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红豆越橘果总黄酮保护线粒体及其机制



全 文 :※基础研究 食品科学 2013, Vol.34, No.19 67
红豆越橘果总黄酮保护线粒体及其机制
李兴泰1,冮 洁1,匡海学2,金凤新3,海 华1,张雅奎3,刘德文3
(1.大连民族学院生命科学学院,辽宁 大连 116600;2.黑龙江中医药大学药学院,黑龙江 哈尔滨 150040;
3.大兴安岭农林科学院,黑龙江 加格达奇 165000)
摘 要:目的:探索红豆越橘果总黄酮(VTF)保护线粒体活性及其机制。方法:用60%乙醇连续回流提取冷冻干燥
的红豆越橘果,经大孔吸附树脂纯化后得VTF,并用AlCl3比色法测定其总黄酮含量。以Fe
2+/VC诱发肝及脑线粒
体脂质过氧化,采用硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛(MDA)含量;用Ca2+诱导肝线粒体通透性转换(MPT),用分
光光度法测MPT程度;以还原型辅酶Ⅰ/吩嗪硫酸甲酯(NADH/PMS)为超氧阴离子自由基(O2
-·)生成系统,过氧化氢
(H2O2)/Fe
2+体系为羟自由基(�OH)生成系统,分别用氮蓝四唑(NBT)还原法和Fenton反应显色法测定VTF清除自由
基O2
-·及�OH的能力;用Na2S2O3滴定法测定VTF清除H2O2的能力;还测定VTF对Fe2+螯合能力及还原力的影响。结
果:冷冻干燥的红豆越橘果总黄酮提取率达5.1%,VTF提取物中黄酮的含量为72.3%。VTF可明显抑制线粒体MDA
生成;VTF能明显清除O2
-·、�OH和H2O2,并均呈剂量-效应关系;VTF具有一定的Fe2+螯合能力及还原力。另外,
Ca2+引起的MPT可通过加入VTF而在一定程度上抑制其发生。结论:VTF能通过抗氧化、清除活性氧及抑制MPT来
保护线粒体免受损伤,这是VTF保护线粒体的机制。
关键词:红豆越橘;总黄酮;线粒体保护;活性氧;线粒体通透性转换
Mitochondrial Protection Activity of Total Flavonoids from Vaccinium vitis-idaea Fruits and Underlying Mechanism
LI Xing-tai1,GANG Jie1,KUANG Hai-xue2,JIN Feng-xin3,HAI Hua1,ZHANG Ya-kui3,LIU De-wen3
(1. College of Life Science, Dalian Nationalities University, Dalian 116600, China;
2. College of Pharmacy, Heilongjiang University of Chinese Medicine, Harbin 150040, China;
3. Daxing’anling Academy of Agriculture and Forestry Sciences, Jiagedaqi 165000, China)
Abstract:Objective: To investigate the mitochondrial protection activity and underlying mechanism of total flavonoids
from Vaccinium vitis-idaea (VTF). Methods: Freeze-dried V. vitis-idaea fruits were extracted by continuous reflux with
60% ethanol followed by purification with macroporous resin to prepare VTF. Total flavonoids were determined by AlCl3
colorimetry. Lipid peroxidation of liver and brain mitochondria was induced by Fe2+/VC in vitro. Thiobarbituric acid
(TBA) colorimetry was used to measure malondialdehyde (MDA) content. Mitochondrial permeability transition (MPT)
of rat liver was induced by Ca2+ overload in vitro and measured by spectrophotometric method. The scavenging activities
of VTF against superoxide anion (O2
-·) and hydroxyl (·OH) free radicals, which were produced by reduced nicotinamide
adenine dinucleotide (NADH)/N-methylphenazonium methyl sulfate (PMS) and hydrogen peroxide (H2O2)/Fe
2+ system,
respectively, measured by NBT reduction and Fenton reaction colorimetry, respectively. The Na2S2O3 titration method was
used to measure the scavenging activities of VTF against H2O2. The effect of VTF on Fe
2+ chelation and reducing power was
also examined. Results: The extraction yield of flavonoids from freeze-dried V. vitis-idaea fruits was 5.1%, and the content
of VTF was 72.3%. VTF could inhibit mitochondrial MDA production and scavenge O2
-·, �OH and H2O2 significantly in
a dose-dependent manner, respectively. It could increase Fe2+ chelation and reducing power in some degree and protect
mitochondria from permeability transition. Conclusion: The protective effect of VTF on mitochondrial injury is ascribed to
antioxidation, scavenging reactive oxygen species (ROS) and inhibiting MPT, which may be the underlying mechanism of
mitochondrial protection by VTF.
