全 文 ：中国肿瘤2007年第16卷第2期
槐耳浸膏的实验研究及临床应用进展
李立新,叶胜龙,王艳红,汤钊猷
(复旦大学肝癌研究所,上海中山医院,上海市肝脏肿瘤临床医学中心,上海 200032)
摘 要:槐耳颗粒目前在临床肿瘤治疗中运用较为广泛。全文对槐耳的菌质制备、化学研究、作
用机制、药理及毒理研究、临床应用等方面作一综述,旨在为槐耳的进一步研究提供帮助。
关键词:槐耳浸膏;实验研究;临床应用
中图分类号:R73-3 文献标识码:A 文章编号:1004-0242(2007)02-0110-04
ProgressonExperimentalResearchandClinicalApplicationofTrametesRobiniophila
LILi-xin,YESheng-long,WANGYan-hong,etal.
槐耳是我国民间重要的药用真菌。其学名为
trametesrobiniophilamur,中药名为槐栓菌[1]。它是
生长在槐及洋槐、青檀等树干上的高等真菌子实
体。按 Ainsworth等 1973年真菌分类系统,属于真
菌门 Eumycota,担子菌亚门 Bisidiomycotina,层菌
纲 Hymenomycetes,非褶菌目 Aphylophorales,多孔
菌科Polyporaceae,栓菌属Trametes[2]。现代不少文献
误认为它是槐树上的黑木耳,以致对其认识较为混
乱。经考证:槐耳的入药史最早可追溯到公元3世纪
(1600年前)葛洪的《肘后方》到明朝的《本草纲目》
等有关草本均有记载。其别名有“槐菌”、“槐蛾”、“槐
鸡”、“槐鹅”等。现已确证槐耳就是槐栓菌[2]。它味苦
辛,性平无毒,有“治风”、“破血”、“益力”的功效[3]。
1 槐耳菌质的制备
由于槐耳的生长条件要求严格,生长周期很长,
生物效应较低,难以满足药用需要。目前已采用固体
发酵工艺来生产槐耳菌质,即药用真菌在农副产品
组成的固体营养基质上生长,分解基质,吸取营养,
生长菌体供药用。在 0~100天的发酵过程中,随着
发酵时间的延长,基质转化为菌质,产品中多糖含量
迅速下降,蛋白质含量逐步上升。当发酵周期达45
天左右时,多糖与蛋白质含量渐趋稳定,这时期菌质
中提取成分的抑瘤率最高,也是菌质中槐耳菌丝体
由营养生长转向生殖生长的阶段。现已知道多糖蛋
白(PS-T)是槐耳菌质的重要有效成分,因此测定多
糖与蛋白质的含量可作为发酵质量的监控指标和判
定菌质的发酵终点,也是药品的重要质量标准[4]。近
来也有作者改用双向发酵工程来生产菌质。即由以
往仅用富含碳、氮等营养的农副产品作为营养基质,
改为采用具有一定活性成分的中药材作为药性基
质,它既能提供真菌成长所需的营养,又因真菌的酶
而被改变组织成分,从而产生新的性味功能。实验证
实:由黄芪作为基质发酵槐耳菌而产生的菌质,其药
效明显超过槐耳菌质[5]。
2 槐耳的基础研究
2.1 化学研究
槐耳菌质得精致槐耳多糖蛋白,简称 PS-T。经
小鼠肉瘤 S180抑瘤试验,抑瘤率达 40%~47%,说明
PS-T具有抗癌活性,是槐耳菌质和槐耳清膏的有效
作用部位[6]。
槐耳多糖蛋白是一种棕褐色粉末,没有明显的
熔点,在 280℃时变黑,易溶于热水,稍溶于低浓度
乙醇,不溶于高浓度乙醇、丙酮、乙醚、乙酸乙酯、正
丁醇等有机溶剂。其水溶液透明呈黏稠状,pH值为
5.5,无旋光性[7]。经高效液相色谱和电泳分析表明其
主成分基本为均一多糖,并由光谱和气相层析方法
证明槐耳多糖为一蛋白结合杂多糖,其具体组成为:
6种单糖(含量为 41.53%)和 18种氨基酸(含量为
