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零余子粗多糖超声波辅助提取工艺优化



全 文 :基金项目:国家自然科学基金(编号:31340059);粮油深加工与品质
控制湖南省2011协同创新项目(编号:湘教通〔2013〕448
号)
作者简介:任佳丽(1977—),女,中南林业科技大学副教授,博士。
E-mail:rjl_cl@163.com
收稿日期:2016-06-06
第32卷第9期
2 0 1 6年9月 食 品 与 机 械
OOD&MACHINERY Vol.32,No.9
Sept.2 0 1 6
DOI:10.13652/j.issn.1003-5788.2016.09.037
零余子粗多糖超声波辅助提取工艺优化
Optimization on ultrasound-assisted extraction process of
crude polysaccharide from bulbil
任佳丽1,2
REN Jia-li1,2
 
黄仁贵1
HUANG Ren-gui1
 
李忠海1,2
LI Zhong-hai1,2
(1.中南林业科技大学食品科学与工程学院,湖南 长沙 410004;
2.稻谷及副产物深加工国家工程实验室,湖南 长沙 410004)
(1.College of Food Science and Engineering,Central South University of Forestry and Technology,Changsha 410004,
China;2.National Engineering Laboratory for Rice and By-product Deep Processing,Changsha 410004,China)
摘要:利用响应面法优化零余子粗多糖的超声波辅助提取工
艺。通过单因素试验考察液料比、超声功率与提取时间对粗
多糖得率的影响。在单因素试验的基础上,采用 Box-
Behnken中心组合方法设计试验,以粗多糖得率为响应值进
行响应面分析,获得最优提取工艺为料液比18∶1(mL/g)、
超声 功 率 760 W、提 取 时 间 23 min,粗 多 糖 得 率 可 达
60.68%,与预测值相对误差为2.03%,结果表明预测值与试
验值之间具有良好的拟合度,采用响应面法对零余子多糖超
声波提取条件进行优化合理可行。
关键词:粗多糖;零余子;超声波
Abstract:Response surface analysis was proposed to optimize the ul-
trasound-assisted extraction process of crude polysaccharides from
bulbils.The effects of solid-liquid ratio,ultrasonic power and extrac-
tion time on crude polysaccharide yield were investigated by single
factor experiments.Response surface analysis was carried out by
using the crude polysaccharide yield as response value and the box
Behnken method to design the experiments.The optimum extraction
conditions were obtained as folows:solid-liquid ratio,18∶1
(mL/g),ultrasonic power,760W;extraction time,23min and the
crude polysaccharides yield could be up to 60.68%,which agreed
with the predicted value(the relative error is 2.03%).The results
demonstrated that it is reasonable and practicable to optimize the ul-
trasonic extraction process using response surface methodology.
Keywords:crude polysaccharide;bulbil;ultrasonic
零余子,俗称“山药蛋”,有地方亦称“山药豆”,是薯蓣叶
腋间的珠芽,呈卵圆形或椭圆形,直径约0.4~2.0cm,外表
皮淡黄色,有细皱纹,气味淡而不苦,口嚼粘腻。山药零余子
味甘温、无毒、主补虚、强腰脚、食之不饥,功能比山药还要
强,自古就是营养价值很高的滋补食品和药用价值很高的药