收稿日期:2012-06-30
基金项目:中央高校基本科研业务费专项(DC12010210);黑龙江中医药大学博士后科研流动站大兴安岭北奇神绿色产业集团
博士后科研工作站资助项目(LRB10-316);大连民族学院人才引进科研项目(20116126)
作者简介:李兴泰(1966—),男,副教授,博士,研究方向为功能食品及中药作用机理。E-mail:xtli@dlnu.edu.cn
68 2013, Vol.34, No.19 食品科学 ※基础研究
Key words:Vaccinium vitis-idaea;total flavonoids;mitochondrial protection;reactive oxygen species;mitochondrial
permeability transition
中图分类号:Q731 文献标志码:A 文章编号:1002-6630(2013)19-0067-06
doi:10.7506/spkx1002-6630-201319015
红豆越橘(Vaccinium vitis-idaea L.)为杜鹃花科越橘
属(Vaccinium)植物,是环北极分布的极耐寒的多年生常
绿矮小灌木[1],在我国最北部边陲大兴安岭林区(当地
称其果为牙格达)分布广泛,其果实风味独特,营养丰
富,富含有机酸、糖类、维生素和微量元素,有很高
的营养价值[2]。果实酸、甘,为亮红色球状水果,直径
0.75~1.0cm[3],还富含类黄酮,如花青素、原花青素、
黄烷醇、黄酮醇及其糖苷等药理活性成分[4-5],具有抗氧
化[3]、抗菌[1]、抗炎[6]、抗癌防癌、减肥、抗糖尿病、预
防心血管疾病、提高记忆力[7-9]和改善视力等作用,是北
欧国家和俄罗斯最受欢迎的浆果之一[4],也是开发功能食
品极好的天然原料。研究表明,线粒体与健康长寿密切
相关。线粒体是机体进行各项生命功能活动的枢纽和核
心,也是所有细胞活性氧(ROS)的主要来源,因此,线粒
体又是自由基损伤最敏感的靶部位。线粒体通过操纵生
物能学、通透性转换等因素而调控细胞的生与死[10]。线
粒体功能障碍会破坏细胞、组织和器官的功能,进而引
起癌症、肥胖、心血管疾病、神经退行性疾病等多种疾
病和衰老的发生,所以,线粒体已成为治疗疾病的一个
新靶点[11-12]。由于对线粒体的保护是治疗线粒体相关疾
病的重要机制[13],主要由线粒体活性氧引起的蛋白质、
核酸与脂质氧化,是决定健康和寿命的关键因素[14]。因
此,保护线粒体对健康长寿具有重要意义。而红豆越橘
的以上药理作用均归因于其所含的黄酮类化合物[6],且其
抗氧化、抗癌、减肥、抗糖尿病、预防心血管疾病等作
用又均与线粒体密切相关。鉴于此,本实验从保护线粒
体视角研究红豆越橘果总黄酮的作用机理,以期为进一
步开发利用红豆越橘的保健功能提供科学依据,以提供
更广阔的市场应用前景。
1 材料与方法
1.1 动物、材料与试剂
实验用SD大鼠,由大连医科大学实验动物中心提供
(合格证号:2007 6A007)。
红豆越橘采自大兴安岭新林区。
考马斯亮蓝G-250、吩嗪硫酸甲酯(PMS) 美国
Fluka 公司;牛血清白蛋白、还原型辅酶Ⅰ(NADH)、氮
蓝四唑(NBT) 荷兰Boehringer Mannheim公司;硫代巴
比妥酸(TBA)、1,1,3,3-四乙氧基丙烷(TEP) 美国Sigma
公司;N-(2-羟乙基)哌嗪-N’-2-乙烷磺酸(Hepes) 德国
Merck公司;三羟甲基氨基甲烷(Tris) 美国Gibco公
司;4-吗啉丙烷磺酸(MOPS) 北京索莱宝科技有限
公司;钌红(RR)、Ferrozine 英国Alfa Aesar公司;
HPD-600大孔树脂 河北宝恩化工有限公司;其他试剂
均为国产或进口分析纯。
1.2 仪器与设备
