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椒目仁油的成分分析及对家兔高血脂模型的影响



全 文 :现代生物医学进展 www.shengwuyixue.com Progress inModern Biomedicine Vol.11 NO.8 APR.2011
椒目仁油的成分分析及对家兔高血脂模型的影响 *
肖会敏 何 悦 王四旺△ 王剑波 谢艳华 袁娟丽 何中民
(第四军医大学药学系药物研究所 陕西 西安 710032)
摘要 目的:分析椒目仁油的成分及探讨其对家兔高血脂模型的影响;方法:①采用 GC-MS分析椒目仁油的成分;②建立家兔高
血脂模型后,以 CH、TG、HDL-C及血液粘度为检测指标,比较椒目仁油的量效与时效关系;结果:①椒目仁油的主要成分是α-
亚麻酸酯与亚油酸等,总相对含量为 71.34%;②每个椒目仁油组与模型组及对照组比较均能明显降低 CH(P<0.01)、TG(P<
0.01)、血液粘度(P<0.01)以及明显升高 HDL-C(P<0.01),其剂量效果是椒目仁油 25mg/kg组<50mg/kg组<100mg/kg组,其时
间效果是用药后第 2周<第 4周<第 6周;结论:椒目仁油调节血脂的作用主要依赖其中不饱和脂肪酸即 α-亚麻酸与亚油酸,
其调节血脂的效果随着椒目仁油剂量的增加而加强,同时随着使用时间的延长而加强。
关键词:气 -质联用仪;椒目仁油;胆固醇;甘油三酯;高密度脂蛋白
中图分类号:R284.2 Q95-3 R589.2 文献标识码:A 文章编号:1673-6273(2011)08-1454-04
Component Analysis of Semen Oil of Zanthoxylum Bungeanum Maxim
and Its Effect on Hyperlipidemic Rabbits Model*
XIAO Hui-min, HE Yue, WANG Si-wang△, WANG Jian-bo, XIE Yan-hua, YUAN Juan-li, HE Zhong-min
(Institute of Materia,SchoolofPharmacy,Fourth Military Medical University,Xian 710032 China)
ABSTRACT Objective: To analyze the components of Zanthoxylum bungeanum Maxim and to investigate the effect on
hyperlipidemic rabbitsmodel. Methods: ①Use GC-MS to analyze the components.② Compare the amount-effect with the time-effect ,
TC,TG,HDL-C and blood viscosity as the detection indexes. Results:①The main components of Zanthoxylum bungeanum Maxim are
α-octadecatrienoic acid and linoleic acid, the amount of which is 71.34%.② CH(P<0.01),TG(P<0.01), whole blood viscosity(P<
0.01)significantly decrease and HDL-C increase (P<0.01)in the model group and blank group compared that of Zanthoxylum
bungeanum Maxim group.And the amount-effect is 25mg/kg group<50mg/kg group<100mg/kg group. And the time-effect is after 2
weeks<after 4 weeks<after 6 weeks after medication. Conclusion:①The regulating effect of Zanthoxylum bungeanum Maxim on
lipidemia depended onα-octadecatrienoic acid and linoleic acid which was increased with the increasing dosage and time.
Key Words:GC-MS;Semen oil of the Zanthoxylum bungeanum Maxim;CH;TG;HDL
Chinese Library Classification(CLC):R284.2 Q95-3 R589.2 Document code:A
Article ID:1673-6273(2011)08-1454-04
*基金项目:陕西省“13115”科技创新项目(2008ZDKG- 61)
作者简介:肖会敏(1975-),男,硕士,主管药师,中药新药开发。Tel.(029)84773689,xhm_0908@163.com
△通讯作者:王四旺,电话:029- 84773491,wangsiw@fmmu.edu.cn
(收稿日期:2010- 12- 18 接受日期:2011- 01- 13)
前言
椒目为芸香科植物青椒( Zanthoxylum schinifolium Sieb. et
Zucc )或花椒( Zanthoxylum bungeanum Maxim )的干燥成熟种
子,秋季果实成熟时采收,晒干,除去果皮、果柄及杂质。椒目是
