全 文 ：猫眼草水提物对 Lew is肺癌组织 Caspase-3表达的影响*
*　基金项目:青岛市科技局基金资助课题(04 - 2 -NY - 47)
1　通讯作者 , Te l:13953219612, E-ma il:aix iao-y@163. com
266042　山东青岛　青岛市中心医院呼吸内科　张春玲 , 肖宝红 1
　　【摘　要】　目的:探讨猫眼草水提物对小鼠 Lew is肺癌的抑制作用及其对肿瘤组织 Caspase-3表达的影响。方法:以移
植性 C57BL /6小鼠 Lew is肺癌为动物模型 , 观察猫眼草水提物对肿廇组织 C aspase-3表达的影响。结果:猫眼草水提物能够抑
制 Lew is肺癌肿瘤细胞生长 , 稳定病灶 ,上调 Caspase-3的表达。结论:猫眼草水提物对小鼠 Lew is肺癌具有明显疗效 , 其作用
机理与上调 Caspase-3的表达有关。
　　【关键词】　猫眼草水提物;　Lew is肺癌;　Caspase-3;　免疫组织化学
中图分类号:R730.53;R734. 2　　文献标识码:A　　文章编号:1009 - 0460(2006)12 -0901 - 03
The study of the effects of crescent euphorbia on the expression for caspase-3 in lew is lung cancer
　　ZHANG Chun-ling , X IAO Bao-hong. Department of Respiration of Q ingdao Centra l Hospita l, Qingdao
266042, China
　　Corresponding autor:X IAO Bao-hong , E-ma il:aixiao-y@163. com
　　【Abstract】　Objective:To observe the inh ibito ry e ffect of C re scen t eupho rbia on tum or g row th and the expre ssion fo rCaspase-3
in Lew is lung cancer. M ethods:The rapeutic effec t of C rescent eupho rbia on m ice w ith Lew is lung cancer wa s observed, and the
Caspase-3 leve ls in them icew as a lso de te cted bym eans of imm unoh istochem istry. R esu lts:C re scent euphorbia could inhibit the g row th
o f Lew is lung cancer, and the Caspase-3 leve ls wa s inc reased. Conclusion:C rescent euphorb ia have a po sitive therapeu tic effec t in
m ice w ith Lew is lung cance r, and its mechanism m igh t be associa ted w ith inc reasing the Caspase-3 leve ls.
　　【KeyW ords】　C rescent eupho rbia;　Lew is lung cancer;　C aspase-3;　 Imm unoh istochem istry
　　细胞凋亡是当今肿瘤学研究的热点 ,尤其在抗
肿瘤药物的筛选及机制研究方面为人们提供了新思
路 。细胞凋亡信号传导的大致过程是细胞整合各种
胞内外凋亡信号 ,通过细胞凋亡信号与其受体形成
的复合物 ,经细胞信号转导蛋白传递至一组细胞凋
亡的执行者 caspases,再由激活的 caspases对其特异
性底物进行降解 ,最终导致细胞凋亡 。 Caspase-3是
Caspase家族蛋白酶中最重要的成员之一 , Caspase-3