Beckman Coulter Avanti J-E高速低温离心机(Beckman
JA-25.50转子) 美国Beckman公司;Polystat 34恒温水
浴锅 美国Techne公司;UV-2450紫外-可见分光光度计
日本岛津公司;DY89-1型电动玻璃匀浆机 宁波新芝
科器研究所;XW-80A旋涡混合器 上海精密实业有限
公司。
1.3 方法
1.3.1 红豆越橘果总黄酮(VTF)的制备及其含量测定
称取冷冻干燥的红豆越橘果20g,粉碎,置于索式
提取器,用石油醚脱脂后,加入60%乙醇,在80℃连续
回流提取3h,过滤,旋转蒸发除去溶剂,得总黄酮粗提
物,用95%乙醇醇沉(弃去沉淀),除去溶剂,用蒸馏水配
成一定浓度的水溶液(调pH5.0),上HPD-600大孔吸附树
脂柱。待吸附完全时,用蒸馏水冲洗树脂柱清洗杂质,
再用60%乙醇将吸附的黄酮物质洗脱下来,收集洗脱
液。旋转蒸发回收溶剂,60℃真空干燥,研磨成粉状,
即为VTF。以芦丁为标准品用AlCl3比色法测定VTF黄酮
含量[15]。
1.3.2 鼠肝及脑线粒体的制备
差速离心法分离线粒体[16],大鼠处死后,立即取出肝
脏及大脑,于预冷的生理盐水中洗去血迹,分别放入预冷的
含有线粒体分离介质(含0.25mol/L蔗糖、0.5mmol/L EDTA、
3mmol/L HEPES,pH7.4)的匀浆器中匀浆,1000×g、
4℃离心10min,取上清液于10000×g,4℃离心10min,
沉淀用分离介质洗涤2次,每次于10000×g、4℃离心
10min,沉淀即为线粒体,悬于一定量分离介质中,冰浴
中保存备用。以牛血清白蛋白为标准,Bradford法测定线
粒体蛋白质含量[17]。
1.3.3 丙二醛(MDA)含量的测定
用TBA显色法测定[18]。反应系统含0.25mmol/L FeSO4
和0.6mmol/L的VC(正常组不加FeSO4和VC),不同浓度的
VTF(模型组不加)与0.5mg线粒体蛋白,用pH7.4、0.1mol/L
的磷酸盐缓冲液(PBS)补充体积至2mL(空白参比管不加
线粒体和VTF),37℃水浴温育60min后,加入20%三氯
※基础研究 食品科学 2013, Vol.34, No.19 69
乙酸(TCA) 0.5mL终止反应,5000×g离心10min,取2mL
上清,加入1mL 0.67%硫代巴比妥酸(TBA),100℃煮沸
10min,以空白参比管调零, 于波长532nm处测吸光度A,
以TEP为外标,经线性回归分析计算MDA含量。VTF的
作用以MDA的抑制率(IR)按式(1)表示。
IR/% = h100
C῵ൟ ˉ CVTF
C῵ൟ ˉ Cℷᐌ
(1)
式中:C为MDA含量。
1.3.4 线粒体通透性转换(MPT)测定
在线粒体温育介质(250mmol/L蔗糖、1mmol/L
Pi-Tris、10mmol/L Tris-MOPS、5mmol/L谷氨酸-Tris、
2.5mmol/L苹果酸-Tris,pH7.4、25℃)中加入150�mol/L
Ca2+,再加入VTF(模型组不加)或钌红(0.5�mol/L,模型
组不加),加入0.5mg线粒体起始实验,终体积为2mL。在
0、2、5、10、20、30min通过检测线粒体悬液540nm处
吸光度下降程度测定MPT[19-20]。
1.3.5 超氧阴离子自由基(O2
-·)的测定
以NADH/PMS为O2
-·生成系统,以NBT还原法测定
O2
-·的生成情况[21]。16mmol/L的Tris-HCl缓冲液(pH8.0)中
含NADH 73�mol/L、NBT 50�mol/L、PMS 15�mol/L,空
白管不加PMS,对照组不加VTF,总体积为3mL,以空
白管调零,于波长560nm处测定吸光度,2min时准确记
录数据,并按式(2)计算清除率(SR),以VC为阳性对照。
