全 文 ：HPLC法测定落葵果实中黄酮类化合物的含量
赵建芬，张素斌，严子军，王晓珊 (肇庆学院化学化工学院，广东肇庆 526061)
摘要 ［目的］建立落葵果实中黄酮类化合物的含量测定方法。［方法］以芦丁为对照品，色谱柱为 Eclipse Zorbax XDB － C18(4． 6 mm ×
150 mm，5 μm)，流动相为无水甲醇 －水(55∶45，V/V)，流速为 0． 8 ml /min;检测波长为 358 nm，柱温为室温。［结果］在色谱条件下芦丁
标准曲线回归方程为 Y =20． 889X －17． 147(R2 = 0． 998 2)，在 2． 00 ～40． 0 μg /ml浓度范围内，浓度与峰面积的线性关系良好，平均回收
率大于 96%，RSD小于 2． 0%，用该法测得落葵果实黄酮含量为 179． 0 μg /g。［结论］该方法样品处理简单，检测高效快速，结果准确可
靠，重现性良好，适合于落葵果实中黄酮类化合物的含量测定。
关键词 高效液相色谱;落葵果实;黄酮类化合物;芦丁
中图分类号 TS207． 3 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2012)12 －07085 －02
Determination of Flavonoids Content in Basella rubra L． Fruits by HPLC
ZHAO Jian-fen et al (College of Chemistry and Chemical Engineering，Zhaoqing University，Zhaoqing，Guangdong 526061)
Abstract ［Objective］To establish the determination method for flavonoids content in Basella rubra L． fruits． ［Method］With rutin as the
reference substance，chromatographic column was Eclipse Zorbax XDB-C18(4． 6 mm × 150 mm，5 μm);mobile phase was anhydrous metha-
nol-water (V/V，55:45)，flow rate was 0． 8 ml /min;detection wavelength was 358 nm;column temperature was room temperature． ［Result］
Under the chromatographic conditions，regression equation of rutin standard curve was Y = 20． 889X － 17． 147(R2 = 0． 998 2)． Linear re-
gression was good between the concentration of 2． 00 and 40． 0 μg /ml． The average recovery rate was greater than 96% and RSD was smaller
than 2． 0% ． Flavonoids content in B． rubra fruits． was 179． 0 μg /g by this method． ［Conclusion］This method was simple，rapid，efficient，re-
peatable，accurate and reliable，and was suitable for the content determination of flavonoids in B． rubra fruits．
Key words HPLC;Basella rubra L． fruits;Flavonoids;Rutin
基金项目 肇庆市科学技术创新计划项目(2011G210)。
作者简介 赵建芬(1974 － ) ，女，广东肇庆人，高级实验师，研究方向:
食品分析，E-mail:jfzh_03@ 126． com。
收稿日期 2012-01-13
落葵(Basella rubra L．)为落葵科(Basellaceae)落葵属
(Basella)植物，又名木耳菜、胭脂菜、红藤菜等，是一类药菜
兼用的植物。成熟的落葵果实为紫黑色浆果，含有黄酮类化
合物，而黄酮类化合物是中药中一类重要有效成分，具有泻
下作用、解痉作用、保护心脑血管作用、抗氧化、抗病毒、抗菌
和抗炎等多种生物活性［1 －2］。目前，分析黄酮类化合物的方
法主要有紫外分光光度法、荧光光度法、高效液相色谱法、薄
层层析、柱层析、高效毛细管电泳法和色谱 －质谱联用等［3］。
其中高效液相色谱法(high-performance liquid chromatogra-
phy，HPLC)具有分析速度快、检测灵敏度高和精密度高等优
点，是测定黄酮类化合物的有效方法。在研究落葵果实黄酮
类化合物超声提取的基础上，试验建立一种高效稳定的
HPLC 法测定落葵果实黄酮类化合物的含量，以期为落葵果
实黄酮类化合物的深入研究打下基础。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。新鲜红花落葵果实，采自高要市莲塘农
家菜园，经鉴定为落葵(Basella rubra L．)的果实。
1． 1． 2 主要仪器。1200高效液相色谱仪，G1314B型可变波
长扫描紫外检测器，Agilent TC-C18(2)色谱柱(4． 6 mm ×15
mm，5 μm) ，Agilent 色谱工作站，均购自美国 Agilent 公司;
AE240电子分析天平，购自梅特勒 －托利多仪器有限公司;
超声波清洗仪，购自宁波新芝生物科技股份有限公司。
1． 1． 3 主要试剂。芦丁对照品，购自中国药品生物制品检
定所，供含量测定用;甲醇为色谱纯，购自天津市四有生物医
学技术有限公司;乙醇为分析纯，蒸馏水，市售。
