全 文 ：一 12 2 2 一 药物分析杂志 hC ni J phna A耐 20 5 , 25 ( 10)
R P 一 E P L C 法测定栽培种越橘果中花色素昔的含量 ’
杨桂霞’ , 范海林 , , 李亚东 2 , 郑毅男 ’ *
( 1
. 吉林农业大学资源与环境学院 长春 1301 18 ; 2 . 吉林农业大学园艺学院 长春 13 01 1;8
3
. 吉林农业大学中药材学院 长春 13 01 18 )
摘要 目的 :建立测定不同越橘果中花色素昔含量的方法 。 方法 :采用 0 . 1% H CI 的甲醇溶液对 16 种越橘果进行提取 , 以矢
车菊 一 3 一半乳糖昔 ( C yan i d i n 一 3 一叨 ac ot s id e e hl o ir d e )为对照品 ,采用 Z o ht ax S B C , :色谱柱 ( 15 0 un x 4 . 6 mtn , 5 林m ) , 以甲醇
一甲酸水溶液作为流动相进行二元梯度洗脱 ,检测波长为 525 unr ,流速 : 0 . 5 m L · 而 n 一 ’ 。 结果 :花色素昔在 0 . 032 一 0 . % 此
·
m L
一 `的浓度范围内呈良好的线性关系 ( r = 0 . 9 9 3 ) ,平均回收率为% . 1% 。 结论 :本方法简便 、快速 、 准确 、 可靠 ,可以作为
越橘果花色素昔含量的测定方法 。
关健词 :高效液相色谱 ;花色素昔 ;越橘
R P 一 E r L C D e et r m i n s it o n o f A n t h o C y a m l S C o n et nt in
C ul it v s et d B IU e b e r ir e S V a ir e it e S
Y A N c e u i 一 x i a l ,狱N H ia 一 l in l , u Y a 一 d o嗯 2 , z H EN G Y i 一 n a n 3 “
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s at n d a记 . Ch or m a to gr a p h y wa s p e for n e d o n a oZ br ax SB C , : e o l u m n ( 15 0 m x 4
.
6
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5 2 5 mn
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R e s川 st : A hnt o e y耐 n s s h o w e d 即 o d l i n e面汀 ( r = 0 . 9 9 9 3 ) i n ht e arn 邵 of 0 . 0 3 2 一 0 . 9 6 卜g · m L 一 ’ . hT e
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越橘果是杜鹃花科 ( E icr ac ea e) 越橘属 (伦“ in i 一 瘤 、 抗辐射等功能 。 花色素昔类物质被国外的临床
“ m sP
.
)植物越橘的成熟果实 ,越橘果 口味独特并且 和科学实验证明还有治疗和预防各类眼科疾病的功
具有显著的生理活性 , 已经成为一种新兴的小浆果 。 效 ,含量 > 25 % 的花色素昔提取物已经被收人法国
现代研究表明 [ ’ 一 , l :越橘果中的活性成分是花色素 药典 ;意大利 、法国 、 西班牙 、韩国 、美国和新西兰已
誉和黄酮类物质 ,花色素昔可以对抗自由基 ,延缓衰 将其用于夜盲症 、 毛细血管硬化 、脑血管障碍 、 胃溃
老 ,防止细胞蜕变 , 可以抑制血小板聚集 ,能有效预 疡的治疗 。
防大脑病变 、 动脉硬化和肿瘤 , 有抑菌 、 杀菌 、 抗肿 我国野生种越橘资源品种比较少 , 品质较差 。
* 中华人民共和国科技部农业科技成果转化资金项目 ( 03 E FN2 1 2 仪力 7 7 )
* 通讯作者 ( c o成 soP n d i n g a u ht or )
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2005. 10. 005
