全 文 ：　　基金项目：国家科技重大专项－重大新药创制 （编号：２００９ＺＸ０９１０２－１０９）。
作者简介：王雅静，女，硕士研究生，主要从事天然药物化学成分研究，Ｔｅｌ：１８６８４６７９１６２，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｊｉｎｇ１９８＠１６３．ｃｏｍ　　＊通讯
作者：周应军，男，教授，博士，主要从事天然药物研究与开发，Ｔｅｌ：（０７３１）８２６５０３７２，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｉｎｇｊｕｎｚｈｏｕ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
黄荆子三萜类化学成分研究
王雅静，何熙，曾光尧，谭健兵，李鑫，周应军＊ （中南大学药学院，长沙　４１００１３）
摘要：目的　研究马鞭草科牡荆属植物黄荆果实的三萜类化学成分。方法　采用硅胶柱层析、ＯＤＳ柱层析、Ｓｅｐｈａ－
ｄｅｘ　ＬＨ－２０柱层析等色谱法分离纯化黄荆子三萜类化学成分，并根据理化性质和波谱数据对化合物结构进行鉴定。
结果　分离得到了７个化合物，分别是２α，３α，１９α－三羟基乌苏－１２－烯－２８－酸 （１）、２α，３β－二羟基齐墩果－１２－烯－
２８－酸 （２）、２α，３β，１９α－三羟基乌苏－１２－烯－２８－酸 （３）、２α，３β，１９α，２３－四羟基齐墩果－１２－烯－２８－酸 （４）、２α，３β，
２３－三羟基齐墩果－１２－烯－２８－酸 （５）、２α，３α，２４－齐墩果三羟基－１２－烯－２８－酸 （６）、乌苏酸 （７）。结论　化合物１、
３、４、５、６为首次从该属植物中分离得到。
关键词：黄荆子；三萜；化学成分
中图分类号：Ｒ２８４　　　　文献标识码：Ａ　　　　文章编号：１６７２－２９８１ （２０１２）０６－０４０９－０４
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－２９８１．２０１２．０６．００３
Ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｅｅｄｓ　ｏｆ　Ｖｉｔｅｘ　ｎｅｇｕｎｄｏ　Ｌ．
ＷＡＮＧ　Ｙａ－ｊｉｎｇ，ＨＥ　Ｘｉ，ＺＥＮＧ　Ｇｕａｎｇ－ｙａｏ，ＴＡＮ　Ｊｉａｎ－ｂｉｎｇ，ＬＩ　Ｘｉｎ，ＺＨＯＵ　Ｙｉｎｇ－ｊｕｎ＊ （Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｓｏｕｔｈ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１００１３）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｅｅｄｓ　ｏｆ　Ｖｉｔｅｘ　ｎｅｇｕｎｄｏ　Ｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｔｒｉｔ－
ｅｒｐｅｎｅｓ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｂｙ　Ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ，ＯＤＳ　ａｎｄ　Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ－２０ｃｏｌｕｍｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ａｎｄ
ｔｈｅｉｒ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｗｅｒｅ　ｅｌｕｃｉｄａｔｅｄ　ｂｙ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｓｅｖｅｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ：
２α，３α，１９α－ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙｏｉｃ－１２－ｅｎ－２８－ａｃｉｄ（１），２α，３β－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ　ｂｅａｒｉｎｇ－１２－ｅｎ－２８－ａｃｉｄ（２），２α，３β，１９α－ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙｏｉｃ－
１２－ｅｎ－２８－ａｃｉｄ（３），２α，３β，１９α，２３－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｘｙｂｅａｒｉｎｇ－１２－ｅｎ－２８－ａｃｉｄ（４），２α，３β，２３－ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙｂｅａｒｉｎｇ－１２－ｅｎ－２８－
