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胆木叶和茎挥发性成分对比分析及其抗MRS活性的研究



全 文 :虫 、水蛭类药则可走窜入络 、活血软坚 [ 10] 。此外 , 大黄 、地黄 、
甘草还可调节慢性肝炎及肝纤维化病人的免疫功能。研究表明 ,
DHZCW不仅可以改善肝炎肝硬化患者的临床症状和肝功能 ,还
可以促进肝纤维化病变的修复。本实验从细胞和分子水平 , 进
一步验证了 DHZCW可通过抑制旁分泌途径以抑制活化 HSC增
殖和细胞因子 TGF-β 1的表达 ,达到抗肝纤维化的效应。
参考文献:
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收稿日期:2009-04-17; 修订日期:2009-12-10
修订日期:国家科技支撑计划(No.2007BAI27B04)
作者简介:苏 奎 (1983-),男(汉族),安徽阜阳人 ,现为石河子大学在读硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事天然产物研究与开发工作.
*通讯作者简介:邓世明(1969-),男(汉族),四川内江人 ,现任海南大学海洋学院副教授 ,博士学位 ,主要从事天然产物研究与开发工作.
胆木叶和茎挥发性成分对比分析及
其抗 MRS活性的研究
苏 奎1, 2 ,龚 敏 1, 2 ,邓世明 1* ,周 静 2
(1.海南大学海洋学院 ,海南 海口 570228; 2.石河子大学食品学院 ,新疆 石河子 832000)
摘要:目的 对比分析胆木叶和茎中的挥发性成分和抗菌活性。方法 采用水蒸气蒸馏法提取胆木叶和茎中的挥发性成
分 , 用 GC-MS技术进行成分对比分析 , 用滤纸片琼脂扩散法检测挥发性成分的抗菌活性。结果 鉴定了胆木叶中的 14
个化学成分和茎中的 10个化学成分;挥发性成分具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRS)、大肠杆菌 、 普通金黄色葡萄
球菌 、普通变形杆菌 、枯草芽孢杆菌的活性 。结论 胆木叶和茎中的挥发性成分主要分别为烷酸 46.30%和烯酸 48.94%;
在抗菌活性中 , 抗 MRS的活性最强。
关键词:胆木; 挥发性成分; 抑菌; 气相色谱 -质谱联用分析; 金黄色葡萄球菌
中图分类号:R284.2;R285.5  文献标识码:A  文章编号:1008-0805(2010)02-0299-02
StudyontheComparativeAnalysisandAnti-MRSActivityofVolatileComponentsfrom
LeavesandStemsofNaucleaoficinalis
SUKui1, 2 , GONGMin1, 2 , DENGShi-ming1* , ZHOUJing2
(1.HainanUniversity, Haikou, Hainan570228 , China;2.FoodColegeofShiheziUniversity, Shihezi, Xinjiang
832000, China)
Abstract:ObjectiveTocompareandanalyzethevolatilecomponentsanditsanti-bacterialactivityofNaucleaoficinalisleav-
esandstems.MethodsThevolatilecomponentswereextactedbysteamdistilationfromleavesandstemsofNaucleaoficinalis,
thenthevolatilecomponentswerecomparedandanalyzedbyGC-MS, andanti-bacterialbioassayofthevolatilecompoundswas
carriedoutbypaperdiskdifusionmethod.ResultsTheresultsshowedthat14 compoundsofleavesand10 compoundsofstems
wereidentified, andthevolatilecomponentspossessedinhibitoryactivityagainstMethicilinresanalysestaphylococcus(MRS), E.co-
li, Staphylococcusaureus, P.vulgaris, Bacilsubtilits.ConclusionThemainvolatilecomponentsfromleavesofNaucleaofficinalisis
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.2 时珍国医国药 2010年第 21卷第 2期
46.30% ofalkaneacidandstemsis48.94% ofolefineacid.Anti-MRSisthestrongestinanti-bacterialactivity.