材,可提高人体免疫功能和抗病能力[1]。研究发现,零余子
主要含淀粉、多糖(包括黏液质及糖蛋白)、蛋白质,并含多种
游离氨基酸、尿囊素、胆碱、淀粉酶、止杈素 (又称脱落酸d-
absicisin)、多巴胺(dopamine)和山药素Ⅰ (batatasin Ⅰ)
等[2];零余子多糖具有较好的抗氧化性与降血糖作用[3-4]。
粗多糖是指复合型杂多糖,含有黏多糖、脂多糖、结合多
糖(糖蛋白及黏蛋白)等杂质。研究显示,粗多糖具有降血
脂[5]、抗凝血[6]、抗氧化[7]等多种生物活性。其提取方法有
热水浸提取[8]、超声波辅助提取[9]、微波辅助提取[10]、酶法
提取[11]、超临界提取[12]以及复合提取[13]等。其中热水浸提
法的时间长,得率低[14-15];酶法提取成本高[16],对反应条件
温度、pH、底物浓度等较为敏感。超声波法辅助提取粗多
糖,操作简单,而且由于超声波巨大的空化作用和强烈振动,
可加速粗多糖进入溶剂,利于提取[17]。
崔玮等[18]利用响应面法优化了锁阳原花青素果胶酶辅
助提取的工艺,其得率高于前人的研究结果。余洋定等[19]
及Chen等[20]分别利用响应面分析优化果胶酶辅助提取裙
带菜孢子叶多糖工艺和葡萄糖氧化酶辅助提取黄芪多糖的
工艺;贾丽艳等[21]利用复合酶法对零余子多糖进行了提取,
但是利用响应面法优化零余子多糖的超声波辅助水提工艺
尚未见报道。本研究拟采用响应面法对超声波辅助水提零
余子粗多糖进行研究,旨在优化零余子粗多糖提取工艺,为
进一步提高零余子综合利用价值提供参考。
941
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.1.1 材料与试剂
零余子:铁棍山药零余子,购于河南省焦作温县;
氢氧化钠、无水乙醇:分析纯,天津市恒兴化学试剂制造
有限公司;
丙酮:分析纯,湖南汇虹试剂有限公司;
配制用水均为二次蒸馏水。
1.1.2 主要仪器设备
电热恒温水浴锅:DK-98-Ⅱ型,天津市泰斯特仪器有限
公司;
电热鼓风干燥箱:101-2AB型,天津市泰斯特仪器有限
公司;
真空冷冻干燥机:LJG-10型,北京松源华兴科技发展有
限公司;
高速万能粉碎机:FW200型,北京科伟永兴仪器有限
公司;
超声波细胞粉碎机:JY 92-Ⅱ型,宁波新枝生物科技股
份有限公司;
离心机:TD4K-Z型,长沙市东旺实验仪器有限公司;
旋转 蒸 发 仪:Hei-VAP Precision 型,德 国 Heidolph
公司。
1.2 试验方法
1.2.1 零余子粗多糖提取工艺流程
零余子→去皮→切片→冷冻干燥→粉碎→过60目筛→
超声波辅助水提取→离心取上清液(4 000r/min离心
20min)→浓缩(60℃下旋转蒸发至原体积的1/5)→醇沉
(将4倍体积的95%乙醇水溶液缓缓倒入浓缩液中,边倒边
搅拌,静置过夜)→离心取沉淀(4 000r/min离心20min;沉
淀依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤)→干燥(60℃鼓风
干燥箱中烘干至恒重)→粗多糖
1.2.2 粗多糖得率计算 按式(1)进行。
P =
m1
m2
×100% , (1)
式中:
P———粗多糖得率,%;
m1———粗多糖的质量,g;
m2———零余子粉的质量,g。
1.2.3 单因素试验设计 准确称取零余子粉3g,置于小烧
杯中,考察液料比、超声功率与超声时间对粗多糖得率的
影响。
(1)超声功率对粗多糖得率的影响:在超声时间20min,
液料比为251(mL/g),超声功率分别为440,560,680,
800,920W的条件下,考察超声功率对零余子粗多糖得率的
影响。
(2)液料比对粗多糖得率的影响:在超声时间20min,
超声功率920W,液料比分别为101,151,201,251,
301(mL/g)的条件下,考察液料比对零余子粗多糖得率的
影响。
(3)提取时间对粗多糖得率的影响:在超声功率920W,
液料比为151(mL/g),超声时间分别为5,15,25,35,
45min的条件下,考察超声时间对零余子粗多糖得率的
影响。
1.2.4 响应面试验设计 在单因素试验的基础上,采用
Box-Behnkex试验设计,以超声功率、液料比、提取时间为影
响因子,零余子粗多糖得率为响应值,进行响应面法优化零
余子粗多糖的超声波提取工艺。
1.2.5 数据处理 每个试验进行3次重复,单因素试验中利
用origin 8.5作图,优化试验中利用Design-Expert 8.0.6软件
进行数据分析、统计及作图。
2 结果与分析
2.1 单因素试验结果与分析
2.1.1 超声功率对粗多糖得率的影响 由图1可知:在所选
超声功率范围内,零余子粗多糖得率呈现出随着超声功率的
增大而增加的趋势。其中,当超声功率在440~800W变动,
粗多糖得率的增幅较为微小,变化缓慢;当超声功率超过
800W,零余子粗多糖得率增幅显著。考虑到所使用仪器最