ａｃｉｄ（５），２α，３α，２４－ｏｌｅａｎｏｌｉｃ　ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ－１２－ｅｎ－２８－ａｃｉｄ（６）ａｎｄ　ｕｒｓｏｌｉｃ　ａｃｉｄ（７）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　１，３，４，５
ａｎｄ　６　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｉｓ　ｇｅｎｕｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｔｉｍｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｖｉｔｅｘ　ｎｅｇｕｎｄｏ　Ｌ．；ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｓ；ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ
　　黄荆子 （Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｖｉｔｉｃｉｓ　Ｎｅｇｕｎｄｏ）为马鞭草科 （Ｖｅｒ－
ｂｅｎａｃｅａｅ）牡荆属植物黄荆 （Ｖｉｔｅｘ　ｎｅｇｕｎｄｏ　Ｌ．）的果实，
具有宣肺涤痰，散寒止痛，祛风除湿，理气下逆，疗痔除漏
的功效，广泛分布于我国长江流域及南部各省［１］。已有的化
学成分研究表明，该植物主要含有黄酮、二萜、三萜和木脂
素类化学成分；药理研究表明萜类成分具有抗肿瘤、抗
ＨＩＶ、抗糖尿病、抗菌、抗病毒、增强免疫功能和降血脂等
多种生物学活性。本试验分离及鉴定了７个黄荆子三萜类化
学成分，为深入研究该植物的生物活性奠定了基础。
１　仪器与材料
ＩＮＯＶＡ－４００ＦＴ核磁共振仪 （美国 Ｖａｒｉａｎ公司，ＴＭＳ
为内标）；ＬＣＱ－Ａｄｖａｔａｎｇｅ质谱仪 （美国 Ｆｉｎｎｉｇａｎ公司）；
Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ－２０（瑞典 Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ公司）；
ＯＤＳ反相色谱硅胶 （天津博瑞公司）；薄层色谱和柱色谱硅
胶 （青岛海洋化工厂）；所用试剂均为分析纯。
黄荆子 （贵州省遵义市中承药源公司，由中南大学药学
院谭桂山教授鉴定为Ｖｉｔｅｘ　ｎｅｇｕｎｄｏ　Ｌ．的果实）。
２　提取与分离
黄荆子药材２０ｋｇ用４０％ＥｔＯＨ回流提取３次，提取液
减压浓缩至无醇味，得到的提取物加入３倍量的９５％
ＥｔＯＨ，静置过夜，滤去沉淀，上清液浓缩至２５Ｌ静置，倾
出上清液，得到沉淀。取沉淀１８０ｇ用甲醇溶解后，上硅胶
柱，石油醚－乙酸乙酯梯度洗脱，得到７个部分：Ａ （１０∶
０．１）、Ｂ （１０∶０．２）、Ｃ （１０∶０．５）、Ｄ （１０∶１）、Ｅ （１０∶
２）、Ｆ （１０∶５）和Ｇ （０∶１）。Ｄ部分用甲醇溶解后，放冷，
析出沉淀，沉淀用少量冷甲醇洗涤，得到化合物７ （３．５ｇ）。
Ｆ部分取５ｇ，用甲醇溶解后，上硅胶柱，依次用二氯甲烷－
甲醇 （１００∶５、０∶２、１００∶２．７５、１００∶３．２、１００∶３．５、
１００∶４）梯度洗脱，收集合并流份，经Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ－２０、
ＯＤＳ柱层析等手段得到化合物纯化后分别得到化合物１
（２５ｍｇ）、２ （２０ｍｇ）、３ （３５ｍｇ）、４ （２５ｍｇ）、５ （１２ｍｇ）
和６ （３０ｍｇ）。
３　结构鉴定
化合物 １　 白色无定形粉末，易溶于甲醇、吡啶，
ｍｐ　２７０～２７１℃；Ｌｉｂｅｒｍａｎｎ－Ｂｕｒｃｈａｒｄ反应呈阳性。ＥＩ－ＭＳ
（ｍ／ｚ）：４８８ ［Ｍ］＋，对 应 分 子 式 Ｃ３０ Ｈ４８ Ｏ５。１　Ｈ－ＮＭＲ
９０４
中南药学２０１２年６月第１０卷第６期　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｓｏｕｔｈ　Ｐｈａｒｍａｃｙ．Ｊｕｎｅ　２０１２，Ｖｏｌ．１０Ｎｏ．６
　（Ｃ５Ｄ５Ｎ，４００ＭＨｚ）谱中有７组甲基信号δ０．９１ （３Ｈ，ｓ），
０．９８ （３Ｈ，ｓ），１．１２ （３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６ Ｈｚ，Ｈ－３０ ），１．１２
（３Ｈ，ｓ），１．２８（３Ｈ，ｓ），１．４３ （３Ｈ，ｓ），１．６６ （３Ｈ，ｓ，
Ｈ－２９）和 １ 个 双 键 氢 信 号 δ５．６０ （１Ｈ，ｓ）；１３　Ｃ－ＮＭＲ
（Ｃ５Ｄ５Ｎ，１００ ＭＨｚ）谱中有２个烯碳特征信号 δ１２８．４、
１４０．４和２个羧基碳信号δ１８１．２，因此推测化合物１为具有
ｕｒｓ－１２－ｅｎ而非ｏｌｅａｎ－１２－ｅｎ基本骨架的三萜，且有１个角甲
