全 文 ：基金项目 玉林师范学院青年项目。
作者简介 莫昭展(1974-),男,广西玉林人,博士,副教授,从事植物
种质资源利用的教学与研究工作。
收稿日期 2007!06!19
猫须草[Clerodendranthusspicatus(Thunb.)C.Y.Wu.]又
名肾茶、猫须公,为唇形科肾茶属植物,因其雄蕊酷似猫的
胡须而得名[1]。猫须草产于东南亚至澳大利亚的热带亚热带
地区,在我国主要分布于广东、海南、云南南部、广西南部、
台湾及福建等地[2]。猫须草茎叶味苦、性凉,富含黄酮、甾体、
三萜、挥发油、油脂肌醇等营养成分和药效成分,对急慢性
肾炎、膀胱炎、尿路结石、风湿性下肢关节炎等有特殊疗效,
并兼具抗菌、抗过敏及抗慢性肾衰竭,增加肾、肝、脾血流量
等功能,是常用的名贵中草药[3-4]。猫须草组织培养的研究在
国内已有少量报道[5-7],笔者在总结前人研究成果的基础上,
以 MS为基本培养基,研究不同种类和浓度的生长激素对
猫须草茎段腋芽萌发、愈伤组织增殖以及丛生芽生根的影
响,旨在为大规模工厂化生产提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料 供试材料为采自十万大山的野生猫须草。
1.2 外植体的灭菌 取幼嫩的猫须草枝条,去除叶片,先
用洗洁精轻轻擦洗表面,再用自来水冲洗干净,然后用解剖
剪剪成 3～4cm长的茎段,放入玻璃瓶中,用自来水冲洗数
次,最后转入已灭菌的空瓶子中。在超净工作台上,倒入浓
度75%酒精溶液,使之浸没外植体,并轻晃,10~15s后倒去
酒精溶液,加入适量无菌水漂洗 1次;接着用浓度 0.1%升
汞溶液浸泡7~8min。灭菌结束后,小心倒出消毒液,再倒入
适量的无菌水,用无菌镊子搅动数次,再将水倒掉,如此重
复5~6次,最后将消毒过的外植体放在无菌碟上备用。
1.3 方法 试验均以MS作为基本培养基,然后根据培养
目的来添加不同种类和浓度的激素以及附加物,培养基的
pH值为 5.6～5.8,光照培养室温度为(25±2)℃,光照强度
1500~2000lx,每天连续光照12h。
1.3.1 不同浓度的6!BA对腋芽萌发的影响。选取 3cm左
右的茎段,经过表面灭菌后,接种到MS+3%蔗糖+0.72%琼
脂+不同浓度 6!BA和 NAA的 7种培养基中,每瓶接种 1
棵,每种培养基共接种30瓶,30d后统计结果。
1.3.2 不同浓度的 2,4!D对愈伤组织增殖的影响。选取同
样培养条件下生长良好的愈伤组织,切割成直径 0.5cm团
块,每种培养基接种 5瓶,每瓶接种 3块愈伤组织,以 MS
为基本培养基,添加 3%蔗糖及不同浓度的 2,4!D进行浅
层液体静止培养,30d后统计结果。
1.3.3 不同浓度 NAA对丛生芽生根的影响。选取高 2.5cm
左右、有3~4片真叶的无根小苗,接种到含3%蔗糖、0.72%
琼脂和不同浓度NAA的MS培养基上,每种培养基接种30
瓶,每瓶1棵小苗,30d后统计结果。
2 结果与分析
2.1 不同浓度6!BA对腋芽萌发的影响 带节的茎段接种
到诱导培养基上培养2周左右,茎节开始萌动,腋芽处开始
长出小芽,30d后可以看到分化出许多丛生芽(图 1)。由表
1可以看出,随着 6!BA浓度的增加,萌发腋芽的数量反而
减少,且出芽较晚,芽体较小;当 6!BA浓度大于 2.5mg/L
时,茎段便不再长出腋芽,而是在其顶端出现愈伤组织,并
且随培养时间的延长,某些愈伤组织还长出少许白色的根。
2.2 不同浓度 2,4!D对愈伤组织增殖的影响 由表 2可
以看出,在一定浓度范围内,随着 2,4!D浓度的增加,愈伤
组织的生长就越旺盛;当2,4!D浓度为2.0mg/L时,愈伤组
织增殖效果最好。在试验过程中笔者还发现,当2,4!D浓度
猫须草组织培养研究
莫昭展,梁海清,马华材,韦江萍 (玉林师范学院,广西玉林 537000)
摘要 [目的]研究猫须草离体培养的最佳激素配比和最佳培养基。[方法]以猫须草幼嫩茎段为外植体,以MS为基本培养基,比较不
同浓度和不同种类的生长激素对茎段腋芽萌发、愈伤组织增殖及丛生芽生根的影响。[结果]6!BA可促进腋芽萌发,分化丛生芽。随着
6!BA浓度的增加,萌发腋芽的数量反而减少,当6!BA的浓度大于 2.5mg/L时,茎段便不再长出腋芽,而是在其顶端出现愈伤组织。
在一定浓度范围内,随着2,4!D浓度的增加,愈伤组织的生长就越旺盛,当2,4!D浓度为2.0mg/L时,愈伤组织增殖效果最好。NAA
浓度为1.0mg/L时诱导茎段生根效果最好,生根率达到100%。[结论]适宜的诱导培养基为MS+6!BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,适宜继
代增殖培养基为MS+2,4!D2.0mg/L,茎段生根的适宜培养基为MS+NAA1.0mg/L。
关键词 猫须草;组织培养;激素;6!BA;2,4!D;NAA
中图分类号 Q943.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2007)32-10348-02
StudyonTissueCultureofClerodendranthusspicatus
MOZhao!zhanetal(YulinNormalColege,Yulin,Guangxi537000)
Abstract [Objective]TheaimwastostudyonthebesthormonematchingandthebestmediuminvitrocultureofClerodendranthusspicatus.