一种内外含油的油脂加工资源,其表皮层含油 13%左右,内仁
含油 15%左右,椒目仁油中不饱和酸含量高速 90%以上[1],其
中人体必需的亚油酸和亚麻酸含量在 70%以上[2]。文献报导花
椒籽油对实验性小鼠高血脂模型具有防治作用,认为是通过降
低小鼠的血脂水平、血细胞比容、红细胞聚集指数、调节和改善
脂质代谢及血流变动力学指标等来实现,并对小鼠肝细胞具有
一定的保护作用[3];花椒籽油对实验性大鼠高血脂模型具有防
治作用,认为是通过降低血脂、改善血液流变性、增强体内抗氧
化酶活性、调节体内自由基代谢、抑制脂质过氧化反应[4]。本文
旨在分析椒目仁油的成分,并使用该油对家兔高血脂模型进行实
验,探讨椒目仁油的量效与时效关系以及可能起作用的主要成分。
1 材料与方法
1.1 仪器
岛津气质联用仪 GCMS-QP2010 Plus,岛津公司;日立
KY2000半自动生化分析仪。XN-2型血液粘度仪,上海医科大
学生产。TDZ-5-4.0多管架自动平衡离心机,湖南仪表总厂。
1.2 试剂与试药
椒目仁油(压榨提取,陕西韩城产),批号 20090426,由陕
西盛华药业有限责任公司提供;阳性对照药,非诺贝特,批号:
20090816,广州威尔曼药业有限公司;绞股篮总甙片,批号
20090627,陕西安康中药厂;胆固醇(Cholesterol),A.R.,批号
030315,中国惠兴上海生化试剂公司生产;胆固醇(CH)、甘油
三脂(TG)检测试剂、高密度脂蛋白(HDL-C)检测试剂由北京
中生北控生物科技股份有限公司提供。
1.3 动物
日本大耳白兔,由第四军医大学实验动物中心提供,动物合格
1454· ·
DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2011.08.013
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证号:陕动准字第 01号,军医动字第 C98001(KM、SD)清洁级。
1.4 方法
1.4.1 色谱条件 RTX-l MS色谱柱(30m×0.25mm),固定相厚度
0.25 m,进样口温度 250℃;色谱程序升温条件为起始温度
40℃,保持 3min,升温速率 5℃/min,终点温度 250℃保持
5min;载气为氦气,流量 2mL /min,压力 28.8kPa;分流比 100∶
1,连接质谱结口温度 250℃,总流量 205mL /min,进样量 lμL
(不含任何化学试剂)。
1.4.2 质谱条件 质量范围 m/z 20~400,扫描间隔 0.50 S,扫描
速度 833 D/s;检测电压 0.75 kV,电离电压 70 eV,El电离源,离
子源温度 200℃;获取的质谱数据用美国 NIST08和 wILEY7
谱库检索。
1.4.3 家兔降血脂、降血粘实验 家兔 60只,雄性,体重 2.0~
2.5kg,随机分 6组,每组 10只。正常对照组饲喂标准饲料,其
余各组均饲喂高脂饲料[5](3%胆固醇,15%猪油,82%标准饲料)
造高脂血症动物模型,连续饲喂 28天后,随机在对照组和造模
组各取 10只家兔采血样测定血脂指标,以确认造模成功与否。
造模成功后,高脂饲料配方调整为(0.5%胆固醇,5%猪油,
94.5%标准饲料)维持量至实验末。各组于造模后开始给药,空
白对照组和模型组 ig给 10ml/kg生理盐水,阳性对照组 ig给
16mg/kg 绞股篮总甙片,其余各组分别 ig 给椒目仁油
25mg/kg、50mg/ kg、100mg/kg,每天一次,连续 6周。分别在用
药后第 2、4、6周耳静脉采血测定血脂,末次用药后加测血液粘
度。
1.5 统计学分析
动物实验各分组所得计量数据采用均数±标准差 (x±s)表
示,用 SPSS12.0软件处理数据,两组间均数比较用 t检验。检
验水准 α=0.05,p<0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 成分分析结果
从表 1分析,椒目仁油中主要的成分为不饱和脂肪酸(即
α-亚麻酸酯与亚油酸等),其总含量为 71.34%;其次,β-蒎烯
与 α-蒎烯的总含量为 12.51%;此外其它不饱和烯烃总含量为
11.39%,萜品醇总含量为 2.09%,其余烃类、饱和脂肪酸等总含
量为 14.06%等,见表 1。
表 1 椒目仁油化学成分分析结果
Table 1 Chemical component analysis of semen oil of zanthoxylum bungeanum maxim
序 号
保留时间
(min)
化合物名称 分子式
相对分子
质量
相对百分含量
/%
1 3.742 己醛,Hexanal C6 H12O 100 0.18
2 7.158 α- 崖柏烯,.alpha.-Thujene C10H16 136 0.32
3 7.346 α- 蒎烯,.alpha.-Pinene C10H16 136 3.11
4 7.833 莰烯,Camphene C10H16 136 0.15
5 8.182 5-甲基 -1-己烯,5-Methyl-1-hexene C7 H14 98 0.08
6 8.616 β- 水芹烯,.beta.-Phellandrene C10H16 136 2.75
7 8.725 左旋 -β- 蒎烯,(-)-.beta.-Pinene C10H16 136 9.40
8 9.231 月桂烯,Myrcene C10H16 136 0.52
9 9.444 3-乙基 -1,4-己二烯,3-Ethyl-1,4-hexadiene C8H14 110 0.52