基被羧基取代。１　Ｈ－ＮＭＲ 中 δ３．７９ （１Ｈ，ｂｒ　ｓ，Ｈ－３）和
δ４．３２ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，Ｈ－２）；１３　Ｃ－ＮＭＲ中３个连氧
的碳信号δ７９．８、７３．１、６６．６；且 ＥＩ－ＭＳ　ｍ／ｚ　２６４，２４６出
现碎片离子峰，因此推测化合物１有３个羟基取代，且有１
个羟基位于Ｄ／Ｅ环上。１３　Ｃ－ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）数据：
δ４２．６ （Ｃ１），６６．６ （Ｃ２），７９．８ （Ｃ３），４１．０ （Ｃ４），４８．７
（Ｃ５），２５．１ （Ｃ６），３４．０ （Ｃ７），３９．１ （Ｃ８），４８．１ （Ｃ９），
３９．３ （Ｃ１０），２７．５ （Ｃ１１），１２８．４ （Ｃ１２），１４０．４ （Ｃ１３），
４２．８ （Ｃ１４），２９．７ （Ｃ１５），２６．８ （Ｃ１６），４９．２ （Ｃ１７），
５５．１ （Ｃ１８），７３．１ （Ｃ１９），４３．３ （Ｃ２０），１９．１ （Ｃ２１），
３９．０ （Ｃ２２），３０．１ （Ｃ２３），２２．８ （Ｃ２４），１７．７ （Ｃ２５），
１７．１ （Ｃ２６），２７．４ （Ｃ２７），１８１．２ （Ｃ２８），１７．３ （Ｃ２９），
２４．５ （Ｃ３０），以上光谱数据与文献［２］报道的化合物２α，３α，
１９α－三羟基－１２－烯－２８－乌苏酸一致，因此确定化合物１为２α，
３α，１９α－三羟基乌苏－１２－烯－２８－酸 （见图１）。
化合物２　白色无定形粉末，易溶于甲醇、吡啶，ｍｐ
２７８～２８０℃；Ｌｉｂｅｒｍａｎｎ－Ｂｕｒｃｈａｒｄ反应呈阳性。ＥＩ－ＭＳ （ｍ／
ｚ）：４７２ ［Ｍ］＋，对应分子式Ｃ３０Ｈ４８Ｏ４。１　Ｈ－ＮＭＲ（Ｃ５Ｄ５Ｎ，
４００ＭＨｚ）谱中有７组角甲基信号δ，０．９５（３Ｈ，ｓ），０．９８
（３Ｈ，ｓ），０．９９ （３Ｈ，ｓ），１．０１ （３Ｈ，ｓ），１．０３ （３Ｈ，ｓ），
１．０６ （３Ｈ，ｓ），１．２２ （３Ｈ，ｓ）和１个双键氢信号δ５．４８
（１Ｈ，ｓ）；１３　Ｃ－ＮＭＲ （Ｃ５Ｄ５Ｎ，１００ＭＨｚ）中有２个烯碳特征
信号δ１２２．９，１４４．３和１个羧基碳信号δ１８０．２，进一步证明
化合物１为具有ｏｌｅａｎ－１２－ｅｎ－２８－ｏｉｃ　ａｃｉｄ基本骨架的三萜。１　Ｈ－
ＮＭＲ中δ３．４３ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｈ－３）和δ４．１３ （１Ｈ，
ｄｔ，Ｊ＝４，９．２Ｈｚ，Ｈ－２），同时１３　Ｃ－ＮＭＲ谱中有２个连氧
的碳信号δ８４．３，６９．０，推测化合物２有２个羟基取代。１３　Ｃ－
ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）数据：δ４８．６ （Ｃ１），６９．０ （Ｃ２），
８４．３ （Ｃ３），４０．３ （Ｃ４），５６．３ （Ｃ５），１９．３ （Ｃ６），３３．７
（Ｃ７），４０．３ （Ｃ８），４８．２ （Ｃ９），３９．０ （Ｃ１０），２４．２ （Ｃ１１），
１２２．９ （Ｃ１２），１４４．３ （Ｃ１３），４２．４ （Ｃ１４），２８．７ （Ｃ１５），
２４．４ （Ｃ１６），４７．１ （Ｃ１７），４２．６ （Ｃ１８），４６．９ （Ｃ１９），
３１．４ （Ｃ２０），３４．６ （Ｃ２１），３３．６ （Ｃ２２），２９．８ （Ｃ２３），
１８．２ （Ｃ２４），１７．３ （Ｃ２５），１７．９ （Ｃ２６），２６．６ （Ｃ２７），
１８１．０ （Ｃ２８），３３．６ （Ｃ２９），２４．２ （Ｃ３０），以上波谱数据与
文献［３］报道的化合物２α，３β－二羟基齐墩果－１２－烯－２８－酸一
致，因此确定化合物２为２α，３β－二羟基齐墩果－１２－烯－２８－酸
（见图１）。
化合物 ３　 白 色 无 定 形 粉 末，易 溶 于 甲 醇、吡 啶
ｍｐ　２８０～２８１℃；Ｌｉｂｅｒｍａｎｎ－Ｂｕｒｃｈａｒｄ反应呈阳性。ＥＩ－ＭＳ
（ｍ／ｚ）：４８８ ［Ｍ］＋，对应分子式为Ｃ３０Ｈ４８Ｏ５。１　Ｈ－ＮＭＲ（Ｃ５
Ｄ５Ｎ，４００ＭＨｚ）谱中有７个甲基信号δ１．０１ （３Ｈ，ｓ），
１．１０ （３Ｈ，ｓ），１．１２ （３Ｈ，ｓ），１．３０ （６Ｈ，ｂｒ　ｓ），１．４５
（３Ｈ，ｓ），１．７４ （３Ｈ，ｓ，Ｈ－２９）和１个双键氢信号δ５．６０
（１Ｈ，ｓ）；１３　Ｃ－ＮＭＲ （Ｃ５Ｄ５Ｎ，１００ＭＨｚ）中有２个烯碳特征
信号δ１２８．４，１４０．４和１个羧基碳信号δ１８１．２，因此推测化
合物３为具有ｕｒｓ－１２－ｅｎ基本骨架的三萜，且有１个角甲基
被羧基取代。１　Ｈ－ＮＭＲ中δ３．４１ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ－３）
和δ４．１４ （１Ｈ，ｂｒ　ｓ，Ｈ－２）；１３　Ｃ－ＮＭＲ谱中３个连氧的碳信
号δ８４．３、７３．１、６９．３；且 ＥＩ－ＭＳ　ｍ／ｚ　２６４，２４６出现碎片