[Method]WithtenderstemsegmentofC.spicatusasexplantsandMSasbasicmedium,theefectsofdiferentconcentrationsanddiferenttypes
ofgrowthhormoneonthegerminationofstemsegmentandaxilarybud,proliferationofcalusandrootingoftuftybudswerecompared.[Result]
6!BAcouldpromotethegerminationofaxilarybudanddiferentiationoftuftybuds.Thegerminationamountofaxilarybudweredecreased
alongwithincrementoftheconcentrationof6!BA.Whentheconcentrationof6!BAwashigherthan2.5mg/L,theaxilarybuddidntgrowouton
thestemsegmentandthecaluswouldappearonthetopofstemsegment.Withintherangeofcertainconcentration,alongwithincrementof2,4!
Dconcentration,thecalusofstemsegmenthadmorevigorousgrowth,andhadabestproliferationefectwhen2,4!Dconcentrationwas2.0mg/L.
WhenNAAwasat1.0mg/Ltherootinginductionofstemsegmentwasthebest(100%ofrooting).[conclusion]Theoptimummediumfor
inductionwasMS+6!BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,theoptimummediumforsubcultureproliferationwasMS+2,4!D2.0mg/Landtheoptimum
mediumforrootingofstemsegmentwasMS+NAA1.0mg/L.
Keywords Clerodendranthusspicatus;Tissueculture;Hormone;6!BA;2,4!D;NAA
安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2007,35(32):10348-10349 责任编辑 金琼琼 责任校对 王 淼
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2007.32.036
在0.5和 1.0mg/L时,愈伤组织块会长出白色的根,具体原
因有待进一步研究。
2.3 不同浓度 NAA对丛生芽生根的影响 由表 3可见,
浓度1.0mg/LNAA诱导生根效果最好,生根率达100%,根
的数量多且粗壮,小苗长势也好(图2)。
3 小结与讨论
3.1 快速繁殖途径的选择 猫须草从嫩茎段长成完整植
株的途径主要有2条:一是从带节茎段直接诱导萌发出不
定芽,再由不定芽诱导出丛生芽,经生根壮苗后,移栽成活
即是再生植株;二是由外植体诱导出愈伤组织,再进一步分
化产生出丛生芽,经生根壮苗后,也可长成再生植株。笔者
在该试验中发现,猫须草的腋芽比愈伤组织更易获得,因此采
用第1种途径进行快速繁殖可能更适合大规模人工化生产。
3.2 激素浓度的控制 生长素和细胞分裂素是植物组织
培养中的关键因子,因培养材料和培养目标的不同,试验中
所选取的细胞分裂素和生长素的种类与浓度也有很大差
别。在猫须草腋芽的诱导培养中,高浓度的6!BA和低浓度
的NAA配比较合适,但更高浓度的6!BA与NAA配比却没
有达到良好的效果。在猫须草愈伤组织增殖试验中,较高浓
度的2,4!D比较合适,其愈伤组织增殖速度快,生长状态好。
3.3 NAA对丛生芽生根的影响 诱导猫须草植株根的分
化并不难,常用的生长素 NAA便能诱导其生根,且能形成
完整植株。浓度1.0mg/LNAA诱导生根效果最好,根的数量
多且粗壮,小苗长势也好。过低或过高浓度的NAA对生根
率、生根数及小苗的长势都有一定影响。
参考文献
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1988(4):9.
注:“-”表示没有腋芽萌发。
处理 6!BA
mg/L
NAA
mg/L
开始萌发的
天数∥d
平均芽
数∥个
平均叶片
数∥片
出芽率
%
① 1.0 0.1 15 5 31 100.0
② 1.0 0.5 18 4 22 66.6
③ 1.0 1.0 20 3 15 50.0
④ 1.5 0.5 27 2 9 33.3
⑤ 2.0 0.5 30 2 4 16.7
⑥ 2.5 0.5 - - - 0
⑦ 3.0 0.5 - - - 0
表1 不同浓度6!BA和NAA对诱导腋芽萌发的影响
注:“+”表示愈伤组织增殖的相对程度。
处理
培养基
形态
2,4!D
mg/L
增殖程度 愈伤组织的外观形态
A1 液态 0.5 ++ 愈伤组织块较小,颜色为淡黄色
A2 液态 1.0 +++ 愈伤组织块较大,表面为淡绿色
A3 液态 1.5 ++++ 愈伤组织团较大,表面呈黄绿色
A4 液态 2.0 +++++ 愈伤组织团最大,表面为深绿色
A5 液态 2.5 +++ 愈伤组织块较大,表面为淡绿色
表2 不同浓度2,4!D对愈伤组织增殖的影响
表3 不同浓度NAA对丛生芽生根的影响
处理 NAA
mg/L
生根率
%
生根数
条
幼苗的形态
Y1 0.1 20.5 1.5 长势缓慢,弱小,叶片浅绿色
Y2 0.5 63.3 3.3 长势较慢,叶片浅绿色
Y3 1.0 100.0 6.2 长势好,健壮,叶片深绿色
Y4 1.5 86.3 5.7 长势尚好,叶片绿色
Y5 2.0 70.5 3.8 长势较慢,叶片浅绿色
图1 1号培养基腋芽的生长状况 图2 Y3培养基的丛生芽生根状况
莫昭展等 猫须草组织培养研究35卷32期
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GB/T7714-2005
10349