全 文 ：411※分析检测 食品科学 2007, Vol. 28, No. 08
黄皮果中总黄酮含量的测定及其黄酮
种类的鉴别
钟秋平，林美芳
(钦州学院生物与化学系，广西 钦州 535000)
摘 要：本研究以黄皮果为原料，测定了黄皮果中总黄酮的含量，并鉴别黄酮的种类。实验表明，95%甲醇是
浸提黄皮果中黄酮类化合物的较理想溶剂。以芦丁为标准品测得黄皮果中的总黄酮含量为0.91mg/ml。在此基础上，
通过颜色反应和荧光鉴别，确定黄皮果95%甲醇提取液中黄酮的种类主要为：双氢黄酮、查尔酮和黄酮醇等。
关键词：黄皮果；总黄酮；鉴别
Determination of Contents of Flavones and Identification of Flavones Species in ructus clausenae Lanii
ZHONG Qiu-ping，LIN Mei-fang
(Department of Biology and Chemistry，Q nzhou U iversity，Qi zhou 535000, China)
Abstract ：In this paper, the contents of flavones were measured and the species of flavones were identified in Fructus clausena
Lanii. The results showed that 95% methanol was the premium solvent to digest flavones in Fructus cl usenae Lanii. And that
the content of flavones is 0.91 mg/ml determined with the standard sample rutin. With color reaction and fluorescence identification,
it was determined that the species of flavones are flavanones, chalcones and flavonols.
Key words：Fructus clausenae Lanii；flavones；identify
中图分类号：O623.54 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2007)08-0411-03
收稿日期：2007-05-15
作者简介：钟秋平(1964-)，男，讲师，主要从事天然产物的研究与开发以及食品生物技术的研究。
黄皮果(Fructus clausenae Lanii)为芸香科植物黄皮
[Clausena lansium(Laur.)Skeels](Quinaria lansium Lour.)
的成熟果实。各地还有黄皮子《桂海虞衡志》、黄弹
子《广东通志》、黄弹子《岭南杂记》、金弹子《本
草求原》等叫法。《本草纲目》谓：“《海槎录》
云：出广西横州。状如楝子及小枣而味酸。”《岭南
采药录》云：“木本，高至十余尺，叶羽状复叶，
互生，春生开小花，白色，果黄蜡色，状如金弹。”
主要产于广东、广西、云南、四川、海南等地。黄
皮果的果肉较薄，为南方夏季果品之一，其种子亦称
黄皮果核。黄皮果味甘、酸，性微温。功能理气消
食，化痰止咳[1]。
黄酮类化合物(flavoniod)是在植物中分布非常广泛的
一类天然产物，其在植物体内大部分与糖结合成苷类，
有一部分是以游离态(苷元)的形式存在。绝大多数的植
物体内都含有黄酮类化合物，其对植物的生长、发育、
开花、结果及防菌防病等方面起着重要的作用。同时，
黄酮类化合物也具有重要的生物活性功能，如：治疗冠
心病、对缺血性脑损伤以及对心肌缺血损伤有保护作用
等。另外，黄酮类化合物还具有抗菌及抗病毒、抗肿
瘤、抗氧化自由基、抗炎、镇痛和保肝等活性。黄
酮类化合物多具有颜色，且较早发现的化合物具有2-苯
基色原酮(2-phenyl-chromone)的结构，故称黄酮或黄酮
体。现在则是泛指两个苯环(A环与B环)通过中央三碳
相互联结而成的一系列化合物。根据中央三碳的氧化程
度、是否成环、B环的连接位置(2或3位)及两分子黄
酮类化合物的结合等特点，可将黄酮类化合物分成黄酮
类(flavones)、黄酮醇类(flavonols)、双氢黄酮类
(flavanones)、双氢黄酮醇类(flavanonols)、异黄酮类
(isoflavones)、双氢异黄酮类(isoflavanones)、查尔酮类
(chalcones)、花色素类(anthocyanidins)、双黄酮类