离子峰，因此推测化合物３有３个羟基取代，且有１个羟基
位于Ｄ／Ｅ环上。１３　Ｃ－ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）数据：δ４８．４
（Ｃ１），６９．３ （Ｃ２），８４．３ （Ｃ３），４０．３ （Ｃ４），５６．４ （Ｃ５），
１９．４ （Ｃ６），３３．６ （Ｃ７），４０．６ （Ｃ８），４８．３ （Ｃ９），３８．９
（Ｃ１０），２４．６ （Ｃ１１），１２８．４ （Ｃ１２），１４０．４ （Ｃ１３），４２．６
（Ｃ１４），２９．８ （Ｃ１５），２６．８ （Ｃ１６），４８．７ （Ｃ１７），５５．１
（Ｃ１８），７３．１ （Ｃ１９），４２．８ （Ｃ２０），２７．４ （Ｃ２１），３８．９
（Ｃ２２），２９．７ （Ｃ２３），１８．２ （Ｃ２４），１７．３ （Ｃ２５），１７．７
（Ｃ２６），２５．２ （Ｃ２７），１８１．２ （Ｃ２８），２７．５ （Ｃ２９），１７．３
（Ｃ３０），以上波谱数据与文献［４］报道的化合物２α，３β，１９α－
三羟基乌苏－１２－烯－２８－酸一致，因此确定化合物３为２α，３β，
１９α－三羟基乌苏－１２－烯－２８－酸 （见图１）。
化合物４　白色无定形粉末，易溶于甲醇、吡啶，ｍｐ
２８１～２８３℃；Ｌｉｂｅｒｍａｎｎ－Ｂｕｒｃｈａｒｄ反应呈阳性。ＥＩ－ＭＳ （ｍ／
ｚ）：５０４ ［Ｍ］＋，对应分子式Ｃ３０Ｈ４８Ｏ６。１　Ｈ－ＮＭＲ （Ｃ５Ｄ５Ｎ，
４００ＭＨｚ，）在 δ５．５７ （１Ｈ，ｓ）有 １ 个双键氢信号；在
δ１．５９ （ｓ，Ｈ－２９），１．１９ （ｓ），１．１２ （ｓ），１．１０ （ｓ），１．０５
（ｓ），０．８８ （ｓ）有 ６ 组甲基信号；δ４．３１ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
８Ｈｚ，Ｈ－３），４．１７ （１Ｈ，ｓ，Ｈ－２），３．６４ （１Ｈ，ｄ，Ｈ－１９），
３．７６ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，Ｈｂ－２３），３．９４ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
１０．８Ｈｚ，Ｈａ－２３）有４组连氧质子信号。１３　Ｃ－ＮＭＲ （Ｃ５Ｄ５Ｎ，
１００ＭＨｚ）在δ１８０．７有１个羧基信号；δ１４５．３，１２２．８有２
个双键信号，７１．７，７９．５，８１．６有３个连有羟基的碳信号；
６６．６有１个羟甲基 （－ＣＨ２ＯＨ）信号。结合以上信号与同
类已知化合物相比较可知，本化合物为四羟基取代的齐墩果
酸类 三 萜 化 合 物。１３　Ｃ－ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）数 据：
δ４８．２ （Ｃ１），７１．７ （Ｃ２），７９．５ （Ｃ３），４４．１ （Ｃ４），４８．７
（Ｃ５），１９．０ （Ｃ６），３４．１ （Ｃ７），４０．６ （Ｃ８），４８．８ （Ｃ９），
３９．１ （Ｃ１０），２９．３ （Ｃ１１），１２２．８ （Ｃ１２），１４５．３ （Ｃ１３），
４２．７ （Ｃ１４），３０．５ （Ｃ１５），２８．８ （Ｃ１６），４６．５ （Ｃ１７），
４５．２ （Ｃ１８），８１．６ （Ｃ１９），３６．２ （Ｃ２０），２８．８ （Ｃ２１），
３３．５ （Ｃ２２），６６．６ （Ｃ２３），１４．８ （Ｃ２４），１８．２ （Ｃ２５），
１７．４ （Ｃ２６），２５．３ （Ｃ２７），１８１．３ （Ｃ２８），２９．６ （Ｃ２９），
２５．２ （Ｃ３０）。以上数据与文献［５－６］报道的２α，３β，１９α，２３－
四羟基齐墩果－１２－烯－２８－酸波谱数据一致，因此确定化合物４
为２α，３β，１９α，２３－四羟基齐墩果－１２－烯－２８－酸 （见图１）。
化合物 ５　 白色无定形粉末，易溶于甲醇，吡啶，
ｍｐ　２８０～２８２ ℃Ｌｉｂｅｒｍａｎｎ－Ｂｕｒｃｈａｒｄ 反应呈阳性。ＥＩ－ＭＳ
（ｍ／ｚ）：４８８ ［Ｍ］＋，对应分子式为 Ｃ３０Ｈ４８Ｏ５。１　Ｈ－ＮＭＲ
（Ｃ５Ｄ５Ｎ，４００ＭＨｚ）中有６个甲基信号δ０．９２ （３Ｈ，ｓ），
０．９９ （３Ｈ，ｓ），１．０５ （３Ｈ，ｓ），１．０８ （６Ｈ，ｓ），１．２０
（３Ｈ，ｓ）和 １ 个双键氢信号 δ５．４８ （１Ｈ，ｓ）；１３　Ｃ－ＮＭＲ
（Ｃ５Ｄ５Ｎ，１００Ｈｚ）中有δ１２２．８，１４５．３烯碳特征信号和１
个羧基碳信号δ１８０．２，因此推测化合物５为具有ｏｌｅａｎ－１２－ｅｎ
基本骨架的三萜，其中１个角甲基被羟亚甲基取代，１个角
甲基被羧基取代。１　Ｈ－ＮＭＲ中δ４．２４（３Ｈ，ｍ，Ｈ－２，Ｈ－３，
Ｈａ－２３），δ３．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，Ｈｂ－２３）；１３　Ｃ－ＮＭＲ
０１４
Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｓｏｕｔｈ　Ｐｈａｒｍａｃｙ．Ｊｕｎｅ　２０１２，Ｖｏｌ．１０Ｎｏ．６　中南药学２０１２年６月第１０卷第６期
中有３个连氧的碳信号δ７８．７、６９．３、６６．９，因此推测化合
物５有３个羟基取代，且有１个羟基位于角甲基上。１３　Ｃ－
ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）数据：δ４８．２ （Ｃ１），６９．３ （Ｃ２），
７８．７ （Ｃ３），４４．１ （Ｃ４），４８．４ （Ｃ５），１９．０ （Ｃ６），３３．７
（Ｃ７），４０．３ （Ｃ８），４８．６ （Ｃ９），３８．９ （Ｃ１０），２４．４ （Ｃ１１），
１２２．８ （Ｃ１２），１４５．３ （Ｃ１３），４２．７ （Ｃ１４），２８．７ （Ｃ１５），
２３．４ （Ｃ１６），４７．１ （Ｃ１７），４２．４ （Ｃ１８），４６．８ （Ｃ１９），
３０．５ （Ｃ２０），３４．６ （Ｃ２１），３１．４ （Ｃ２２），６６．９ （Ｃ２３），
１４．９ （Ｃ２４），１８．０ （Ｃ２５），１７．８ （Ｃ２６），２６．６ （Ｃ２７），
１８０．７ （Ｃ２８），３３．９ （Ｃ２９），２４．２ （Ｃ３０）。以上波谱数据与
文献［７］报道的化合物２α，３β，２３－三羟基齐墩果－１２－烯－２８－酸
一致，因此确定化合物５为２α，３β，２３－三羟基齐墩果－１２－
烯－２８－酸 （见图１）。
化合物６　白色针状结晶 （甲醇重结晶），易溶于甲醇，
吡啶，ｍｐ　２８０～２８２℃；Ｌｉｂｅｒｍａｎｎ－Ｂｕｒｃｈａｒｄ反应呈阳性。
ＥＩ－ＭＳ （ｍ／ｚ）：４８８ ［Ｍ］＋，对应分子式Ｃ３０Ｈ４８Ｏ５。１　Ｈ－ＮＭＲ
（Ｃ５Ｄ５Ｎ，４００ＭＨｚ）中有６个甲基信号δ０．９２ （３Ｈ，ｓ），
０．９９ （３Ｈ，ｓ），１．０２ （６Ｈ，ｓ），１．２０ （３Ｈ，ｓ），１．７１
（３Ｈ，ｓ）和 １ 个双键氢信号 δ５．４８ （１Ｈ，ｓ）；１３　Ｃ－ＮＭＲ
（Ｃ５Ｄ５Ｎ，１００ＭＨｚ）中有δ１２２．９，１４５．３烯碳特征信号和１
个羧基碳信号δ１８０．７，因此推测化合物６为具有ｏｌｅａｎ－１２－ｅｎ
基本骨架的三萜，其中１个角甲基被羟亚甲基取代，１个角
甲基被羧基取代。１　Ｈ－ＮＭＲ中δ４．１５ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ）
和δ３．８４ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ）为－ＣＨ２ＯＨ 中的ａ，ｂ质
子，δ４．６３ （１Ｈ，ｂｒ　ｓ，Ｈ－３），δ４．４９ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．４
Ｈｚ，Ｈ－２）；１３　Ｃ－ＮＭＲ中有３个连氧的碳信号δ７４．７、６６．７、
６５．６因此推测化合物６有３个羟基取代，且有１个羟基位
于角甲基上。１３　Ｃ－ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）数据：δ４３．５
（Ｃ１），６６．７ （Ｃ２），７４．７ （Ｃ３），４５．７ （Ｃ４），５０．０ （Ｃ５），
１９．４ （Ｃ６），３４．１ （Ｃ７），４０．４ （Ｃ８），４８．７ （Ｃ９），３９．１
（Ｃ１０），２４．４ （Ｃ１１），１２２．９ （Ｃ１２），１４５．３ （Ｃ１３），４２．６
（Ｃ１４），２８．７ （Ｃ１５），２４．６ （Ｃ１６），４７．１ （Ｃ１７），４２．４
（Ｃ１８），４６．７ （Ｃ１９），３１．４ （Ｃ２０），３４．６ （Ｃ２１），３３．７
（Ｃ２２），２４．２ （Ｃ２３），６５．６ （Ｃ２４），１７．５ （Ｃ２５），１７．８
（Ｃ２６），２６．６ （Ｃ２７），１８０．７ （Ｃ２８），３３．７ （Ｃ２９），２４．１
（Ｃ３０）。以上波谱数据与文献［８］报道的化合物２α，３α，２４－三
羟基齐墩果－１２－烯－２８－酸一致，因此确定化合物６为２α，３α，
２４－三羟基齐墩果－１２－烯－２８－酸 （见图１）。
化合物７　白色无定型粉末，易溶于吡啶，ｍｐ　２８３～
２８５℃。Ｌｉｅｂｅｒｍａｎｎ－Ｂｕｒｃｈａｒｄ反应显阳性。ＥＩ－ＭＳ （ｍ／ｚ）：
４５６ ［Ｍ］＋，２４８ （基峰），２０７，２０３，１８９，１３３，这是ｕｒｓ－
１２－ｅｎ和ｏｌｅａｎ－１２－ｅｎ的特征碎片，对应分子式为Ｃ３０Ｈ４８Ｏ３。
１　Ｈ－ＮＭＲ （Ｃ５Ｄ５Ｎ，４００ＭＨｚ）显示δ５．５１（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２）
有１个双键氢信号；δ０．９０ （３Ｈ，ｓ），０．９７ （３Ｈ，ｄ，Ｊ＝
５．６Ｈｚ，Ｈ－２９），１．０２ （３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ－３０），１．０５
（３Ｈ，ｓ），１．０７ （３Ｈ，ｓ），１．２５ （３Ｈ，ｓ），１．２７ （３Ｈ，ｓ）
有７个甲基信号，３．４８ （１Ｈ，ｍ，Ｈ－３）有１个羟亚甲基信
