全 文 ：【临床研究】
黑大豆有效部位 － β －环糊精包合物的研究
蔡红杰
(辽宁省铁岭市结核病医院，辽宁 铁岭 112000)
【关键词 】 黑大豆;β －环糊精;高效液相色谱法
doi: 10． 3969 / j． issn． 1672 － 0369． 2012． 01． 034
中图分类号: R282． 710． 2 文献标识码: B 文章编号: 1672 － 0369(2012)01 － 0063 － 02
黑大豆为豆科植物大豆 GIycine max(L．)Merr．(Phaseo-
lus max L．)的黑色种子。黑大豆味甘，性平。归脾、肾经。
活血利水，祛风解毒，健脾益肾。近年来，药理实验研究表
明，黑大豆具有降脂［1］、抗动脉粥样硬化及减肥作用［2，3］;保
肝［4］及抗脂肪肝作用［5］;同时具有扩张冠脉，增加心肌营养
性血流量，降低冠脉阻力，减小心肌收缩力及抗心率失常作
用［6］;还具有抗肿瘤作用［7］;抗衰老作用等。
本实验将黑大豆有效部位提取物制成了 β －环糊精包
合物，采用均匀设计法考察和优化了包合物的制备条件，并
采用高效液相色谱法进行了含量测定，为临床进一步应用和
开发提供理论依据。
1 试验药品及仪器设备
1． 1 药品 黑大豆有效部位提取物，由本校植物化学教研
室提供;β －环糊精(β － CD) ;沈阳市试剂三厂;色谱纯甲醇、
色谱纯乙腈，均为天津四友生物医学技术有限公司生产。
所用其它辅料均为药用规格，试剂均为分析纯或化学纯，均
购于沈阳药科大学药品库。
1． 2 仪器 分析天平，上海天平仪器厂;磁力搅拌器，上海
标本模型厂;电热恒温水浴锅，江苏医疗器械厂;离心沉淀
机，上海手术器械厂;日本岛津 LC － 6A 高效液相色谱仪;
SPD － 6A 紫外可见分光光度检测器;HYPERSIL ODS 柱
(C185μ200mm ×4． 6mm ID) ，大连化学物理研究所产品。
2 β － CD包合物的制备
2． 1 均匀设计法优化处方组成 采用均匀设计法，用 U11
(1110)表安排四因素 11 水平试验，黑大豆有效部位提取物
和 β － CD投料比(X1) ，溶液 pH值(X2) ，反应温度(X3)和搅
拌时间(X4) ，每个因素的变化范围，X1:1:5 ～ 1:15;X2:5 ～
7;X3:50 ～ 60 ℃;X4:2 ～ 6 hr，其设计结果见表 1。
表 1 黑大豆有效部位提取物 β － CD包合物的均匀设计试验
试验号
因素
X1 X2 X3 X4
包合物收率(%) 豆芽素 A(%) 药物收率(%)
1 1:5 6 55 2 76． 15 0． 18 64． 29
2 1:6 5 50 6 78． 14 0． 24 85． 71
3 1:7 7 50 2 83． 36 0． 16 57． 14
4 1:8 6 60 6 79． 99 0． 12 42． 86
5 1:9 5 60 4 84． 35 0． 22 78． 57
6 1:10 5 55 6 74． 29 0． 04 14． 29
7 1:11 6 55 4 86． 46 0． 07 25． 00
8 1:12 6 50 2 64． 98 ― ―
9 1:13 5 50 4 74． 08 0． 17 60． 71
10 1:14 7 60 2 76． 22 0． 15 53． 57
11 1:15 6 55 4 68． 40 ― ―
表中各结果计算:
药物含量% =包含物实际含药量(g)
包含物得量(g)
× 100%
包合物收率% =包含物收量(g)
投料量(g)
× 100%
药物收率% =包含物实际含药量(g)
投药量(g)
× 100%
2． 2 制法 采用饱和水溶液法包合黑大豆有效部位提取
物。
取一定量 β － CD加入至适量蒸馏水中，50 ℃磁力搅拌
器搅拌使成饱和水溶液。黑大豆有效部位提取物用适量
95%乙醇溶解，滴加入饱和水溶液中，包合一定时间，冰箱
放置 24 hr，抽滤，少量石油醚洗涤，置烘箱中 70 ℃干燥，
得干燥物，称重，计算包合物收率、药物收率。
2． 3 含量测定
2． 3． 1 色谱条件
柱:HYPERSIL ODS柱，200 mm ×4． 6 mm
流动相:乙腈 －水(3:7)
柱压:190 ～ 210 Kgf /cm2
流速:0． 8 ml /min
柱温:30 ℃
纸速:1 mm/min
灵敏度:0． 02
检测波长:249 nm
2． 3． 2 流动相的配制 按比例要求取乙腈，双蒸去离子水
混合，磁力搅拌脱气，至无气泡，约 30 min，然后用 G5 垂熔
漏斗过滤，即可。
2． 3． 3 标准曲线的制备 精密称取豆芽素 A 10 mg，加甲
醇定容于 50 ml 容量瓶中，即为对照品溶液，其浓度为 200
μg /ml，分别吸收该溶液 0． 05 ml、0． 10 ml、0． 20 ml、0． 30 ml、