药物分析杂志 Ci hnJP h~A na 2 l 05
,
25 ( 10) 一 1 223 一
自上世纪末开始 ,栽培品种不断地引人 ,吉林农业大
学现已拥有不同的栽培品种 12 0 个 ,其中包括品质
较优的矮丛越橘〔吕川 。 为深人对越橘果进行研究 ,
有必要建立越橘果中花色素昔含量的测定方法 , 完
善其质量评价体系 , 因此 ,本实验具有一定的理论基
础和现实意义 。
1 仪器 、药品及试荆
高效液相色谱仪 : 美国 A幼e nt 1 0 型 ; 色谱
柱 : oZ ht ax S B C l: ( 4 . 6 m x 15 0 mtn
,
5 林m ) ; SZH
-
B8 8 型循环水式多用真空泵 , 郑州长城仪器厂 ; Uv
一 12 0 型紫外可见分光光度计 , 日本岛津 ; zS 一 93 自
动双重纯水蒸馏器 ,上海亚荣生化仪器厂 ; M 2A 60 s
电子天平 , 上海第二天平仪器厂 。
对照品矢车菊 一 3 一 口 一半乳糖昔 ( cy 一 3 一 gal )
由日本东京都文京区本郎株式会社提供 。
甲醇为色谱纯 , 山东禹王公司生产 ,二次蒸馏水
自制 ,其他试剂为分析纯 。 实验用越橘果共 16 个品
种 ,包括矮丛越橘 (代码 )L 7 种 , 高丛越橘 (代码 H )
4 种 ,半高丛越橘 (代码 M ) 5 种 ,名称和代码见表 1 。
2X() 3 年 6 一 7 月采于吉林农业大学浆果园 , 经吉林
农业大学园艺学院果树教研室李亚东教授鉴定 。 保
存于 一 40 ℃ 的冰箱中备用 。
2 实验方法与结果
2
.
1 对照品溶液的制备 取 一 40 ℃冷冻的 c y 一 3
一脚 , 真空干燥 48 h , 精密称取 0 . 8 m g , 用 0 . 1%
HCI 的甲醇溶液溶解并定容在 5 m L 量瓶中作为对
照品原液 。
2
.
2 供试品溶液的制备 精密称取供试的 1 一 16
号越橘果各 2 9 ,破碎后用 0 . 1% H CI 的甲醇溶液 10
m L 浸泡过夜 , 60 ℃水浴 Z h ,抽滤 ;未滤过物再次以
0
.
1% HCI 的甲醇溶液 8 m L 60 ℃水浴 Z h ,抽滤 ,合
并滤液 ,用 0 . 1% HCI 的甲醇溶液定容于 25 m L 的
量瓶中作为供试原液 。 进样前精密量取供试原液
5
.
0 m L
,定容至 25 . 0 m L ,备用 。
2
.
3 最大吸收波长的选择 取对照品用流动相溶
解后使用 U V 一 12 0 型紫外可见分光光度计测试 , 测
定 cy 一 3 一脚 的最大吸收波长为 525 n m ,本实验选
定 5 25 mn 为检测波长 。
2
.
4 色谱条件 色谱柱为 oZ ht ax S B c l : ( 4 . 6 ~ x
巧 0 ~
,
5 卿 ) ;柱温为 25 ℃ ;检测波长为 525 lun ;流
动相 : 甲醇 一 甲酸水溶液二元梯度洗脱 , A : 10 % 甲酸
溶液 , B : 甲醇 ;流速 : .0 s mL · 而 n 一 ’ ;梯度洗脱条件 :
O 一 20 而 n 10% 一团% B , 20 一 2 5 m i n 印% 一 10 % B ,
25 一 so 而 n 10 % ;B 进样量 : 20 汕 。 对照品 cy 一 3 -
列 在上述色谱条件下 的保 留时间为 13 . 175 而 n ,
HP LC 测定的纯度为 98 . 6% 。 如图 1 。
20 t ./ i n
图 1 对照品的 HF LC 色谱图
iF g 1 HP LC of ht e s切旧 d a月』
1
.
e y 一 3 一 gal ( 13
.
2 n )
2
.
5 线性关系考察 精密吸取 cy 一 3 一脚 原液不
同体积 ,用水定容于 5 m L 量瓶中得系列标准溶液 ,
过 0 . 45 林m 微孔膜后各吸取 20 卜L 进样 。 以 cy 一 3
一脚 的峰面积积分值为纵坐标 ,进样量为横坐标 ,
计算得回归方程 :
Y = 5 9 0 2 6
.
8 2《巧 X 一 3 3 . 7 6 30 了 = 0 . 9 9 9 3
线性范围为 0 . 0 3 2 一 0 . 9 6 林g · m L 一 ’ 。
2
.
