全 文 ：中国现代药物应用 2 0 13 年 9 月第 7 卷第 17 期 Ch i n J M o d D ru 只 A p p l 万e p 2 0 1 3 ,V 0 1. 7 召 0 . 17 , 2 2 7 ,
表 1 提取的各类化合物的回收率统计
些率 ( % ) \ \ 化合物 黄酮类化合物 糖普类化合物 生物碱 菇类化合物 挥发油
方法 一
SF E 技术
传统方法
76
.
3
4 7
.
9
4 1
.
0
18
.
2
74
_
O
5 8
15
. 宁 2
4
.
4 9
无害工艺要求 。
SF E 作为一 种新技术 , SF E 也 有其局限性 。 投资成本
大 投备要求高 常需高压器材 在实际生产中因为难以进行
连续化操作造成能量大量耗散 要求高素质的专门操作人员
等 。 在天然药物领域 ,由于技术限制 另FE 一 c o : 目前大多仅
用于单味药物有效成分的提取 。 疾病的病理与性质尤为复
杂 单味药物难以达到相应的治疗效果 。 目前 SF E毛 0 2 技术
在复方剂的萃取中还处于起步阶段 ,C O Z 的非极性和低分子
质量特点 使得 sF E毛。 : 萃取本身具有先天的局限性 。 夹带
剂能大大拓宽 c o : 在超临界萃取上的极性范围 夹带剂的正
确选择和应用 对萃取效果影响甚大 。 因此 ,研究人员应该提
高自身的能力与技术水平 ,加强萃取理论的认识 、 理解与应
用 ,国家与社会应该投入更多的资金进行研发 ,实现萃取分
离的新突破 。
参考文献
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的研究时珍国医国药 2 0 0 7 江8 ( 1 1) : 26 4 3 2 64 5 .
, .Jes12
r.LF
, .J esJ气、
4
r.LF
, .Jes气6r.LF
, .Jes
7
OCr.LF
黄酮类化合物的提取结果表明 超临界流体萃取技术可
有效地提取银杏叶中的黄酮类化合物 黄酮的回收率 ( 63 % )
明显高于乙醇浸取的回 收率 ( 38 . 5% ) 。 研究表明 万F E 法操
作简单 提取率高 回收率也高 产品黄酮中的有毒物质银杏
酚酸的含量得到较好的控制 。
糖普类化合物的提取结果表明 超临界流体萃取技术提
取糖普类化合物 回收率达 76 . 3% ,是传统乙 醇提取方法的
1
.
6 倍 回收率大大提高 说明 SF E 一 C O Z 技术提取糖类化合
物的效果相对理想 。
生物碱的提取结果表明 经 H P L C 测定 SF E毛0 2 萃取物
和乙醇回流物中延胡索乙素的含量 ,前者为后者的 2 . 25 倍
将延胡索乙素的含量除 以固体物量即得固体物中延胡索乙
素的纯度 万F E毛 。 : 法所得萃取物中延胡索乙素的纯度约为
醇回流法的 10 倍 。
菇类化合物的提取结果表明 ,乙醇浸提菇内醋的总回收
率 58 % 。 采用 S F E毛 0 2 法萃取总内醋 ,回收率为 74 . 0 % ,比
醇回流高 0 . 2 762 % 。 说明 S F E毛0 2 法提取银杏叶总内醋效
果较好 。
挥发油的提取结果表明 超临界萃取金银花中的挥发性
成分的收率 ( 巧 . 72 % ) 较水蒸气蒸馏工艺 ( 4 . 49 % ) 高出 3 . 5
倍 库取时间缩短 4 倍 。 SF E毛 0 2 有着传统水蒸气蒸馏法不
可替代的优越性 其收率明显提高 且提取时间大大缩短了 。
4 讨论
我国天然药物资源丰富 ,而天然药物的多样性与复杂
性 大大加重了萃取的难度 。 采用 S FE 技术提取分离有效成
分是实现天然药物现代化的一 条有效途径 ,与传统方法相
比 无论是提取效率还是提取时间 , SF E 技术都明显优于传
统的提取方法 。 此外 万F E 技术更具有选择性好 ,溶解性好
有效成分的含量高 、 纯度高 库取溶剂不残留 , c o : 的可循环
利用 后处理过程简洁及处理成本低等优点 。 同时超临界萃
取法替代有害的溶剂萃取法符合目前世界绿色环保和化学
蓖麻根提取物抑制肝癌细胞的作用探讨
姜秀杰
【摘要】 目的 探讨蓖麻根提取物对肝癌细胞的作用 。 方法 用 (3 一4 万二 甲基窿哩勺 之 万二
苯基四氮哩澳盐 ( M脚) 实验法 脸测蓖麻根提取物对肝癌细胞的表达程度 。 结果 蓖麻根提取物中蓖
麻石油醚成分对肝癌表达抑制作用最强 。 结论 蓖麻根提取物在体外有较强的抗肝癌细胞作用 。
【关键词 】 蓖麻 ; 肝癌 ; 抑制率
蓖麻属大戟科草本植物 。 据文献报道 蓖麻毒素和蓖麻
油的提取物有抗肿瘤的作用 「1」 规用 MT 实验法 脸测蓖麻
根 A 、 B 、 C 三组 ( 石油醚 、 氯仿 、 乙酸乙醋 ) 提取物对肝癌细胞
的影响 。 为进一步研究蓖麻对癌细胞的抑制作用提供参考 。
1 仪器和试药
作者单位 : 13 7 4 0 内蒙古兴安盟人民医院药剂科
1
.
