． 7 稳定性试验 取供试品品溶液，常温放置，分
别于 0，2，4，8，12，24h，按 2． 1 色谱条件测定，记录
色谱峰面积，计算出山奈酚的含量，ＲSD = 2． 3%，表
明供试品溶液中山奈酚在 24h内保持稳定。
表 1 加样回收试验结果
药材中原含量
/μg
对照品加入量
/μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
46． 71 40． 7 86． 01 96． 56
46． 92 40． 7 86． 92 98． 28
45． 50 40． 7 85． 66 98． 67
45． 99 40． 7 85． 95 98． 18
46． 80 40． 7 88． 32 102． 0
46． 64 40． 7 87． 09 99． 39
46． 22 40． 7 86． 51 98． 99
47． 20 40． 7 88． 13 100． 6
47． 09 40． 7 88． 98 102． 9
99． 50 2． 1
2． 8 加样回收试验 取已知山奈酚含量的药材干
燥粗粉 9 份，每份约 2g，精密称定。分别精密加入
与药材相当量的山奈酚对照品溶液(40． 70μg /mL) ，
按 2． 3 项下方法制备供试品溶液，按 2． 1 色谱条件
测定，计算山奈酚的加样回收率，结果显示:山奈酚
的平均回收率为 99． 50%，ＲSD为(下转第 120 页)
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江西中医药大学学报 2015 年 4 月第 27 卷第 2 期
●
文
献
综
述
●
析［J］．中国实验方剂学杂志，2011，17(14) :68 － 70．
［8］胡浩武，谢晓鸣，张普照，等．江香薷黄酮类化学成分研究［J］．中
药材，2010，33(2) :218 － 219．
［9］刘华，张东明，罗永明． 江西道地药材江香薷的化学成分研究
［J］．中国实验方剂学杂志，2010，16(3) :56 － 59．
［10］刘华，沈娟娟，张东明，等．江香薷极性成分的研究［J］． 中国实
验方剂学杂志，2010，16(8) :84 － 86．
［11］沈娟娟，张东明，刘华，等．江香薷的极性成分研究Ⅱ［J］． 中国
中药杂志，2011，36(13) :1 779 － 1 781．
［12］张静，冯岗，袁旭超，等．百里香酚抑菌活性初探［J］． 中国农学
通报，2009，25(21) :277 － 280．
［13］徐旭红，唐风雷，范正达，等． 几种中药挥发油挥散剂空间抗菌
作用的考察［J］． 现代中西医结合杂志，2010，19(21:2 618 － 2
619．
［14］周梦娇，万春鹏，陈金印．柑橘绿霉病中草药高效抑菌剂的筛选
及抑菌机理研究［J］．现代食品科技，2014，30(3) :144 － 149．
［15］倪亮，石伟勇，颜军，等． 海州香薷黄酮分布及其对植物病原真
菌抑制效果的研究［J］．科技通报，2010，26(4) :546 － 549．
［16］冯元，刘静．石香薷挥发油抑菌和免疫应答作用［J］．氨基酸和
生物资源，2009，31(3) :30 － 32．
［17］王思思．选择性抑菌中草药筛选及组方研究［D］．保定:河北农
业大学，2012．
［18］张丽娟．云南野生香薷油调节血脂及对子代小鼠学习记忆的影
响［D］．昆明:昆明医学院，2011．
［19］杨频，马雅军，杜昱光，等． 植物源生物活性物质对蚊虫的防制
［J］．中国人兽共患病杂志，2004，20(1) :66 － 67．
［20］Gillij Y G，Gleiser Ｒ M，Zygadlo J A． Mosquito repellent activity of
essential oils of aromatic plants growing in Argentina［J］． Biore-
source technology，2008，99 (7) :2 507 － 2 515．
［21］Cheng Sen － Sung，Chua Meng － Thong，Chang Ed － Haun，et al．
Variations in insecticidal activity and chemical compositions of leaf
essential oils from Cryptomeria japonica at different ages［J］． Biore-
source technology，2009，100(1) :465 － 470．
