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云南野樱桃中槲皮素提取方法的研究①
施　瑛　孟　花　李 加 祝　杨 庆 娇　周　润　江　铃
（玉溪师范学院 资源与环境学院，云南 玉溪６５３１００）
［关键词］野樱桃；槲皮素；紫外分光光度法；高效液相色谱法
［摘　要］采用碱溶酸沉法、乙醇回流提取法、浸渍提取法提取云南野樱桃果实中槲皮素，用紫外
分光法和高效液相色谱法测定野樱桃中槲皮素的含量．其结果为：碱溶酸沉法得到的槲皮素含量
＞乙醇回流提取得到的槲皮素含量＞浸渍提取得到的槲皮素含量．通过分析比较，三种提取法
中，碱溶酸沉法提取槲皮素的工艺最为合理和简便．
［作者简介］施　瑛，本科，研究方向：生物化学与分子生物学．
［中图分类号］Ｓ７［文献标识码］Ａ［文章编号］１００９－９５０６（２０１３）０８－００６０－０４
野樱桃属蔷薇目 （Ｒｏｓａｌｅｓ）蔷薇科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）李亚科（Ｐｒｕｎｏｉｄｅａｅ）樱桃属（Ｐｒｕｎｕｓ）树木．野樱桃果实有
核果，呈鲜红色、黄色或暗红色，果直径约１０ｍｍ．野樱桃含樱桃苷、槲皮素、维生素Ｃ、松稀油等营养成分．槲
皮素是一种多羟基黄酮类化合物，化学名为３，３′，４′，５，７－五羟基黄酮，多以苷的形式（芦丁）存在于多种植物
中．槲皮素广泛存在于植物的花、叶、果实中，已知有１００多种中草药中含有槲皮素，如槐米、槐花、丹皮、菊花
等．槲皮素能治疗关节炎，结肠肿瘤，在抗氧化及止痛消炎等方面有潜在的疗效［１，２］．野樱桃在我国分布较广，
但有关野樱桃果实中槲皮素的提取方法的研究报道较少，为更好的利用这一丰富的植物资源，本研究采用几
种不同方法来提取云南野樱桃中的槲皮素，并通过对几种方法的对比，得出提取槲皮素的有效方法．
１　仪器、试剂及分析方法
仪器电子天平、酒精灯、玻璃棒、铁架台、抽滤装置、温度计、烧杯、索式提取器、试管、水浴锅、蒸发皿、
容量瓶、分光光度计、粉碎机、广口瓶、烘箱、三角瓶、高效液相色谱仪．
试剂　硼砂、石灰乳、１ＭＨＣｌ、７０％乙醇、三氯化铝、槲皮素标准品、无水乙醇、流动相甲醇为色谱醇．
定性分析　黄酮类化合物与金属离子形成的络合物一般为黄色或橙色，可以用此原理进行定性分
析［３］．具体可采用三氯化铝反应，方法是往样品的甲醇溶液中加入１％的三氯化铝溶液，呈鲜黄色，在紫外
光下观察为黄绿色荧光，从而可以初步确认此溶液中含有黄酮类化合物．
定性分析　紫外分光法和高效液相色谱法．
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玉溪师范学院学报（第２９卷）２０１３年第８期　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｙｕｘｉ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｖｏｌ．２９Ｎｏ．８Ａｕｇ．２０１３
① 指导教师：刘家忠，副教授，研究方向：植物及基因工程．
２　方法与结果
２．１　野樱桃中槲皮素的提取
样品的处理［４］　将采摘的野樱桃自然风干后，用粉碎机粉碎，后分装于广口瓶，放在烘箱中于６５℃烘
１０ｈ，然后放在具塞三角烧瓶中，备用．
碱溶酸沉法提取槲皮素　①粗制芦丁的制备［５］：取５份野樱桃粗粉各１０ｇ，加水及硼砂后加热至微
沸，边搅拌边加入石灰乳调至ｐＨ８～９，保持３０ｍｉｎ，趁热抽滤（重复３次），合并滤液，在６０～７０摄氏度下
用１ＭＨＣｌ调至调ｐＨ４～５左右，静置过夜，待沉淀形成后抽滤，即得粗制芦丁．②槲皮素的制备：取粗制芦
丁加热溶解至澄清后，趁热抽滤，将得到的滤液用１ＭＨＣｌ调至ｐＨ２，加热水解，静置冷却，抽滤，得到的沉
淀物即为粗制槲皮素．
乙醇回流的方法提取槲皮素［６］　称取５份野樱桃粉末各１０．００ｇ，置入索式提取器中加入７０％乙醇
２００ｍＬ，９０摄氏度水浴，抽提５ｈ，至回流液无色．合并提取液，减压浓缩，恒温干燥，得槲皮素粗提物．
浸渍提取的野樱桃中的槲皮素［７］　称取５份野樱桃粉末各１０．００ｇ，精密称定，置入２５０ｍＬ烧杯，加
入蒸馏水２００ｍＬ，５０℃提取４ｈ．提取液抽滤，滤液减压浓缩至少量，恒温干燥，得槲皮素粗提物．
２．２　槲皮素样品溶液的紫外分光光度计含量测定
　　　附图　槲皮素标准曲线图
标准曲线制备　称取２９ｍｇ槲皮素标准品，置
于５０ｍＬ容量瓶中，加入无水乙醇，定容制成含
０．５８ｍｇ／ｍＬ槲皮素的标准溶液．分别吸取槲皮素标
准溶液 ０ｍＬ、０．２ｍＬ、０．４ｍＬ、０．６ｍＬ、０．８ｍＬ、
１．０ｍＬ，置于标有１～６号的２５ｍＬ容量瓶中；加入
无水乙醇定容至刻度，摇匀，静置．以缺少槲皮素标
品的溶液为空白对照，在３７０ｎｍ处测定吸光度［８］．
得到槲皮素的吸光度值，标准曲线见附图．
　含量测定　精密称取５份槲皮素样品２ｇ，置于标有１～５号烧杯中，加２５ｍＬ无水乙醇摇匀，静置．
以溶剂为空白对照，在３７０ｎｍ处测定各溶液的吸光度．用此方法分别对采用碱溶酸沉法、乙醇回流的方
法、浸渍提取的槲皮素进行含量测定，结果见表１．
