全 文 ：土家族药紫金砂中异欧前胡素的含量测定
卢金清 ,胡晓燕＊ ,曹儒宾 ,何雪峰 ,吴丹慧 ,阮小云 ,许家琦
(湖北中医学院 /湖北省药用植物研发中心 ,湖北 武汉 430065)
　　摘要　目的:建立 HPLC法测定紫金砂中异欧前胡素的含量。方法:采用高效液相色谱法 , Kromasil100AC
18
(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱;以乙腈 -水为流动相;流速为 1.0 mL/min;柱温为 25℃;检测波长为 254 nm。结
果:异欧前胡素在 0.0900 ～ 0.5400 μg范围内呈线形关系 , r=0.9998, 平均回收率为 98.91%, RSD为 1.05%。结
论:该方法简便 ,重复性好 , 可用于紫金砂原药材的质量控制。
关键词　紫金砂;异欧前胡素;含量测定
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2010)03-0395-02
收稿日期:2009-06-15基金项目:卢金清(1955-),男 ,教授 ,硕士生导师 ,主要从事中药及其制剂有效成分的研究;Tel:027-68889899, E-mail:ljq59169@sohu.com。＊通讯作者:胡晓燕 , Tel:13871386065, E-mail:417841317@qq.com。
　　紫金砂为伞形科当归属植物拐芹 Angelicapoly-
morphaMaxim.的干燥根 ,为土家族治疗胃痛的常
用中草药 ,具有温中散寒 、理气止痛等功效 〔1〕 ,民间
常用其治疗胃腹痛 、胸胁痛 、风湿关节痛 、跌打损伤 、
毒蛇咬伤等 〔2〕。其主要有效成分为香豆素类化合
物 ,其中异欧前胡素在紫金砂中含量相对较高 ,且具
有解痉 、降血压 、抗肿瘤等作用。目前尚未见有关紫
金砂中异欧前胡素含量测定的相关报道 ,因此本文
采用 HPLC法测定该药材中异欧前胡素的含量 ,以
期为建立紫金砂原药材质量标准提供依据 。
1 　仪器与材料
DIONEX-ULTIMATE3000高效液相色谱仪 ,
StarsoriusBSI型电子分析天平(d=0.01 mg,北京赛
多利斯天平有限公司), UP520H超声波清洗机(熊
猫集团南京电子计量有限公司);Kromasil100AC18
(250 mm×4.6 mm, 5 μm)色谱柱 。异欧前胡素对
照品(自制 ,经 HPLC测定 ,峰面积归一化法测定纯
度为 99.04%,可供含量测定用),乙腈为色谱纯(美
国天地公司),水为三蒸水 ,其他试剂均为分析纯 。
实验用紫金砂药材经中科院武汉植物园赵子恩
教授鉴定为伞形科当归属植物拐芹 Angelicapoly-
morphaMaxim.的干燥根 ,来源见表 1。
　　表 1　 紫金砂药材的来源
批次 采集时间 采集地点 鉴定结果
1 2007年 8月 神农架红坪镇 AngelicapolymorphaMaxim.
2 2007年 8月 神农架木鱼镇 AngelicapolymorphaMaxim.
3 2007年 8月 神农架板仓 AngelicapolymorphaMaxim.
4 2008年 8月 神农架红坪镇 AngelicapolymorphaMaxim.
5 2008年 8月 神农架板仓 AngelicapolymorphaMaxim.
