全 文 ：第 25卷 第 3期
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中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 25 No. 3
M ar. 2 0 0 7
中华中医药
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学刊
葎草花粉的生药学研究
李 峰 1,魏庆宇 2,李正言1,俞牡丹 1
( 1. 辽宁中医药大学药学院, 辽宁 沈阳 110032; 2.沈阳军区解放军第 202医院变态反应科, 辽宁 沈阳 110003)
摘 要:目的:对葎草花粉进行系统的生药学研究。方法:分别采用显微摄影、光谱及色谱等方法, 对花粉进
行定性鉴别与定量分析。结果: 葎草花粉粒经分解后花粉粒显微结构清晰; 4种溶剂的紫外光谱、粉末红外光谱、
SDS -PAGE及 HPLC图谱特征明显;分别以标准蛋白和木犀草素对照, 测得其 9个蛋白质组分的分子量及木犀
草素的含量。结论:本实验结果可为葎草花粉的生药鉴定,质量标准制定及进一步开发利用提供依据。
关键词:葎草花粉;鉴别; 分子量测定;含量测定
中图分类号: R282 文献标识码: A 文章编号: 1673 -7717( 2007) 03 -0458 - 03
Pharmacognost ica lS tud ies on the Po llen of Humulus Scardens
LI Feng1, WE IQ ing-yu2, L I Zheng-yan1, YU M u-dan1
( 1. C ollege o f Pharm acy, L iaoning Unive rsity o f TCM, Shenyang 110032, L iaoning, China;
2. A llerg ic D isease Departmen,t Shenyang A rm y No. 202 H ospita ,l Shenyang 110003, L iaoning, China)
Abstrac:t Ob jective: To study in a sy stem atic pha rm acognostica l study on the po llen of Humu lus scandens.
M ethods: The m ic roscopic fea tures of pow de r w as obse rved, I ts fingerp rints w ere g iven by UV、IR、SDS - PAGE and
HPLC. Results: This study displayed mo rpho log ica ,l m ic roscopic and chem o - phy sica l identifica tion fea tu res o f this po l-
len, a lso to de te rm ine theMW of its pro te in and conten t o .f Conc lus ion: These stud ie s provide reference info rm ation fo r
fur ther developm en,t quality con tro ,l and identification of this c rude drug.
Keywords: Po llen o fH umu lus scardens; identification; UV; IR; SDS -PAGE; HPLC
收稿日期: 2006 - 10 - 06
作者简介:李峰 ( 1963 - ),女,辽宁沈阳人,教授, 博士,主要从事中
药品种鉴定与质量评价研究。
葎草花粉为桑科葎草 Hum ulus scandens(Lour. )Merr.的
干燥成熟花粉。葎草别名 /勒草0、/黑草0;俗名 /拉拉秧0。
始载《名医别录》, /葎草 0一名始见于《唐本草》,其药用分
别为全草 (葎草 )、根 (葎草根 )、花 (葎草花 )及果穗 (葎草
果穗 ) [1 ]。有关葎草的生药学研究多见于其全草及
根 [2 - 3], 对葎草花粉的生药学研究未见报道。而被认为是
/完全营养素0和 /微型营养库 0的植物花粉具有多种生物
活性 [4 ],同时, 葎草由于分布广泛, 其花粉又是我国夏季花
粉症的主要致敏原之一 [5]。因此, 对葎草花粉进行系统的
生药学研究,将对阐明葎草花粉致敏物质基础及其综合开
发利用具有实际意义。
1 材料与仪器
1. 1 材料
葎草花粉采自沈阳浑南地区, 经作者鉴定为桑科葎草
Hum ulus scandens(Lour. )Merr. 的成熟花粉。
1. 2 仪器
Agilen t 1100 Se rie s高效液相色谱仪, G1310A 泵,
G1314A VWD紫外检测器; Sh im adzu - UV 265 FW自记式
紫外可见分光光度计; IR -200 Spec toome ter( The rmo E le tron
Co rpo ra tion) ; BX50高级生物系统显微镜 ( OLYPS); DYY -
12电脑三恒多用电泳仪, DYCZ - 24D型电泳槽 (北京市六
一仪器厂 )。
1. 3 药品与试剂
木犀草素中国药品生物制品鉴定所 (批号: 111520 -
200201); 标准蛋白: 576Lg /v ia,l 分子量: 97000、66000、