1 仪器 C O Z 培养箱 ( B C斗1 6 0 5 上海博讯 ) ,B x 4 3 显微
镜 ( o l y m p u s ) 超净工作台 ( s w 毛 J仑 r D 苏州安泰 ) ,全自动
酶免仪 ( 帝肯 ) ,TN R o刁二4纯水机器 (北京图南 ) 超低温冰箱
( Dw 一 6 L一 8 6 海尔 ) 产田胞培养皿 夕6孔细胞培养板 ( c o m i n
美国 ) 。 谷氨酞胺 ( iS g m a) ,J/、牛血清 ( iS g m a) 月 sB A g 、 HeB A g
试剂盒 (上海科华 ) 余为分析纯试剂 。 细胞培养盒 。
1
.
2 试剂和药物 肝癌细胞 、 R P lM l 640 培养液 谷氨酞胺
DOI : 10. 14164 /j . cnki . cn11 -5581 /r . 2013. 17. 029
.2 2 8
. 中国现代药物应用 2 0 13 年 9 月第 7 卷第 17 期 C hi n J M o d D r u 只 A p p l 万e p 20 13 ,V 0 1. 7 召 0 . 17
胎牛血清 P B S。
2 方法
2
.
1 药物的配制 用石油醚 、 氯仿 、 乙酸乙醋三种溶剂分别
提取物蓖麻根 ,分离得 A 、 B 、 C 三组成分 ,用 二 甲基亚砚
( 10 % ) 溶解后 分别配成 40 9几 浓度 ,调 p H 至 6 . 8 一 7 . 2 ,
过滤后备用 。
2
.
2 细胞的培养 ①在无菌条件下配制完全培养液 井T 保
存备用 。 ②细胞复苏 : 从液氮罐中取出细胞冻存管 ,处理后
将细胞悬液加入完全培养液中 置无菌刻度离心管中低速离
心 5 m in 弃上清 接种于培养瓶中 置 37 T 5 % C O Z 孵箱中培
养 欢日换液 。 ③细胞传代与计数 : 肝癌细胞为贴壁生长细
胞 约 4 一 s d 传代一次 · 取 10 闪细胞悬液与等量染液混
合 取其中的 10 闪加入细胞计数板中数 4 大格 细胞数计算
公式 : 每毫升细胞数 = ( 4 大格细胞数之和 / 4) x Z x l了 ; 用
完全培养液将已经计数的细胞悬液的细胞浓度调至 2 x l了 /
m l 接种于细胞培养瓶中 。 37 T 5 % c o : 孵箱中培养 ,隔 日换
液 。 ④细胞冻存 : 取对数生长期细胞 ,消化离心 。 使细胞密
度约为 1 x l汀 / ml 分装于冻存管中置液氮罐保存 。
2
.
3 药物对细胞的毒性作用试验
2
.
3
.
1 收集对数期的肝癌细胞 调整细胞悬浮浓度 ,每孔加
入 19 0 闪 脯板 乃7 ℃ 5% c o Z 孵育 ,至细胞单层铺满 % 孔平
底板孔底 依次将 A 、 B 、 C 、 各组分药物 ( 10 闪) 加入培养板
中 海个浓度重复 3 个空 。 37 ℃ 5% c o Z 孵育 48 、 72 h ,倒置
显微镜下观察 · 每孔加入 20 闪 MT 溶液 ,培养 4 h ,终止 。
吸取孔内培养液 用酶联免疫检测仪于 4 90 n m 波长处检测
各处的吸光值 。
2
.
3
.
2 抑制率计算公式 : 阴性对照孔 O D 值 一 药物孔 O D
值 /阴性对照孔 O D 值 x 1 0 0 % 。
2
.
3
.
3 毒性判断标准 : 4 0 倍镜下 细胞生长正常 ( 无变圆 、
变形 、死亡 ) 为 一 细胞死亡 1% 一 24 % 为 + ; 25 % 一 49 % 为 +
+ ; 5 0 % 一 7 4% 为 + + + ; 7 5 % 一 1 0 0 % 为 + + + + 。
3 结果及分析
3
.
1 蓖麻根提取物 A 、 B 、 C 三组 48 h 对肝癌细胞的抑制作
用 : ①剂 量为 4 0 0 m g 几 抑制 率分 别为 : 28 . 08 % 、 5 . 71 % 、
27
.
