全 文 ：［收稿日期］ 20130126(002)
［基金项目］ 贵州省科技厅联合基金项目(黔科合中药字
【2010】LKZ7025 号)
［第一作者］ 杨立勇，硕士，副教授，从事民族医药的基础研究
［通讯作者］ * 王祥培，博士，教授，从事中药及民族药的品种、
品质与资源开发，E-mail:wxp0123@ 126. com
桃枝类药材 HPLC指纹图谱的鉴别
杨立勇1，李雨生1，杨烨1，石鑫磊1，冯华2，王祥培1*
( 1. 贵阳中医学院，贵阳 550002; 2. 遵义市药品检验所，贵州 遵义 563000)
［摘要］ 目的:建立桃枝类药材高效液相色谱(HPLC)指纹图谱鉴别方法。方法: 采用 ＲP-HPLC，Diamonsil-C18(4. 6
mm × 250 mm，5 μm)色谱柱，流动相为乙腈-0. 05%磷酸水，梯度洗脱，流速 0. 5 mL·min －1，290 nm波长下测定山桃枝、桃枝、桃
叶及桃仁指纹图谱，并作相似度比较分析。结果:建立了山桃枝药材 HPLC指纹图谱共有模式，有 47 个共有指纹峰被标定，并
对山桃枝、桃枝、桃叶及桃仁药材的 HPLC指纹图谱进行相似度比较，结果有明显差异。结论:HPLC 指纹图谱具有方法简便，
重复性好，特征性强的特点，可用于桃枝类药材鉴别。
［关键词］ 桃枝;高效液相色谱;指纹图谱;鉴别
［中图分类号］ Ｒ284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)19-0156-03
［doi］ 10． 11653 /syfj2013190156
Identification of Peach Juvenile Branchlet by HPLC Fingerprint
YANG Li-yong1，LI Yu-sheng1，YANG Ye1，SHI Xin-lei1，FENG Hua2，WANG Xiang-pei1*
(1. Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China;
2. Zunyi Institute for Drug Control，Zunyi 563000，China)
［Abstract］ Objective:To establish a HPLC fingerprint for the identification of Peach Juvenile Branchlet．
Method:The analysis was carried out on a Diamonsil C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)with a mobile phase
consisting of acetonitrile-0. 05% phosphoric acid，gradient eluent，the flow rate of 0. 5 mL·min －1 ． The wave
length was 290 nm，data were analyzed by the main component of dried branch of Prunus persica and peach leaf and
peach seed P． E． to compare the similarity of samples． Ｒesult:The mutual mode to HPLC fingerprints was
estabilished and the 47 mutual peaks were indicated． The similarities among the of the main component of dried
branch of P． persica and peach leaf and peach seed P． E． collected from different sources were obtained． There
was an apparent difference in fingerprint． Conclusion:HPLC fingerprint method is repeatable and feasible and can
be suitable for identifying Peach Juvenile Branchlet．
［Key words］ Peach Juvenile Branchlet;HPLC;fingerprint;identification
桃枝为蔷薇科植物桃的干燥枝条，具有活血通