在肺癌凋亡中起重要作用 [ 1] ,但是目前未见中药对
肺癌组织中 Caspase-3表达的影响的相关报道 。本
实验运用 Lew is肺癌小鼠模型 ,观察了猫眼草水提
物对小鼠 Lew is肺癌的疗效 ,及其对 Caspase-3表达
的影响 ,探讨其抗肿瘤作用机制并为新药的开发提
供理论依据 。
1　材料与方法
1.1　实验动物　小鼠:C57 BL /6J纯系小鼠 ,雄性 , 6
～ 8周龄 , (20±2)g,军事医学科学院实验动物中心
提供;动物许可证号:医动字第 SCXK 京 2004
-0001。
1.2　试验药品与试剂　(1)猫眼草全草:购自青岛
同仁堂大药房 ,产地江苏 ,产品批号:040901;北京京
兴中药饮片厂生产 ,生产许可证号:冀 Y20040006。
猫眼草水提物的制备:猫眼草生药 500g, 加水
5 000m l煮沸 20m in 2次 , 4层纱布过滤后 ,浓缩至
500m l,制成口服液 ,每 1m l含生药 1.0g, 高压蒸汽
灭菌后 ,于 4℃冰箱中贮存备用 。 (2)顺铂注射液
(DDP):生产企业:F. H. Fau ld ing＆ Co. ltd. trading
as David BullLab,批号:N 221881。 (3)Caspase-3试
901 　临床肿瘤学杂志 2006年 12月第 11卷第 12期　Ch inese C linica lOncology, Dec. 2006, Vo .l 11, No. 12　
剂盒由美国 AYMED公司提供;防脱片剂 APES、显
色剂 DAB为北京中山生物技术有限公司产品 。
1.3　实验用瘤株与造模 Lew is肺癌　由中国医学科
学院基础医学研究所引进 ,青岛海洋大学海洋药物与
食品研究所传代保种 , Lew is肺癌维持在 C57 BL /6小
鼠体内 ,每 2周传代一次。取传代后 14天的 Lew is肺
癌瘤源小鼠 ,颈脱臼处死 ,固定于鼠板上 ,常规消毒 ,
于超净工作台中 ,从腋部皮下取肿瘤组织 ,剔除纤维
包膜和坏死组织 ,在无菌平皿中剪碎 ,置组织研磨器
中加 4℃生理盐水 ,轻轻研磨过滤 ,制成瘤细胞悬液。
0.4%台盼蓝计数 ,细胞活力大于 95%,调整细胞浓度
为 1×107m l。各组小鼠均于右腋部皮下注射上述瘤
细胞悬液 0.2m l,建立模型。
1.4　分组 、给药与取材 　取 C57 BL /6小鼠 ,随机分
为模型组 、猫眼草 7.5g /kg、15g /kg、30g /kg、 60g /kg
组及顺铂组 (DDP, 1mg /kg),每组 10只。从接种肿
瘤次日开始模型组小鼠生理盐水 1.2m l /天灌胃 ,猫
眼草各组按剂量灌胃给药 ,连续 12天;顺铂组每日
腹腔注射给药 1次 ,连续 7天 。每天观察小鼠饮食
及肿瘤生长情况 。末次灌胃给药后 24小时 ,小鼠称
重 ,处死。完整剥离瘤块 ,称瘤重计算抑瘤率;部分
肿瘤组织以 10%中性甲醛固定 ,做石蜡切片 ,行免
疫组化检测 。
1.5　观察指标　(1)小鼠体重:小鼠体重 (g)=小鼠
重量 -瘤重;(2)抑瘤率:按下式计算抑瘤率:抑瘤率
=(模型组平均瘤重 -治疗组平均瘤重) /模型组平
均瘤重 ×100%;(3)免疫组化染色采用链霉亲合素 -
生物素 -过氧化物酶复合法(SABC),严格按说明书
操作。
1.6　结果判断　光学显微镜 400倍镜下随机观察
每张切片 10个高倍视野的癌细胞 ,明显的棕色颗粒
为阳性细胞。按肿瘤细胞着色强度及阳性细胞占肿
瘤细胞百分率分为四个等级:( - ):阳性细胞 <
25%;(+):阳性细胞 25% ～ 50%;(++):阳性细
胞 50% ～ 75%;(+++):阳性细胞 >75%。
1.7　统计学方法　计量资料以 –x ±s表示 ,样本均
数的比较采用方差分析 , SPSS 10.0软件处理 ,等级
资料的样本用 Spearman等级相关分析。
2　结　果
2.1　猫眼草对小鼠体重及体内 Lew is肺癌细胞增
殖的影响　由各组小鼠体重结果可见:与模型组相
比 ,猫眼草各组小鼠体重无显著性差异 (P >0.05),