2 　方法与结果
2.1 　色谱条件　色谱柱:Kromasil100AC18(250
mm×4.6 mm, 5 μm);流动相:乙腈 -水;流速:1.0
mL/min;柱温:25℃;检测波长:254 nm;进样量:10
μL;梯度洗脱程序见表 2。
2.2 　对照品溶液的制备　精密称取异欧前胡素
对照品 0.45 mg,加甲醇溶解并定容至 10 mL,即
得 。
2.3 　供试品溶液的制备　取紫金砂粉末(过 40目
筛)约 0.25g,精密称定 ,置 50mL具塞锥形瓶中 ,加
入 20mL甲醇 ,称定重量 ,超声处理 45min,取出 ,放
冷 ,用甲醇补足减失的重量 ,过滤 ,取续滤液 ,用微孔
滤膜(0.45μm)过滤 ,即得。
　表 2　 梯度洗脱程序
时间 /min 流动相 A/% 流动相 B/%
0 ～ 5 78 22
5 ～ 10 78※57 22※43
10 ～ 25 57 43
25 ～ 35 57※35 43※65
35 ～ 40 35 65
40 ～ 45 35※ 0 65※100
45 ～ 60 0 100
2.4　系统适应性试验　取上述供试品溶液 、对照
品溶液及空白溶液 ,各进样 10μL,测得色谱图。见
图 1。从图中可见此条件下 ,异欧前胡素与相邻的
峰基线分离度良好 ,样品中其他组分无干扰 。
·395·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 3期 2010年 3月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2010.03.031
图 1　对照品(A)与紫金砂样品(B)的 HPLC图谱
1.异欧前胡素
2.5 　线性关系的考察　取异欧前胡素对照品溶
液 ,分别精密吸取 2、4、8、10、12 μL注入高效液相色
谱仪 ,分别测定峰面积。以峰面积积分值 y为纵坐
标 ,异欧前胡素的浓度 x为横坐标进行回归处理 ,得
回归方程 y=74.888x-0.5695, 相关系数 r=
0.9998,结果表明异欧前胡素在 0.0900 ～ 0.5400μg
范围内线性关系良好 。
2.6　精密度试验　取浓度为 0.045 mg/mL的对照
品溶液 ,精密吸取 10 μL,连续进样 6次 ,测定峰面
积 ,结果 RSD为 0.179%,表明仪器精密度良好 。
2.7　重现性试验　取同一批次紫金砂药材 5份 ,
每份 0.25g,精密称定 ,按 “2.3”项下方法制备供试
品溶液 ,在上述同一色谱条件下 ,分别进样 10 μL,
测定紫金砂药材中异欧前胡素的含量 ,结果平均含量
为 0.2852mg/g, RSD为 0.74%,表明重现性良好。
2.8　稳定性试验 　取同一批次紫金砂药材 ,按
“2.3”项下条件制备供试品溶液 ,照上述色谱条件 ,分
别在 0、3、6、9、12、24 h精密吸取 10μL,注入液相色
谱仪 ,测定 ,记录异欧前胡素峰面积 ,结果 RSD为
0.83%。表明样品溶液在 24 h内稳定。
2.9　加样回收率试验　取已知含量(异欧前胡素:
0.0428%)的紫金砂粉末(过 40目筛)约 0.15 g,共
6份 ,精密称定 ,置 50 mL容量瓶中 ,分别加入近等
量的异欧前胡素对照品 ,用甲醇定容至刻度 ,称定重
量 ,超声处理 30min,取出 ,放冷 ,用甲醇补足减失的
重量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,用微孔滤膜(0.45μm)
过滤 ,制备成供试品溶液 。进样 10 μL,按上述色谱
条件测定异欧前胡素含量 ,计算回收率 ,平均加样回
收率为 98.91%, RSD为 1.05%。结果见表 3。
　　表 3　 加样回收试验结果
取样量 /g 异欧前胡素的含量 /mg 加入量 /mg 测定值 /mg 回收率 /% 平均值 /% RSD/%
0.1502 0.4284 0.5000 0.9295 100.21
0.1506 0.4295 0.5000 0.9167 97.43
0.1511 0.4309 0.5000 0.9235 98.52 98.91 1.05
0.1508 0.4301 0.5000 0.9249 98.96
0.1505 0.4292 0.5000 0.9265 99.45
2.10　供试品含量测定　按上述测定法 ,测定 5批
样品中异欧前胡素的含量 ,结果见表 4。
　表 4　不同批次紫金砂药材异欧前胡素含量测定结果
批次 取样量/g 异欧前胡素含量 /% 平均含量/%
1 0.2500 0.2852
2 0.2515 0.2858
0.2517 0.2861
3 0.2503 0.2853
0.2505 0.2855
4 0.2510 0.2853
0.2512 0.2857
5 0.2516 0.2863
0.2518 0.2864
0.2857
3 　小结与讨论
3.1 　异欧前胡素(MeOH溶解)在 210、248、310nm
下有最大吸收 ,曾选择 246 nm为检测波长 ,结果基
线不平稳 ,易漂移 ,改用 254nm为检测波长时 ,基线
平稳 ,不易漂移 ,分离效果较好 ,而且在 254nm处异
欧前胡素有较强吸收 ,故选择 254nm为检测波长。
3.2　通过使用不同的流动相进行测试 ,发现以乙
腈-水为流动相时 ,分离效果最佳 ,有利于含量测定。
3.3　实验对紫金砂中异欧前胡素的含量进行了测
定 ,并进行了方法学考察 。结果表明 ,本测定方法可
行 、简便 、准确 ,可以用于紫金砂药材的质量控制 。
参 考 文 献
[ 1] 国家中医药管理局编委会.中华本草 [ M] .上海:上海
科学技术出版社 , 1998:982.
[ 2] 陈昌彪 , 万定荣 .湖北省土家族常用植物药(伞形科)
[ J] .中国民族民间医药杂志 , 2006, 15(6):354-356.
·396· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 3期 2010年 3月