45000、30000、20100、14400 Da ( Ame rsham 公司 ); 试剂除甲
醇为色谱纯外,其余为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 药材性状
葎草花粉呈浅黄色细粉, 气微, 味淡。实体显微镜下,
花粉粒呈大小均一的球状体。
2. 2 显微鉴别
取葎草花粉适量, 经醋酸酐分解法 [6]制片, 镜检, 测
量 [6]。花粉粒近球形, 大小 22. 8Lm @ 22. 6Lm; 表面较光
滑,外壁可见内、外两层,壁厚 1Lm;萌发孔 3个, 等距,孔间
距 16. 5Lm,孔直径 2. 5Lm, 孔边缘增厚, 稍凸出于轮廓线,
如图 1。
极面观 赤道面观
图 1 葎草花粉显微图
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DOI：10.13193/j.archtcm.2007.03.43.lif.021
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2. 3 光谱鉴别 [7 ]
2. 3. 1 紫外光谱鉴别 取葎草花粉 0. 2g置具塞三角瓶
中,分别加水、乙醇、乙醚、丙酮等各 10mL, 超声提取 20
m in, 滤过,滤液定容至 25 mL。分别各溶液, 按紫外分光光
度法,以溶剂作空白对照, 在 200 ~ 400nm 扫描, 狭缝宽 1
nm;扫描速度: 快速; 量程范围: 0 ~ 15ABS; 波长标尺放大:
40nm /cm。结果葎草花粉 4种溶剂紫外光谱特征吸收峰分
别为: 水溶液 Km ax = 264. 4 nm, 乙醇液 Kmax = 322. 8 nm、
298. 4 nm, 乙醚液 Kmax = 309. 2 nm、287. 8 nm, 丙酮液 Kmax =
214. 4 nm、324. 8 nm,见图 2。
水溶液 乙醇液 丙酮液 乙醚液
图 2 葎草花粉 4种溶剂的紫外光谱图
2. 3. 2 红外光谱鉴别 取葎草花粉细粉 1m g (过 200目
筛 ), 加溴化钾 200mg, 共研,压片。
按红外分光光度法, 以溴化钾为背景采集, 在 4000 ~
400 cm - 1扫描, 扫描次数: 16次; 分辨率: 4。结果葎草花粉
红外光谱指纹区的特征峰为: 3447 cm - 1、3316cm - 1、2927
cm - 1、1736cm - 1、1655 cm - 1、1560 cm - 1、1543 cm - 1、1458
cm - 1, 见图 3。
图 3 葎草花粉的红外光谱图
2. 4 SDS -PAGE鉴别及蛋白质分子量测定
取葎草花粉 0. 5g, 加 5m L缓冲提取液 [8 ],研磨匀浆,超
声提取 20m in, 离心 20 m in( 2000r /m in),取上清液, 电泳前
与样品水解液 [8 ] 1B1混合, 100e 水浴 2 m in;另取标准蛋白
1v ia,l加缓冲提取液 100LL, 加样前, 100e , 加热 5m in。供
试品各加样 20、30、40、50、60LL, 标准蛋白加样 10LL; 凝胶
浓度为 10% ;开始电泳时, 电流为 30mA, 50m in后, 将电流
增加至 60mA, 直至指示剂电泳至凝胶底部;按文献方法 [8]
固定、染色及脱色, 结果见图 4, 供试品中共分离得到 9条
谱带。按公式 [8 ]分别计算标准蛋白各谱带的 Rf值,以 R f值
为横坐标,标准白分子量对数为纵坐标作图,绘制标准曲线
图,经统计得回归方程为: Y = - 1. 3215X + 5. 1397 ( r =
0. 9821)。计算葎草花粉 9条谱带的 Rf值分别为: 0. 171、
0. 211、0. 251、0. 326、0. 393、0. 463、0. 613、0. 905、0. 990,经
回归方程计算出其各谱带所对应蛋白质的分子量分别为:
81000、72000、64600、51000、41700、33900、21000、8700、
6900Da, 其中以分子量 21000和 6900Da的蛋白质的含量较
高 (谱带染色较深 )。
1~ 9为不同加样量的供试品溶液; 10:标准蛋白
1: 20LL, 2、9: 30LL, 3、8: 40LL, 4、7: 50LL, 5、6: 60LL
图 4 葎草花粉 SDS - PAGE图谱
2. 5 H PLC鉴别及木犀草素含量测定
2. 5. 1 供试品溶液制备 取葎草花粉 1g, 精密称定, 至
50mL的圆底烧瓶中, 加甲醇 25mL, 回流提取 2h, 滤过, 滤
液蒸干,加少许甲醇溶解, 定容至 5mL,摇匀, 即得。
2. 5. 2 对照品溶液制备 取木犀草素 0. 5m g, 精密称定,
加甲醇定容至 10m L,摇匀, 即得浓度为 0. 0534 g# L- 1的对
照品溶液。
2. 5. 3 色谱条件色谱 Sh im - pack CL -ODS柱;流动相:
甲醇 - 0. 4% 磷酸溶液 ( 55B45); 柱温: 25e ; 检测波长:
350nm; 流速: 1m L /m in。
2. 5. 4 标准曲线制备 精密吸取木犀草素对照品溶液 2、
4、6、8、10LL, 分别注入高效液相色谱仪中, 按上述色谱条
件,测定色谱图 (见图 5), 以进样量为横坐标,峰面积为纵
坐标,绘制标准曲线图, 经统计得回归方程为: Y = 628. 24X
-254. 3( r= 0. 9995), 木犀草素在 0. 534~ 2. 67Lg范围内
线性关系良好。
2. 5. 5 样品含量测定 精密吸取供试品 20LL, 注入高效