(biflavonoids)等。黄酮类化合物可与镁粉(或锌粉)、盐
酸、三氯化铝、氢氧化钠等试剂产生特征性的颜色反
应，用于黄酮类化合物的鉴别[2]。
有关黄皮果的研究文献并不多，唐闻宁、康文
艺、穆淑珍等[3]研究了黄皮果中挥发油的成分；曾少
葵、蒋志红等[4]研制了黄皮果珍珠钙奶保健饮料，而有
关黄皮果中总黄酮含量的测定和鉴别的研究还未见报
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道。本实验首先利用50%乙醇、75%乙醇、95%乙醇、
50%甲醇、75%甲醇、95%甲醇、水、乙酸乙脂等
溶剂对黄皮果中的黄酮类化合物进行浸提，然后分别测
定浸提液中总黄酮的含量。选择总黄酮含量最高的有机
溶剂作为主要研究对象，通过特征反应，鉴别该有机
溶剂浸提液中的黄酮种类，以期为后续从黄皮果中提
取、分离黄酮类化合物的单体物质及其药理作用研究提
供理论指导，同时，也为黄皮果的工业开发提供理论
基础。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1原料与试剂
黄皮果果实(晒干) 广西钦州。芦丁(rutin) 国药集
团化学试剂有限公司；其它化学试剂均为分析纯。
1.1.2仪器与设备
JZ7114单相异步电动粉碎机(1400r/min) 巩义市英峪
子华仪器厂；RE-52D旋转蒸发仪 上海青浦泸西仪器
厂；ZF型紫外透射反射分析仪 上海伊利仪器制造有
限公司；SpectrumLab54紫外可见光分光光度计 上海
棱光技术有限公司；索氏提取器。
1.2方法
1.2.1黄皮果提取液的制备
称取经过干燥的黄皮果粉末160g，在索氏提取器中
用石油醚进行脱脂。将脱脂后的黄皮果等分为8份，即
每份20g，分别加入100ml 50%乙醇、75%乙醇、95%
乙醇、50%甲醇、75%甲醇、95%甲醇、水、乙酸
乙脂等溶剂，用冷浸法浸取2d，共浸提三次，合并三
次浸提液，过滤，利用旋转蒸发仪进行浓缩至体积为
10ml，即得各种溶剂的黄皮果粗黄酮提取液。
1.2.2黄皮果提取液中总黄酮含量的测定
1.2.2.1标准曲线的建立
将提取液和标准品在700～200nm内进行光谱扫描分
析，发现在510nm处有最大吸收峰，故用510nm作为
检测波长。
精密称取在105℃条件下干燥至恒重的芦丁对照品
11.8mg，置50ml容量瓶中，加甲醇适量，在水浴上微
热溶解，置冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀。得芦丁
对照溶液(0.236mg/ml)。精密吸取对照溶液0.0、1.0、
2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分别置入25ml容量瓶中，
再分别加甲醇6.0、5.0、4.0、3.0、2.0、1.0、 .0ml，
加5%亚硝酸钠溶液1.0ml，摇匀，静置6min；加10%
硝酸铝溶液1.0ml，摇匀，再静置6min；加1%氢氧化
钠试液10ml，再加30%乙醇至刻度，摇匀，静置15min，
在510nm处测定吸光度，并求出线性回归方程，建立
标准曲线。
1.2.2.2黄皮果中总黄酮含量的测定
吸取黄皮果的不同提取液1ml，按照标准曲线建立
的方法，测出其吸光度，根据标准曲线，求出提取液
中总黄酮的含量。
1.2.3黄皮果提取液中黄酮的定性鉴定
根据1.2.2.2测得的黄皮果不同溶剂提取液黄酮含量
的大小来确定较理想的提取溶剂，选择黄酮含量最高的
浸提液作为研究对象。
本实验只对总黄酮含量最高的提取液进行鉴定。
1.2.3.1颜色反应[5]
本实验利用盐酸-镁粉法、盐酸-锌粉法、浓硫酸
法、氢氧化钠法对提取液中的黄酮进行定性鉴定。
1.2.3.2荧光反应[5]
用毛细管将提取液点样于滤纸上，重复点样三次，
烘干，于254nm紫外光下激发，再在300nm紫外光下
观察荧光的颜色。同法点样，烘干，用氨水熏蒸1～
2min，于254nm紫外光下激发，再在300nm紫外光下
观察荧光的颜色。
1.2.4回收率实验
取已测知含量的黄皮果样品1.0643g，共三份，分
别加入等量的对照品芦丁1.65mg，按1.2.2.1操作制备溶
液，测定，结果平均回收率为98.7%，RSD为2.5%。
2 结果与分析
2.1标准曲线的建立
以芦丁为标准品，按照1.2.2.1的方法得到标准曲线
如图1所示，其回归方程为：y = 1.963x，R＝0.9997。
2.2黄皮果中总黄酮含量的测定结果
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
黄
酮
含
量
吸光度
