全 文 ：基金项目:湖北省高等学校创新能力提升计划(鄂教科函［2012］56 号)
通讯作者:张晓燕 Tel:(0719)8637262 E-mail:coarff66@ 126． com
HPLC法测定日本蛇根草不同组织器官中绿原酸的含量
熊辉1 徐梦菲2 刘艳红1 张晓燕1 (1．湖北医药学院附属人民医院 湖北十堰 442000;2．武汉大学第二临床学院)
摘 要 目的:测定日本蛇根草不同组织器官及发育周期中绿原酸的含量。方法:建立高效液相色谱法。色谱柱 ODS Phe-
nomenex Gemini C18柱(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，流动相乙腈:0． 4%磷酸溶液(1∶ 9) ，流速:1． 0 ml·min
－1，检测波长:327 nm;
柱温:30℃。结果:绿原酸在0． 022 ～ 1． 320μg(r = 0． 999 9)范围内线性关系良好。2 月花期采收的日本蛇根草根、茎、叶、花中
绿原酸的含量分别为7． 076 7，1． 030 7，10． 609 5，24． 110 3 mg·g －1，其全草与四月果期的全草绿原酸含量分别为18． 600 4 ，
14． 082 6 mg·g －1。结论:日本蛇根草不同组织器官绿原酸含量差异较大，其中花的含量最高。不同发育周期绿原酸的含量
也不同，花期含量明显高于果期。
关键词 高效液相色谱法;日本蛇根草;绿原酸
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2015)09-1475-03
Determination of Chlorogenic Acid in Different Tissues of Ophiorrhiza Japonica BI． by HPLC
Xiong Hui1，Xu Mengfei2，Liu Yanhong1，Zhang Xiaoyan1(1． Department of Pharmacy，Ｒenmin Hospital，Hubei University of Medi-
cine，Hubei Shiyan 442000，China;2． The Second Clinical School of Wuhan University)
ABSTＲACT Objective:To determine the content of chlorogenic acid in different tissues at different cyclogeny of Ophiorrhiza japoni-
ca BI．Methods:An HPLC method was established with an ODS Phenomenex Gemini C18 column (250 mm × 4． 6 mm，5 μm)． The
mobile phase consisted of acetonitrile∶ 0． 4% phosphoric acid solution (1∶ 9) ，the flow rate was 1． 0 ml·min －1，the detection wave-
length was at 327 nm and the column temperature was 30 ℃ ． Ｒesults:There was a good linear relationship of chlorogenic acid within
the range of 0． 022-1． 320 μg(r = 0． 999 9)． The content of chlorogenic acid in roots，stems，leaves and flowers of Japanese snakeroot
harvested in February flowering period was 7． 076 7，1． 030 7，10． 609 5and 24． 110 3 mg·g －1，respectively． Meanwhile，that was
18． 600 4 mg·g －1 and 14． 082 6 mg·g －1 in all grass harvested in February and April． Conclusion:The content of chlorogenic acid
in different tissues of Ophiorrhiza japonica BI． in different growth stages is various． The flowers have the highest content，and the con-
