全 文 ：Apr.2009
Vol.35　No.2
现　代　临　床　医　学
JOURNALOFMODERNCLINICALMEDICINE
2009年 4月
第 35卷　第 2期
·论著与研究 ·
[文章编号 ] 1673-1557(2009)02-0094-03　　　[中图分类号 ] R392.32　　 　　[文献标志码 ] A　
基金项目:浙江省教育厅科研项目 SJY03011(20030800)
温州医学院科研项目 XNK07055
通讯作者:陈向敏 , wmccxm@wzmc.net
槐白皮对辐射损伤小鼠免疫调节及骨髓造血细胞的修复作用
张　婵 ,陈向敏 ,董海艳 ,李安乐
(温州医学院 ,浙江　温州　325027)
[摘要 ]目的:探讨槐白皮对急性放射损伤小鼠免疫调节及骨髓造血细胞的修复作用。方法:取 50只昆明小鼠 ,随机
分为槐白皮组 、照射对照组和正常组。采用 MTT法检测小鼠脾淋巴细胞 IL-2水平及免疫细胞化学 SABC染色法检测骨
髓组织中 VEGF的表达水平。结果:IL-2水平检测槐白皮 0.2 mg· mL-1、0.4 mg· mL-1 、0.8 mg· mL-1浓度组与照射对
照组比较有显著性差异(P<0.05), 与正常组比较无显著性差异(P>0.05);且槐白皮浓度 0.4 mg· mL-1组最强 , 槐白皮
浓度的 0.2 mg· mL-1为最弱。槐白皮各浓度组的 VEGF表达水平与照射对照组比较有显著性差异(P<0.05), 槐白皮浓
度为 0.4mg· mL-1浓度组与正常组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:槐白皮可调节免疫功能 ,增强抗辐射能力 , 对急
性放射损伤小鼠骨髓造血细胞的恢复具有促进作用。
[关键词 ]槐白皮;免疫调节;IL-2;VEGF
RecoveryEffectsofSophoraJaponicalonImmunoregulation
andBoneMarrowHematopoieticCelsinMiceafterIrradiation
ZHANGChan, CHENXiang-min, DongHai-yan, LiAn-le
(WenzhouMedicalColege, ZhejiangWenzhou　325027, China)
[ Abstract] Objective:Toexploretherecoveryeffectsofsophorajaponicalonimmunoloregulationandbonemarow
hematopoieticcellsinmiceafteriradiation.Methods:50 miceweredividedinto3 groups:sophorajaponicalgroup、irradiation
injuredgroupandnormalgroup.TheproliferationofTlymphocyteandthelevelofIL-2weredeterminedbyMTTprocedure.The
levelofVEGFwasdetectedbyimmuohistochemicalstaininginthebonemarrowofmice.Results:ItwasfoundthatthelevelofIL
-2 insophorajaponicalgroupwassignificantlyhigherthanthatintheirradiationinjuredgroup(P<0.05), andtherewasno
significantdifferencebetweenthesophorajaponicalgroupandthenormalgroup(P>0.05).Amongthosegroups, thehighestwas
the0.4mg· mL-1 sophorajaponicalgroup, andthelowestwas0.2 mg· mL-1 sophorajaponicalgroup.TheexpressionofVEGF
insophorajaponicalgroupwassignificantlyhigherthanthatintheirradiationinjuredgroup(P <0.05), andtherewasno
significantdifferencebetweenthesophorajaponicalgroupandthenormalgroup(P>0.05).Conclusion:Thesophorajaponical
canregulatetheimmunologicalfunction, enhancetheabilityofantiradiation, andincreasethehematogenesisrecoveryofbone
marowafteracuteradiation.