　　　　　表１ 不同方法提取的槲皮素含量测定对照
提取方法
槲皮素含量（ｕｇ／ｇ）
１　 ２　 ３　 ４　 ５
平均值
碱溶酸沉法 ０．４５３　４　 ０．４５２　１　 ０．４４６　７　 ０．４４９　８　 ０．４５７　８　 ０．４５１　９
乙醇回流的方法 ０．４５２　４　 ０．４５０　１　 ０．４４４　９　 ０．４４５　６　 ０．４４８　６　 ０．４４８　３
浸渍提取 ０．４４２　７　 ０．４４９　９　 ０．４４０　９　 ０．４３９　６　 ０．４３６　６　 ０．４４１　９
２．３　ＨＰＬＣ法测定野樱桃中槲皮素的含量
色谱条件　色谱柱［９］：Ｄｉｋｍａ　Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ　ＴＭＣ１８５μｍ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）色谱柱；流动相：甲醇－０．４％磷
酸溶液（５５∶４５）为流动相［１０］；流速：１ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：３０℃；检测波长：３７０ｎｍ．
１６
施　瑛　孟　花　李加祝　杨庆娇　周　润　江　铃：云南野樱桃中槲皮素提取方法的研究
实验条件的选择　根据黄酮类化合物及槲皮素的化学性质，参考药典及文献，本试验选用甲醇溶液为
提取溶剂，采用回流提取，再用２５％盐酸经水解后测定其含量．
对照品溶液的制备　分别精密称取槲皮素标准品５．４６ｍｇ分别置１０ｍＬ量瓶中，用甲醇溶解并稀释
至刻度，摇匀；分别精密吸取１．０ｍＬ，置２５ｍＬ量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每１ｍＬ含
２１．８４μｇ，作为对照品溶液．
供试品溶液的制备　取实验中粗制槲皮素２ｇ，精密称定，置磨口瓶中，精密加入甲醇２５ｍＬ，称定重
量，置水浴中回流３０ｍｉｎ，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液１０ｍＬ，置磨口
瓶中，加入２５％盐酸溶液２．５ｍＬ，置水浴中回流１ｈ，冷却，转移至２５ｍＬ量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，
滤过，取续滤液，即得．
线性范围考察　精密称取槲皮素对照品约２５ｍｇ，加５ｍＬ氯仿振摇使溶解，再加甲醇稀释分别制成
０．３２５μｇ／ｍＬ、０．６２５μｇ／ｍＬ、１．２５．μｇ／ｍＬ、１．５７５μｇ／ｍＬ、２．５μｇ／ｍＬ浓度的溶液，精密吸取２０μＬ进样，按
上述色谱条件依次测定峰面积．
以槲皮素浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，经回归处理，得到槲皮素回归方程，分别为
Ｙ＝１　８１４ｘ–５．８４，ｒ＝０．９９８　９，线性范围为０．３２５～２．５μｇ／ｍＬ，相关系数为ｒ＝０．９８９　６．
精密度试验考察　精密称取本品２ｇ，按供试品溶液制备方法制备，精密吸取供试品溶液２０μＬ，连续
进样６次，按上述色谱条件进行色谱分析，测定色谱峰面积．槲皮素精密度试验考察结果ＲＳＤ＝１．４３％；
测定结果表明，精密度实验符合规定．
稳定性试验考察　精密称取本品２ｇ，按供试品溶液制备方法制备，精密吸取供试品溶液２０μＬ，每隔
２ｈ进样一次，分别测定其色谱峰面积．槲皮素稳定性试验考察结果ＲＳＤ＝１．５７％；测定结果表明，槲皮素
色谱峰面积在８ｈ内基本无变化，表明本实验条件下稳定性良好．
重复性试验考察　取本品２ｇ，共取６份，分别按供试品溶液制备方法制备，按上述色谱条件进行色谱
分析，测定色谱峰面积．槲皮素重复性考察结果分别为ＲＳＤ＝１．６１％、ＲＳＤ＝１．４９％．测定结果表明，本方
法的重复性较好．
回收率试验考察　精密吸取已知浓度的槲皮素６份，按供试品溶液制备方法操作，即得加样回收溶
液，精密吸取加样回收溶液２０μＬ，按上述色谱条件进行色谱分析，测定结果见表２．
　　　　　　表２ 槲皮素回收率考察
编号 对照品加入量（ｕｇ） 实测槲皮素总量（ｕｇ） 回收率（％） 平均回收率（％）
１　 ０．６６３　９　 ０．６４３　 ０．９６８　５
２　 ０．６７３　５　 ０．６５９　 ０．９７８　４
３　 ０．６７５　８　 ０．６５８　 ０．９７３　７
４　 ０．６７０　６　 ０．６６１　 ０．９８５　７
５　 ０．６６６　９　 ０．６２７　 ０．９４０　２
６　 ０．６４４　９　 ０．６３２　 ０．９７９　９
９７．１１
ＨＰＬＣ法测定三种提取法得到的槲皮素含量对比　分别称取三种方法提取得到的粗槲皮素３份，每
份２ｇ，精密称定，置磨口瓶中，精密加入甲醇２５ｍＬ，称定重量，置水浴中回流３０ｍｉｎ，放冷，再称定重量，用
甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液１０ｍＬ，置磨口瓶中，加入２５％盐酸溶液２．５ｍＬ，置水浴中回
流１ｈ，冷却，转移至２５ｍＬ量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液．精密吸取槲皮素供试品溶
２６
玉溪师范学院学报
