全 文 ：5China Pharmaceuticals
2014年 1月 5日 第 23卷第 1期
Vol． 23，No． 1，January 5，2014
胖血藤为蓼科植物毛血藤 Polygonum cynanchodiis Hemsl． 的
干燥根，别名有荞麦蔓、毛血藤、云扣莲、荞叶细辛，广泛分布于湖
北、四川、贵州等省，生长于河岸或山沟草丛中 [1 ]。该药材已收载
于 2003 年版《贵州省中药材、民族药材质量标准》，具有敛肺止
咳、行气健胃、祛风除湿的功效，主要用于肺痨咳嗽、痰中带血、白
日咳、胃脘胀闷疼痛、风湿痹痛 [2 ]。该质量标准只规定了来源、性
状、性味归经、功能主治、用法用量及贮藏。该药材为贵州省少数
民族用药，其分布广、药用价值高，目前未发现有对胖血藤含量测
定方法研究的报道。为保证药材质量和疗效，笔者建立了其含量
测定方法，现报道如下。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(Waters 1525 二元高压梯度泵，2487 Dual λ
absorbance Detector，柱温箱，Breeze 色谱工作站; 岛津LC － 20AD
二元高压梯度泵，SPD － M20D二级管阵列检测器);AB265 － S型
电子天平(瑞士 Mettle Toledo 公司)。大黄素对照品(批号为
110756 － 200110 )、大黄素甲醚 (批号为 110758 － 200610 )，均购
自中国药品生物制品检定所;甲醇为色谱纯(美国天地公司)，水
为自制超纯水，其他试剂均为分析纯。试验所用的 3 批胖血藤药
材经毕节市食品药品检验所汪勋副教授鉴定为蓼科植物毛血藤
Polygonum cynanchodiis Hemsl． 的干燥根。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:Diamonsil C18 柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm); 流动相:
甲醇 － 0． 1%磷酸(80 ∶ 20);流速:1． 0 mL /min;柱温:30 ℃;检测
波长:254 nm;进样量:20 μL。在此色谱条件下，大黄素、大黄素甲
醚与其他组分分离度良好，色谱图见图 1。
2． 2 溶液制备
精密称取大黄素对照品 10 mg，加甲醇稀释至 25 mL，精密称
取大黄素甲醚对照品 13 mg 加甲醇稀释至 100 mL，即得对照品
贮备液，备用。精密称取样品 0． 5 g，置具塞锥形瓶中，精密加甲
醇 50 mL，精密称定质量，于水浴上加热回流 1 h，放冷，加甲醇
补足减失的质量，用 0． 45 μm 的滤膜滤过，取续滤液，即得供试
品溶液。
2． 3 方法学考察
线性关系考察:取对照品贮备液适量，分别制成含大黄素5，
10，20，40，80 μg /mL，含大黄素甲醚 1． 562 5，3． 125，6． 25，9． 375，
12． 5 μg /mL 的混合溶液，精密吸取 20 μL，注入高效液相色谱
仪，按拟订色谱条件分别测定峰面积。以对照品进样量(X，μg)为
A
B
C
1． 大黄素 2． 大黄素甲醚
A. 对照品溶液 B. 供试品溶液 C. 空白对照溶液
图 1 高效液相色谱图
t / min
2
1
0 10． 0 20． 0 30． 0
t / min
0 10． 0 20． 0 30． 0
1
2
t / min
0 10． 0 20． 0 30． 0
反相高效液相色谱法测定胖血藤中大黄素和大黄素甲醚含量
薛朝金 1，陶 凯 2
(1． 贵州省毕节市食品药品检验所，贵州 毕节 551700; 2． 贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002)
摘要:目的 建立测定胖血藤中大黄素和大黄素甲醚含量的反相高效液相色谱法。方法 采用 Diamonsil C18 柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)，
以甲醇 － 0． 1%磷酸溶液(80 ∶ 20)为流动相，流速为 1． 0 mL /min，检测波长为 254 nm，柱温为 30 ℃。结果 大黄素、大黄素甲醚的进样
量分别在 0． 100 0 ～ 1． 600 0 μg(r = 0． 999 9)和 0． 031 25 ～ 0． 250 0 μg(r = 0． 999 7)范围内与峰面积呈良好线性关系，平均回收率分别
为 99． 07%(ＲSD = 1． 04%，n = 6)和 100． 05%(ＲSD = 1． 54%，n = 6)。结论 该方法简便、准确、可靠，可用于胖血藤的质量控制。
关键词:胖血藤;大黄素;大黄素甲醚;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ284． 1;Ｒ282． 71 文献标识码:A 文章编号:1006 － 4931 (2014 )01 － 0005 － 02
Determination of Emodin and Physcion in Ｒadix Polygoni Cynanchoides by ＲP －HPLC