络、解毒杀虫之功效，临床上用于心腹刺痛、风湿痹
痛、跌打损伤、疥癣等［1］。而 2003 年版《贵州省中
药材、民族药材质量标准》［2］中收载桃与山桃的枝
条作桃枝使用。目前桃枝药材的性状、显微鉴别及
桃与山桃的枝条两者间的挥发性成分的比较研究已
有报道［1-3］，但对于更客观、准确的去识别两者药材
的异同，目前缺乏研究。由于桃与山桃为同科同属
植物，亲缘关系相近，其两者枝条的药材性状、显微
特征及成分等方面相似或相近，难以区别。而中药
指纹图谱技术能够标示其特征的共有峰的图谱，借
以辨别真伪、评价原料药材、半成品以及成品质量的
均一性和稳定性［4-9］。因此，本文采用 HPLC 对桃与
山桃的枝条及桃叶、桃仁药材的指纹图谱进行测试，
并作指纹图谱的相似度比较，以期为桃枝类药材鉴
别和质量控制提供一些依据。
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第 19 卷第 19 期
2013 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 19
Oct．，2013
1 仪器与试药
山桃枝药材分别采收于贵州各地，共 10 份样
品，经王祥培教授鉴定为山桃 Prunus davidiana
(Carr．)Franch．的干燥枝条;桃枝采集于贵阳花溪、
天柱坌处，经王祥培教授鉴定为桃 P． persica(L．)
Batsch的干燥枝条;桃叶采集于天柱坌处，经过王祥
培教授分别鉴定为山桃的干燥叶和桃的干燥叶;桃
仁 Semen Persicae采购于药店。见表 1。
表 1 桃枝类药材及桃叶和桃仁的相似度
No． 样品 来源 采收时间 相似度
S1 山桃枝 天柱坌处① 2009-08 0. 989
S2 山桃枝 剑河革东镇八郎村① 2010-01-16 0. 995
S3 山桃枝 剑河革东镇方家寨 2010-02-16 0. 955
S4 山桃枝 剑河革东镇八郎村② 2010-02-16 0. 995
S5 山桃枝 天柱凤城镇 2009-08 0. 992
S6 山桃枝 剑河革东镇源江村山坡 2010-02-16 0. 998
S7 山桃枝 天柱坌处② 2010-02 0. 989
S8 山桃枝 水田① 2009-08 0. 978
S9 山桃枝 水田② 2009-08 0. 978
S10 山桃枝 天柱坌处③ 2010-02 0. 997
S11 桃枝 天柱远口 2010-02 0. 726
S12 桃枝 花溪① 2009-08 0. 800
S13 桃枝 花溪② 2009-08 0. 560
S14 桃枝 花溪③ 2010-02 0. 792
S15 桃枝 花溪④ 2009-08 0. 858
S16 山桃叶 天柱坌处 2009-07 0. 250
S17 桃叶 天柱坌处 2009-08 0. 276
S18 桃仁 芝林大药房 2010-07 0. 058
Agilent1100 型高效液相色谱仪(自动进样器) ，
二极管阵列检测器(DAD) ;《中药色谱指纹图谱相
似度评价系统 A 版》(国家药典委员会) ;乙腈为色
谱纯，水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Dikma 公司 Diamonsil C18色谱柱
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，流动相乙腈(A)-0. 05%
磷酸水(B)进行线性梯度洗脱(0 ～ 55 min，20% ～
35%A，55 ～ 80 min，35% ～ 44% A，80 ～ 100 min，
44% ～50%A，100 ～ 105 min，50% ～ 100% A，105 ～
115 min，100% ～20%A) ，体积流量 0. 5 mL·min －1，
柱温 25 ℃，检测波长 290 nm，运行时间 115 min。
2. 2 供试品溶液的制备 取药材粉末(过 40 目
筛)约 1. 0 g，精密称定，置于 100 mL具圆底烧瓶中，
加 70%甲醇 50 mL，回流提取 60 min，滤过，药渣加
70%甲醇 50 mL，回流提取 45 min，滤过，合并 2 次
滤液。滤液置水浴锅挥干，残渣加 70%甲醇定容至
10 mL。用微孔滤膜(0. 45 μm)滤过，取续滤液，
即得。
2. 3 方法学考察［6-7］
2. 3. 1 空白试验 精密吸取空白溶液 7 μL，注入
高效液相色谱仪，按规定的梯度条件洗脱，结果表明
空白不干扰测定。
2. 3. 2 精密度试验 取同一供试品溶液，按 2. 1 项