[ Keywords] Sophorajaponical;immunoregulation;interleukin2;vascularendothelialgrowthfactor
　　辐射能直接导致骨髓造血微环境和造血细胞的损伤 , 同时
还伴有机体免疫功能的下降 ,如抗感染 、抗肿瘤能力的下降。因
此选择无毒或低毒药物恢复或部分恢复放疗后患者受损的细
胞和提高免疫功能已成为临床上急需解决的课题。许多研究
显示槐白皮具有广谱抗菌 、镇痛作用 , 并能增强 T淋巴细胞转
化率 , 可在机体免疫调节中起重要作用 [ 1 ～ 3] 。但槐白皮对放射
损伤后机体免疫功能的调节及骨髓造血微环境的修复尚未见
报道。本实验采用槐白皮对 60Coγ射线照射后小鼠脾淋巴细胞
IL-2水平和骨髓组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达水
平进行检测 , 以探讨槐白皮对急性辐射损伤小鼠免疫功能及骨
髓造血细胞的修复作用。
1　材料和方法
1.1　实验动物:清洁级昆明小鼠同批鼠龄 6 ～ 8周 , 雄性 , 体重
20±2 g,由温州医学院动物中心提供。
1.2　药物与试剂
1.2.1　槐白皮水提物:由山东济宁中草药研究室刘善庭教授惠
赠(取槐白皮 100g加蒸馏水 1 000 mL浸泡 1 h后 ,加热至沸 ,
然后用文火煎煮 30 min取出药液 , 如此连续煎煮 3次 , 把 3次
药液混合用滤纸过滤 ,加热浓缩为含量 100%供实验用)[ 1 , 2] 。
1.2.2　RPMI1640为 Gibco产品;MTT、刀豆蛋白 A(ConA)均为
Sigma产品;白细胞介素 2细胞依赖株(CTLL-2细胞株)购自
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上海肿瘤研究所。 VEGF试剂:一抗单 克隆抗体 (编号
BA0407), 二抗(生物素化山羊抗小鼠 IgG)和三抗(SABC)免疫
组化试剂盒(编号 SA1022)均购自武汉博士德试剂公司 。
1.3　检测方法
1.3.1　实验分组与照射方法:清洁级昆明小鼠 50只 , 随机分 3
组。正常组即未处理组 10只;槐白皮组(又分为 1、2、3组 , 浓度
分别为0.2 mg· mL-1、0.4mg· mL-1、0.8mg· mL-1)各 10只;
照射对照组 10只。照射后槐白皮组即喂饲槐白皮 , 每只各给相
应浓度药物 0.8 mL,每日 1次 ,连续给药 10d;对照组喂饲生理盐
水每只 0.8 mL,每日 1次 ,连续 10d。照射剂量用 60Coγ射线一
次性全身均匀照射 ,总剂量为 6.0Gy,剂量率为 0.56Gy· min-1。
1.3.2　IL-2水平检测:将各组小鼠眼球放血处死 , 无菌取脾
脏 , 用 RPMI1640 液 匀 浆 , 通 过 100 目 不 锈 钢 筛 网 ,
1 000 r· min-1离心 5min,弃上清 , 加入适量 0.83%NH4Cl缓冲
液溶解红细胞 ,洗涤 3次 ,将脾细胞悬液调至 1×107 mL,每孔加
100μL于 96孔板中 , 每孔再加入 100 μLConA于细胞悬液中
(终浓度为 5 μg· mL-1), 置 37 ℃、 5%CO2条件下培养 48 h
后 , 取上清液备用。 于 96 孔板中各加入 CTLL-2细胞(用
RPMI1640培养液调成 1×105 mL)100 μL, 每孔再加备用上清
液 100 μL, 每个浓度设 3个复孔 , 同时设空白对照 , 置 37 ℃、
5%CO2条件下培养 24 h,最后加入 MTT试剂培养 4 ～ 6 h后于
酶标仪 545 nm波长测 OD值。
1.3.3　免疫组化分析 VEGF的表达:将以上各组小鼠处死后立
即取左尺骨入 4%多聚甲醛固定 , 常规石蜡切片 ,进行免疫组化
染色。按说明书常规脱蜡至水 , 3%H
2
O
2
去除内源性过氧化物
酶 , 山羊血清封闭后 ,依次加入一抗 、二抗 、三抗孵育反应 , 显色
剂显色 , 最后苏木素复染。实验以 PBS替代一抗做空白对照。
每张切片随机选取 5个视野 , 用 HPIAS-1000高清晰度彩色病
理图像测量系统进行定量分析 , 测量每个视野下细胞的总面积