Xue Chaojin1， Tao Kai2
( 1． Bijie Municipal Institute for Food and Drug Control， Bijie， Guizhou， China 551700;
2． Guiyang College of Trditional Chinese Medicine， Guiyang， Guizhou， China 550002 )
Abstract: Objective To develop a reversed phase high performance liquid chromatography (ＲP － HPLC) method for determining emodin
and physcion in Ｒadix Polygoni cynanchoidis． Methods The Diamonsil C18 column ( 250 mm × 4． 6 mm，5 μm ) was adopted with the
mobile phase of methanol － 0． 1% phosphoric acid ( 80 ∶ 20 ) at the flow rate of 1． 0 mL / min． The detection wavelength was set at
254 nm and the column temperature was 30 ℃ ． Ｒesults The linear ranges were 0． 100 0 － 1． 600 0 μg ( r = 0． 999 9 ) for emodin and
0． 031 25 － 0． 250 0 μg ( r = 0． 999 9 ) for physcion． The average recovery rates of emodin and physcion in Ｒadix Polygoni cynanchoidis
were 99． 07% ( ＲSD = 1． 04% ，n = 6 ) and 100． 05% ( ＲSD = 1． 54% ，n = 6 ) respectively． Conclusion The method is simple， accurate
and reliable，which can be used to be the quality control of Ｒadix Polygoni cynanchoidis．
Key words:Ｒadix Polygoni cynanchoidis; emodin; physcion; high performance liquid chromatography
·药物研究·
Drug Ｒesearch
6China Pharmaceuticals
2014年 1月 5日 第 23卷第 1期
Vol． 23，No． 1，January 5，2014
注:A为大黄素，B为大黄素甲醚。
表 1 大黄素与大黄素甲醚加样回收试验结果 ( n = 6 )
样品含量(mg) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) X(%) ＲSD(%)
A
0． 600 2
0． 603 6
0． 606 7
0． 609 8
0． 605 0
0． 601 9
B
0． 155 1
0． 155 9
0． 156 7
0． 157 5
0． 156 3
0． 155 5
A
0． 600 0
0． 600 0
0． 600 0
0． 600 0
0． 600 0
0． 600 0
B
0． 187 5
0． 187 5
0． 187 5
0． 187 5
0． 187 5
0． 187 5
A
1． 198 5
1． 205 0
1． 192 9
1． 197 8
1． 199 1
1． 200 3
B
0． 346 0
0． 342 9
0． 339 9
0． 346 5
0． 346 1
0． 341 1
A
99． 72
100． 25
97． 70
98． 00
99． 02
99． 73
B
101． 81
99． 73
97． 71
100． 80
101． 23
98． 99
A
99． 07
B
100． 05
A
1． 04
B
1． 54
表 2 不同批次胖血藤药材大黄素和大黄素甲醚含量测定结果
含量(%) 平均含量(%) ＲSD(%)取样量
(g)
批次
注:A为大黄素，B为大黄素甲醚。
1
2
3
0． 511 7
0． 505 8
0． 500 4
0． 504 6
0． 505 6
0． 505 1
0． 524 3
0． 510 6
0． 513 7
A
0． 264 5
0． 268 6
0． 266 3
0． 240 3
0． 241 1
0． 239 0
0． 238 4
0． 242 4
0． 243 3
B
0． 072 84
0． 074 35
0． 074 26
0． 058 36
0． 059 73
0． 058 35
0． 061 79
0． 061 75
0． 062 38
A
0． 27
0． 24
0． 24
B
0． 074
0． 059
0． 062
A
0． 77
