全 文 ：Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2010 November，Vol．21 No．6
收稿日期：2010-05-26
作者简介：刘晓涵（1982-），女，博士，研究方向：中药资源开发与新药研究。Email：liuxia98@163.com。通讯作者：林励，博士生导师，研究
员，主要从事中药资源开发与新药研究。Email：lwyll@gzhtcm.edu.cn。
基金项目：广东省科技计划项目（A301020101）。
化州柚（Citrus grandis‘Tomentos’）是广东省化州
市特有树种，其未成熟果外果皮即作为化橘红入药，
习称“毛橘红”，系道地化橘红药材。本课题组自
2003年起研究化橘红药材，已从中分离鉴定出多个
黄酮类成分，药材黄酮类成分的指纹图谱结果提示柚
皮苷和野漆树苷为毛橘红的主要成分[1]，尚含有柚皮
苷元、芹菜素、原儿茶酸等[2]。已建立了毛橘红药材
质量标准，但现有质量控制方法均须在不同条件下分
别测定柚皮苷和野漆树苷含量，难于快速便捷检测毛
橘红药材的质量 [3-4]，也未见同时测定柚皮苷和野漆
树苷含量的报道。故本试验建立了 RP-HPLC同时测
定毛橘红中有效成分柚皮苷和野漆树苷含量的方法，
可为制定该药材质量的快速检测方法提供参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器 KQ-500型超声波清洗器（昆山市超声仪器
有限公司，500 W，40 kHz），Agilent 8453 紫外－可
见分光光度仪；Agilent-1100型高效液相色谱仪，包
括：四元泵，在线脱气机， DAD检测器等，BP211D
电子分析天平（德国 Sartorius公司）。
1.2 药材与试剂 毛橘红样品均采自广东省化州市化
橘红 GAP基地，经广州中医药大学中药学院林励研
究员鉴定为芸香科植物化州柚 Citrus grandis‘Tomen－
tos’的干燥幼果（毛橘红样品见表 3）。柚皮苷对照品
化橘红中柚皮苷和野漆树苷含量同时测定方法的建立
刘晓涵1，陈永刚2，林 励3，陈地灵3，庄满贤3（1.广东药学院，广州 510006；2.湖北省武汉市第三医院药学
部，武汉 430060；3. 广州中医药大学中药学院，广州 510006）
摘要：目的 建立同时测定化橘红中柚皮苷和野漆树苷的含量的方法。方法 采用RP-HPLC法，GraceSmart
RP C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水-冰乙酸，梯度洗脱；流速1.0 mL·min-1；检测波长330 nm；
柱温室温。结果 柚皮苷和野漆树苷浓度分别在0.96～28.80 μg（r=0.999 9）和0.07～2.10 μg（r=0.999 9）范围内与
峰面积积分值呈良好线性关系。平均加样回收率（n=5）分别为98.81 %和98.73 %。结论 该方法简便、快速、
准确，重复性好，可用于化橘红中柚皮苷及野漆树苷含量的同时测定。
关键词：化橘红；柚皮苷；野漆树苷；RP-HPLC
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1003-9783（2010）06-0640-0
Simultaneous Determination of Naringin and Rhoifolin in Exocarpium Citri Grandis by RP-HPLC
LIU Xiaohan1，CHEN Yonggang 2， LIN li3，CHEN Diling3， ZHUANG Manxian3（1. Guangdong Pharmaceutical
College，Guangzhou 510006，China; 2. Department of Pharmacy， the Third Peoples Hospital of Wuhan，Wuhan
430060 Hubei， China; 3. School of Chinese Herbal Medicine， Guangzhou University of Chinese Medicine，
Guangzhou 510006，China）
Abstract: Objective To develop an HPLC method for simultaneous determination of naringin and rhoifolin in Exo－
carpium Citri Grandis. Methods The RP-HPLC system consisted of a Gracesmart RP C18 column（250 mm×4.6 mm，
5 μm） and the mobile phase of methanol-water- glacial acetic acid as in gradient mode. The flow rate was at 1.0
mL·min-1 and the detection wavelength was 330 nm， the column temperature was room temperature. Results The
linear ranges of naringin and rhoifolin were 0.96～28.80 μg（r=0.999 9）and 0.07～2.10 μg（r=0.999 9），respective－
ly，and the average recoveries（n=5）were 98.81 % and 98.73 % respectively. Conclusion The method is quick，
simple and reproducible for the determination of naringin and rhoifolin in Exocarpium Citri Grandis simultaneously.