10 9.902 1-乙基 -环己烯,1-Ethylcyclohexene C8H14 110 0.37
11 10.027 △-2-莰烯,delta-2-carene C10H16 136 0.33
12 10.277 α- 水芹烯,.alpha.-Fellandrene C10H16 136 0.45
13 10.418 (-) - 柠檬油精,l-Limonene C10H16 136 1.37
14 10.495 1,8-桉树脑;1,8-Cineole C10H18O 154 0.25
15 11.046
4-亚甲基螺旋[2,4]庚烷,
4-Methylenespiro[2.4]heptane
C8H12 108 0.11
16 11.354 γ-萜品烯,.gamma.-Terpinene C10H16 136 0.80
17 12.187 △-2-莰烯,Δ - 2 - carene C10H16 136 0.32
18 15.076 4-萜品醇,4-Terpineol C10H18O 154 1.42
19 15.528 (-) -α-萜品醇,(-)-.alpha.-Terpineol C10H18O 154 0.67
20 18.253 (Z)- 3-烯 -1-十二碳炔,(Z)-3-Dodecen-1-yne C12H20 164 0.58
21 18.386 (2E,4Z)-癸二烯醛,(2E,4Z)-Decadienal C10H16O 152 0.80
22 19.018 (E,E)-2,4-癸二烯醛,(E,E)-2,4-Decadienal C10H16O 152 1.33
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23 33.835 棕榈酸,n-Hexadecanoic acid C16H32O2 256 0.78
24 36.263 油酸,oleic acid C18H34O2 282 0.13
25 37.016 亚油酸,cis-9,cis-12-Octadecadienoic acid C18H32O2 280 16.72
26 37.116 α-亚麻酸 cis-9,cis-12,cis-15-Octadecadienoic acid C18H30O2 278 45.10
27 45.948
单甘油三亚油酸酯,9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z)-,
2,3-dihydroxypropyl ester
C21H38O4 354 3.08
28 46.040
单甘油三亚油酸酯,9,12,15-Octadecatrienoic acid,
2,3-dihydroxypropyl ester, (Z,Z,Z)-
C21H36O4 352 6.31
29 47.797 角鲨烯,Squalene C30H50 410 2.07
2.2 家兔降血脂、降血粘实验结果
表 2说明造模成功;表 3、4、5结果说明,椒目仁油给高脂
血症家兔口服用药 2周就可有效降低血脂,随着用药时间的延
长,疗效愈加稳定和显著,并呈现一定的量效关系;表 6说明椒
目仁油口服 2周以上可显著降低高脂血症家兔的血液粘度,改
善血液流动的阻力等。
表 2 造模第 4周家兔血脂的变化(n=10,x±s,mmol/L)
Table 2 Effect of blood lipid on each group rabbits after 4 weeks’raising(n=10,x±s,mmol/L)
组别
group
胆固醇
CH
甘油三酯
TG
高密度脂蛋白
HDL-C
空白对照组(Blank group) 2.54±0.38 1.19±0.11 0.33±0.07
造模组(Model group) 4.06±0.97b 4.98±1.91b 0.24±0.69
注:bP<0.01与空白对照组比较
Note:bP<0.01,compaerd with Blank groups
表 3 用药后第 2周各组家兔的血脂变化(n=10,x±s,mmol/L)
Table 3 Effect of blood lipid on each group hyperlipidemic rabbits after 2 weeks treatment(n=10,x±s,mmol/L)
组别
group
剂量(mg/kg)
dosage
胆固醇
CH
甘油三酯
TG
高密度脂蛋白
HDL-C
空白对照组(Blank group) - 2.35±0.32 0.84±0.38 0.45±0.27
模型组(Model group) - 3.28±0.97b 4.19±2.93b 0.36±0.12bd
小剂量组(Low dosage group) 25 1.79±1.33bc 1.64±0.30d 0.57±0.06bd
中剂量组(Middle dosage group) 50 1.59±0.85bd 1.52±0.43bd 0.62±0.33bd
大剂量组(High dosage group) 100 1.19±0.92ad 1.18±0.68d 0.78±0.23bd
阳性对照组(Control group) 16 0.55±0.52d 0.60±0.11d 0.66±0.22bd
注:aP<0.05,bP<0.01与空白对照组比较;cP<0.05, dP<0.01 与模型组比较
Note:bP<0.01,bP<0.01,compaerd with blank groups; cP<0.05, dP<0.01 compaerd with model groups
表 5 用药后第 6周各组动物的血脂变化(n=10,x±s,mmol/L)