6 精密度实验 精确量取对照品 cy 一 3 一 gal 溶
液 ,按 ,’2 . 4 ” 项条件 ,连续进样 5 次 , 5 次峰面积的
R SD 为 0 . 9 6% ,说明方法的精密度很高 。
2
.
7 稳定性实验 精确量取对照品 cy 一 3 一卿 溶
液 ,按 ,’2 . 4” 项条件 , 每隔 4 h 进样 , 5 次峰面积的
R SD 为 1 . 4% ,说明实验的稳定性高。
2
.
8 回收率实验 采用加样回收法 ,精密称取已知
含量的越橘果 M 3 , 5H 和 7L 各 2 9 总计 9 份 , 准确
加人对照品 ,按照 “ 2 . 2 ” 项下 的制备方法提取制备 ,
按照上述色谱条件进样测定 ,计算回收率 , 结果显
示 : 回收率 ( n = 3 )分别为 95 . 4% , % . 2% , % . 6% ;
RS D 值分别为 3 . 3% , 3 . 1% , 2 . 8% 。 平均 回收率
%
.
1%
。 表明此方法得到的测定结果准确可靠 , 且
对不同品种的越橘果均适用 。
2
.
, 花色素昔含量测定 取 16 个品种的越橘果的
供试品溶液稀释成一定的倍数后各进样 20 卜 L , 以
外标法按照上述的色谱条件进行测定并按照以下公
式计算花色素昔总含量 , 结果见表 1。
`
~
J欲面积 x 又胡貌撇度面积比 x样品稀释倍数 x幼总含量 =一里些进翼岁= 卫一竺竺~ 。 ~ 一 果重
一 12 2 4一 药物分析杂志 Chi n J ph ram An a lZ os, 25 ( 10)
表 1 不同品种的越擂果花色素昔的总含 t
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序号
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名称及代码
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对照品含量
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26
.
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闷的 . 23
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18
28
.
42
16
.
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3 2
.
59
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.
95
28
.
34
12
.
7 6
8
.
%
10
.
19
37
.
34
17
.
64
20
.
96
13
.
33
23
.
02
! 4
.
27
4 18
.
64
33 6
.
5 3
宜使用微波提取 , 而加热提取温度也不宜过高 (不
高于 60 ℃ ) ,否则活性物质会受到破坏 。 而在溶剂
中加酸和不加酸提取的对比实验显示 , 加酸的效果
好 。
3
.
5 本实验所用的越橘样品均采 自吉林农业大学
浆果园 ,他们是 19 89 一 20 1年以来从欧美以及日本
等国引种 ,实验的结果将能进一步地验证栽培引种
的效果 ,为越橘的产业化生产和开发奠定良好的基
础 。
50
.
97
49 4
.
95
月以加. 26
25 8
.
76
3 12
.
59
l 0
l I
349
.
50
346
.
43
l 2
13
336
.
12
3 7
.
38
l 4
巧
27 8
.
49
初 5 . 5 5
29 8
.
19
3 讨论
3
.
1 本文以 c y 一 3 一脚 为对照品 ,采用外标法确定
了 16 个栽培品种越橘果中总花色素昔的含量 ,数据
结果显示 ,不同越橘品种总花色素昔含量差别较大 ,
芝妮 ( C hi gn ec ot ) 含量最高为每百克鲜果 61 3 . 18
m ;g 蓝乐 ( lB u ej ay )含量最低为每百克鲜果 258 . 76
m g
,含量范围与其他文献记载的栽培品种的花色素
昔的含量在每百克鲜果 70 一 450 m g 的数据 〔` 0 , 川基
本相同 。
3
.
2 在本文的分析条件下 ,越橘果中花色素昔的种
类有近 20 种 , 与文献报道的数量 [`众 川 相当 。 作者
认为 ,使用单一对照品测试得总含量是一种相对的
含量 ,有必要建立统一的测试标准 ,进而为质量评价
奠定基础 。
3
.
3 由于植物体内化学成分的积累是一个动态的
变化过程 ,越橘果中花色素昔含量也是不断变化的 ,
不同品种的越橘应以花色素昔含量来确定最佳的采
收期 ,并确定其含量的多少 。 因此实验还有待于进
一步深人研究 。
3
.
4 实验中对提取条件试用过微波水提取 、加热醇
提取和常温醇提取 3 种方法 ,发现对于花色素昔不
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(本文于 2 X( 抖 年 7 月 14 日收到 )