Keywords:Naucleaoficinalis; Volatilecomponents; Anti-bacterialactivity; GC-MS; MRS
  胆木 NaucleaoficinalisPierreexPitard别名乌檀 、熊胆树 、树
黄柏 , 为茜草科乌檀属乔木 ,在全国分布于海南 、广东 、广西 、云南
等省区。药用枝条 、树干和根。全年可采 , 性味苦 , 寒 , 具有清热
泻火之功效 , 用于外感发热 、急性扁桃体炎 、咽喉炎 、支气管炎 、肺
炎 、急性黄疸 、胃痛等 [ 1] 。 胆木在海南有大面积种植 , 目前市场
上出售的有 “胆木注射液 ”和 “胆木浸膏片 ”中药产品 , 临床用于
治疗急性扁桃腺炎 , 急性咽喉炎 ,急性结膜炎及上呼吸道感染 ,疗
效显著 , 药用部位是胆木的茎皮。为进一步开发利用胆木其他药
用部位 , 本文采取了水蒸气蒸馏法提取胆木叶和胆木茎的挥发性
成分并进行了抑菌活性的研究 ,用 GC-MS技术测定了胆木叶和
胆木茎中的挥发性成分 ,为胆木叶的开发应用提供科学依据。
1 材料与仪器
1.1 材料 胆木叶 、胆木茎 ,均由海南金光药业提供。
1.2 仪器与设备 美国安捷伦公司 HP6890/HP5973MS联用仪。
采用 NITS98标准质谱图库进行检索。
2 方法
2.1 GC-MS条件
2.1.1 色谱条件 HP-FFAP30 m×0.25 mmi.d×0.25 μm弹
性毛细管柱;柱温采用程序升温:从 60℃开始 , 以 4℃/min升到
120℃, 再以 6℃/min升温到 250℃, 保持 5 min;气化室温度
250℃;柱前压为 63 kPa;载气为高纯氦气(99.999%), 流量为
1.0 ml/min;进样量为 0.4 μl;分流比为 50∶1。
2.1.2 质谱条件 离子源为电子轰击源(EI);离子源温度 230℃;
四极杆温度 150℃;电子能量 70eV;电子倍增器电压 1 382V;接口
温度 270℃;溶剂延迟时间 3min;扫描范围 40 ~ 550 u。
2.2 胆木叶和茎挥发性成分制备 各称取 100 g自然干燥粉碎
的胆木叶和茎分别置于 1 000 ml长颈圆底烧瓶中 , 加适量水浸
泡 , 采用水蒸气蒸馏法将挥发性成分蒸馏出来 , 再用乙醚萃取 ,乙
醚萃取液用无水硫酸钠脱水 , 自然挥干乙醚 , 分别得到挥发性成
分 48mg和 96 mg, 做 GC-MS分析。
2.3 菌株与培养基 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicilin
siltantstaphylococcus, MRS)由中国热带农业科学院热带生物技
术研究所提供 , 大肠杆菌 、普通金黄色葡萄球菌 、普通变形杆菌 、
枯草芽孢杆菌由海南大学公共实验中心微生物实验室提供。 均
采用牛肉膏蛋白胨培养基 [ 2] :牛肉膏 3 g,蛋白胨 10 g, NaCl5 g,
琼脂 20g,定容至 1L, pH7.0~ 7.2, 1×105Pa灭菌 20min。
2.4 抑菌活性的测定 [ 3] 将胆木叶和茎挥发性成分配成浓度为
100 mg/ml的样品溶液 ,选用直径为 5.5 mm的灭菌滤纸片 ,滤纸
片分别加样品溶液 20 μl, 每个梯度重复 3次 ,待溶剂挥干后 , 将
已加样的滤纸片贴于已涂供试菌悬液 0.1 ml(菌液浓度 105 ~
107cfu/ml)的琼脂培养基上 ,放置 15 min后 , 再放入培养箱 37℃
无光照培养 , 24 h后测其抑菌圈大小。 MRS以硫酸卡那霉素作
为阳性对照 ,其它菌株以硫酸庆大霉素为对照。
3 结果
3.1 GC-MS分析结果 胆木叶挥发性成分共分离出 18个峰 ,
其中鉴定了 14 种化学成分 , 占胆木叶挥发性成分总量的
95.75%;胆木茎挥发性成分共分离出 14个峰 , 其中鉴定了 10种
化学成分 ,占胆木茎挥发性成分总量的 88.31% , 采用不做校正
的峰面积归一化法得出各组分的相对含量 ,各色谱峰相应的质谱
图检索采用 NITS98标准质谱图库进行检索。结果见表 1。
从表 1可看出 , 胆木叶挥发性主要成分为烷烃 、烷酸 、烯烃 、
烯酸 、酮和酯类 , 含量最高的为烷酸 46.30%:十六烷酸 41.02%
和十八烷酸 5.28%;胆木茎挥发性主要成分为烷酸 、烯酸 、烷烃 、
酸酐 、酯和酮类 , 含量最高的为烯酸 48.94%:(9E)-9 -十六烯
酸 45.12%和 9, 12-十八烷二烯酸(Z, Z)3.82%。
表 1 胆木叶和茎挥发性成分 GC-MS分析结果
序号 化合物名称 分子式
胆木叶
保留
时间 t/s
相对
含量(%)
胆木茎
保留
时间 t/s
相对
含量(%)
1 1-Octadecene 1-十八(碳)烯 C18H36 19.92 2.52 - -
2 1-Nonadecene  1-十九烯烃 C19H38 23.53 3.03 - -
