全 文 ：食品工业科技
ScienceandTechnologyofFoodIndustry 研究与探讨
106　 　2007年第 11期
葛粉总黄酮的提取
及其清除 DPPH·自由基的研究
叶　青 ,郑大贵 ,李战胜
(上饶师范学院 ,江西省普通高校应用有机化学重点实验室 ,江西上饶 334001)
　摘　要:研究微波辅助处理方法从葛粉中提取总黄酮 ,从微波处理
时间、微波强度、浸取时间、乙醇体积分数和固液比等因素
对葛粉总黄酮提取量的影响进行实验。研究结果表明:用微
波中火对葛粉进行辅助处理 20s后,选用体积分数为 75%的
乙醇 ,固液比为 1∶20,浸取 8h,得到的葛粉总黄酮提取量为最
佳。同时研究其对 DPPH·的清除作用 ,表明葛粉总黄酮具
有较强的抗氧化作用 ,是一种天然抗氧化剂。
　关键词:葛粉 ,总黄酮 ,微波萃取 , DPPH·　　Abstract:Microwave-assistedextractingmethodwasusedin
exactingtotalflavonoidesfrompuerariaeradixstarch.
Fivefactorsincludingtimeofmicrowaveextracting,
microwaveintensity, timeofexacting, concentration
ofalcoholandratioofsampletoliquorwerestudied
bytakingtherateoftotalflavonoidsextractingasthe
target.Theresultsshowedthatthebestwaytoget
thetotalflavonoidswas:puerariaeradixstarchwas
processedunderthemid-strongpowerfor20s, then
extracted8hin75%alcoholandthe1to20ofsample
toliquor.Simultaneously, studyingtheefectionof
scavengingactivitytotheDPPH· showedthatthe
totalflavanoneinpuerariaeradixstarchwasanatural
antioxidationwithstrongantioxidantactivity.
　Keywords:puerariaeradixstarch;totalflavonoids;microwave
extracting;DPPH·　　中图分类号:TS201.1　文献标识码:A
　文 章编 号:1002-0306(2007)11-0106-03
收稿日期:2007-05-21
作者简介:叶青(1963-),女,教授 ,主要从事分析化学的教学与研究工作。
基金项目:江西省普通高校重点实验室科技计划项目(赣教技字
[ 2006] 302号)。
　　葛粉为豆科植物葛 Puerarialobata(wild)ohwi
块根的浸取粉 ,其主要化学成分为葛根素 、大豆素 、
大豆苷等黄酮类化合物 ,其中的总黄酮具有抗氧化 、
抑菌 、抗癌作用 [ 1, 2] 。葛根黄酮的提取通常采用水提
法和有机溶剂法 [ 3] 。微波辐射(MWI)可以大大加快
反应速度(最高达 1240倍),微波技术应用于植物细
胞破壁 ,有效的提高了收率 ,亦取得了令人可喜的进
展 [4 , 5 ] 。本文以乙醇为溶剂 ,借助微波辅助萃取技术
从葛粉中提取出总黄酮 ,利用紫外可见分光光度计
法测定总黄酮的提取量 ,进行提取参数的优化研究 ,
并以 DPPH·自由基作为抗氧化性的指标对提取得
到的总黄酮进行了抗氧化活性的研究 。
1　材料与方法
1.1　材料与仪器