12.93%)。该多糖蛋白的分子量为30000,其多糖分
子糖苷键构型主要为β型[7~10]。收稿日期:2006-04-05;修回日期:2006-05-10
110
中国肿瘤2007年第16卷第2期
2.2 作用机制
2.2.1 促进巨噬细胞功能
槐耳多糖蛋白(PS-T)能激活巨噬细胞,增强巨
噬细胞的吞噬功能,使之直接杀伤肿瘤细胞并处理、
递呈肿瘤抗原,进而激活 T细胞产生抗肿瘤效应。
巨噬细胞还可释放 TNF-α、IL-1、IFN-α等细胞因子
来调节抗肿瘤效应。经槐耳多糖蛋白作用后的小鼠,
其血清中溶菌酶活性也明显增加[11]。
2.2.2 诱导细胞因子
槐耳多糖蛋白能明显诱生 α、γ干扰素,对 α干
扰素促进NK细胞活性有协同作用,后者又可产生
IFN-γ、IL-2等。IL-2可刺激T、B淋巴细胞增殖活化。
活化的巨噬细胞也可产生 IFN-α、IL-1、CSF等细胞
因子。在这些细胞因子的协同作用下增强 T细胞、
巨噬细胞、NK细胞等对肿瘤细胞的杀伤能力[6,11]。
2.2.3 促进细胞免疫功能
槐耳多糖蛋白对脐血EaRF(活性花环)及GVHR
(移植物抗宿主反应)有增强作用。另外在干扰素尤
其是 IFN-γ的协同作用下可使 NK细胞活性增强,
提高CTL对肿瘤的杀伤作用[6]。陈慎宝等[11]用槐耳多
糖给小鼠腹腔注射,10天后取血测定淋巴细胞转化
率均高于生理盐水对照组。陆鹏等[12]应用二乙基亚
硝胺制备大鼠肝癌模型,同时给大鼠灌服槐耳浸膏,
20周后取肝用免疫组化检测IL-2R阳性细胞,证明
槐耳浸膏能增加肝内IL-2R阳性细胞数,从而增强
体内细胞免疫功能。
2.2.4 提高体液免疫作用
陈慎宝等[11]通过动物实验表明槐耳多糖蛋白可
明显提高机体产生抗体的水平。在特异性抗体的
作用下,可增加吞噬细胞的调理吞噬作用及发挥
ADCC作用,进而杀伤、吞噬或溶解肿瘤细胞。
2.2.5 抑制肿瘤血管生成
陈大兴等[13]用不同浓度的槐耳浸膏作用于人胎
脐静脉血管内皮细胞,观察其对细胞的增殖能力、迁
移能力、附壁能力及血管生成的影响。结果发现槐耳
浸膏≥2mg/ml时可显著降低肿瘤组织的血管内皮
细胞的增殖能力,减少血管形成,抑制血管内皮细
胞的迁移、黏附,从而降低肿瘤组织中的微血管密
度。许戈良等[14]观察了槐耳浸膏对血管内皮生长因
子(VEGF)诱导的人脐静脉内皮细胞增殖和分化成
血管能力的影响。结果显示:槐耳浸膏在浓度为
0.1g/L～10g/L时能明显抑制 VEGF诱导的内皮细胞
增殖,呈量效关系。它阻止内皮细胞由S期进入G2/
M期。在浓度为1g/L时可抑制内皮细胞体外分化成
管样结构,浓度为10g/L时则完全阻断内皮细胞体
外分化成管样结构的能力,说明槐耳浸膏对血管内
皮细胞体外构建新生血管具有抑制作用。
2.2.6 诱导肿瘤细胞凋亡
临床实践及细胞实验已证明槐耳浸膏能抑制多
种肿瘤细胞的增殖。诱导肿瘤细胞的凋亡是其发挥
这一作用的途径之一。周进等[15]采用不同浓度的槐
耳浸膏与人胰腺癌细胞Panc-1共同培养,发现槐耳
浸膏能明显抑制Panc-1的生长,细胞周期阻滞主要
在 G1期。槐耳浸膏在浓度为 3.0mg/ml、作用时间
36h时达到凋亡高峰,凋亡率达15%～20%。细胞免
疫组化进一步证实槐耳浸膏能上调凋亡基因 Cas-
pase-3的表达。程若川等[16]将不同浓度的槐耳浸膏
与人直肠癌 HR8348细胞共同培养 36h,结果显示
细胞凋亡指数随槐耳浸膏浓度的增加而增加,当浓
度为 4.0mg/ml时达到最大。槐耳浸膏组 bcl-2、bcl-
xl、bak、p53蛋白表达较空白对照组明显增强,而bax