号。１３　Ｃ－ＮＭＲ（Ｃ５Ｄ５Ｎ，１００ＭＨｚ）显示δ１２６．１，１３９．７有２
个烯碳特征信号，δ１８０．４有１个羧酸碳信号，δ７８．６有１个
连氧的碳信号。１３　Ｃ－ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）数据：δ３９．９
（Ｃ１），２８．６ （Ｃ２），７８．６ （Ｃ３），３９．９ （Ｃ４），５６．３ （Ｃ５），
１９．２ （Ｃ６），３４．０ （Ｃ７），４３．０ （Ｃ８），４８．５ （Ｃ９），３７．９
（Ｃ１０），２４．１ （Ｃ１１），１２６．１ （Ｃ１２），１３９．７ （Ｃ１３），４３．０
（Ｃ１４），２９．１ （Ｃ１５），２５．４ （Ｃ１６），４８．５ （Ｃ１７），５４．０
（Ｃ１８），３４．０ （Ｃ１９），３９．５ （Ｃ２０），３１．５ （Ｃ２１），３７．７
（Ｃ２２），２９．３ （Ｃ２３），１７．０ （Ｃ２４），１６．２ （Ｃ２５），１７．９
（Ｃ２６），２４．４ （Ｃ２７），１８０．４ （Ｃ２８），１８．０ （Ｃ２９），２１．９
（Ｃ３０）。以上波谱数据与文献［９］报道的乌苏酸数据一致，因
此鉴定该化合物为乌苏酸 （见图１）。
图１　黄荆子中三萜类化学成分的结构
Ｆｉｇ　１　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｅｅｄｓ　ｏｆ　Ｖｉｔｅｘ　ｎｅｇｕｎｄｏ　Ｌ．
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中南药学２０１２年６月第１０卷第６期　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｓｏｕｔｈ　Ｐｈａｒｍａｃｙ．Ｊｕｎｅ　２０１２，Ｖｏｌ．１０Ｎｏ．６
　

参考文献
［１］ 李妍岚，曾光尧，周应军，等．黄荆子化学成分研究 ［Ｊ］．中
南药学，２００９，７ （１）：２４－２６．
［２］ Ｃｈｅｎｇ　ＤＬ，Ｃａｏ　ＸＰ．Ｐｏｍｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔ　ｏｆ
Ｓａｎｇｕｉｓｏｒｂａ　ｏｆ　ｆｉｃｉａｎａｌｉｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９２，３１ （４）：
１３１７－１３２０．
［３］ Ｓｅｏｂ　Ｓ，Ｔｏｍｉｔａ　Ｙ，Ｔｏｒｉ　Ｋ．Ｃａｒｂｏｎ１３－ＮＭＲ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｕｒｓ－１２－
ｅｎｅｓ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ａｓｓｉｇｎｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ
Ｉｓｏｄｏｎ　ｊａｐｏｎｉｃｕｓ　Ｈａｒａ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅｓ［Ｊ］．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔ－
ｔｅｒｓ，１９７５，１６ （１）：７－１０．
［４］ Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ　Ｓ，Ｉｍａｙｏｓｈｉ　Ｙ，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ　Ｅ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ
ｂｉｏａｃｔｉｖｅ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｓ　ｂｙ　Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａｊａｐｏｎｉｃａ　ｃａｌ ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏ－
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，５９（３）：３１５－３２３．
［５］ Ｆｕｍｉｋｏ　Ａ，Ｔａｔｓｕｏ　Ｙ．Ｇｌｙｅｏｓｉｄｅｓ　ｏｆ　１９α－ｈｙｄｒｏｘｙ－ｏｌｅａｎａｎｅ　ｔｙｐｅ
ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＴｒａｃｈｅｌｏｓ　Ｐｅｒｍｕｍａｓｉａｔｉｃｕｍ （Ｔｒａｅｈｅｌｏｓ　Ｐｅｒ－
ｍｕｍ．ＩＶ）［Ｊ］．Ｃｈｅｍ　Ｐｈａｒｍ　Ｂｕｌ，１９８７，３５ （５）：１８３３－１８３５．
［６］ Ａｓｈｏｋｅ　ＫＮ，Ｇｕｒｕｄａｓ　Ｐ，Ｎｉｒａｎｊａｎ　ＰＳ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ　ａｎｄ