SR/% = h100
Aᇍ✻ ˉ AVTF៪VC
Aᇍ✻
(2)
1.3.6 羟自由基(·OH)清除活性分析
总体积2mL的Fenton反应体系含0.75mmol/L硫酸亚
铁、0.75mmol/L邻二氮菲、150mmol/L PBS和不同浓度的
VTF或BHT、0.8mmol/L H2O2。加入H2O2起始反应,各管
分别在37℃水浴中孵育60min,测定波长536nm处Fe2+-邻
二氮菲复合物吸光度[22]。以BHT为阳性对照。VTF对·OH
的清除能力通过式(3)计算。
SR/% = h100
A1 ˉ A0
A2 - A0
(3)
式中:A0为对照组(加H2O2但不加VTF和BHT)吸光
度;A1为VTF或BHT组吸光度;A2为空白组(不加VTF、
BHT和H2O2)吸光度。
1.3.7 H2O2的测定
VTF的H2O2清除活性按Zhao等
[23]方法测定。0.1mmol/L
H2O2 1.0mL与1.0mL不同浓度的VTF混合,再加入100�L
3%钼酸铵、10mL 2mol/L硫酸和7.0mL 1.8mol/L碘化钾。
混合溶液用5mmol/L Na2S2O3滴定至黄色消失,以BHT为
阳性对照,按式(4)计算。
SR/% = h100
V0 ˉ V1
V0
(4)
式中:V0是H2O2存在时滴定对照样品(不含VTF)使
用的Na2S2O3溶液体积;V1是VTF或BHT存在时使用的
Na2S2O3溶液体积。
1.3.8 亚铁离子螯合能力
试管中依次加入不同浓度的VTF溶液或EDTA溶
液(0.6mg/mL)、0.1mL 0.375mmol/L FeSO4、0.1mL
2.25mmol/L Ferrozine溶液,最后用Hepes缓冲液补充体积
至3mL,漩涡混匀,室温条件下反应20min,测定562nm
波长处的吸光度,结果以螯合率表示[24],以EDTA为阳性
对照,按式(5)计算。
㶃ড়⥛/% = h100
Aᇍ✻ ˉ AVTF៪EDTA
Aᇍ✻
(5)
1.3.9 总还原力
取不同浓度的VTF溶液于试管中,加入0.5mL
0.2mol/L PBS(pH6.6)和0.5mL 1%K3Fe(CN)6溶液,用超
纯水补足至1.5mL,50℃水浴保温20min后,冷却,再
加入1.0mL 10% TCA,3000r/min离心10min,取上清液
1.5mL,依次加入0.1mL 0.1%的FeCl3溶液,加水补足到
2mL,混匀,静置10min,测定700nm波长处吸光度,吸
光度越大表示还原力越强[25]。以BHT为阳性对照。
1.3.10 统计学处理
数据以 ±s表示,采用SPSS16.0统计学软件进行统
计分析,组间比较采用单因素方差分析。P<0.05表示有
显著性差异,P<0.01表示有较显著性差异。
2 结果与分析
2.1 红豆越橘果总黄酮的含量测定结果
红豆越橘果富含黄酮醇、花青素、原花青素和花色
苷等黄酮类活性成分,且类黄酮为其功能因子;因此,
本实验分离VTF并用AlCl3比色法测定VTF含量,其中总
黄酮提取率达5.1%,提取物中VTF含量为72.3%。
2.2 红豆越橘果总黄酮对鼠肝及脑线粒体MDA生成的
影响
表 1 VTF对鼠肝及脑线粒体MDA生成的影响(n=6)
Table 1 Effect of VTF on MDA generation in rat liver and brain
mitochondria (n=6)
组别 质量浓度/(mg/L)
肝 脑
MDA/
(nmol/mg pro) IR/%
MDA/
(nmol/mg pro) IR/%
正常组 0.65±0.33b 0.53±0.29b
模型组 5.89±1.43 5.67±1.35
5 3.36±0.61b 48.28 4.23±0.78 28.02