00.10.20.30.40.50.60.70.8
图1 芦丁标准曲线
Fig.1 Standard curve of rutin
y=1.963x
R2=0.9995
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按照1.2.2.2的方法，黄皮果不同提取液中总黄酮含
量测定结果如表1所示。
是哪一种，还需进一步鉴别。同时，表2所列的反应
颜色，只是某类黄酮体中大多数化合物所具有的共同颜
色，为了能够得出正确的结论，需利用荧光反应作进
一步的鉴别。
2.3.2荧光反应
根据1.2.3.2的方法，在黄皮果95%的甲醇提取液点
样处，出现两个斑点，其荧光反应结果如表3所示。
100ml溶剂 乙醇 甲醇 水乙酸乙酯
浓度(%) 507595 50 75 95－ －
吸光度 0.10.3200.2410.1320.4490.4630.0450.161
含量(mg/ml)0.1960. 280.4730.2590.8810.910.0880.316
表1 不同提取液的总黄酮含量
Table 1 Content of flavones in different extract solutions
从表1中可以看出，不同溶剂的黄皮果提取液中总
黄酮含量存在较大的差异，95%甲醇提取液中总黄酮含
量是水提取液中总黄酮含量的九倍，说明溶剂的选择是
提取黄皮果中总黄酮的关键。另外，从表1中还可以发
现，50%乙醇、50%甲醇、水和乙酸乙酯提取液中总
黄酮的含量较低，说明这几种溶剂不是理想的提取剂。
随着甲醇浓度的升高，提取的效果越好，95%甲醇提
取液中总黄酮含量最高，达到0.91mg/ml，说明95%的
甲醇是最理想的提取剂，同时也说明95%甲醇提取液中
总黄酮含量与黄皮果中所含有的黄酮含量最为接近，因
此95%甲醇提取液中总黄酮含量即为黄皮果中的黄酮含
量。在此基础上，本实验选择95%甲醇作为主要的提
取剂，并以95%甲醇提取液作为研究对象，探讨其中
所含有的黄酮种类及其特性。
2.3黄皮果提取液中黄酮的鉴别
不同植物中的黄酮性质存在很大的差异，为了更好
地研究和开发黄皮果，本实验对95%的甲醇提取液中的
黄酮进行鉴别。
2.3.1颜色反应[5]
按1.2.3.1的方法对黄皮果95%的甲醇提取液进行定
性鉴别的结果如表2所示。
试 剂 浓硫酸 盐酸-镁粉 盐酸-锌粉 NaOH溶液
现 象 橙→紫红 红 无反应 深 黄
表2 95%甲醇提取液中黄酮的颜色反应
Table 2 Colour reaction of flavones in 95% methanol extract
s ol u t io n
从表2中可以看出，浓硫酸反应颜色由橙色变为紫
红，说明提取液中含有双氢黄酮；盐酸-镁粉反应颜色
呈红色，这是双氢黄酮的特征反应，因此，进一步证
明提取液含有双氢黄酮；NaOH溶液反应呈深黄色，说
明提取液中含有黄酮醇；盐酸-锌粉加到提取液中无反
应，说明提取液中含有查尔酮或异黄酮或噢哢，具体
斑点
荧光颜色
1 2
紫外 蓝色 紫红色
紫外氨熏 黄－绿色 黄色
表3 斑点荧光颜色
Table 3 Fluorescence colour of spot
从表3可以发现，由斑点1显示的两种颜色，可
以判定提取液中含有：黄酮、双氢黄酮和黄酮醇。由
斑点2显示的两种颜色可以判定提取液中含有：黄酮或
黄酮醇、双氢黄酮和查尔酮[5]。
综合以上的颜色反应和荧光鉴别结果，可以发现
95%甲醇提取液中含有的黄酮物质的种类主要为：双氢
黄酮、查尔酮和黄酮醇等。
通过对黄皮果95%的甲醇提取液中黄酮含量的测定
和黄酮种类的鉴别，为从黄皮果中分离纯化黄酮醇、双
氢黄酮和查尔酮等打下了基础。
3 结 论
通过上述实验发现， 95%甲醇是浸提黄皮果中黄酮
类化合物的较理想溶剂。以芦丁为标准品测得黄皮果中
的总黄酮含量为0.91mg/ml。通过回收率实验发现样品平
均回收率为98.7%，RSD为2.5%。在此基础上，通过
颜色反应和荧光鉴别，确定黄皮果95%甲醇提取液中黄
酮的种类主要为：双氢黄酮、查尔酮和黄酮醇等。为
后续对黄皮果提取物的药理研究指明了方向。
参考文献：
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卫生出版社, 2001: 1895.
[2]徐任生. 天然产物化学[M]. 2版北京: 科学出版社, 2004: 526.
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(2): 28-29.
[5]中国科学院上海药物研究所植物化学研究室. 黄酮体化合物鉴定手
册[M]. 北京:科学出版社, 1981: 363-392.