Keywords: Exocarpium Citri Grandis；Naringin；Rhoifolin；RP-HPLC
·质量分析研究·
·640·
中药新药与临床药理 2010年 11月第 21卷第 6期
（批号：110722—200309）购自中国药品生物制品检定
所；野漆树苷对照品（自制，经面积归一化法计算纯
度为 99.51 %）；水为双蒸水；甲醇为色谱纯，其余
试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 测定波长的选择 分别配制一定浓度的柚皮苷及
野漆树苷对照品溶液，另取“2.4”项下化橘红样品
溶液适量，按中国药典 2005版一部附录ⅤA项下方
法，在 200～800 nm进行紫外吸收波长扫描。结果两
种对照品溶液和化橘红样品溶液在 330nm 均有紫外
吸收，结果见图 1～3。
图1 柚皮苷对照品溶液图谱
图2 野漆树苷对照品溶液图谱
图3 化橘红样品溶液图谱
2.2 色谱条件 GraceSmart RP C18色谱柱（250 mm×
4.6 mm，5 μm）；流动相采用二元体系，流动相 A为
甲醇溶液，流动相 B为水和冰醋酸溶液（61-4），梯
度洗脱 [0 min～18 min，25 % A～47 % A]；柱温：室
温；流速：1.0 mL·min-1；检测波长 330 nm；进样量
10 μL。对照品及样品色谱图见图 4～5。
图4 化橘红样品HPLC图谱
图5 对照品混合溶液HPLC图谱
2.3 对照品混合溶液的制备 精密称取柚皮苷、野漆
树苷对照品适量，置于 10 mL容量瓶中，加甲醇溶
解并定容至刻度,制成 1.0，0.5 mg·mL-1的对照品溶
液，摇匀，备用。
2.4 样品溶液的制备[5] 取化橘红粉末约 0.2 g，精密
称定，置具塞锥形瓶中，加入石油醚（60~90 ℃）20
mL超声处理（功率 500 W，频率 40 kHz）30 min，取
出，充分挥干石油醚，再精密加入甲醇 20 mL，密
塞，称定，超声处理 30 min。取出，放凉，用甲醇
补足减失的重量，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取
续滤液，作为供试品溶液。
2.5 线性关系考察 精密吸取柚皮苷、野漆树苷混合
对照品溶液各 1、5、10、15、20、25、30 μL进样，
以峰面积积分值对进样量进行回归处理，得回归方程
Y=274 150X+142 65， r=0.999 9；Y=106X+162 93，
r= 0.999 9。结果表明柚皮苷、野漆树苷分别在 0.96
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
Ab
s
250 300 350 400
λ / nm
λ / nm
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
Ab
s
200 300 400 500 600 700 800
λ / nm
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
-0.2
Ab
s
250 300 350 400
t / min
mV
430
420
410
400
390
380
370
360
350
340
330
320
310
300
290
280
270
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18
t / min
12
.4
32
0.
33
2 3.
05
9 3
.2
12
3.
31
8
3.
68
7
4.
13
0
4.8
19
7.
18
3
11
.5
51
13
.9
87
14
.6
31
17
.3
21
18
.5
54
19
.3
24
t / min
430
420
410
400
390
380
370
360
350
340
330
320
310
300
290
280
270
260
250
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18
0.
62
4
1.
44
4
1.
99
9
3.
02
6 3
.2
08
3.