下的色谱测试条件连续进样 6 次，结果显示各共有
峰相对保留时间和相对峰面积比值的 ＲSD 均 ＜
3%，表明该方法精密度良好。
2. 3. 3 稳定性试验 取同一供试品溶液，按 2. 1 项
下的色谱测试条件分别在 0，6，12，18，24，36 h 检
测，结果显示各共有峰相对保留时间和相对峰面积
比值的 ＲSD 均 ＜ 3%，表明该供试品溶液在36 h内
稳定。
2. 3. 4 重复性试验 取同一批山桃枝药材分别提取
制备 6份供试品，按 2. 1项下的色谱测试条件进行检
测，结果显示各共有峰相对保留时间和相对峰面积比
值 ＲSD均 ＜3%，表明该方法重复性良好。
2. 4 指纹图谱建立 按 2. 1 项的色谱条件进行检
测。同一试验条件下，测定所有供试品高效液相色
谱图。根据不同供试品测定结果所给出的峰数，峰
值(积分值) ，峰位(相对保留时间)等相关参数进行
分析，比较并得出优化的指纹图谱(图 1 ～ 4)。
图 1 山桃枝药材 HPLC指纹
图 2 10 批山桃枝药材的 HPLC指纹
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杨立勇，等:桃枝类药材 HPLC指纹图谱的鉴别
图 3 5 批桃枝药材的 HPLC指纹
图 4 桃枝类药材及桃叶和桃仁的 HPLC指纹图谱
2. 5 指纹图谱分析
2. 5. 1 指纹图谱相似度评价 分别将各地样品的
色谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系
统》2004 年 A版相似度软件，考察图谱相似度的一
致性。见表 1。
2. 5. 2 指纹图谱共有峰的确立 以保留时间约
67. 61 min的 41 号峰作为参照峰，对 10 批山桃枝药
材的指纹图谱进行考察，确立了 47 个共有指纹峰
(图 1)。
2. 5. 3 山桃枝、桃枝、桃叶和桃仁的指纹图谱比较
从山桃枝、桃枝、桃叶和桃仁的指纹图谱中，可以
直观地看出各自的色谱指纹图谱明显不同，其特征
峰数目、位置(相对保留时间)、积分值均有差异，山
桃枝、桃枝、桃叶和桃仁的指纹图谱相比，相似度结
果见表 1。各药材指纹图谱比较结果见图 4。
3 讨论
在色谱分离过程中考察了甲醇-水，乙腈-水，甲
醇-磷酸水溶液，乙腈-磷酸水、乙腈-0. 05%磷酸水溶
液等系统，结果显示乙腈-0. 05%磷酸水溶液系统的
分离度高，峰形对称，基线稳定;对不同检测波长进
行考察，结果在 290 nm 检测波长下，桃枝色谱中色
谱峰较多，信息丰富，基线稳定。
对不同体积分数的甲醇与乙醇并采用回流提取
和超声提取进行考察发现，70%甲醇回流提取比超
声提取的提取效率高且色谱峰较多。还对回流提取
中不同提取时间，不同提取次数进行比较，结果表明
70%甲醇提取 2 次(60，45 min)后基本完全。故拟
定上述供试品溶液的制备方法。
研究结果表明，各批次山桃枝指纹图谱相似度
较好并有 47 个共有峰，而与桃枝、桃叶和桃仁指纹
图谱相似度及共有峰的个数有明显差异。说明本文
建立的高效液相色谱指纹图谱的鉴别方法，具有方
法简便、色谱峰多、信息丰富、基线稳定、客观等特
点，可用于桃枝类药材的鉴别。
桃仁味苦、甘，性平，具有活血祛瘀、润肠通便、
止咳平喘的功效，用于经闭痛经，症瘕痞块，肺痈肠
痈，跌扑损伤，肠燥便秘，咳嗽气喘等症［1］;桃叶味
苦，性平具有清热解毒，杀虫止痒的功效，用于疟疾，
痈疖，痔疮，湿疹，阴道滴虫等症［10］;而桃枝(桃与山
桃的枝条)在功效与主治方面，与桃仁、桃叶具有明
显的区别，结合他们的高效液相色谱指纹图谱的差异
性，从而提示他们各自治疗疾病的药效物质基础也可
能不同。在《中国药典》中只收载桃的枝条作为桃枝
药材的来源，而《贵州省中药材、民族药材质量标准》
中却收载桃与山桃的枝条作为桃枝药材来源，从指纹
图谱的鉴别研究结果看，两者的相似度有一定的区
别，但与桃仁、桃叶比较，两者间有较大的相似性(共
有峰个数及相似度) ，提示两者在功能主治方面的共
同点，可能与他们指纹图谱上的相似性有关。
［参考文献］
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［10］ 谢宗万，范崔生，朱兆仪，等． 全国中草药汇编． 上册
［M］．北京:人民卫生出版社，1996:681.
［责任编辑 邹晓翠］
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第 19 卷第 19 期
2013 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 19
Oct．，2013