3 2-Pentadecanone, 6, 10, 14-trimethyl 6, 10, 14-三甲基 -2-十五烷酮 C18H36O 24.45 5.00 - -
4 1-Docosene  1-二十二烯 C22H44 26.64 1.90 - -
5 5, 6, 7, 7a-Tetrahydro-4, 4, 7a-trimethyl-2(4H)benzofuranone C11H16O2 27.54 4.54 21.62 0.38
5, 6, 7, 7a-四氢 -4, 4, 7a-三甲基 -2(4H)苯并呋喃酮
6 Hexatriacontane 三十六烷 C36H74 28.83 3.04 - -
7 1-Dotriacontanol 三十二烷醇 C32H66O 29.46 4.56 - -
8 Tetratriacontane 三十四烷 C34H70 30.16 3.56 - -
9 Tetratetracontane 四十四烷 C44H90 31.45 2.34 - -
10 2-Nonadecanol  2-十九烷醇 C19H40O 32.08 5.11 - -
11 n-Hexadecanoicacid十六烷酸 C16H32O2 34.59 41.02 20.40 11.32
12 Octadecanoicacid十八烷酸 C18H36O2 36.94 5.28 23.19 5.52
13 9-Octadecenoicacid, (E)(9E)-9-十六烯酸 C18H34O2 37.27 9.29 23.58 45.12
14 Bis(2-ethylhexyl)phthalate 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 C24H38O4 37.66 4.56 23.86 6.38
15 Dibutylphthalate 酞酸丁酯 C16H22O4 - - 13.40 7.72
16 Bicyclo[ 2.2.1] heptane, 2-methoxy-1, 7, 7-trimethyl C11H20O - - 17.44 1.03
(1R, 2R, 4R)-REL-2-甲氧基 -1, 7, 7-三甲基二环 [ 2.2.1]庚烷
17 Benzylbutylphthalate邻苯二甲酸丁苄酯 C19H20O - - 20.70 0.64
18 2-Dodecen-1-yl(-)succinicanhydride 2-十二烷烯 -1-基丁二酸酐 C16H26O3 - - 23.86 6.38
19 9, 12-Octadecadienoicacid(Z, Z) 9, 12-十八烷二烯酸(Z, Z) C18H32O2 - - 24.19 3.82
合计 95.75 88.31
  胆木叶和茎中共有 5种相同的成分:5, 6, 7, 7a-四氢 -4, 4,
7a-三甲基 -2(4H)苯并呋喃酮 、十六烷酸 、十八烷酸 、(9E)-9
-十六烯酸 、邻苯二甲酸二(2 -乙基)己酯 , 其中胆木叶中十六
烷酸含量最高 ,胆木茎中十六烯酸含量最高。在胆木茎中无烯酸
成分 ,胆木叶中无酸酐成分。据文献报道 , 单不饱和脂肪酸具有
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 2期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.2
降血糖 、调节血脂 、降低胆固醇等作用 , 并对心脏具有保护作
用 [ 4] 。
3.2 活性测定结果 以滤纸片琼脂扩散法测定化合物的抗菌活
性 , 结果表明胆木叶和茎挥发性成分对 MRS有很强的抑制作用 ,
对大肠杆菌有较强的抑菌活性 ,对金黄色葡萄球菌 、枯草芽孢杆
菌 、变形杆菌有一定的抑菌活性。结果见表 2。
表 2 胆木叶和茎挥发性成分的抑菌圈直径( x±s) mm
菌株 胆木叶
2.0mg/dis
胆木材
2.0mg/dis
对照
0.2mg/dis
大肠杆菌 10.0 12.0 20.0
金黄色葡萄球菌 8.0 8.0 21.0
枯草芽孢杆菌 8.0 7.5 21.0
变形杆菌 9.0 7.0 19.0
MRS 14.0 15.0 32.0
4 讨论
长期以来 , 由于抗生素的广泛使用甚至滥用 , 导致耐甲氧西
林金黄色葡萄球(MRS)等耐药菌株的出现。 MRS对临床上广泛
应用的多种抗生素产生耐药性 , 致感染治疗困难 ,病死率高 ,已成
为全世界范围内抗感染中的难题 [ 5] 。胆木叶和茎挥发性成分具
有很好的抑制 MRS的作用 , 为胆木的开发利用提供了新的科学
依据。
参考文献:
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收稿日期:2009-05-12; 修订日期:2009-10-10
基金项目:国家 “十一五 ”科技支撑计划重点项目子课题(No.