大功率只有1 000W,因此将超声功率920W 设置为+1水
平,将800W设置为0水平。
2.1.2 液料比对粗多糖得率的影响 由图2可知:在所选液
料比的范围内,零余子粗多糖得率随着液料比的增加,呈现
出先增加后降低的大致趋势,其中在151(mL/g)左右达到
最大值。可能是溶剂不断增多,利于零余子多糖的溶出;随
图1 超声功率对得率的影响
Figure 1 Effect of ultrasonic power on yield
图2 液料比对得率的影响
Figure 2 Effect of solid-liquid ratio on yield
051
提取与活性   2016年第9期
着溶剂继续增加,零余子多糖在巨大的空化作用下开始水
解,导致其含量降低。因此,将液料比拟定在151(mL/g)
左右,这个结果与官波等[22]对山药多糖提取工艺的优化结
果相似。
2.1.3 提取时间对粗多糖得率的影响 由图3可知:在所选
提取时间的范围内,零余子粗多糖得率呈现出先增加后降低
的趋势。其中,提取时间在5min到10min,粗多糖得率急
剧上升;在时间为15min左右达到最大值。可能是随着提
取时间的延长,零余子多糖的溶出逐渐增多;当超声时间继
续延长,零余子多糖反而被降解,导致粗多糖得率降低。因
此,将提取时间拟定在15min左右。
图3 提取时间对得率的影响
Figure 3 Effect of extraction time on yield
2.2 超声波辅助提取零余子粗多糖工艺的优化
2.2.1 响应面分析因素水平的选取 在单因素试验结果的
基础上,根据Box-Behnken的中心组合设计原理,综合考虑
单因素影响试验的结果,选取液料比、超声功率与提取时间
为影响因子,采用三因素三水平的响应面分析方法,各因素
的水平及编码见表1。
表1 零余子粗多糖提取响应面分析因素水平表
Table 1 Factors and levels of Box-Benhnken design test on
extraction conditions of crude Polysaccharide
from bulbils
编码水平
X1液料比
(mL/g)
X2超声功率/

X3提取时间/
min
-1  10  680  5
0  15  800  15
1  20  920  25
2.2.2 响应面分析方案及结果 根据Box-Behnken的中心
组合设计原理,试验方案及结果见表2。
  利用软件Design expert 8.0.6,以零余子粗多糖得率为
响应值进行分析,经回归拟合后得出,各影响因子对响应值
的影响可用式(2)函数表示,回归分析见表3。
Y=51.27+11.76 X1+0.90 X2+19.50 X3+1.50 X1X2+
9.41 X1X3+1.32 X2X3-8.90 X21-4.46 X22-17.98 X23。 (2)
  由表3可知,回归模型具有较高的F 值(F=18.59)和极
低的P值(P=0.000 4),模型显著性良好。其中,X1(液料
表2 响应面分析方案及试验结果
Table 2 Program and experimental results of RSA
试验号 X1 X2 X3 Y 得率/%
1 -1 -1  0  22.81
2  1 -1  0  52.50
3 -1  1  0  20.32
4  1  1  0  56.02
5 -1  0 -1  9.36
6  1  0 -1  4.90
7 -1  0  1  25.07
8  1  0  1  58.24
9  0 -1 -1  6.89
10  0  1 -1  7.33
11  0 -1  1  47.72
12  0  1  1  53.42
13  0  0  0  48.57
14  0  0  0  49.15
15  0  0  0  57.90
16  0  0  0  51.03
17  0  0  0  49.72
表3 回归分析结果
Table 3 Analysis results of regression
方差来源 平方和 自由度 均值 F 值 P值 显著性
模型 6 444.45  9  716.05  18.59  0.000 4 **
X1 1 106.85  1  1 106.85  28.74  0.001 1 **
X2 6.43  1  6.43  0.17  0.695 1
X3 3 040.83  1  3 040.83  78.96 <0.000 1 **
X1X2 9.03  1  9.03  0.23  0.643 0
X1X3 354.00  1  354.00  9.19  0.019 1 *
X2X3 6.92  1  6.92  0.18  0.684 4
X21 333.85  1  333.85  8.67  0.021 6 *
X22 83.64  1  83.64  2.17  0.184 0