tent in flowering period is significantly higher than that in fruit period．
KEY WOＲDS HPLC;Ophiorrhiza Japonica BI．;Chlorogenic acid
茜草科蛇根草属日本蛇根草(Ophiorrhiza japon-
ica BI． )别名散血草、雪里梅、白指甲花、活血丹、向
日红、紫金草、钻地风、辣子草、蛇根藤及四季花
等［1，2］。蛇根草属植物约 200 余种，广泛分布于亚
洲的热带、亚热带，湖北武当山地区地处亚热带和温
带的分水岭，气候温和，日本蛇根草的资源非常丰
富。中医认为蛇根草性味淡平［3］，有活血散瘀，清
肺祛痰的功效，主要用于肺结核咯血、气管炎，外用
治扭挫伤［4］，也有治劳伤咳血、扭伤脱臼、痔疮及月
经不调的记载［5］。蛇根草属植物含有甾醇、喜树
碱、蒽醌衍生物、胡萝卜苷和木犀草素等活性成
分［6］，为了考察蛇根草的药效与活性成分的关联
性，试验试测过木犀草苷、绿原酸和喜树碱［7］等活
性成分的含量，发现其富含绿原酸。因此，本文建立
了 HPLC法测定日本蛇根草中绿原酸含量，并对不
同部位的绿原酸含量进行比较，为有效控制药材质
量及合理利用植物资源提供参考。
1 仪器与材料
1． 1 仪器
日本岛津高效液相色谱仪;LC-20AD 泵;SIL-
20A自动进样器;SPD-M20A 紫外检测器;LC solu-
tion色谱工作站，四号筛(250 μm，NO． 60新乡市康
达新机械有限公司) ，超声清洗器(KQ-500DV 昆山
市超声仪器有限公司)。万分之一电子分析天平
(FA2004，上海天平仪器厂) ，恒温干燥箱(KWY-101
型电热干燥箱，武汉市武昌实验仪器厂) ，柏讯高科
手持 GPS(S200 北京柏讯高科信息技术有限公司)
1． 2 材料
日本蛇根草样品采于湖北十堰市牛头山森林公
园和房县野人谷，经湖北医药学院附属人民医院药
学部张晓燕主任药师鉴定为茜草科蛇根草属植物日
本蛇根草(Ophiorrhiza japonica BI．)。分别于 2、4 月
采集自十堰市房县野人谷和牛头山。绿原酸对照品
(购自中国食品药品检定研究院，批号:110753-
5741
中国药师 2015 年第 18 卷第 9 期 China Pharmacist 2015，Vol． 18 No． 9
200413，供含量测定用)。乙腈、甲醇为色谱纯;水
为重蒸馏水;其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 日本蛇根草的基源鉴定
日本蛇根草为草本，茎下部匐地生根，上部直立
近圆柱状，有二列柔毛。叶片椭圆状卵形、披针形或
狭披针形，顶端渐尖，基部楔形或近圆钝，两面光滑
无毛;花序顶生，有多朵花，花冠白色或粉红，呈漏斗
形，裂片 5，分枝短，花柱较长。蒴果近僧帽状，倒扁
三角形，红褐色，状似荷包。种子小，多数，棕色，有
棱角;气无，味淡［8］。
2． 2 色谱条件［9，10］
色谱柱:ODS Phenomenex Gemini C18柱(250 mm
×4． 6 mm，5 μm) ;流动相(乙腈:0． 4% 磷酸水溶
液，1∶ 9) ;流速:1． 00 ml·min －1;检测波长:327 nm;
柱温:30 ℃。色谱图见图 1。
A．对照品 B． 供试品 1．绿原酸
图 1 HPLC色图谱
2． 3 供试品溶液的制备
取样品粉末约0． 2 g，精密称定，置具塞锥形瓶
中，精密加 50%甲醇溶液 50 ml，称定重量，超声处
理(900 W，40 kHz)30 min，放冷至室温，再次称定重
量，用 50%甲醇补足减失的重量。减压抽滤两次，
取续滤液 15 ml置 50 ml量瓶中，用 50%甲醇定容，
0． 45 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。不同批
次、不同部位的样品分别处理方法同上。
2． 4 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸标准品 22 mg，置于 5 ml 棕色
量瓶中，加 50%甲醇定容，超声溶解，配成浓度为
440 μg·ml －1的绿原酸贮备液。精密吸取储备液 1
ml置 10 ml量瓶中，50%甲醇定容，得 44 μg·ml －1
对照品溶液①，精密吸取储备液 250 μl于 5 ml量瓶
中，50%甲醇定容，得 22 μg·ml －1对照品溶液②。