葛根素标准品　购于上海君创生物科技有限公
司;无水乙醇　分析纯;DPPH·标准品 　日本东京
化成工业株式会社;葛粉　为农家自制的土葛粉 。
UV-1201单光束紫外可见分光光度计　北京瑞
利分析仪器公司;WD800(L23)微波炉　佛山市顺德
区格兰仕微波炉电器有限公司;AL-104电子分析天
平　梅特勒-托利多仪器有限公司。
1.2　实验方法
1.2.1　微波萃取方法 　准确称取 5g干燥葛粉于
250mL烧杯中 ,加入 10.0mL蒸馏水 ,充分搅拌均匀 ,
放入微波炉中中火处理 20s,微波处理后加入 75%乙
醇溶液 100mL, 静置 8h, 过滤得提取液 , 定容
为 250mL。
1.2.2　总黄酮含量的测定
1.2.2.1　标准液的制备及最大吸收波长的确定
　准确称取葛根素标样 4.6mg于 25mL的容量瓶中 ,
加入 95%乙醇溶解稀释至刻度 ,得葛根素标准溶液 ,
浓度为 0.184mg/mL。精确吸取 0.5mL置于 10mL容
量瓶中 ,用 9.5%乙醇稀释至刻度 ,摇匀。以 9.5%乙
醇溶剂为空白 ,进行光谱扫描 , 知其最大吸收波长
为 251nm。
1.2.2.2　标准曲线的制备　分别移取葛根素标准溶
液 0.1、 0.2、 0.3、 0.4、 0.5、 0.6、 0.7、 0.8、 1.0mL, 置于
10mL容量瓶中 ,用 9.5%乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,在
251nm处测定吸光度 ,得回归直线方程:A=0.0058+
0.0674C, R=0.9990。
1.2.2.3　样品　吸取提取液 2mL于 25mL容量瓶中 ,用
9.5%乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,在 251nm处测定吸光度。
研究与探讨 食品工业科技Vol.28, No.11, 2007
　2007年第 11期　 107　
表 1　不同微波强度和时间及浸取时间对提取率的影响(μg/mL)
浸取时间(h)
微波强度和时间(s)
解冻 中火 中高火
0 10 20 40 60 10 20 40 60 10 20 40 60
2
4
6
8
10
2.9
3.0
3.3
3.8
3.6
4.7
4.8
5.1
5.7
5.5
5.6
5.8
5.9
6.1
5.8
5.3
5.4
5.5
5.8
5.7
4.8
4.8
4.9
5.2
5.2
4.8
4.9
5.2
5.7
5.3
6.1
6.8
7.4
7.8
7.4
5.9
5.9
6.3
6.8
7.0
5.1
5.2
5.3
5.5
5.5
4.5
4.5
4.6
5.0
5.0
4.9
5.0
5.2
5.6
5.6
4.8
5.0
5.1
5.2
5.2
4.5
4.6
4.6
5.0
4.9
1.2.3　抗氧化性实验
1.2.3.1　DPPH·溶液配制及最大吸收波长的确定　
准确称取 7.9mgDPPH· ,用无水乙醇溶解并定容于
100mL棕色容量瓶中 ,摇匀 。移取 2.0mL于具塞试
管中 ,加入 75%乙醇 2.0mL,充分混合后 ,进行光谱扫
描 ,得其最大吸收波长为 520nm。
1.2.3.2　DPPH·自由基清除率的测定 　取 2mL
DPPH·溶液及 2mL不同浓度的葛粉提取液加入同
一具塞比色管中 ,放置 30min后 ,在 λ=520nm处测
定吸光度 A520 ,自由基清除率可由式(1)计算:
清除率(%)=[ (Ac+Aj)-Ai] /Ac] ×100%(1)
式中 , Ac— 2mL75%乙醇加 2mLDPPH·溶液的
吸光度;Ai— 2mL葛根提取液与 2mLDPPH·溶液反
应后的吸光度;Aj— 2mL葛根提取液加 2mL乙醇的