X23 1 360.73  1  1 360.73  35.34  0.000 6 *
残差 269.56  7  38.51

失拟项 211.36  3  70.45  4.84  0.080 8
纯误差 58.20  4  14.55
  决定系数R2=0.959 9,调整决定系数adj-R2=0.908 2;**表
示P<0.01极显著,*表示P<0.05显著。
比)、X3(提取时间)对响应值影响极显著,X2(超声功率)在所
选范围内对响应值无显著影响;对于3个影响因子的交互作
用,只有X1、X3交互作用明显,显著影响零余子粗多糖得率。
本试验结果中,决定系数(R2)为0.959 9,表明此模型下零余
子粗多糖得率的实验值与预测值具有较好的一致性[23],调
整决定系数(adj-R2)为0.908 2说明零余子粗多糖得率总变
异中大约90.82%是由独立变量决定的;另外,失拟项的F 值
为4.84,P值为0.080 8,相对于纯误差不显著,因此,回归模
型具有更高的适合度[24]。
2.2.3 响应面图与等值线图分析 根据回归模型绘制相应
151
第32卷第9期 任佳丽等:零余子粗多糖超声波辅助提取工艺优化  
响应曲面图与等值线图,分析各参数对零余子粗多糖得率的
影响,结果见图4~6。其中,由图4可知,超声功率对零余子
粗多糖得率的影响不明显,而得率随着相应的液料比从-1
水平到+1水平变化,呈现出增加的趋势,可能是溶剂含量
的增大,加速了多糖的溶出,致使得率提高。但液料比不宜
过大,当液料比接近+1水平,零余子粗多糖得率下降,可能
是水分含量增加,部分多糖开始降解。由图5可知,液料比
与提取时间两个因子在所取水平内,粗多糖得率呈现出先增
加后降低的整体趋势,对零余子多糖得率影响显著,二者交
互作用明显。可能是随着时间的延长,零余子多糖的溶出逐
渐增多;当时间超过15min,多糖逐渐降解,致使粗多糖得率
下降。图6与图4相似,表明超声功率对零余子粗多糖得率
影响不显著,而超声时间的延长,导致粗多糖得率先增加后
降低。
利用Design expert软件,结合回归模型与响应面与等值
线图分析得出零余子粗多糖超声波提取的最佳工艺条件为:
料液比17.81(mL/g)、超声功率760.4 W、超声时间
22.9min。该条件下,预测零余子粗多糖得率可达61.94%。
2.3 验证实验结果
考虑到实际操作的方便性,将最佳提取工艺调整为:料
液比181(mL/g)、超声功率760W、提取时间23min。在
修正后的优化工艺条件下,平行实验3次,得出零余子粗多
糖得率为60.68%,与预测值相对误差为2.03%,表明预测值
与实验值存在较好的一致性,说明本回归模型准确且较为可
图4 液料比与超声功率交互作用对零余子粗多糖得率的影响
Figure 4 Effect of liquid-to solid ratio and ultrasonic power on the yield of bulbil crude polysaccharide
图5 液料比与提取时间交互作用对零余子粗多糖得率的影响
Figure 5 Effect of liquid-to solid ratio and extraction time on the yield of bulbi crude polysaccharide
图6 超声功率与提取时间交互作用对零余子粗多糖得率的影响
Figure 6 Effect of ultrasonic power and extraction time on the yield of bulbil crude polysaccharide
251
提取与活性   2016年第9期
靠,具有一定的应用价值。
3 结论
在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken设计试验,
以液料比、超声功率与提取时间为影响因子,零余子粗多糖
得率为响应值,进行响应面法优化零余子粗多糖的超声波提
取工艺,得出最佳提取工艺条件为:料液比181(mL/g)、超
声功率760W、提取时间23min。在此优化条件下,预测得
率达到61.94%。验证实验表明,预测值与实验值存在较好
的一致性,此回归模型重复性较好,对于优化零余子多糖的
超声波法提取工艺是合理的,在零余子综合利用方面具有一
定的应用价值。
研究结果显示,超声波辅助水提取可以提高零余子粗多
糖得率,具有较大应用前景。然而,该法得出的多糖为粗多
糖,含有蛋白质、核酸及无机盐等杂质,零余子粗多糖的纯
化、结构鉴定以及纯化后多糖的抗氧化、降血脂、抗疲劳等生
物活性有还待深入研究。另外,多糖结构复杂,不同的提取
方式可能在一定程度上影响活性功能,因此,研究提取方式
对零余子多糖的生物活性影响亦具有重要意义。
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