变化不明显。槐耳浸膏组bak/bcl-2和bak/bcl-xl比
值显著大于空白对照组。另外有作者分别观察了槐
耳浸膏诱导人肺腺癌细胞A549、食管癌细胞、Molt-4
细胞的凋亡作用,证明槐耳浸膏对这些肿瘤细胞均
有明显诱导凋亡的作用[17~19]。
2.2.7 逆转耐药细胞株
槐耳浸膏能逆转部分耐药细胞株,同时对化疗
亦有增敏作用。张玉宝等[20]观察了槐耳浸膏在乳腺
癌综合治疗中的作用并探讨了其相应的机制。结果
提示:0.01mg/ml剂量的槐耳颗粒能显著降低化疗药
物 ADM对人乳腺癌耐药细胞株 MCF-7/A的 IC50
(3.95μg/ml),与逆转前耐药细胞株MCF-7/A的IC50
(17.67μg/ml)相比,差异有显著性(P<0.05),其逆转
倍数为4.5,耐药倍数为21.7。人乳腺癌敏感细胞株
MCF-7/S无MDR-1mRNA表达,低毒剂量和非细胞
毒性剂量的槐耳颗粒可使 MCF-7/A细胞的耐药基
因MDR-1表达水平下调。说明槐耳颗粒逆转MCF-
7/A耐药性的机制是通过下调耐药基因 MDR-1的
表达水平来实现的[20]。黄涛等探讨了槐耳浸膏对耐
顺铂的人肺腺癌细胞A549DDP化疗敏感性的逆转作用
及其机制,结果表明槐耳浸膏对A549和A549DDP的细
胞毒性作用相似,并可致凋亡。经槐耳浸膏作用后
A549及A549DDP的顺铂IC50均呈下降趋势,并与槐耳浸
膏有剂量依赖性。给予1mg/ml槐耳浸膏作用40h后
再经相应顺铂作用的A549和A549DDP细胞凋亡的发生
111
中国肿瘤2007年第16卷第2期
率差异无显著性,但较同剂量的顺铂单独作用于
A549和A549DDP凋亡率有极显著性差异。说明槐耳浸膏
可逆转人肺腺癌细胞对顺铂的耐药性,提高顺铂对
A549DDP化疗的敏感性[21]。
2.2.8 其 他
槐耳还能促进小鼠脾细胞DNA的合成,提高血
清中血红蛋白的含量,说明它对造血细胞有一定的
促进作用。陈莉等在鼠肝癌模型制备早期给小鼠灌
服槐耳清膏发现具有显著的防癌作用,癌变率显著
性降低,在癌形成与发展过程中灌服槐耳清膏也有
显著的抑癌效应,可减轻癌变的病理变化。槐耳清膏
还能通过抑制肝硬化来干预癌的形成,其疗效与疗
程呈正相关[22]。
2.3 药理及毒理研究
2.3.1 药 理
槐耳浸膏灌胃药效最佳剂量在小鼠为1500mg/
kg。研究显示对小鼠肉瘤S180抑瘤率达46%,对腹水
型S180生命延长率为38%。粗多糖及PS-T灌胃及腹
腔给药也同样有明显的抑瘤和延长生命的作用。多
糖静脉给药对犬血压、心电图、心率和对麻醉后的呼
吸频率均无明显影响。对兔呼吸系统、大鼠神经系统
的实验也未见异常[23]。
2.3.2 毒 理
大剂量槐耳浸膏给小鼠、大鼠灌胃(小鼠>20000mg/kg,
大鼠>15000mg/kg)均未能测出LD50,且在观察期间
均未引起动物死亡。大鼠按人临床用药量的5.5倍、
50.6倍、95倍灌胃90天,家兔各剂量组连续给药半
年,实验动物生长正常,生化指标、血象无异常,也未
见药物引起的病理改变,特殊毒理如诱变试验和微
核与染色体畸变等试验均为阴性反应[6]。
3 槐耳的临床应用
3.1 槐耳颗粒治疗肝癌
蒋梅等应用槐耳颗粒治疗中晚期原发性肝癌
98例,所有病例均服药 1个月以上,最长服药时间
38个月。治疗期间停用其他抗癌药物。结果显示肿
瘤完全缓解0例,部分缓解2例,无变化24例,病变
进展72例。瘤体稳定率为24.49%。Ⅱ期患者中6个
月 、1年 、3年 生 存 率 分 别 为 94.74%、73.68%、