和阳性反应的面积 , 计算阳性面积百分率。阳性面积百分率 =
阳性反应面积 /细胞总面积 ×100%。
1.4　统计学处理:采用 SPSS10.0 统计软件 , 用秩和检验
(Kruskal-WalisTest)作相关统计。
2　结　　果
2.1　IL-2活性测定:见图 1。
图 1　各组 IL-2水平比较
各组之间均有差别(P<0.05);两两比较后 ,正常组和槐白
皮 2组浓度与照射对照组比较有显著性差异(P<0.05), 槐白
皮 1组浓度与槐白皮 2组浓度比较有显著性差异(P<0.05),
其余均无差异。
2.2　骨髓组织中 VEGF表达水平:见表 1。
表 1　急性放射损伤小鼠骨髓组织中 VEGF表达水平(ng· L-1)
组　　别 例数 中位数 测定值范围
正常组 8 90 70 ～ 95
槐白皮 1组 8 35 0 ～ 60
槐白皮 2组 8 85 30 ～ 90
槐白皮 3组 7 30 0 ～ 50
照射对照组 8 0 0 ～ 20
注:χ2 =30.029, v=4, P<0.01;正常组与槐白皮 2组比较 P>0.05,
与其余各组比较均 P<0.05;槐白皮 1组与槐白皮 3组比较
P>0.05,与其余各组比较均 P<0.05;照射对照组与各组比
P均 <0.05。
照射后 d10, 槐白皮 1、 2、3组和正常组小鼠骨髓中 VEGF
的表达显著高于对照组(P<0.05)。 且槐白皮 2组浓度与槐白
皮 1组 、槐白皮 3组浓度间比较也有显著性差异(P<0.05), 槐
白皮 2组浓度与正常组比较无显著性差异(P>0.05)。
3　讨　　论
机体的免疫功能状况在急性放射损伤的发展和转归过程
中具十分重要的地位。 T淋巴细胞是机体免疫系统中主要调节
效应细胞 ,构成维持正常免疫功能的生理状态平衡 。 IL-2主
要是由 T1细胞产生的一种免疫调节因子 , 具有促进 T淋巴细
胞增殖 、诱导 lark细胞促进 B细胞分泌抗体 、促进 T细胞杀伤
作用及增强 NK细胞活性等作用。在免疫调控中扮演着重要角
色。CD+4 T细胞活化分泌 IL-2的同时 ,细胞表面 IL-2R表达
增加 ,通过自分泌来促进增殖;CD+8 T细胞的活化 、增殖亦要靠
IL-2的辅助 [ 4] 。苏旭等报道大剂量(4.0 ～ 6.0 Gy)辐射全身
照射后小鼠脾细胞数量急剧减少并抑制小鼠脾细胞 IL-2R受
体的表达 [ 5] 。本实验结果显示 ,槐白皮组和正常组与照射对照
组比较小鼠脾淋巴细胞 IL-2水平有显著差异(P<0.05), 槐
白皮组 IL-2具有不同程度增殖 , 照射对照组 IL-2水平则受
到了抑制。而槐白皮 1、2、3组中的 IL-2水平以槐白皮 2组最
强。经两两比较 ,槐白皮 1组与槐白皮 2组 ,正常组与照射对照
组 ,槐白皮 2组与照射对照组之间均有显著性差异(P<0.01),
其余各组间均无显著性差异。表明其药物浓度与 IL-2水平不
成正比。提示槐白皮可诱导 IL-2的生成 , 促进 T淋巴细胞增
殖 ,有调节小鼠细胞免疫功能的作用。
骨髓是辐射高度敏感的组织 , 辐射引起骨髓损伤必将导致
骨髓造血细胞的变化和骨髓微环境的损伤。生长因子 VEGF是
细胞微环境重要的调节因子 ,它不仅在内皮细胞表达 , CD+
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细胞
和粒系 、红系 、巨核系祖细胞及基质细胞均可分泌 VEGF。
VEGF与造血系统疾病的发生 、发展密切相关 ,它是一种对血管
内皮细胞具有高度特异性的肝素结合蛋白 , 具有强烈的促血管
生成作用 ,还可抑制由放射损伤和化疗引起的造血细胞的凋
亡 [ 6, 7]。于大海报道 VEGF165重组质粒转染大鼠放疗损伤组
织后 , VEGF165mRNA明显增高 , VEGF蛋白表达也高于正常组
织 [ 8] 。张晓启报道由于内皮细胞照射后可引起凋亡发生 ,且凋
亡随照射剂量增大而增多 [ 9] 。 提示内皮细胞凋亡在照射诱导
的血管损伤中起主要作用 [ 10] 。本实验结果显示 , 放射损伤后对
照组的 VEGF在骨髓细胞中表达水平急剧降低 , 而槐白皮组各
浓度的 VEGF在骨髓细胞中表达水平均有不同程度的提高 , 其