0 4% ; ② 剂 量 为 2 0 0 m g 几 抑 制 率 分 别 为 : 30 . 62 % 、
14
.
01 %
、
28
.
25 % ; ③ 剂量 为 10 0 m g几 抑 制率 分 别为 : 、
31
.
4 5%
、
2
.
3%
、 仑 1 . 63 % ; ④剂量为 5 0 m g 几 抑制率分别为 :
1 3
.
2 7%
、
3
.
3 7%
、 仑5 . 4 7 % 。
3
.
2 蓖麻根提取物 A 、 B 、 C 三组 72 h 对肝癌细胞的抑制作
用 : ①剂量 为 4 0 0 m g几 抑制率分别为 : 58 . 53 % 、 14 . 97 % 、
13
.
82 % ; ② 剂 量 为 2 0 0 m g 几 抑 制 率 分 别 为 : 60 . 61 % 、
25
.
91 %
、
6
. 巧% ; ③ 剂 量 为 1 0 0 m g几 抑 制 率 分 别 为 :
62
.
4 6%
、
2
.
08 %
、 一 1 . 8 % ; ④剂量 为 50 m g几 抑制率分别
为 : 4 1. 8 7 % 、 一 2 3 % 、 斗 . 7 5 % 。
4 讨论
蓖麻根石油醚提取物的各剂量组 48 h 和 72 h 对肝癌细
胞的抑制率分 别是 2 8 . 0 8% 、 3 0 . 6 2% 、 3一 4 5 % 和 5 8 . 5 3 % 、
6 0
.
6 1%
、
6 2
.
4 6 %
。 提示蓖麻根石油醚提取物有较强的抑制
肝癌细胞的作用 。 即蓖麻根提取物在体外有较强的抗肝癌
细胞作用 。 也有研 究表 明 ,蓖麻毒素 有明显的抗 肿瘤作
用 2[] 。 MT 实验法具有简便 、 快捷 、 经济 、 可评率高 、 观察终
点客观等优点 在肿瘤的体外药敏试验中使用普遍 。 但它不
能测定细胞的绝对数 ,只可检测细胞的相对数和相对活力 。
参考文献
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( 2 ) : 5 6
.
壮腰止痛合剂的薄层色谱鉴别
刘移 兰
【摘要 ] 目的 鉴别壮腰止痛合剂中的当归 、 川育 防风 。 方法 采用薄层色谱 ( T L )C 鉴别制剂中
的当归 J } }育 ,防风 。 结果 薄层色谱法鉴别制剂中的当归 川育 ,防风 ,专属性强 ,分离度好 ,色谱斑点
清晰 。 结论 本方法简便灵敏 结果准确可靠 为本品的质量控制提供了简便的方法 。
【关键词 】 壮腰止痛合剂 ; 当归 、 川育 ,防风; T L C
壮腰止痛合剂由当归 、 川育 ,防风 ,独活 ,牛膝等十多味
中药组成 具有益肝肾 、 补气血 、 祛风湿 、 止痹痛等疗效 1[] 用
于治疗肝肾虚损 ,腰膝冷痛 ,风寒湿痹及腰痛损伤等症 。 是
江苏省泰州市姜堰中医院骨伤科与药剂科根据临床需要 经
过反复实践研制而成的 。 经多年的临床应用 ,取得了 比较显
著的治疗效果 。 为进一步控制本品的内在质量 ,确保用药安
全有效 本试验对壮腰止痛合剂中的主要药物当归 、 川育 ,防
风进行了薄层色谱鉴别 所建立的方法简便 灵敏 ,建议作为
本制剂的质量控制方法 。
1 样品与试药
壮腰止痛合剂 ( 江苏省泰州市姜堰中医 院 ) ,阴性对照
品 ,当归 、 防风 、 川育对照药材均购于中国药品生物制品检定
所 所用试剂均为分析纯 水为纯化水 。
2 薄层色谱鉴别
2
.
1 当归薄层色谱鉴别 1[] 取本品 3 0 m l 加乙醚 6 O ml 振
摇提取 分取乙醚层 滤过 滤液挥干 残渣加乙醇 Z ml 溶解
作为供试品溶液 。 另取缺当归的阴性对照样品 ,同法制成阴
性对照样品溶液 。 再取当归对照药材 1 9 加乙醚 20 m l 加热
回流 60 m in 滤过 滤液蒸干 ,残渣加乙醇 Z ml 溶解 ,作为对
照药材溶液 。 照薄层色谱法 2[] 实验 ,吸取上述三种溶液各 2
闪分别点于同一硅胶 G 薄层板上 以正己烷醋酸乙醋 ( :9
l) 为展开剂展开 ,取出晾干 ,置紫外灯 365 n m 下检视 。 供试
品溶液与对照品溶液相应的位置上显相 同颜色的亮蓝色荧
光斑点 。 阴性对照色谱中相应的位置上 ,无此斑点 。 ( 见图
1 )
。
作者单位 : 2 2 5 5 0 江苏省泰州市姜堰中医院