液，按上述色谱条件进行色谱分析，测定结果见表３．
　　　　　　　表３ ＨＰＬＣ法测定不同提取法得到野樱桃中槲皮素的含量
提取方法
槲皮素含量（ｕｇ／ｇ）
１　 ２　 ３
平均值
碱溶酸沉法 ０．４５６　７　 ０．４５０　６　 ０．４４４　８　 ０．４５２　７
乙醇回流的方法 ０．４５０　１　 ０．４４９　８　 ０．４４６　７　 ０．４４９　７
浸渍提取 ０．４５１　３　 ０．４４８　８　 ０．４４　３４　 ０．４４４　９
结果与讨论　①本文采用碱溶酸沉法、乙醇回流的方法、浸渍提取法提取云南野樱桃果实中槲皮素，
并分别用紫外分光法测定含量和高效液相色谱法测定不同方法提取到的槲皮素的含量．从实验结果看，三
种提取法得到的槲皮素含量为：碱溶酸沉法得到的槲皮素含量＞乙醇回流提取得到的槲皮素含量＞浸渍
提取得到的槲皮素含量．因此，三种提取法中，碱溶酸沉法提取槲皮素的工艺最为合理和简便．②采用紫外
分光光度法和高效液相色谱法测定云南野樱桃中槲皮素的含量，两种方法所测得的槲皮素含量相近，但使
用高效液相色谱法测得的数据更准确、重复性好、精密度高、稳定性强．
参考文献：
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［１０］国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［Ｓ］．北京：化学工业出版社，２００５．
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｆｒｏｍ　Ｗｉｌｄ　Ｃｈｅｒｒｙ　ｏｆ　Ｙｕｎｎａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ
ＳＨＩ　Ｙｉｎｇ　ＭＥＮＧ　Ｈｕａ　ＬＩ　Ｊｉａｚｈｕ　ＹＡＮＧ　Ｑｉｎｇｊｉａｏ　ＺＨＯＵ　Ｒｕｎ　ＪＩＡＮＧ　Ｌｉｎｇ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，Ｙｕｘｉ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｕｘｉ，Ｙｕｎｎａｎ　６５３１００，Ｃｈｉｎａ）
Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ：ｗｉｌｄ　ｃｈｅｒｒｙ；ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ；ＵＶ　Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ；ＨＰＬＣ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｒｅｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｆｒｏｍ　ｗｉｌｄ　ｃｈｅｒｒｙ　ｏｆ　Ｙｕｎｎａｎ　ｐｒｏｖｉｎｃｅ　ｗｉｔｈ　ｉｔｓ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｗｉｌｄ
ｃｈｅｒｒｙ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＵＶ　Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　ａｎｄ　ＨＰＬＣ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｉｎｄｉｃａｔｅｓ　ｔｈａｔ　ａｌｋａｌｉ－ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｃｉｄ－ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈ－
ｏｄ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｓｉｍｐｌｅｓｔ　ａｎｄ　ｍｏｓｔ　ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｍｏｕｎｔｓ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｂｙ　ａｌｋａｌｉ
－ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｃｉｄ－ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｅｔｈａｎｏｌ　ｒｅｆｌｕｘ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｐｐｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｅｓｃｅｎｄｉｎｇ　ｏｒｄｅｒ．
收稿日期：２０１３年３月１７日
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施　瑛　孟　花　李加祝　杨庆娇　周　润　江　铃：云南野樱桃中槲皮素提取方法的研究