10.53%。Ⅲ期患者中 6个月、1年、3年生存率分别
为68.66%、16.67%、1.67%。AFP阳性病例中稳定及
下降率为37.97%。槐耳颗粒对患者的疼痛、纳呆、失
眠症状均有不同程度的改善[24]。郭添胜等[25]比较了
槐耳颗粒联合肝动脉化疗栓塞术及单用肝动脉化疗
栓塞术治疗原发性肝癌的近期疗效,发现两者差异无
显著性,联合组在肝功能改善、人体功能状况评分改
善、减少粒细胞下降率、改善食欲下降较单纯组好。
3.2 槐耳颗粒治疗乳腺癌
钟少文等[26]将62例Ⅳ期乳腺癌病人分为两组:
治疗组29例,连服槐耳颗粒3个月。对照组33例,
以 CTX+THP+5-Fu化疗,每 3周为 1个疗程,共 4
个疗程。结果表明治疗组不仅在中医证候、生存质量
的改善方面优于对照组,在中位生存时间上也优于
后者。另外槐耳浸膏联合化疗治疗乳腺癌不仅可以
提高化疗疗效,减轻毒副反应(白细胞、血红蛋白下
降等),还可提高乳腺癌患者的IgG、IgA、IgM水平,
促进机体的免疫功能[27,28]。
3.3 槐耳颗粒治疗消化道恶性肿瘤
邓艾平等[29]将 74例有化疗指征的消化道恶性
肿瘤患者随机分为两组,分别给予槐耳颗粒联合化
疗 (羟基喜树碱 10mg/m2,亚叶酸钙 100mg,5-Fu
500mg)和单用化疗。观察患者在治疗后的疗效和生
活质量的改变。结果前者治疗后总有效率为60.5%,
生活质量状况 Karnofsky评分提高及稳定者占
86.6%;后者总有效率为 33.3%,生活质量状况
Karnofsky评分提高及稳定者占69.5%。两者差异有
显著性。槐耳颗粒联合化疗治疗大肠癌、胃癌术后患
者,同样具有减轻不良反应,提高生存率的作用,并
能促进机体的细胞免疫功能[30,31]。
3.4 槐耳颗粒治疗慢性乙肝
槐耳多糖蛋白对小鼠血清干扰素诱生作用非常
明显。对感染鸭肝炎病毒的实验鸭使用该药后可使
其血清HBV-DNA水平明显下降。唐保元等[32]用槐
耳颗粒治疗慢性乙肝病毒感染者 20例,结果
HBeAg阴转 6例(占 30%),其中 3例 HBeAb转为
阳性,1例在 HBeAg转为HBeAb时HBsAg阴转,提
示槐耳对慢性乙肝有较好疗效。
目前槐耳颗粒已在临床上得到较为广泛应用,
涉及以肿瘤疾病为主的多项领域,并已取得了许多
独到的疗效。现有的基础理论研究已为槐耳颗粒抑
制肿瘤提供了部分理论依据。随着实验研究的不断
深入,尤其是细胞生物学及分子生物学技术的运用,
槐耳抑制肿瘤的机制必将会被人们揭开。
112
中国肿瘤2007年第16卷第2期
参考文献:
[1] 邓叔群.中国的真菌[M].北京:科技出版社,1963.515.
[2] 庄毅.槐耳的鉴定与考证[J].中国食用菌,1993,13(6):
22.
[3] 李时珍.槐耳[A].本草纲目下册(菜部)二十八卷[M].北
京:人民卫生出版社,1982.1712.
[4] 庄毅.药用真菌的固体发酵[J].中国药学杂志,1991,26
(2):80.
[5] 庄毅.药用真菌新型固体发酵工程与槐芪菌质的研制
[J].中国药学杂志,2004,39(3):175-178.
[6] 庄毅.真菌抗癌药物槐耳颗粒的研制[J].中国肿瘤,1999,
8(12):540-543.
[7] 郭跃伟,程培元,陈玉俊,等.槐耳菌丝体多糖的研究
(Ⅰ)[J].中草药,1992,23(4):175-177.
[8] 郭跃伟,程培元,陈玉俊,等.槐耳菌丝体多糖的分离和
分析[J].中国生化药物杂志,1993,1:56-60.
[9] 周学敏,郭跃伟,陈玉俊,等.槐耳多糖的含量测定[J].
中草药,1993,24(3):127.
