全 文 ：HPLC法同时测定山香圆片中女贞苷和野漆树苷的含量＊
章光文 1 ,周国平 1 ,杨香菊2 ,谢二磊1
(1.江西省食品药品检验所 , 南昌 330046;2.江西省胸科医院 ,南昌 330006)
摘要　目的:采用反相高效液相色谱法同时测定山香圆片中女贞苷和野漆树苷的含量。方法:使用 DiamonsilC18色谱柱(250
mm×4.6mm, 5 μm),流动相为甲醇 -0.5%磷酸(43∶57), 流速 1.0mL· min-1 , 检测波长 336 nm, 柱温为 30 ℃。结果:女贞
苷 、野漆树苷浓度分别在 14.2 ～ 170 μg· mL-1和 7.24 ～ 86.9 μg· mL-1范围内 , 线性关系良好;平均回收率(n=6)分别为
101.2%和 101.3%, RSD分别为 1.2%和 1.7%。结论:本法简便 、准确 ,重复性好 ,可为山香圆片的质量控制提供实验依据。
关键词:山香圆片;女贞苷;野漆树苷;高效液相色谱法
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2009)06-0912-03
HPLCsimultaneousdeterminationofligustroflavone
andrhoifolininShanxiangyuantablets＊
ZHANGGuang-wen1 , ZHOUGuo-ping1 , YANGXiang-ju2 , XIEEr-lei1
(1.JiangxiProvicialInstituteforFoodandDrugControl, Nanchang330046, China;2.JiangxiChestHospital, Nanchang330006, China)
Abstract　Objective:TodevelopanRP-HPLCmethodforthedeterminationofligustroflavoneandrhoifolinin
Shanxiangyuantablets.Method:TheseparationwasperformedonaDiamonsilC18 column(250 mm×4.6 mm, 5
μm)withamobilephaseofacetonitrile-0.5% phosphoricacid(43∶57).Theflowratewas1.0 mL·min-1 , and
thedetectingwavelengthwas336nm;columntemperatureof30℃.Results:Thelinearrangesofligustroflavoneand
rhoifolinwere14.2 to170 μg· mL-1 and7.24 to86.9 μg· mL-1 , respectively;theaveragerecoveriesofligus-
troflavoneandrhoifolinwere101.2%(RSD=1.2%)and101.3%(RSD=1.7%), respectively.Conclusion:The
methodissimpleandaccuratewithgoodreproducibility.ItcanbeusedtocontrolthequalityofShanxiangyuantab-
lets.
Keywords:Shanxiangyuantablets;ligustroflavone;rhoifolin;HPLC
　　山香圆片是山香圆叶(FoliumTurpiniae)的单方
制剂 ,具有清热解毒 、利咽消肿之功效 ,用于喉痹 、乳
娥 、咽喉肿痛等症 。现代药理研究表明 ,山香圆叶具
有抗菌 、镇痛以及调节免疫作用 ,总黄酮是其主要有
效成分 [ 1 ～ 4] ,但目前山香圆叶化学成分研究报道其
仅含有三萜类成分[ 5 ～ 7] 、大柱烷类成分 [ 8] ,为检测山
香圆片中有效成分的含量 ,江西省食品药品检验所
从山香圆叶中提取分离出女贞苷(C33H40O18 ,芹菜
素 -7-O-鼠李糖 -(1※2)-[鼠李糖 -(1※6)]
-葡萄糖苷)[ 9]和野漆树苷(C27H30 O14 ,芹菜素 -7
-O-鼠李糖 -(1※2)-葡萄糖苷)[ 10] 2个黄酮类
化合物 ,作为含量测定用对照品。目前尚未有同时
测定女贞苷和野漆树苷含量的文献报道 ,本文采用
反相高效液相色谱法同时测定山香圆片中女贞苷和
野漆树苷的含量 ,并考察了多批山香圆片中 2种成
分的含量 ,为山香圆片的质量控制提供了科学依据。
1　仪器与试药
Waters系列高效液相色谱仪:Waters600 Con-