吸光度 。
2　结果与讨论
2.1　不同微波强度和时间及浸取时间对提取率的影响
称取 5.0g干燥土葛粉三组 ,每组 5份 ,于 13个
250mL烧杯中 ,分别加入 10.0mL蒸馏水 ,充分搅拌
均匀 ,放入微波炉中 ,分别选择解冻 、中火 、中高火下
处理 0、10、20、40、60s。微波处理后各加入 75%乙醇
溶液 100mL,分别静置 2、4、6、8、10h,过滤得提取液 ,
按 1.2.2.3测量吸光度 ,结果见表 1。
由表 1可知 ,采用中火微波处理 20s,静置时间
8h条件下得到的葛粉总黄酮的提取量为最佳 ,未用
微波处理的(微波处理时间 0s)提取量最低。
2.2　乙醇不同体积分数对提取率的影响
图 1　乙醇体积分数对黄酮提取量的影响
称取 5.0g干燥土葛粉 5份于 250mL烧杯中 ,加
入 10.0mL蒸馏水 ,充分搅拌均匀 ,放入微波炉中微
波处理 20s, 微波处理后各加入 65%、75%、 85%、
95%、100%乙醇溶液 100mL,静置 8h,过滤得提取液。
按 1.2.2.3测量吸光度 ,结果见图 1。从图 1可以看出:
在体积分数为 75%的乙醇下浸取的葛粉 ,提取液中总
黄酮提取量最多 ,因此使用 75%的乙醇进行实验。
2.3　不同固液比对提取率的影响
称取 5.0g干燥土葛粉 3份于 250mL烧杯中 ,加
入 10.0mL蒸馏水 ,充分搅拌均匀 ,放入微波炉中微
波处理 20s,微波处理后各加入 75%乙醇溶液 75、
100、125mL,静置 8h,过滤得提取液 。按 1.2.2.3测量
吸光度 ,结果见图 2。从图 2可以看出:在固液比为
1∶20的条件下 ,提取液中总黄酮提取量最多。因此 ,
使用 1∶20的固液比进行实验 。
图 2　不同固液比对黄酮提取量的影响
2.4　样品的测定
称取 5.0g干燥葛粉于 250mL烧杯中 ,按实验方
法提取总黄酮并进行含量测定 ,结果见表 2。
表 2　葛粉中总黄酮含量(n=3)
方法 黄酮含量(mg/g) RSD(%)
经微波处理 4.62 0.93
未经微波处理 2.20 2.8
2.5　葛粉总黄酮对 DPPH·的清除作用
按 1.2.3.2方法测定不同浓度的葛粉提取液对
DPPH·自由基的清除率 ,结果见图 3。
图 3　葛粉总黄酮对 DPPH·的清除作用
由图 3知 ,葛粉中提取的总黄酮对 DPPH·具有
较好的清除能力 ,其 IC50 =18.75mg/L。
3　结论
由表 2知 ,与无微波处理的相比 ,微波处理后总
黄酮的提取率提高 1倍。用微波中火对葛粉进行辅
助处理 20s后 ,选用体积分数为 75%的乙醇 ,固液比
1∶20,浸取 8h,得到的葛粉总黄酮提取量为最佳。葛
食品工业科技
ScienceandTechnologyofFoodIndustry 研究与探讨
108　 　2007年第 11期
　　
人工接种泡菜的风味研究
粉中提取的总黄酮对 DPPH·具有较好的清除能力 ,
其 IC50 =18.75mg/L。
参考文献:
[ 1] 崔苏镇 , 彭学莲 .葛根的药理作用研究概况 [ J] .时珍国
药研究 , 1998, 9(3):246～ 247.
[ 2] 华辉 ,郭勇 .黄酮类化合物药理研究进展 [ J] .广东药
学 , 1999, 9(4):9～ 12.
[ 3] 张睿 ,徐亚琴 , 时阳 .黄酮类化合物提取工艺研究 [ J] .
食品与机械 , 2003(1):21～ 22.
[ 4] 曾昭钧 ,李香文 .微波有机化学进展 [ J] .沈阳药科大学
学报 , 1999, 16(4):304～ 309.
[ 5] 张代佳 ,刘传斌 ,修志龙 , 等 .微波技术在植物胞内有效
成份提取中的应用 [ J] .中草药 , 2000, 31(9):5～ 6.