2． 5 线性关系考察
分别进样绿原酸对照品溶液②号 1 μl，对照品
溶液①号 5，10，20，30 μl，按“2． 2”项下色谱条件测
定，记录绿原酸的峰面积，以对照品进样量为纵坐标
(Y) ，峰面积为横坐标(X)进行线性回归分析，得回
归方程 Y = 3． 17 × 107X + 2． 43 × 103;r = 0． 999 9，结
果表明绿原酸在0． 022 ～ 1． 320 μg内线性关系良好。
2． 6 精密度试验
取绿原酸对照品溶液①号 5 μl，依上述“2． 2”
项下色谱条件连续进样 6 次，ＲSD 为0． 16% (n =
6) ，表明仪器精密度良好。
2． 7 稳定性试验
取同一日本蛇根草供试品溶液，分别于 0，2，4，
6，8，12 h 进样 5 μl，测得样品中绿原酸峰面积的
ＲSD为0． 21%(n = 6) ，说明样品在 12 h内稳定性良
好。
2． 8 重复性试验
取同一日本蛇根草样品粉末，按“2． 3”项下方
法重复制备供试品溶液 6 份，按上述色谱条件进行
测定，其平均含量为10． 609 5 mg·g －1，其 ＲSD 为
1． 27%(n = 6) ，表明该方法重复性良好。
2． 9 加样回收试验
精密称取同一批样品粉末 6 份，每份0． 1 g(绿
原酸含量为10． 609 5 mg·g －1) ，精密加入浓度为
440 μg·ml －1的绿原酸对照品液2． 4 ml，按“2． 3”项
下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，
计算 6 份样品中绿原酸的加样回收率。结果平均加
样回收率为100． 5%，ＲSD = 1． 30%(n = 6)。
2． 10 样品中绿原酸的含量测定
取盛花期及结果期两个生长时期、不同组织器
官的日本蛇根草样品照“2． 3”项下分别制备供试品
溶液，按上述色谱条件进样分析，结果见表 1。
表 1 两个生长时期不同组织器官绿原酸含量(n =3)
生长时期 部位 绿原酸含量(mg·g － 1) 质量分数(%)
花期 根 7． 0767 0． 71
茎 1． 0307 0． 01
叶 10． 6095 1． 01
花 24． 1103 2． 41
全草 18． 6004 1． 86
果期 全草 14． 0826 1． 41
3 讨论
绿原酸是植物体在有氧呼吸过程中经过莽草酸
6741
www． zgys． org 研究论文
途径产生的苯丙素类化合物，其在植物中的含量差
异与植物发育时期和组织器官的代谢能力有直接相
关性。本试验结果显示日本蛇根草不同组织器官中
绿原酸的含量依次为花 ＞叶 ＞根 ＞茎。此结果与繁
殖器官花的代谢最旺盛，营养器官叶的代谢活跃，运
输器官根和茎的代谢程度低的特点相吻合。二月盛
花期日本蛇根草全草中绿原酸含量比果期的高，与
其盛花期花在全草中的比例较大有关。因此利用日
本蛇根草中绿原酸的药理作用在临床用于抗菌、消
炎、解毒、清除氧自由基和抗癌的治疗时，于冬季到
早春盛花期采收比较合理。
深入的挖掘古方及民间有确切疗效的验方，结
合现代制药技术开发新药造福人类是中药研究的热
点，《本草纲目拾遗》记载“雪里花”经后人的本草考
证为日本蛇根草原植物，其记载“土人采得，干之入
药。…敷痔疮，湿者干掺，干者麻油调搽一二度，其
痔即消缩”［11］，古人记载如此神效，与其记载的活血
散瘀，清肺发散的功效是相适应的，但是目前未见日
本蛇根草临床应用和药理药效的研究报道，本研究
发现其富含绿原酸是否与其药效有关联，还需相应
的临床观察及药效试验来佐证，本研究为野生日本
蛇根草资源的充分利用，明确其药用价值提供理论
依据。
参 考 文 献
1 易浪波，彭清忠，田向荣． 湘西产两种蛇根草中喜树碱含量的比
较研究［J］．长沙大学学报，2007，21(5) :35-36
2 全国中草药汇编编写组．全国中草药汇编(上册)［M］． 北京:人
民卫生出版社，1996． 809
3 中国科学院中国植物志编辑委员会． 中国植物志［M］． 北京:科
学出版社，2009． 110-111
4 福建省中医研究所． 福建药物志(第 2 册)［M］． 福州:福建科
学技术出版社，1983． 186-187
5 浙江省革命委员会． 浙江民间常用草药第一集［M］． 杭州:浙江
人民出版社，1969． 150
6 Wang W，Lu Y，Li L，et al． Distribution of anticancer drug in Ophi-
orrhiza japonica［J］． Journal of Shanghai Normal University (Natural