0． 40 ml、0． 50 ml于 10 ml 容量瓶中，加甲醇定容后，即配成
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第 24 卷 上半月 第 1 期
中国民康医学
Medical Journal of Chinese People＇s Health
Jan，2012
Vol． 24 FHM No． 1
1、2、4、6、8、10 μg /ml 系列标准液。分别取各浓度标准液进
样 20 μl，在流动相为乙腈 －水(3:7) ，柱温 30 ℃，柱压 200
Kgf /cm2，流速 0． 8 ml /min，检测波长 249 nm 下，记录各自
峰面积，以峰面积 －浓度作图，考察其线性，计算 r。结果
见表 2。
表 2 不同浓度标准液的峰面积测定结果
浓度 μg /ml 1 2 4 6 8 10
峰面积 8 110 17 023 33 172 50 185 67 122 85 143
回归方程:y = － 281． 7 + 8490． 5x
r = 0． 9996
标准曲线见图 1。
图 1 对照品标准曲线图
2． 3． 4 样品液的制备 称取适量的黑大豆有效部位提取
物，溶于甲醇，把其浓度适当调节至线性范围内，经微孔滤
膜过滤，备用。
2． 3． 5 HPLC 法测定含量 将配置好的样品溶液进样 20
μl，在相同色谱条件下，保留时间 25 ～ 27 min 左右出现与对
照品相同的色谱峰，按图峰面积数值和标准曲线计算含量。
2． 3． 6 稳定性试验考察 取供试品溶液，按制备后 0、2、4、
6、8 小时分别测定峰面积，测定结果见表 3。
表 3 供试品溶液稳定性试验测定结果
时间(hr) 0 2 4 6 8 RSD%
色谱峰面积 52 561 51 571 52 447 53 646 53 646 1． 98
测定结果表明，供试品溶液制备后 8 小时内测定，色谱
峰面积无明显变化，在本试验条件下，供试品溶液化学性质
稳定。
2． 3． 7 精密度试验考察 取同一供试品溶液，连续进样 6
次，测得结果见表 4。
表 4 供试品溶液精密度试验测定结果
次数 1 2 3 4 5 6 RSD%
百分含量% 5． 94 5． 90 6． 10 6． 01 6． 10 5． 93 1． 46
2． 3． 8 重现性试验 取同一批号的样品 6 份，制成供试品，
按实验测定方法测定，结果如表 5。
表 5 重现性试验测定结果
次数 1 2 3 4 5 6 RSD%
百分含量% 6． 58 6． 52 6． 48 6． 39 6． 54 6． 67 1． 20
2． 3． 9 β － CD 包合物的含量测定 精密称取 0． 2 g 左右 β
－ CD包合物，加入 10 ml CHCl3，超声处理 30 min，抽滤，
回收 CHCl3，然后用 CH3OH溶解提取物，多次冲洗，定容于
10 ml容量瓶中，移取 0． 5 ml于 5 ml容量瓶中，微孔滤膜过
滤，进样。(结果见表 1)
2． 3． 10 加样回收率试验 取己知含量为 0． 28%的样品0． 1
g，精密称定，加 CHCl3 10ml，超声 30 min，过滤，回收
CHCl3，用甲醇溶解并定容于 10 ml 的容量瓶中，移取 1 ml
并加已知浓度为 20 μg /ml的对照品 0． 15 ml于容量瓶中，甲
醇定容，经微孔滤膜过滤后，进样经数据处理，结果见表 6。
表 6 回收率试验测定结果
编号
称样量
(mg)
样品的含量(μg)
稀释 10 倍
对照品量
(μg)
实测量
(μg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 99． 6 27． 89 30 56． 21 97． 10 97． 78 1． 35
2 101． 2 28． 34 30 57． 46 98． 49
3 97． 8 27． 38 30 55． 23 96． 25
4 101． 6 28． 45 30 58． 02 99． 26
3 讨论
通过对 β － CD 包合物的考察，结果表明，黑大豆的有
效部位提取物能够被 β － CD 所包合，由于黑大豆的有效部
位提取物极粘稠，不宜干燥，且其中的内酯成分不稳定，经
β － CD包合后易干燥，这样使半固体的原料可固体化，便于
进一步制剂。并以此期望能增加黑大豆的有效部位提取物
的稳定性。其稳定性试验有待于进一步研究。
参考文献
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(收稿日期:2011 － 09 － 13)
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