［22］高赟．石香薷挥发油对棉蚜的生物活性研究［J］．农业科技与信
息，2013(8) :49 － 50．
［23］陈飞飞，彭映辉，曾冬琴，等． 石香薷精油对白纹伊蚊的生物活
性研究及其成分分析［J］． 中国媒介生物学及控制杂志，2010，
21(3) :211 － 214．
［24］戴晓冬，任一鑫，刘欣，等． 香薷体外抗阴道毛滴虫的透射电镜
观察［J］．热带医学杂志，2011，11(12) :1 379 － 1 382．
［25］郑莉莉，崔昱，秦元华，等． 中药香薷体外杀灭阴道毛滴虫效果
的观察［J］．大连医科大学学报，2009，31(3) :282 － 285．
［26］甘正伟．香薷黄酮化合物的提取、纯化和抗氧化性的研究［D］．
长沙:中南林业科技大学，2012．
［27］段建荣，严贵亮．香薷不同部位总黄酮的提取及其抗氧化作用
研究［J］．现代中药研究与实践，2013，27(6) :44 － 46．
(收稿日期:2014-06-06)编辑:
櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴
薛铁瑛
(上接第 78 页)
2． 1%(n = 9) ，结果见表 1。
2． 9 样品含量测定 取 5 个产地的了覆盆子药材
细粉各约 2 g，精密称定。按 2． 3 条件制备供试溶
液，按 2． 1 条色谱条件进样分析，计算山奈酚的含
量，结果见表 2。
表 2 不同产地覆盆子的含量测定结果
购买地 药材收集时间 平均含量 /μg·g － 1 ＲSD /%
樟树 1 2012 年 12 月 19． 91 0． 83
樟树 2 2013 年 4 月 22． 26 1． 7
江苏 2013 年 5 月 20． 59 0． 92
湖南 2013 年 10 月 17． 92 3． 4
浙江 2014 年 3 月 20． 95 2． 9
3 讨论
3． 1 检测波长的选择 取山奈酚对照品溶液在
190 ～ 500nm 范围内进行紫外波长扫描，山奈酚在
266nm处有最大吸收，故选 266nm作为检测波长。
3． 2 流动相考察 比较了不同酸碱性的流动相，结
果显示采用酸性流动相，可有效提高柱效，改善峰
形，减少山奈酚的色谱峰拖尾现象，而其中以 0． 1%
磷酸水溶液的分离效果最佳。比较了不同配比和不
同酸度的甲醇水、甲醇酸水、乙腈水和乙腈酸水，结
果显示乙腈∶ 0． 1%磷酸 = 30∶ 70 所组成的流动相分
离效果最佳。
3． 3 供试品溶液制备方法的选择 考察了甲醇超
声、索氏提取、乙醇回流和甲醇回流 4 种提取方法，
结果表明甲醇回流山奈酚含量最高，杂质峰相对较
少。曾试用硅胶柱、反相填料柱、聚酰胺柱、硅藻土
的预处理甲醇回流液，以除去提取液的杂质，因经上
述处理后，山奈酚易损失，故直接将回流液浓缩定容
后测定。
参考文献
［1］李天傲，谭喜莹． HPLC测定覆盆子中没食子酸含量［J］． 中国现
代应用药学，2008，25(3) ;235 － 237．
［2］付德润，钟承民，郭伟，等．覆盆子抗诱变作用的实验研究［J］．中
国全科医学杂志，1998 ，1 (1) :35．
［3］佟丽华．覆盆子的化学成份研究［J］．佳木斯医学院学报，1994，
17 (2) :51．
［4］Niering P，Michels G，Watjen W，et al，Protective and Detrimental
Effects of Kaemperol in Ｒat H4 IE Cell:Implication of Oxidative
Stress and Apoptosi［J］． Toxicol Appl Pharmacol，2005，209(2) :114
－ 122．
［5］黄丽萍，熊玉洁，赵梦岚，等．覆盆子有效部位改善肾阳虚型痴呆
大鼠学习记忆作用机制研究［J］．中国实验方剂学杂志，2013，19
(19) :192 － 196．
［6］黄丽萍，熊玉洁，赵梦岚，等．覆盆子对肾阳虚型 DA 大鼠学习记
忆的影响［J］．中药药理与临床，2013，29(4) :111 － 113．
［7］黄丽萍，熊玉洁，赵梦岚，等．覆盆子不同萃取部位对东莨菪碱所
致学习记忆障碍大鼠的影响［J］．时珍国医国药，2013，24(9) :
2 083 － 2 084．
(收稿日期:2014-11-10)编辑:曾文雪
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江西中医药大学学报 2015 年 4 月第 27 卷第 2 期