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中槐白皮 2组的 VEGF与正常组的 VEGF表达水平相近。表明
槐白皮不仅可刺激骨髓细胞分泌产生 VEGF, 使骨髓基质细胞
VEGF表达水平接近正常组。在放疗损伤后的骨髓细胞中起积
极作用。
有研究表明黄芪可以减轻免疫异常对骨髓造血细胞的抑
制和损伤 [ 11] 。本实验表明槐白皮具有调节和增强免疫功能的
作用 , 对急性辐射损伤后骨髓细胞的修复和造血系统的恢复都
起到一定的防护作用。 槐白皮可能是治疗急性放射损伤后的
一个新靶点。但目前对 IL-2与 VEGF间是否存在相互协同关
系 , 其具体机理还不十分清楚 , 有待进一步探讨。
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(2008-12-10收稿;2008-12-25修回)
本文编辑:董小龙
[文章编号 ] 1673-1557(2009)02-0096-02　　　[中图分类号 ] R521　　 　　[文献标志码 ] A　
通讯作者:廖清 , yaoyuanliaoqing@sina.com
下肺结核误诊 54例分析
姚　远 , 廖　清
(成都市邛崃市医疗中心医院 ,四川　成都　611530)
[摘要 ]目的:探讨肺部不典型结核误诊的原因 ,避免或减少误诊。方法:对我院 2001 ～ 2007年收治的 54例肺部不典
型结核误诊患者的临床资料和深入检查结果进行分析 ,调整治疗方法。结果:54例下肺结核误诊患者经进一步临床观察
和深入补充检查 , 重新调整治疗方法后均获痊愈。结论:肺部不典型结核在临床症状 、体征及 X线影像上与非结核性肺部
炎症有很多相似之处 ,极易误诊 , 应注意鉴别。在经一般抗炎治疗无效或效果不明显时 ,应警惕有结核可能 ,尽快作进一
步深入检查 , 明确诊断 ,有效治疗。
[关键词 ]下肺结核;误诊;分析
AnalysisofMis-DiagnosisofPulmonaryTuberculosis
LocatedinLower-Lobe
YAOYuan, LIAOQing
(ChengduQionglaiCentralHospital, SichuanChengdu　611530, China)
[ Abstract] Objective:Toinvestigatethemis-diagnosisreasonofatypicalpulmonarytuberculosis, inordertoavoideor
reducethemis-diagnosisrate.Methods:54 atypicalpulmonarytuberculosispatientswhoweretreatedfrom 2001 to2007 in
haspitalwereanalysedcarefully.Results:Thetreatmenteffectwithanti-inflammationwasinefectual.Afteradjustingthe
therapeuticschedule, alpatientswerecurebytreatingwithanti-tuberculosis.Conclusion:Theatypicalpulmonarytuberculosisis
verysimilartopneumoniainclinicalsyndromeandX-rayimage, theyareeasilyconfused.Ifapatientwereinefectualbytreating
withanti-imflammation, itwouldbeprobablysufferingfrompulmmrytuberculosis.
[ Keywords] pulmonarytuberculosislocatedinlower-lobe;mis-diagnosis;analysis
　　肺结核好发于肺尖 , 而肺炎在下叶较常见 , 这就致使不典 型结核易被误诊。本文将我院 2001 ～ 2007年收治的 54例下肺
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