10 2.59±0.48b 62.98 3.57±0.88b 40.86
VTF组 20 2.12±0.53b 71.95 2.73±0.75b 57.20
40 1.66±0.45b 80.73 2.03±0.52b 70.82
80 1.25±0.47b 88.55 1.46±0.37b 81.91
注:a.与模型组比较,有显著性差异(P< 0.05) ;b.与模型组比较,有较
显著性差异(P< 0.01)。表 2同。
70 2013, Vol.34, No.19 食品科学 ※基础研究
在本研究中,Fe2+与鼠肝或脑线粒体温育,并通过测
定波长532nm处的吸光度检测其对线粒体的影响。由表
1可知,用Fe2+/VC处理后肝及脑线粒体中的MDA显著增
多,可被VTF以质量浓度依赖性的方式抑制,表明其具有
抗氧化活性。研究表明,线粒体脂质过氧化物的量随年龄
而增加,膜脂质过氧化已被认为是线粒体膜功能降低的重
要原因之一,过氧化改变膜脂质的结构,破坏脂质双层组
织结构,改变膜的流动性和通透性[26]。所以,VTF可能通
过抑制脂质过氧化而具有一定的抗衰老作用。
2.3 红豆越橘果总黄酮对肝线粒体通透性转换(MPT)的
影响
表 2 VTF对肝线粒体通透性转换的影响(x±s, n=6)
Table 2 Effect of VTF on liver mitochondrial permeability
transition (x±s, n=6)
时间/min 正常组 模型组 钌红组(0.5�mol/L) VTF组
20mg/L 40mg/L
0 0.473±0.035 0.468±0.028 0.475±0.039 0.478±0.027 0.482±0.029
2 0.437±0.025b 0.376±0.027 0.419±0.033b 0.401±0.029 0.413±0.028a
5 0.405±0.034b 0.338±0.024 0.389±0.023b 0.365±0.023 0.382±0.027a
10 0.386±0.027b 0.303±0.037 0.376±0.032b 0.359±0.035a 0.367±0.036a
20 0.363±0.036b 0.276±0.035 0.359±0.039b 0.351±0.032b 0.361±0.031b
30 0.355±0.043b 0.265±0.039 0.354±0.041b 0.342±0.038b 0.356±0.033b
MPT是监测线粒体膜通透性及评价线粒体功能的敏
感指标。研究表明,150�mol/L Ca2+引起可检测的MPT,
Ca2+积累后加入钌红(RR),可阻止Ca2+的再分布[27]。由表
2可知,用150�mol/L Ca2+导致MPT,A540nm降低表明线粒
体发生了通透性转换,Ca2+诱导明显的MPT,其效应几
乎被0.5�mol/L钌红完全抑制,VTF显著抑制MPT,且当
质量浓度较高时抑制效应增强。VTF抑制MPT作用与其
清除活性氧及抑制脂质过氧化作用密切相关,说明其可
能是通过清除活性氧及抗氧化而抑制MPT的,从而产生
保护线粒体作用。
2.4 红豆越橘果总黄酮对O2
-·、·OH及H2O2清除作用的
影响
表 3 VTF对O-2 ·的清除作用(x±s, n=6)
Table 3 Scavenging effect of VTF against superoxide anion free
radical (x±s, n=6)
组别 质量浓度/(mg/L) A560nm SR/%
对照组 0.377±0.028a
VC组
5 0.315±0.033b 16.45
10 0.268±0.025c 28.91
20 0.188±0.031d 50.13
40 0.117±0.022e 68.97