顺铂组小鼠体重明显降低 (P <0.05)。猫眼草在
7.5g /kg、15g /kg、30g /kg、60g /kg的剂量下连续灌胃
给药 12天 ,结果显示对小鼠体内 Lew is肺癌生长具
有不同程度的抑制作用 ,并随剂量的增加而增高 ,生
长抑制率分别为 0.584%(P >0.05)、16.923%(P
<0.05)、 32.785% (P <0.05)、 58.255%(P <
0.001)。阳性对照药 (顺铂组 , 1mg /kg)腹腔内连续
注射 7天后对小鼠体内 Lew is肺癌生长抑制率为
60.992%(P <0.001)。见表 1。
表 1　猫眼草对小鼠体内 Lew is肺癌生长的影响(–x ±s, n =10)
组别 剂量(g /kg) 体重(g) 瘤重(g) 抑瘤率(%)
模型组 - 21. 159±1.620 1. 885±0. 555 -
猫眼草 7. 5 22. 313±1.273 1. 896±0. 572 0.584
15 22. 142±0.836 1. 566±0. 365* 16.923
30 21. 753±1.359 1. 267±0. 689* 32.785
60 20. 343±0.981 0.786 9±0. 423** 58.255
顺铂组 　 0. 001 18. 395±1.130* 0.735 3±0. 298** 60.992
　注:与模型组比较 , *P<0.05, **P<0. 001
2.2　猫眼草对 Lew is肺癌小鼠 Caspase-3的影响　
结果显示:肿瘤组织少量 Caspase-3的表达 ,猫眼草
30g /kg、60g /kg剂量组和顺铂组均可上调 Caspase-3
的表达 (P <0.05);与顺铂组比较 ,猫眼草 60g /kg
剂量组与其无显著性差异 (P <0.05)。见表 2。
3　讨　论
　　猫眼草又名泽漆 ,是大戟科植物猫眼草的全草 ,
性微寒 ,味苦 ,有毒 ,入肺 、肝经 ,生长在山坡草地 ,价
格低廉。猫眼草全草化学成分含黄酮类成分 、猫眼
902 　临床肿瘤学杂志 2006年 12月第 11卷第 12期　Ch inese C linica lOncology, Dec. 2006, Vo .l 11, No. 12　
表 2　猫眼草对 Lew is荷瘤鼠 Caspase-3表达的影响
组别 n 着色强度
- + ++ +++
模型组 10 4 6 - -
猫眼草 7.5g /kg 10 5 5 - -
猫眼草 15g /kg 10 5 4 1 -
猫眼草 30g /kg* 10 - 8 2 -
猫眼草 60g /kg*△ 10 - 3 7 -
顺铂组 1mg /kg* 10 - 3 6 1
　注:*与模型组相比 , P<0.05;△与顺铂组相比 , P <0. 05
草素 、山柰粉 、槲皮素 、山柰粉-3-单-L鼠李糖甙及檞
皮素-3-单-L-鼠李糖甙 ,还含有甾醇 、挥发油 、酚类物
质 、有机酸及蜡质等。有祛寒 、镇咳 、平喘 、拔毒止
痒 、利尿消肿之功。在汉方外用药中 ,猫眼草属抗
菌 、抗病毒药物 ,可外用于淋巴结结核 、皮癣 、灭蛆 。
在中国民间 ,已经有用猫眼草组方来治疗癌症 ,如纵
隔肿瘤 、食道癌及乳腺肿瘤等[ 2] ,多项研究也已发
现猫眼草中含有黄酮类等抗癌成分 ,但相关文献资
料对猫眼草的抗癌作用机制研究甚少 ,鲜有报道 。
近年来 ,人们开始了对猫眼草及其提取物的抗肿瘤
作用的研究。迟静等 [ 3] 应用猫眼草的全草治疗肺
癌 ,使患者的症状明显缓解。俞发荣等[ 4, 5]报道猫
儿眼植物酸对人 HL-60细胞增殖及人 BEL-7402细
胞生长具有明显的抑制作用。为观察猫眼草对肺癌
生长的影响 , 我们采用 C57 BL /6小鼠移植性 Lew is
肺癌为模型 ,研究发现 ,口服猫眼草对荷瘤小鼠体重
无明显影响;不同剂量猫眼草对小鼠移植性肺癌有
不同程度的抑制作用 , 7.5g /kg组未表现出抑制作
用 , 15g /kg、 30g /kg、 60g /kg 组 抑瘤 率 分 别 为
16.923%、32.785%、58.255%, 60g /kg组的抑瘤率