0． 45
1． 07
B
1． 15
1． 35
0． 57
横坐标、峰面积 ( Y )为纵坐标进行线性回归，得大黄素回归方程
Y = 4 × 106 X + 11 534( r = 0． 999 9 )，大黄素甲醚回归方程 Y = 3 ×
106 X － 1 340． 2 ( r = 0． 999 7 )。结果表明，大黄素、大黄素甲醚进样
量分别在 0． 100 0 ～ 1． 600 0 μg和 0． 031 25 ～ 0． 250 0 μg范围内与
峰面积呈良好线性关系。
精密度试验:精密吸取质量浓度为20 μg /mL的大黄素和质
量浓度为 6． 25 μg /mL的大黄素甲醚混合对照品溶液，按拟订色
谱条件，连续进样 6 次测定峰面积。结果大黄素对照品峰面积的
ＲSD 为 0． 55%，大黄素甲醚对照品峰面积的 ＲSD为 1． 40%，表
明仪器精密度良好。
重复性试验:取同一批次的胖血藤药材6 份，每份 0． 5 g，精
密称定，按 2． 2 项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件测定。
结果胖血藤中大黄素和大黄素甲醚的大黄素平均含量分别为
0． 24%和 0． 059%，ＲSD分别为 1． 17%和 1． 35%，表明方法重现
性良好。
稳定性试验:取同一供试品溶液，精密吸取20 μL，分别在 0，
2，4，8，12，24 h时进样测定。结果大黄素峰面积的 ＲSD为 0． 78%，
大黄素甲醚峰面积的 ＲSD为 1． 56%，表明供试品溶液在 24 h内
稳定。
检测限与定量限确定:采用信噪比法，把已知质量浓度的供
试品测出的信号与空白样品测出的信号进行比较。以信噪比为
3 ∶ 1 时为检测限，计算得大黄素的检测限为 2． 4 ng，大黄素甲醚
的检测限为 3． 25 ng;以信噪比为10 ∶ 1 时为定量限，计算得大黄
素的定量限为 8 ng，大黄素甲醚的定量限为 14． 625 ng。
加样回收试验: 取已知含量(大黄素 0． 24%，大黄素甲醚
0． 062%)的胖血藤粉末(过 4号筛)约 0． 25 g共 6份，精密称定，置
锥形瓶中分别精密加入大黄素对照品溶液 15 mL(40 μg /mL)、大
黄素甲醚对照品溶液 15 mL(12． 5 μg /mL)和甲醇 20 mL，称定质
量，水浴回流 1 h，放冷，用微孔滤膜(0． 45 μm)滤过，取续滤液，按
拟订色谱条件测定含量，计算回收率。结果见表 1。
2． 4 样品含量测定
按 2． 2 项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件测定 3 批
样品中的大黄素和大黄素甲醚的含量。结果见表 2。
3 讨论
被测成分:根据植物的亲缘关系，相同科属的植物可能含有
相同化学成分的特点，初步推断胖血藤可能含大黄素等蒽醌类化
合物。因此先采用薄层色谱法 [ 3 ]对其进行薄层分析，结果在与大
黄素、大黄素甲醚对照品相同位置显相同颜色的斑点，初步证实
胖血藤药材中含有大黄素和大黄素甲醚。采用高效液相色谱 －二
极管阵列检测器检测，结果在与大黄素、大黄素甲醚对照品相同
保留时间处有相对应的色谱峰，并且相对应的色谱峰的紫外 －可
见光谱图一致，确定胖血藤药材中含有大黄素及大黄素甲醚。
检测波长:大黄素及大黄素甲醚(甲醇溶解)在 222，254，310 nm
波长处有最大吸收。当选用 222 nm为检测波长时，其他成分的吸
收大，使得大黄素和大黄素甲醚峰的显示相对较小而不明显;而
选择 310 nm 为检测波长时基线不稳定，有干扰; 选择254 nm为
检测波长时，基线稳定，分离效果较好。因此选择 254 nm 作为其检
测波长。
流动相:曾经用水和甲醇为流动相，结果峰形太差，无法进行
积分计算。然后改用甲醇 － 0． 1%磷酸(80 ∶ 20)[ 3 ]为流动相，基线
稳定，色谱峰峰形较好，分离度满足要求，因此确定流动相用甲
醇 － 0． 1%磷酸 ( 80 ∶ 20 )。
提取条件:分别比较了不同提取溶剂(甲醇、乙醇)，不同提取
方法(加热回流提取和超声提取)，不同提取时间(0． 5，1，1． 5 h)，
最后确定采用甲醇加热回流提取 1 h，胖血藤中大黄素和大黄素
甲醚的含量达到最大。
致谢:感谢毕节市食品药品检验所汪勋副主任药师、李佳宁
副主任药师的大力支持。
作者简介:薛朝金(1975 －)，男，主管中药师，研究方向为药
品标准与药物分析，(电话)0857 － 8288509(电子信箱)xue －
gold@ 163． com。
参考文献:
[ 1 ] 全国中草药汇编编写组 ． 全国中草药汇编 (下册 ) [M ] ． 北京:人民卫
生出版社，1978: 146．
[ 2 ] 贵州省药品监督管理局 ． 贵州省中药材、民族药材质量标准 [M ] ． 贵
阳:贵州科学技术出版社，2003: 288．
[ 3 ] 国家药典委员会 ． 中华人民共和国药典(一部)[M ] ． 北京:中国医药
科技出版社，2010: 22．
(收稿日期:2012 － 12 － 01;修回日期:2013 － 07 － 05 )
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