80 0.062±0.023f 83.55
VTF组
5 0.297±0.025b 21.22
10 0.245±0.027c 35.01
20 0.153±0.033d 59.42
40 0.098±0.026e 74.01
80 0.042±0.015f 88.86
注:组间字母不同表示有显著性差异(P< 0.05)。下同。
表 4 VTF对·OH的清除作用(x±s, n=6)
Table 4 Scavenging effect of VTF against hydroxyl free radical (x±s, n=6)
组别 质量浓度/(mg/L) A536nm SR/%
空白组 0.138±0.017a
对照组 0.025±0.005d
BHT组
0.1 0.028±0.008d 2.65
0.2 0.033±0.011d 7.08
0.4 0.056±0.013c 27.43
0.8 0.097±0.009b 63.72
1.6 0.116±0.022ab 80.53
VTF组
1 0.027±0.004d 1.77
2 0.036±0.009d 9.73
4 0.061±0.010c 31.86
8 0.083±0.016b 51.33
16 0.101±0.013b 67.26
表 5 VTF对H2O2的清除作用(x±s, n=6)
Table 5 Scavenging effect of VTF against H2O2 (x±s, n=6)
组别 质量浓度/(mg/L) V(Na2S2O3)/mL SR/%
对照组 1.585±0.033a
BHT组
2 1.387±0.032b 12.49
4 1.202±0.027c 24.16
8 0.932±0.021f 41.20
16 0.788±0.019g 50.28
32 0.635±0.018i 59.94
VTF组
10 1.338±0.035b 15.58
20 1.115±0.021d 29.65
40 0.976±0.024e 38.42
80 0.678±0.029h 57.22
160 0.466±0.026j 70.60
由表3~5可知,与对照组相比,VTF可显著清除
O2
-·、·OH及H2O2 3种反应氧中间产物,且呈剂量-效应
关系,其清除O2
-·作用强度略高于阳性对照VC组;其清
除·OH作用强度虽不如阳性对照BHT强,但BHT为合成
抗氧化剂,有一定毒性。体内最早生产的自由基是O2
-·,
O2
-·是线粒体生成有害活性氧的源头,其可被进一步还原
为H2O2和·OH,·OH作用最强,一旦清除了O2-·,便可以
从根本上预防体内过多的�OH和其他活性氧,达到保护
线粒体的目的。作为线粒体生物功能的后果,其总是暴
露在反应氧中间产物中,并有一个复杂的抗氧化防御系
统以抵抗被氧化。生物系统中氧化剂和抗氧化能力的内稳
态被打破时且氧化还原状态更加助氧化时,氧化应激便会
发生。因此,在线粒体氧化应激条件下,即线粒体反应氧
中间产物的生成超过抗氧化能力条件下,线粒体可能遭受
对其生物分子的氧化损伤。因此,适量补充外源性活性氧
清除剂,可预防这类损伤和病变的发生与发展。
2.5 红豆越橘果总黄酮对Fe2+螯合能力的影响
Fe2+能够通过Fenton反应产生自由基,可能诱发多种
疾病。具有螯合Fe2+活性的物质能够降低导致脂质过氧化
的过渡金属催化剂的浓度,阻止ROS的产生以及由此引
起的氧化损伤,因此对Fe2+的螯合能力与抗氧化有密切的
※基础研究 食品科学 2013, Vol.34, No.19 71
关系。如表6所示,在VTF低质量浓度时作用不显著,随
着质量浓度的升高,对Fe2+的螯合能力随之增加,当质量
浓度为2000mg/L时,其螯合率达到26.48%。但VTF螯合
Fe2+能力远不如EDTA强。