76
7
14
.6
38
15
.9
08
17
.3
49
18
.3
653
.3
18
柚皮苷
野漆树苷
mV
柚皮苷
野漆树苷
·641·
Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2010 November，Vol．21 No．6
μg～28.80 μg和 0.07 μg～2.10 μg内呈现良好线性关系。
2.6 精密度试验 取同一对照品溶液，连续进样 5
次，结果其柚皮苷、野漆树苷峰面积的 RSD分别为
2.1 %，1.8 %，表明精密度良好。
2.7 重复性试验 取化橘红样品（序号 2）5份，每份
0.2 g，分别精密称定，按“2.4”项下方法制备供试
品溶液，按上述色谱条件测定，结果柚皮苷平均含量
为 18.0 %，RSD 为 0.91 %；野漆树苷平均含量为
0.824 %，RSD为 1.3 %，表明重现性较好。
2.8 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在 0、1、
2、4、8、12 h 内进样，结果柚皮苷和野漆树苷的
RSD 分别为 1.1 %和 0.78 %，表明待测成分在 12 h
内稳定。
2.9 加样回收率试验 精密称取已测含量的化橘红样
品 0.1 g（序号 6），精密加入一定量的柚皮苷对照品
和野漆树苷对照品溶液，按供试品溶液制备方法进行
试验，结果柚皮苷平均回收率为 98.81 %，RSD 为
4.34 %，野漆树苷平均回收率为 98.73 %，RSD 为
2.78 %，见表 1和表 2。
表1 柚皮苷加样回收率试验（n=5）
表2 野漆树苷加样回收率试验（n=5）
2.10 样品含量测定 取 1~9号批次化橘红样品各 0.2
g，精密称定，按“2.4”项下制备供试品溶液,于波长
330 nm测定吸收值。代入回归方程，计算试样中柚
皮苷和野漆树苷的含量。结果见表 3。
由上表可知 9批样品的柚皮苷平均含量为 12.34
%，野漆树苷平均含量为 0.52 %。
3 讨论
2010版《中国药典》一部化橘红项下对柚皮苷含
量规定不得低于 2.0 %，对野漆树苷未作要求。本试
验中各批样品柚皮苷含量测定结果显著高于药典规
定值。
文献[1]已报道化橘红柚皮苷和野漆树苷含量之和
已占其黄酮类物质总量的 84 %以上，为毛橘红药材
黄酮类物质的主要组成成分。试验中作者还通过比对
橙皮苷对照品保留时间，未见毛橘红中有与之相同保
留时间的色谱峰，提示其不是毛橘红的主要化学成
分。因此只需测定毛橘红中柚皮苷和野漆树苷含量，
即可控制药材的质量。
进行测定波长扫描时，柚皮苷对照品溶液的最大
吸收波长是 225 nm、285 nm、330 nm；野漆树苷对
照品溶液的最大吸收波长是 270 nm、330 nm。考虑
到 280 nm波长下柚皮苷对照品溶液的响应值较强，
而野漆树苷响应值太小，在预试验中也观察到此波长
值下，样品色谱图中以柚皮苷峰为主，野漆树苷色谱
峰面积太小。再结合仪器条件及测定方法的便利性，
选择 330 nm作为测定波长。
从 2010版《中国药典》中收载的有关药材“含量
测定”方法预测，针对药材中全成分多指标同时检测
的快速高效分析方法会成为今后研究热点，研究成果
将更多地被补录至药典中，如淫羊藿药材含量测定方
法。本实验中参照文献[4]中流动相组成，笔者比较了
等度洗脱和梯度洗脱的各色谱峰分离效果。结果表
明，以本文中所采用的梯度条件效果最好，各色谱
峰在 20 min 内被快速洗脱，各色谱峰达到基线分
离，实现了快速准确同时测定化橘红中两个化学成
分的目的。
参考文献：
[1] 陈志霞，林励，孙冬梅. 化橘红黄酮类成分的 HPLC指纹图谱研究
[J]. 中草药，2003，34（7）：657-661.
[2] 袁旭江，林励，陈志霞. 化橘红中酚性成分的研究 [J]. 中草药，
样品号
6-1
6-2
6-3
6-4
6-5
称样量/g
0.101 03
0.100 15
0.100 26
0.100 18
0.100 19
柚皮苷
含量/mg
8.232 1
8.427 5
9.489 0
9.639 1
8.058 8
柚皮苷加
入量/mg
8.731
8.731
8.731
8.731
8.731
测得值
/mg
16.549 2
16.852 9
18.713 3
18.402 4
16.464 1
x
95.26
96.50
105.65
100.37
96.27
x
98.81
RSD
4.34
回收率/%
样品号
6-1
6-2
6-3
6-4
6-5
称样量/g
0.101 03
0.100 15
0.100 26
0.100 18
0.100 19
野漆树苷
含量/mg
0.408 8
0.405 2
0.405 7
0.405 4
0.405 4
野漆树苷
加入量/mg
0.407
0.407
0.407
0.407
0.407
测得值
/mg
0.798 5
0.817 6
0.820 0
0.805 5
0.798 1
x
95.75
101.33
101.79
98.30
96.49
x
98.73
RSD
2.78
回收率/%
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
产区
马力
马力
马力
积田
积田
积田
积田
积田
积田
树龄/年
4
4
6
5
5
5
5
5
5
柚皮苷含量/%
12.982 3
17.962 8
9.578 6
13.607 6
10.536 0
10.142 0
9.405 7
15.311 1
11.378 3
野漆树苷含量/%
0.498 6
0.828 3
0.334 0
0.659 1
0.460 8
0.419 1
0.412 2
0.604 6
0.454 0
表3 化橘红中柚皮苷和野漆树苷的含量测定结果（n=3）
·642·