2006BA108B03-05);
贵州中药现代化项目(No.2008GZ00371)
作者简介:刘艳丽(1974-),女(汉族),黑龙江齐齐哈尔人 ,现任苏州大学
医学部药学院讲师 ,博士学位 ,主要从事中药新药的研究和开发工作.
*通讯作者简介:许琼明(1975-), 男(汉族),湖北蕲春人 , 现任苏州大学
药学院副教授 ,博士学位 ,主要从事天然药物化学工作.
雪胆胃肠丸对胃溃疡的作用实验研究
刘艳丽 ,李笑然 , 范金胤 ,许琼明* ,杨世林
(苏州大学医学部药学院 ,江苏 苏州 215123)
摘要:目的 考察雪胆胃肠丸对实验性胃溃疡的作用。方法 采用小鼠无水乙醇致胃溃疡和大鼠乙酸致胃溃疡模型 , 考察
雪胆胃肠丸对抗实验性胃溃疡的作用。采用小鼠醋酸扭体实验和小鼠耳廓肿胀实验考察其镇痛和抗炎作用。结果 雪
胆胃肠丸均能使小鼠无水乙醇所致胃溃疡的溃疡面积明显减小 ,能降低大鼠溃疡指数 , 可降低醋酸致小鼠扭体反应的次
数 , 抑制巴豆油致小鼠耳廓肿胀。结论 雪胆胃肠丸对实验性胃溃疡有明显的保护作用。
关键词:雪胆胃肠丸; 胃溃疡; 镇痛; 抗炎
中图分类号:R285.5  文献标识码:A  文章编号:1008-0805(2010)02-0301-02
ExperimentalResearchonEffectsofXueDanWeiChangPilonGastricUlcer
LIUYan-li, LIXiao-ran, FANJin-yin, XUQiong-ming* , YANGShi-lin
(ColegeofPharmacology, SoochowUniversity, Suzhou215123, China)
Abstract:ObjectiveTostudytheeffectsofXueDanWeiChangpillonexperimentalgastriculcer.MethodsAceticacidmodel
inratsandabsoluteethanolgavagemodelinmicewereusedtostudytheanti-gastriculcerefect.Themousestretchingmodel
causedbyaceticacidandtheauricleswelingcausedbycrotonoilinmicewereadoptedtostudytheanalgesiaandantinflammato-
ryefectsofXueDanWeiChangpil.ResultsXueDanWeiChangpillcouldreducetheareasofgastriculcercausedbyabsolute
alcoholinmiceandaceticacidinrats, inhibittheauricleswelingcausedbycrotonoilinmiceandthenumberofstretchingin-
ducedbyaceticacidinmice.ConclusionXueDanWeiChangpillhasprotectiveeffectsontheexperimentalgastriculcer.
Keywords:XueDanWeiChangpill; Gastriculcer; Analgesia; Antiinflammatory
  雪胆胃肠丸是从苗族民间传统秘方中开发出来的中药复方 ,
含有雪胆 、吴茱萸 、木香 、白及 、黄芪等十多味中药材。经临床研
究表明 , 雪胆胃肠丸对胃炎 、萎缩性胃炎 、十二指肠溃疡等疾病有
独特的疗效 [ 1] 。我们对雪胆胃肠丸的药理作用进行初步研究 ,
考察其抗胃溃疡 、镇痛和抗炎作用 , 为雪胆胃肠丸的临床应用提
供实验数据。
1 材料
1.1 动物 昆明种小鼠 ,雌雄各半 , 体质量 18 ~ 22 g。实验动物
使用许可证:SYXK(苏)2007-0035。实验动物领取后适应环境
1 d, 置于标准笼子里 ,室内日夜温度维持在(22±2)℃,随意进食
饮水。
1.2 药品 雪胆胃肠丸由昆明生达制药有限公司提供。西咪替
丁和吲哚美辛由上海衡山药业有限公司提供;硫糖铝由南京白敬
宇制药有限责任公司提供。
2 方法
2.1 对无水乙醇致小鼠胃溃疡的影响 [ 2] 将小鼠随机分组 , 每组
10只 , 分别为空白对照组 , 雪胆胃肠丸各剂量组(1.089, 2.178,
4.356g· kg-1), 硫糖铝组(280 mg· kg-1)和西咪替丁组(400
mg· kg-1)。空白对照组灌胃给予蒸馏水 20 ml· kg-1 , 其他组
分别按照上述剂量灌胃给药 ,给药量为 20ml· kg-1 , 连续 5 d, 第
5天给药后 , 小鼠禁食 24 h,自由饮水 ,第 6天 ,每组均正常给药 ,
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.2 时珍国医国药 2010年第 21卷第 2期