液相色谱仪中,按标准曲线测定方法, 测定, 样品木犀草素
含量为 0. 02% ( n = 3)。
图 5 -1 木犀草素 HPLC图
图 5 - 2 供试品 HPLC图
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收稿日期: 2006 - 10 - 28
作者简介:王林 ( 1965 - ),男,河南焦作人,主任医师,研究方向: 中
西医结合治疗小儿肾病及结缔组织病。
3 小结与讨论
葎草花粉经分解后, 结构较未分解的清晰,其水、乙醇、
乙醚、丙酮 4种溶剂紫外光谱特征明显; 粉末红外光谱指纹
区具有 8个特征峰。葎草花粉的 SDS -PAGE图谱, 有 9条
谱带,可用于葎草花粉的定性鉴别,葎草花粉中低分子量蛋
白质与文献报道 [9 ]的结果稍有差异, 是否与样品的产地及
生境相关,有待深入研究。
据报道葎草全草中含有木犀草素 [1 ], 其花粉的甲醇提
取液,盐酸镁粉反应阳性, 经高效液相色谱分析, 其葎草花
粉中也含木犀草素, 因此, 可采用木犀草素对照, 以 HPLC
法进行葎草花粉的定性鉴别; 经测定葎草花粉中木犀草素
含量为 0. 02% ,木犀草素可作葎草花粉质量控制的指标。
参考文献
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社, 1977: 2313 - 2314
[ 2 ] 严寒静.葎草的生药学研究 [ J ].中医药学刊, 2004, 22( 12) :
2262, 2264
[ 3 ] 周日宝.茜草及其伪品葎草根的比较研究 [ J ].中药材, 2001,
24 ( 5) : 325 - 328
[ 4 ] 王开发.花粉药用研究进展综述 [ J ].世界科学技术 -中药现
代化, 2000, 2( 2 ) : 51 - 53
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[ 8 ] 颜子颖,王海林.精编分子生物学实验指南 [M ].北京: 科学
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杨之藻主任医师治疗小儿紫癜肾经验
王 林,杨之藻,孟牛安,卢书芳
(安阳市中医院儿科, 河南 安阳 455000)
摘 要:杨之藻主任医师认为,小儿紫癜肾初期以实证为主, 后期多为虚实互见。实证治法强调疏风清热和
活血化瘀,坚持辨证论治,倡导中西医结合。对过敏原的检测、过敏性紫癜病人的饮食安排等问题提出了自己的
看法。
关键词:肾炎;紫癜; 过敏性;中西医结合疗法; 辨证论治;杨之藻
中图分类号: R272 文献标识码: A 文章编号: 1673 -7717( 2007) 02 -0460 - 02
Chief Phys ic ian YANG Zh i-zao s Experience in the
T reatment ofHenoch-schonle in Purpura Nephritis
WANG Lin, YANG Zhi-zao, MENG N iu-an, LU Shu-fang
( Anyang H ospita l of TCM, Anyang 455000, Henan, China)
Abstrac:t The chief phy sic ian, Yang Zhi-zhao, be lieved tha t children w ith henoch - schonlein purpura nephritis re-
presen t excess syndrom e m a ily at early stage, and comb ination o f imag inary and realistic descriptions at la ter stage the
therapeu tic me thods on dem onstration em phasize dispe lling w ind clearing heat and ac tivating b lood circu la tion to dissipate
blood stasis, adhe re to se lecting treatment on differentiating syndrome, initia te the comb ina tion of Ch inese andW estern
杨之藻 主任医师
FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF FFFFFFFF
FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF
Keywords: nephritis; purpura; henoch-schonlein; therapeutics o f Chinese and w estern medic ine;
treatm ent on differen tia ting syndrom e; YANG Zhi-zao
过敏性紫癜性肾炎 (以下简称紫
癜肾 )是过敏性紫癜所致的肾损害,
常见症状为血尿或血尿和蛋白尿, 可
有隐匿性肾炎、肾病综合征、急进性肾
炎、肾功能衰竭等临床表现, 但小儿急进性肾炎、肾功能衰
竭等少见。西医治疗多采用皮质激素、免疫抑制剂、血浆置
换等。杨之藻主任医师 (全国第三批名老中医 )在长期诊
治小儿紫癜肾的临床实践中积累了非常丰富的经验, 现简
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