1． 2 方法
1． 2． 1 芦丁标准溶液的配制。准确称取 20． 0 mg干燥至恒
重的芦丁对照品，置于 50 ml的棕色容量瓶中，加无水甲醇溶
解并定容至刻度，经 0． 22 μm滤膜过滤，配成浓度为 0． 400 0
mg /ml的储备液，备用。
1． 2． 2 落葵果实黄酮类化合物的提取。准确称取 1． 028 0 g
新鲜落葵果实，加入 20 ml 浓度 70%的乙醇，超声提取 35
min，于 60 ℃水浴挥干乙醇，加入无水甲醇溶液定容至 50． 00
ml，离心取上清液，经 0． 22 μm滤膜过滤，超声脱气，得到落
葵果实黄酮提取液，备用。
1． 2． 3 检测波长的选择。以无水甲醇溶液为参比，在波长
200 ～400 nm范围内对适当浓度的芦丁标准溶液进行扫描，
选择最佳吸收波长。
1． 2． 4 流动相的选择。以检测时间、峰形及分离度等为指
标，选择流动相分别为无水甲醇 －水 30 ∶70、35 ∶65、45 ∶55、
55∶45、65∶35和 70∶30(V /V)进行试验。
1． 2． 5 流速的选择。取样品溶液，在流速为 0． 60 ～ 1． 0
ml /min范围内进行试验，选择最佳流速。
1． 2． 6 色谱条件。色谱柱为 Eclipse Zorbax XDB-C18(4． 6
mm ×150 mm，5 μm) ;流动相为无水甲醇 －水(55∶45，V /V) ;
流速为 0． 80 ml /min;检测波长为 358 nm;柱温为室温;进样
量为 20 μl;等梯度洗脱。以保留时间定性，以峰面积定量。
1． 2． 7 方法学考察。①线性关系的考察。取适当体积的芦
丁对照品贮备液，加入无水甲醇稀释成浓度为分别为 2． 00、
4． 00、10． 0、20． 0 和 40． 0 μg /ml 的芦丁标准溶液，分别取 20
μl进样分析，每个浓度平行测定 3 次。以芦丁浓度(μg /ml)
为横坐标 X，平均峰面积(mAu)为纵坐标 Y，绘制标准工作曲
线，建立线性回归方程。②精密度试验。取10． 0 μg /ml芦丁
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40(12):7085 － 7086 责任编辑 石金友 责任校对 李岩
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.12.099
标准溶液，在优化色谱条件下连续测定 5 次，计算峰面积的
RSD。③重现性试验。取落葵果实黄酮提取液，在优化色谱
条件下连续测定 5 次，把峰面积代入线性回归方程，算出样
品中黄酮的含量，计算 RSD。④回收率试验。分别在样品提
取液中按 1∶1(V /V)加入浓度为 4． 00、10． 0 和 20． 0 μg /ml的
芦丁标准溶液，进行加标回收试验，每个浓度重复 3次，测定
平均回收率和 RSD。
1． 2． 8 样品的含量测定。取落葵果实黄酮提取液，在
“1． 2． 6”色谱条件下进行测定，计算落葵果实中黄酮类化合
物的平均含量。
2 结果与分析
2． 1 检测波长的选择 结果表明，芦丁标液在 358 nm处有
较强的吸收，而且峰形对称，没有杂峰，所以选择 358 nm 为
检测波长，干扰少且能保证较高的检测灵敏度。
2． 2 流动相的选择 结果表明，当水的比例较大时，样品中
杂峰较多，峰形稍有拖尾，检测时间较长;当增加无水甲醇的
比例时，杂峰数略减少，峰形有所改善，但目标峰与杂峰不能
很好地分离;当无水甲醇 －水的比例为 55∶45(V /V)时，目标
峰与杂峰分离度合适，目标峰峰形对称，而且只需 6 min就能
完成检测。所以选择无水甲醇 －水(55∶45，V /V)为流动相。
2． 3 流速的选择 结果发现随着流速的增加，分析时间随
之减少，但是系统压力逐渐增加。因此，在不影响分离效率
的前提下，选用流速为 0． 80 ml /min。在该色谱条件下，目标
峰与其他杂峰得到良好分离，而且分析速度快。
图 1 芦丁对照品的 HPLC图谱
2． 4 方法学考察 ①线性关系的考察。计算得线性回归方
程为 Y =20． 889X －17． 147，R2 = 0． 998 2，表明在 2． 00 ～ 40． 0
μg /ml浓度范围内，峰面积与浓度的线性关系良好。②精密
度试验。计算峰面积的 RSD为 1． 6%(n =5) ，可见该高效液
相色谱法精密度良好。③重现性试验。计算 RSD 为 1． 6%
(n =5) ，表明重现性良好。④回收了试验。由表 1 可知，平
均回收率为 97． 9%，RSD为 1． 3%，表明该方法准确可靠，可
图 2 样品 HPLC图谱
用于落葵果实中黄酮类化合物的含量测定。
表 1 回收率测定结果
样品含量
μg /ml
加入量
μg /ml
检测量
μg /ml
平均回
收率∥%
RSD
%
3． 680 4． 00 7． 564 7． 512 7． 544
10． 0 13． 41 13． 58 13． 48 97． 9 1． 3
20． 0 23． 36 23． 24 23． 84
2． 5 样品的含量测定 计算得落葵果实中黄酮类化合物的
平均含量为 179． 0 μg /g，RSD为 1． 6%。
3 结论
建立了用于测定落葵果实中黄酮类化合物含量的 HPLC
法，以无水甲醇 － 水(55 ∶45，V /V)为流动相，流速为 0． 80
ml /min，检测波长为 358 nm，柱温为室温。在此条件下建立
的标准曲线回归方程为 Y = 20． 889X － 17． 147(R2 = 0． 998
2) ，表明在 2． 00 ～40． 0 μg /ml 浓度范围内，芦丁标准曲线线
性关系良好。所建立的 HPLC法对样品的处理要求简单，检
测速度快，而且精密度及重现性良好，样品平均回收率大于
96%，RSD小于 2． 0%，结果准确可靠，用该法测得落葵果实
黄酮含量为 179． 0 μg /g。
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