与顺铂组的抑瘤率 (60.992%)无显著性差异。结
果显示 ,随着剂量的增大 ,猫眼草的抑瘤作用逐渐增
强 ,但猫眼草的最大用药限值有待进一步研究 。
细胞凋亡(apoptosis)是由于细胞内外环境变化或
死亡信号触发 ,在基因调控下引起细胞主动死亡的过
程。细胞凋亡严重失衡对机体具有破坏性作用。现已
证明 ,许多疾病尤其是肿瘤的发生 、发展与细胞凋亡失
衡有关。Caspase-3被合成后通常以无活性的酶原形式
存在于细胞质中 ,在多种凋亡信号刺激下经蛋白水解
作用被激活 ,可对多种蛋白底物进行降解 ,从而在细胞
凋亡过程中起关键作用 ,是 Caspase家族中最重要的凋
亡执行者之一 ,参与多种因素诱导的细胞凋亡[ 6, 7] 。抑
制 Caspase-3的活性或拮抗其功能可使细胞凋亡受
抑[ 8] 。姚峰等[ 9]的研究结果显示 , Caspase-3在正常支
气管粘膜上皮 、不典型增生 、肺癌 、淋巴结转移癌中表
达逐渐下调 ,即在低凋亡率的肿瘤细胞中 Caspase-3常
不表达或表达减弱。Caspase-3的这种表达特点与其在
细胞凋亡中的作用有关 , Caspase-3基因在肺癌中表达
下调 ,提示其失表达可能在肺癌的发生中起重要作用。
我们应用免疫组化法检测小鼠瘤组织中的 Caspase-3
蛋白的表达 ,结果显示在生长活跃的肿瘤细胞中 ,
Caspase-3表达较弱 ,猫眼草 30g /kg、60g /kg剂量组和
顺铂组均可上调 Caspase-3的阳性表达 ,与顺铂组比
较 ,猫眼草 60g /kg剂量组的 Caspase-3阳性表达与其无
显著性差异。
综上所述 ,猫眼草有较好的抑瘤作用 ,这种作用
可能是通过上调 Caspase-3的表达调节细胞凋亡而
实现的。
参考文献
[ 1 ] 　陈洪雷 ,刁路明 ,陈福春 ,等.大鼠肺鳞癌 C aspase-3基因表达
水平与其细胞增殖关系的研究 [ J] . 中国肺癌杂志 , 2002, 6
(5):440 - 443.
[ 2 ] 　宋洪恩 ,张秀贞 ,周艳丽.三子三仁汤及华蟾猫眼草治疗纵隔
肿瘤 33例疗效观察 [ J] . 中国综合医学杂志 , 2003, 16(7 -
8):64 - 65.
[ 3 ] 　迟　静 ,王沙平 ,于海萍.猫眼草缓解肺癌症状 20例 [ J] .中
国民间疗法 , 2003, 8(11):51.
[ 4 ] 　俞发荣 ,石清芳 ,连秀珍 ,等.猫儿眼植物酸对人 HL-60细胞
抑制作用的机制 [ J] . 中国临床康复 , 2004, 35(8):8038
- 8039.
[ 5 ] 　俞发荣 ,石清芳 , 连秀珍等.猫儿眼植物酸对人 BEL-7402细
胞抑制作用的实验研究 [ J] . 中国临床康复 , 2004, 32(8):
7234 - 7235.
[ 6 ] 　郑世营 ,张晓膺 ,葛锦锋 ,等. FasL诱导 caspase-3表达与肺癌
细胞凋亡相关关系的研究 [ J] .江苏医药杂志 , 2004, 7(30):
492 - 495.
[ 7 ] 　郑世营 ,葛锦锋 ,赵　军 ,等.外源性 FasL基因诱导肺癌细胞
C aspase-3的表达及凋亡 [ J] . 肿瘤防治杂志 , 2004, 3(11):
273 - 277.
[ 8 ] 　王靖华 ,陈龙邦 ,黄文斌 ,等. survivin和 caspase-3在非小细胞
肺癌中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系 [ J] .中国肺癌杂
志 , 2005, 5(8):435 - 439.
[ 9 ] 　姚　峰 ,陈　倩 ,陶　琳. Caspase-3基因在肺癌中的表达及其
与 bcl-2和 B ax蛋白表达的关系 [ J] . 肿瘤防治杂志 , 2004, 11
(1):4 - 6.
收稿日期:2006 - 07 -15;　修回日期:2006 -09 - 23
903 　临床肿瘤学杂志 2006年 12月第 11卷第 12期　Ch inese C linica lOncology, Dec. 2006, Vo .l 11, No. 12