troler低压混合四元泵 , Waters717自动进样器 ,
Waters2996 PAD检测器 , Empower色谱工作站。电
子天平:赛多利斯(Sartorius)BS110S十万分之一天
平。
女贞苷和野漆树苷均为江西省食品药品检验所
自制 ,经 1H-NMR、13 C-NMR、MS鉴定结构 ,纯度
以 HPLC峰面积归一化法测定均高于 98%;样品
(每片重 0.25 g)及缺山香园叶浸膏阴性样品由江
—912— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(6)
＊ 国家科技支撑计划子课题任务书(2006BAI06A01-01)
第一作者　Tel:(0791)8158028;E-mail:zhanggw@jxfda.gov.cn
西山香药业有限公司提供;甲醇为色谱纯 ,水为超纯
水 ,其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　对照品混合溶液的制备　称取女贞苷对照品
10 mg,精密称定 ,置 50mL量瓶中;再称取野漆树苷
对照品 10mg,精密称定 ,置 100 mL量瓶中。分别
加 50%甲醇使溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得对照
品储备液;分别精密量取上述的女贞苷和野漆树苷
对照品储备液各 5 mL至 25 mL量瓶中 ,加 50%甲
醇至刻度 , 摇匀 , 即得 (女贞苷浓度 47.36 μg·
mL-1 ,野漆树苷浓度 21.48 μg· mL-1)。
2.2　供试品溶液的制备　取本品 20片 ,除去包衣 ,
精密称定总重 ,计算出平均片重 ,研细 ,取约 0.3 g,
精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入 50%甲醇 50
mL,称定重量 ,加热回流 60 min,放冷 ,再称定重量 ,
用 50%甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤
液 ,即得。
2.3　阴性样品溶液的制备　取缺山香园叶浸膏的
阴性样品 ,同 “2.2”项下方法操作 ,制得阴性样品溶
液 。
2.4　色谱条件　色谱柱:DiamonsilC18(250 mm×
4.6mm, 5 μm);流动相:甲醇 -0.5%磷酸 (43∶
57);流速 1.0 mL· min-1;检测波长 336 nm;柱温:
30 ℃;进样量:10 μL;分析时间为 30 min。在上述
色谱条件下 ,女贞苷和野漆树苷与相邻色谱峰分离
度大于 2.0,理论塔板数均大于 3000。色谱图见图
1。
图 1　对照品(A)、 080501号样品(B)及阴性样品(C)色谱图
Fig1　Chromatogramsofreferencesubstances(A), sampleNo.
080501(B)andnegativesamplewithoutFoliumTurpiniae
1.女贞苷(ligustroflavone)　 2.野漆树苷(rhoifolin)
2.5　线性关系考察　取对照品女贞苷和野漆树苷
适量 , 配成女贞苷浓度分别为 14.2, 21.3, 42.5,
84.2, 170 μg· mL-1;野漆树苷浓度分别为 7.24,
10.9, 21.7, 42.1, 86.9μg·mL-1的系列对照品混合
溶液 ,按上述色谱条件测定峰面积 。以峰面积 Y对
浓度 X(μg·mL-1)绘制标准曲线 ,得女贞苷和野漆
树苷回归方程分别为:
Y=1.217×104X+8.447×102　r=0.9999
Y=2.380×104X+9.133×102　r=0.9999
结果表明:女贞苷在 14.2 ～ 170 μg· mL-1范围内 ,
野漆树苷在 7.24 ～ 86.9 μg· mL-1范围内 ,线性关
系良好。
2.6　精密度试验　精密吸取按 “ 2.1”项下方法制
备的对照品混合溶液 10 μL,在上述色谱条件下连
续进样 5次 ,测定峰面积。结果女贞苷及野漆树苷
峰面积的 RSD(n=5)分别为 0.7%和 0.6%。
2.7　稳定性试验　取同一批号的山香圆片(批号
080501)的供试品溶液分别在 0, 1, 3, 5, 7 , 9, 12 h测
定 ,女贞苷及野漆树苷峰面积的 RSD(n=7)分别为
0.7%和 1.0%,说明供试品溶液在 12h内稳定 。
2.8　重复性试验　精密称取同一批号的山香圆片