ｔｈｅｉｒ　ｇｌｕｅｏｓｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａｂｅｌｌｅｒｉｃａ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，
１９８９，２８ （１０）：２７６９－２７７２．
［７］ Ａｓｉｓｈ　Ｐ，Ｋｕｎｄｕ，Ｓｈａｓｈｉ　Ｂ．Ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ
ｆｒｏｍＴｅｒｍｉｎａｌｉａ　ｃｈｅｂｕｌａ ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９３，３２ （４）：
９９９－１００２．
［８］ Ｋｏｊｉｍａ　Ｈ，Ｏｇｕｒａ　Ｈ．Ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｐｒｕｎｅｌｉａ　ｖｕｌｇａｒｉｓ
［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８６，２５（３）：７２９－７３３．
［９］ 刘普，段宏泉，潘勤．委陵菜三萜成分研究［Ｊ］．中国中药杂
志，２００６，３１ （２２）：１８７５－１８７９．
（收稿日期：２０１２－０２－０３；修回日期：２０１２－０３－０１）
　　基金项目：国家科技部重大专项 （编号：２００９ＺＸ０９１０３－０９２）；广东省科技厅省院战略合作专项 （编号：２０１０Ｂ０９０３０００２４）。
作者简介：倪庆纯，女，高级工程师，主要从事新药药理与毒理学研究，Ｅ－ｍａｉｌ：１３５４４５６１０８７＠１６３．ｃｏｍ　　＊通讯作者：杨威，男，
高级工程师，博士，主要从事新药药理与毒理学研究，Ｔｅｌ：（０２０）８４２４１７５０，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｇｗｅｉ０７１９＠１６３．ｃｏｍ
采用活体成像技术观察肿瘤组织在裸鼠体内生长情况的研究
倪庆纯，韩重，杨威＊，欧慧瑜，雷夏凌，黄远铿 （广州医药研究总院，广州　５１０２４０）
摘要：目的　采用活体成像技术监测稳定高表达荧光素酶报告基因的肿瘤细胞在裸鼠体内生长及转移情况，为肿瘤
治疗药物的研发提供新的评价技术和方法。方法　采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ　２０００介导的基因转染方法，将ｐＧＬ４．１７
［ｌｕｃ２／ｎｅｏ］载体转染人肝癌细胞株 ＨｅｐＧ２，经Ｇ４１８抗性筛选及有限稀释法获得稳定高表达荧光素酶的单克隆细
胞；采用活体成像的方法检测转染细胞在裸鼠体内的成瘤情况。结果　获得了可稳定高表达荧光素酶基因的单克隆
细胞株，将单克隆细胞株植入裸鼠皮下。采用活体成像技术准确监测肿瘤细胞体内生长情况。结论　采用活体成像
技术构建的肿瘤动物模型是拓展肿瘤体内生长、转移及治疗相关研究的理想模型。
关键词：荧光素酶；肿瘤细胞；活体成像；动物模型
中图分类号：Ｒ９６５．２　　　　文献标识码：Ａ　　　　文章编号：１６７２－２９８１ （２０１２）０６－０４１２－０３
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－２９８１．２０１２．０６．００４
Ｍｏｎｉｔｏｒ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒ　ｇｒｏｗｔｈ　ｉｎ　ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌ　ｂｙ　ｉｍａｇｉｎｇ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
ＮＩ　Ｑｉｎｇ－ｃｈｕｎ，ＨＡＮ　Ｚｈｏｎｇ，ＹＡＮＧ　Ｗｅｉ＊，ＯＵ　Ｈｕｉ－ｙｕ，ＬＥＩ　Ｘｉａ－ｌｉｎｇ，ＨＵＡＮＧ　Ｙｕａｎ－ｋｅｎｇ （Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｇｅｎｅｒａｌ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０２４０）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｍｏｎｉｔｏｒ　ｔｈｅ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｔｕｍｏｒ　ｇｒｏｗｔｈ　ｔｈａｔ　ｗａｓ　ｓｔａｂｌｙ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ　ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　ｒｅｐｏｒｔ　ｇｅｎｅ，ａｎｄ　ｔｏ
ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｔｏｏｌ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｎｅｗ　ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ　ｄｒｕｇｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ　２０００ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｇｅｎｅ　ｔｒａｎｓ－
ｆｅｒ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔ　ｐＧＬ４．１７［ｌｕｃ２／ｎｅｏ］ｖｅｃｔｏｒ　ｉｎｔｏ　ｈｕｍａｎ　ｈｅｐａｔｏｍａ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅ　ＨｅｐＧ２，ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｂｙ　Ｇ４１８
ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ａｎｄ　ｌｉｍｉｔｉｎｇ　ｄｉｌｕｔｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｔｏ　ｏｂｔａｉｎ　ｈｉｇｈ　ａｎｄ　ｓｔａｂｌｅ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ｃｅｌ　ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ．Ｔｈｅｓｅ　ｓｔａｂｌｙ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ
ｍｏｎｏｃｌｏｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　ｉｎｔｏ　ｍｉｃｅ，ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｉｍａｇｉｎｇ　ａｓ－
ｓｅｓｓｍｅｎｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｓｔａｂｌｙ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ　ｍｏｎｏｃｌｏｎｅｓ　ｈｉｇｈｌｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　Ｌｕｃ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ．Ａｆｔｅｒ　ｓｔａｂｌｙ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ　ｍｏｎｏｅ－
ｌｏｎｅｓ　ｂｅｉｎｇ　ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｍｉｃｅ，ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｓ　ｗａｓ　ａｃｃｕｒａｔｅｌｙ　ｍｏｎｉ－
ｔｏｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｉｍａｇｉｎｇ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　 Ｔｈｉｓ　ｎｏｖｅｌ　ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌ　ｗｉｔｈ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｉｍａｇｉｎｇ　ｍａｙ　ｈｅｌｐ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ
ｏｆ　ｔｕｍｏｒ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒ　ｄｒｕｇｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ；ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅ；ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｉｍａｇｉｎｇ；ａｎｉｍａｌ　ｍｏｄｅｌ
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Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｓｏｕｔｈ　Ｐｈａｒｍａｃｙ．Ｊｕｎｅ　２０１２，Ｖｏｌ．１０Ｎｏ．６　中南药学２０１２年６月第１０卷第６期