朱文娴 1, 2 ,周相玲 2 ,张　惠 1 ,孙国波 2 , 薛文通 1, ＊
(1.中国农业大学食品学院 ,北京 100083;2.徐州空军学院航空军需系 ,江苏徐州 221006)
　摘　要:筛选合适的发酵剂 ,人工接种泡菜并与自然发酵泡菜中的
风味物质测定比较。首先用感官评价法确定合适的发酵
剂进行接种 ,然后利用高效液相色谱法、氨基酸自动分析
仪及气相色谱法 , 对人工接种与自然发酵泡菜中的有机
酸、氨基酸和香气成分进行了分析。结果表明 , 选用的发
酵剂人工接种发酵产品与自然发酵产品中的游离氨基酸、
有机酸和挥发性风味物质基本一致。
　关键词:泡菜 ,人工发酵 ,自然发酵 ,发酵剂 ,风味物质　　Abstract:Starterculturewasscreenedandvolatileflavourswere
comparedbetweeninoculatedfermentationpickleand
naturalfermentationpickle.Firstly, appropriatestarter
culturewasconfirmedwithsensoryevaluationmethod.
Theorganicacids, aminoacids, andvolatileflavours
wereanalyzedbyaminoacidauto-analysis, HPLC
andGC-MS, whichindicatedthattherewasnomuch
diferencebetweentheinoculatedfermentationpickle
andthenaturalfermentationpickle.
　Keywords:pickle;artificialinoculation;naturalfermentation;
starterculture;volatileflavours　　中图分类号:TS255.54　文献标识码:A
　文 章编 号:1002-0306(2007)11-0108-03
泡菜(pickledvegetable)在我国具有悠久的历
史 ,由于泡菜不含脂肪 ,热值低 ,并且含有多种维生
素 、矿物质和丰富的膳食纤维等营养成分 ,与新鲜蔬
菜相比 ,风味更加独特突出 ,而且具有刺激食欲 、健
胃消食 、改善肠道环境 、促进胃肠蠕动 、通便缓泻等功
收稿日期:2007-05-21　＊通讯联系人
作者简介:朱文娴(1966-), 女, 博士研究生 ,教授 ,研究方向:食品科
学与工程。
能。目前泡菜加工有作坊式自然发酵和人工接种发
酵两种形式 。自然发酵虽然口味醇厚 ,但其生产受
生产季节 、加工温度等许多不可避免因素的制约 ,均
有导致发酵异常和发酵失败的危险 ,不能适应工业
化生产的要求 ,所以选择合适的发酵剂进行人工接
种 ,使泡菜的产品风味与自然发酵泡菜的产品风味
相近 ,实现大规模生产 ,具有较高的经济价值和市场
前景 。本文在选择合适发酵剂的基础上 ,对人工接种
泡菜中的有机酸 、氨基酸和挥发性香气成分等泡菜
风味主要指标进行了分析 ,为人工接种泡菜提供了
参考 ,为实现泡菜工业化生产提供了理论依据 ,具有
一定的经济利益和现实意义 。
1　材料与方法
1.1　材料与设备
卷心菜　购于青菜市场 。
XMTJ型温度控制仪　长春自动化仪表厂;SHZ-3
型水循环真空泵　河南巩义杜甫仪器厂;微孔滤膜过
滤器　微孔滤膜孔径 0.22μm,上海医药工业研究院;
DS-1型高速组织捣拌机　上海标本模型厂;TGL-16G
型台式高速离心机　上海医用分析仪器厂;SP-250A
型生化培养箱 , 835型 Hitachi氨基酸自动分析仪 ,日
立 655A型高效液相色谱仪 ,吸附解吸装置。
1.2　实验方法
1.2.1　人工接种泡菜的制备　将离心得到的菌体用
生理盐水洗涤 2～ 3次 ,再用等量的新鲜泡菜盐水重
新悬浮 ,按照不同的接种单位 ,接入到泡菜坛中 ,其
他工艺同自然发酵法 [ 1 ] 。
1.2.2　乳酸菌接种单位的确定　在一定范围内 ,微
生物在液体培养基中的光密度与活菌数成正比。根
据各菌株在液体 MRS培养基中的生长曲线 ,选择处
于对数生长期的细胞作为接种发酵的接种发酵剂。