(批号 080501)0.3g共 5份 ,按 “2.2”项下方法制备
供试品溶液 ,在上述色谱条件下进样测定。结果女
贞苷和野漆树苷含量平均值(n=5)分别为 7.88 mg
·g-1和 3.32mg· g-1 , RSD分别为 1.2%和 1.6%,
表明该方法重复性良好 。
2.9　回收率试验　精密称取已测知含量的山香圆
片(批号 080501)粉末 6份 ,每份 0.15 g,每份精密
加入含女贞苷 21.26 μg· mL-1和野漆树苷 10.86
μg· mL-1的混合对照品溶液 50 mL,按 “ 2.2”项下
方法制备所需溶液 ,在上述色谱条件下进行分析测
定 ,计算回收率 。结果女贞苷和野漆树苷的平均回
收率 (n=6)分别为 101.2%和 101.3%, RSD分别
为 1.2%和 1.7%。
2.10　样品测定　分别取不同批次的山香圆片 ,按
“2.2”项下方法制备供试品溶液。精密吸取供试品
溶液 10μL,在上述色谱条件下进样分析 ,测定峰面
积 ,用外标法计算出女贞苷和野漆树苷的含量 ,测定
结果见表 1。
3　讨论
3.1　提取方式的选择　考察了加热回流法 、超声提
取法 2种方法对女贞苷和野漆树苷含量测定的影
响 ,结果表明加热回流提取法提取更完全 ,故选择回
—913—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(6)
表 1　山香圆片中女贞苷和野漆树苷的含量(mg·片 -1 , n=2)
Tab1　Thecontentsofligustroflavoneandrhoifolinin
Shanxiangyuantablets(mgpertablet, n=2)
批号
(LotNo.)
女贞苷
(ligustroflavone)
野漆树苷
(rhoifolin)
080401 3.17 1.43
080402 3.16 1.43
080403 3.16 1.44
080404 3.11 1.46
080405 3.16 1.46
080406 3.14 1.46
080407 3.13 1.47
080408 3.16 1.51
080409 3.19 1.16
080410 3.21 1.49
080501 3.95 1.73
080502 3.80 1.65
080503 3.93 1.72
080504 3.87 1.69
080505 3.92 1.69
080506 3.83 1.67
080507 3.91 1.67
080508 3.88 1.67
080509 3.90 1.73
080510 3.13 1.51
080511 4.73 1.13
080606 4.11 1.12
080607 4.43 2.76
080703 4.55 1.20
080704 5.10 1.42
080708 4.42 1.15
080902 4.84 1.32
流提取法;提取溶剂考察了水 、30%甲醇 、50%甲醇 、
70%甲醇 、甲醇 、50%乙醇 、乙醇 ,结果表明 50%甲
醇提取效率较高 ,故选择 50%甲醇为提取溶剂;对
50%甲醇用量 (10, 25, 50, 100 mL)进行考察 ,结果
表明 50%甲醇用量为 50mL时可提取完全 ,故提取
溶剂用量定为 50 mL;提取时间考察了 20, 30, 60, 90
min,结果表明 60min可提取完全 ,故提取时间定为
60 min。
3.2　检测波长的选择　取 “2.1”项的对照品混合
溶液 ,在 210 ～ 400 nm范围内进行扫描 ,女贞苷在
265, 336 nm处出现 2个吸收峰;野漆树苷在 266,
336nm处出现 2个吸收峰。考虑到在短波长处样
品中其他组分的干扰较大 ,在 336 nm处女贞苷和野
漆树苷均有最大吸收 ,故选择 336 nm作为女贞苷和
野漆树苷的检测波长 。
3.3　流动相的选择　在对流动相进行选择时考察
了甲醇 -水 、甲醇 -0.5%磷酸水溶液 、乙腈 -水 、乙
腈 -0.5%磷酸水溶液 4个溶剂系统 。结果表明 ,以
甲醇 -0.5%磷酸水溶液为流动相 ,所得色谱峰峰形
好 ,分离效果佳 。
3.4　小结　本文测定了 27批山香圆片中女贞苷
和野漆树苷的含量 ,结果显示 ,二成分的含量稳定 ,
波动幅度不大 ,可作为山香园片的含量测定指标 。
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(本文于 2008年 11月 25日收到)
—914— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(6)