Table 5 Effect of blood lipid on each group hyperlipidemic rabbits after 6 weeks treatment(n=10,x±s,mmol/L)
组别
group
剂量(mg/kg)
dosage
胆固醇
CH
甘油三酯
TG
高密度脂蛋白
HDL-C
空白对照组(Blank group) - 1.54±0.45 1.32±0.56 0.54±0.44
模型组(Model group) - 2.26±1.14b 5.32±2.13b 0.48±0.34
小剂量组(Low dosage group) 25 1.02±0.54ad 1.73±0.70d 0.54±0.23
中剂量组(Middle dosage group) 50 1.23±0.65ac 1.86±0.43ad 0.67±0.15cd
大剂量组(High dosage group) 100 0.55±0.44d 1.32±0.54d 0.87±0.12bd
阳性对照组(Control group) 16 1.01±0.52ad 1.77±0.72d 1.44±0.74c
注:aP<0.05,bP<0.01与空白对照组比较;cP<0.05, dP<0.01 与模型组比较。
Note:bP<0.01,compaerd with blank groups; cP<0.05, dP<0.01, compaerd with model groups
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3 讨论
高脂血症是冠状动脉粥样硬化性心脏病的主要易患因素
之一。降低血清胆固醇、甘油三酯、升高高密度脂蛋白等,可降
低其发作的危险,减少死亡率。
花椒具有抗菌驱虫作用[6],可能是因为椒目仁油中含有桉
树脑、β-水芹烯、萜品油烯等驱虫物质作用[7]以及含有 β-蒎烯
与 α-蒎烯等抗菌物质作用[8~10]的原因。亚油酸(C18:2,ω-6)为必
需脂肪酸,它在体内的代谢又可产生对人体有重要生理功能的
ω-6,是一系列有特殊生物活性化合物类二十烷酸的前体,是
影响血压、血管反应性、凝血等的脂肪激素;它具有抗粥状动脉
硬化,参与脂肪分解与新陈代谢等作用[11]。而 α-亚麻酸(ALA)
及其在体内转变成的ω-3系列长链多不饱和脂肪酸[12],能够抑
制胆固醇合成的主要限速酶 HMG-CoA还原酶的活性从而减
少内源性胆固醇的合成[13],并且ω-3脂肪酸能刺激胆固醇代谢
为胆酸和中性固醇,后者由粪便排出以增加固醇排泄[14];ALA
通过抑制 HMG-CoA还原酶的活性能减少低密度脂蛋白的合
成[15];ALA经体内去饱和与碳链延长作用的代谢产物二十二碳
六烯酸(DHA),能增加脂蛋白酯酶和卵磷脂胆固醇酰基转移酶
(LCAT)活性而促进 HDL合成,同时还能抑制肝内皮细胞酯酶
(HEL)的活性而抑制 HDL降解[16]。从表 1中分析的结果显示该
油中的主要成分是 α-亚麻酸、亚油酸,与文献报导基本一致[2],
此两种物质在油中以单体或者甘油酯的形式存在,在体内不能
直接起作用,需要分解转化后才能成为具有活性的物质,所以
需要剂量与时间的累积。因此,椒目仁油的药效才存在剂量与
时间的依赖性。
综上所述,椒目仁油调节血脂的作用主要依赖其中的 α-
亚麻酸与亚油酸等成分。椒目是花椒的种子,仅中国境内每年
约有 12万吨新增资源被废弃[17]。因此,变废为宝最大限度的开
发和利用椒目丰富的自然资源,为医药、保健品市场提供急需
的原料,为提高人类健康水平具有重要的意义。
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表 6 用药后第 6周各组家兔血液粘度的变化(n=10,x±s,mpa.s)
Table 6 Effect of blood viscosity on each group hyperlipidemic rabbits after 6 weeks treatment(n=10,x±s,mpa.s)
组别
group
剂量(mg/kg)
dosage
全血高切粘度
viscosity of whole blood in
high shear rate
全血中切粘度
viscosity of whole
blood in middle
Shear rate
全血低切粘度
viscosity of whole
blood in low
Shear rate
空白对照组(Blank group) - 4.13±0.39 5.42±0.63 9.17±1.38
模型组(Model group) - 5.57±0.38b 8.17±0.49b 16.37±2.15b
小剂量组(Low dosage group) 25 5.21±0.11b 6.98±0.25bd 12.16±0.70bd
中剂量组(Middle dosage group) 50 4.68±0.29bd 6.72±0.28bd 12.17±0.78bd
大剂量组(High dosage group) 100 4.91±0.60bd 6.57±0.74bd 11.45±1.12bd
阳性对照组(Control group) 16 4.46±0.54d 6.92±0.99bd 16.22±0.09b
注:bP<0.01与空白对照组比较;dP<0.01 与模型组比较。
Note:bP<0.01,compaerd with blank groups;dP<0.01, compaerd with model groups
(下转第 1450页)
1457· ·
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