表 6 VTF 对Fe2+螯合能力的影响(x±s, n=6)
Table 6 Effect of VTF on Fe2+ chelation (x±s, n=6)
组别 质量浓度/(mg/L) A562nm Fe2+螯合率/%
对照 0.355±0.025a
EDTA
1 0.328±0.028a 7.61
2 0.283±0.016b 20.28
4 0.206±0.018c 41.97
8 0.127±0.013d 64.23
16 0.096±0.025e 72.96
VTF
100 0.347±0.034a 2.25
200 0.335±0.029a 5.63
500 0.301±0.017b 15.21
1000 0.283±0.026b 20.28
2000 0.261±0.023b 26.48
2.6 红豆越橘果总黄酮对还原力的影响
研究表明,抗氧化剂的还原力与其潜在的抗氧化活
性之间有密切关系,还原力越强,抗氧化性越强。本实
验以还原Fe3+测定VTF的还原力,A700nm随还原力增加而增
加,VTF还原力随剂量增加而增强,但不如BHT强,如
表7所示。还原力大的物质是良好的电子供体,供应的电
子除可使Fe3+还原为Fe2+外,亦可与自由基反应,使自由
基成为稳定的物质。
表 7 VTF 对还原力的影响(x±s, n=6)
Table 7 Effect of VTF on reducing power (x±s, n=6)
组别 质量浓度/(mg/L) A700nm
BHT组
2 0.028±0.008i
4 0.113±0.013g
8 0.236±0.016e
16 0.477±0.023c
32 0.736±0.035a
VTF组
10 0.037±0.009i
20 0.071±0.021h
50 0.181±0.027f
100 0.289±0.023d
200 0.551±0.028b
3 讨 论
红豆越橘是广泛分布在大兴安岭地区的野生小浆
果,是我国最主要的越橘属植物之一,也是风靡世界的
新兴保健水果蓝莓的重要野生品种之一。研究表明,小
浆果有高含量的抗氧化和抗癌成分,食用这些水果可降
低癌症的发病率和死亡率,小浆果的摄入量高,具有防
止尿路感染、提高免疫功能、降低血压等好处[3]。红豆越
橘富含花青素和花色苷等黄酮类活性成分。黄酮类化合
物,又称生物类黄酮,是一类重要的多酚类天然产物,
具有保护心脑血管、利胆保肝、清除自由基、抗氧化、
抗衰老、抗癌、抗菌、抗炎等多种生物活性[5,28]。人体不
能直接合成类黄酮,只能从食品中获得。因此近年来人
们积极关注从植物体中提取活性强的天然黄酮成分,并进
一步加工成功能性食品和药品等。红豆越橘果实所含的类
黄酮中,槲皮素和矢车菊素-3-半乳糖苷是最丰富的[29]。
本实验结果表明,红豆越橘果总黄酮能明显抑制鼠肝线
粒体及脑线粒体MDA的生成,并呈剂量-效应关系,表明
其能很好地防止机体脂质过氧化。同时观察到VTF能有
效抑制线粒体通透性转换并清除3种主要自由基,且清除
作用随剂量增加而加强,并具有一定的Fe2+螯合能力和还
原力。脂质过氧化反应一般是自由基驱动的链反应,当
暴露于助氧化金属离子如Fe2+的环境中,肝组织中的不饱
和脂质对过氧化更敏感。线粒体富含多不饱和脂肪酸,
易与自由基反应形成脂质过氧化物,Fe2+是最有可能的活
性物质,Fe2+通过与氧的相互作用产生氧化剂,助氧化剂
和ROS也可导致线粒体的脂质过氧化,导致膜通透性增
加,继而引起MPT[30]。说明黄酮为红豆越橘重要的功能
因子,具有一定的健康益处,VTF能通过抗氧化、清除
活性氧及抑制MPT来保护线粒体,这是VTF保护线粒体
的机制。
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