[10]郭跃伟,程培元,陈玉俊,等.槐耳菌丝体多糖的研究
(Ⅱ)槐耳多糖的组成及摩尔比测定[J].中国药科大学
学报,1992,23(3):155-157.
[11]陈慎宝,丁如宁.槐耳菌质成分对小鼠免疫功能的影响
[J].食用菌学报,1995,2(1):21-25.
[12]陆鹏,陈莉,陆正鑫.实验性肝癌中比较槐耳与 IL-2对
PTEN和 IL-2R阳性细胞的影响[J].现代中西医结合杂
志,2004,13(15):1982-1985.
[13]陈大兴,陈孝平,张万广.槐耳清膏治疗肝癌的实验研
究[J].中国普通外科杂志,2004,13(8):578-582.
[14]许戈良,荚卫东,马金良,等.槐耳浸膏体外抑制血管生
成的实验研究[J].中国药理学通报,2003,19(12):1410-
1412.
[15]周进,李德春,匡玉庭.金克(槐耳清膏)抑制胰腺癌细胞
Panc-1生长转移的实验研究 [J].苏州大学学报 (医学
版),2005,25(2):226-228.
[16]程若川,汤礼贵,兰丽琴,等.槐耳清膏诱导人直肠癌
HR8348细胞凋亡的实验研究[J].中国普外基础与临床
杂志,2003,10(6):568-571.
[17]黄涛,孔庆志,卢宏达,等.槐耳清膏诱导人肺腺癌细
胞 A549凋亡的实验研究 [J].中华结核和呼吸杂志,
2001,24(8):487-488.
[18]李保庆,李勇,王其彰,等.槐耳颗粒对食管癌细胞凋亡
及免疫功能的影响[J].中国肿瘤,2003,12(12):752-753.
[19]王家顿,谢大兴,陈金明,等.抗癌药物诱导 Molt-4细
胞凋亡的周期时相性分析 [J].中国肿瘤,2002,11(9):
533-534.
[20]张玉宝,张国强,王劲松,等.槐耳颗粒在乳腺癌综合治
疗中的作用[J].中国肿瘤临床与康复,2004,11(6):512-
515.
[21]黄涛,孔庆志,卢宏达,等.槐耳清膏对耐顺铂人肺腺癌
细胞系A549DDP逆转的实验研究[J].中国药师,2002,5(9):
517-521.
[22]CHENLi,LUZhengxin,LUPeng,etal.Anticancerefect
ofPS-Tontheexperimentalhepatocelularcarcinoma[J].
Chinese-GermanJClinOncol,2004,3(1):55-59.
[23]程若川,王建忠.槐耳的研制及临床应用[J].昆明医学院
学报,2003,24(1):101-103.
[24]蒋梅,周岱翰.槐耳冲剂治疗中晚期原发性肝癌 98例[J].
上海中医药杂志,2004,38(6):21-22.
[25]郭添胜,黄福喜,曹小龙.槐耳颗粒联合介入治疗原发性
肝癌的疗效观察[J].实用医学杂志,2005,21(16):1846-
1847.
[26]钟少文,江慧玲,刘鑫,等.金克槐耳颗粒治疗Ⅳ期乳
腺癌[J].中国肿瘤,2003,12(12):754-755.
[27]付美兰,郭丽英,玛依怒尔,等.槐耳颗粒对 43例晚期乳
腺癌化疗患者造血及免疫功能的影响[J].肿瘤学杂志,
2005,11(4):318.
[28]陈前军,赖熙雯,司徒红林,等.乳腺癌术前行槐耳颗粒
联合化疗临床疗效[J].中国肿瘤,2004,13(5):330-331.
[29]邓艾平,毛德莉.槐耳颗粒治疗消化系统恶性肿瘤 74例
临床观察[J].中国医院药学杂志,2005,25(5):453-454.
[30]袁明,黄桂林,李志刚,等.槐耳颗粒配合化疗对大肠癌
患者术后免疫功能的影响 [J].中国肿瘤,2005,14(7):
487-488.
[31]姚建高,韩少良,朱冠宝,等.Ⅲ期胃癌术后联合化疗与
金克的疗效[J].中国肿瘤,2003,12(10):606-608.
[32]唐保元,闵贤,章莉莉.槐耳菌冲剂对慢性乙型肝炎 e系
统影响的初步观察 [J].南京医学院学报,1991,11(2):
122-123.
113