Sciences) ，2009，38 (1) :59-62
7 林永慧，何兴兵，田启建，等． 日本蛇根草生物群落种间的联结
性［J］． 贵州农业科学，2010，38(12) :11-15
8 卢伟． 日本蛇根草的性状及显微鉴别［J］． 中国中药杂志，2009，
34(9) :1168-1170
9 耿家玲，孟芹． HPLC法测定灯盏细辛中绿原酸和咖啡酸的含量
［J］． 中国药师，2010，13(5) :701-702
10 黄良永，郑江萍，雷震． HPLC法同时测定利胆排毒口服液中绿
原酸、栀子苷和丹酚酸 B 的含量［J］． 中国药师，2010，13(5) :
1562-1564
11 张水利，高晓杰，熊耀康． 《本草纲目拾遗》雪里花的品种考证
［J］． 中国中药杂志，2008，33(13) :1632-1634
(2015-04-23 收稿 2015-06-04 修回)
基金项目:湖北省高等学校创新能力提升计划(编号:鄂教科函［2012］56 号)
通讯作者:张晓燕 Tel:(0719)8637262 E-mail:coarff66@ 126． com
多指标评价不同加工方法对湖北野生川党参质量的影响
余世荣1 徐梦菲2 张晓燕1 石金敏1 (1． 湖北医药学院附属人民医院药学部 湖北十堰 442000;2．武汉大学第二
临床学院)
摘 要 目的:采用多指标评价不同产地加工方法对竹山当地野生党参质量的影响。方法:采用正交设计试验，以干膏得
率、党参炔苷含量、党参多糖含量为指标筛选最佳工艺，采用高效液相色谱法测定党参炔苷和党参多糖的含量。结果:采用循
环干燥控制温度 70℃充分烘干，揉搓 1 次的加工方法最佳。结论:本试验优选的加工方法简单实用，比较有推广价值。
关键词 竹山野生党参;干膏得率;党参炔苷;党参多糖;正交试验
中图分类号:Ｒ283． 1 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2015)09-1477-04
Effects of Various Processing Methods on the Quality of Wild Codonopsis Tangshen Oliv． in Hubei Evalua-
ted by Mutiple-index
Yu Shirong1，Xu Mengfei2，Zhang Xiaoyan1，Shi Jinmin1(1． Ｒenmin Hospital，Hubei University of Medicine，Hubei Shiyan 442000，
China;2． The Second Clincial School of Wuhan University)
ABSTＲACT Objective:To study the quality differences of Codonopsis tangshenThe caused by various processing methods． Meth-
ods:The orthogonal design was used to screen the optimum technology． The yield of extract and the contents of lobetyolin and polysac-
charides in Ｒadix codonopsis determined by HPLC were used as the indices． Ｒesults:The optimal processing technology was as follows:
intensively dried at 70℃ using cyclic drying，and kneaded once． Conclusion:The optimal technology is simple and worthy of wide ap-
plication．
KEY WOＲDS Codonopsis tangshen Oliv．;Yield of extract;Lobetyolin;Polysaccharides of Ｒadix Codonopsis;Orthogonal design
党参的来源为桔梗科植物党参(Codonopsis pilo- sula(Franch．)Nannf．)、素花党参［Codonopsis pilosu-
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中国药师 2015 年第 18 卷第 9 期 China Pharmacist 2015，Vol． 18 No． 9