全 文 ：112 • 实验研究 • April 2012, Vol.10, No.11 Guide of China Medicine
糖尿病心肌病组血糖、血脂明显升高，小剂量治疗组和大剂量治
疗组各指标明显低于糖尿病心肌病组，且有统计学意义（P＜0.05）。
大剂量治疗组各指标下降更明显，且有统计学意义（P＜0.05）。
2.2 各组大鼠心脏的形态学观察结果 
心肌HE染色：糖尿病心肌病组部分肌纤维肥大，部分肌纤维变
细，肌浆浓缩。小剂量治疗组和大剂量治疗组有不同程度的改变，
心肌排列较规整，心肌细胞横纹较清晰，大剂量治疗组改变更显著。
MASSON染色：糖尿病心肌病组心肌间质胶原纤维明显增多，小剂量治
疗组和大剂量治疗组有不同程度的减轻，大剂量治疗组减轻更显著。
2.3 各组大鼠心脏组织免疫组织化学染色结果  
PPAR-α主要阳性表达部位为细胞核，ET-1主要阳性表达部位
为细胞浆。小剂量治疗组和大剂量治疗组PPAR-α阳性表达率明显
高于糖尿病心肌病组，ET-1阳性表达率明显低于糖尿病心肌病组（P
＜0.05）。大剂量治疗组与小剂量组相比，PPAR-α阳性表达率高，
ET-1阳性表达率低（P＜0.05），见表1。
3 讨 论
本实验糖尿病心肌病组大鼠血糖、血脂等生化指标、心肌组织的
病理变化以及心脏胶原含量的变化均符合糖尿病及DCM，表明STZ腹
腔注射法造模成功。本实验重点通过观察糖尿病病心肌病大鼠治疗前
后心脏组织的胶原含量的变化以及PPAR-α、ET-1的蛋白表达水平，
来探讨GLP-1类似物治疗糖尿病心肌病的可能作用机制。
糖尿病心肌病（DCM）是一种特异性心肌病，病理表现为心肌
肥厚和心肌纤维化，是糖尿病患者的主要心脏并发症之一[1,2]。近年来
研究发现，心肌纤维化和心肌胶原间质沉积是DCM病变的一种重要
特征。其中内皮素（ET）是导致心肌纤维化的一个重要因素。李瑞
芳等证明了非诺贝特激活PPAR-α后可以通过调控转录因子NFATc4来
抑制ET-1诱导的心肌肥大反应[3]。胰高血糖素样肽-1（GLP-1）是一种
是由肠道内L细胞分泌的一种十分重要的肠促胰岛素，其受体激动剂 
Exendin-4是由动物唾液分泌的GLP-1类似物[4,5]。近年来对GLP-1的研
究发现其对心血管系统具有保护作用，如改善血管内皮功能，调节心
率、血压，改善心功能，改善心肌缺血等[6]。本实验通过免疫组织化
学法观察了在GLP-1类似物的干预下糖尿病心肌病大鼠心脏PPAR-α，
ET-1的表达情况，结果显示：糖尿病心肌病组PPAR-α阳性表达率为
（6.50±2.67）％，明显低于大剂量治疗组（46.13±4.42）％与小剂
量组（22.50±2.78）％，ET-1阳性表达率（66.63±5.66）％明显高
于大剂量治疗组（15.75±4.00）％与小剂量组（45.75±5.50）％（P
＜0.05）。大剂量治疗组与小剂量组相比PPAR-α阳性表达率高，ET-1
阳性表达率低（P＜0.05）。可见，在DMC中，ET-1的表达与心肌纤
维化具有相关性，促进了心肌纤维化；而PPAR-α的表达与ET-1的表
达相反，即DMC中PPAR-α的表达减少。通过GLP-1类似物的干预，
PPAR-α表达增加，ET-1表达减弱，且具有剂量依赖性。
本实验通过给予GLP-1类似物对DCM大鼠进行治疗来探讨GLP-1
类似物可能是通过剂量依赖性的激活PPAR-α受体，从而下调ET-1的
表达，对DCM大鼠心肌纤维化起到一定的改善作用，从而延缓DCM
的进展。目前GLP-1类似物对糖尿病心肌病的治疗报道较少，其作用
机制尚不清楚，还需结合临床实验深入研究，为治疗心脏疾病开阔新
的领域。
参考文献
[1]  黄娅茜,王宪,孔炜.糖尿病心肌发病机制的研究进展[J].生理科
学进展,2010,41(1): 31-36.
[2]  周彬,钱孝贤.糖尿病心肌病的研究进展[J].新医学,2010,41(3):
197-199.
[3]  李瑞芳,段冷昕,乐康,等.PPAR-α激活对ET-1诱导的心肌肥大
和转录因子NFATc4的影响[J].中国病理生理杂志,2009,25(6):
1046-1050.
[4]  Perry T,Greig NH.Enhancing central nervous system endogenous 
GLP-1 receptor pathways for intervention in Alzheimer′s disease
[J].CurrA lzheim er Res,2005,2(3):377-385.
[5]  Greig NH,Mattson MP,Perry T,et al.New therapeutic strategies
and drug candidates for neurodegenerative diseases:p53 andTNF2
{alpha} inhibitors,and GLP-1 recep tor agonists[J].Ann NY Acad 
Sci,2004,1035:290-315.
[6]  Barragan JM,Rodrguez RE,Bzquez E.Changes in arterial bloodp
ressure and heart rate induced by glu cagon-l ike pept ide-1-(7-36) 
amide in rats[J] .Am J Physio,l 1994,266 (3 Pt 1):459-466.
表1 各组大鼠心脏组织PPAR-α、ET-1表达阳性率比较(％，χ— ±s)
指标
糖尿病心肌病
组(n=8)
小剂量治疗组
(n=8)
大剂量治疗组
(n=8)
P值
PPAR-α 6.50±2.67 22.50±2.78 46.13±4.42 ＜0.05
ET-1 66.63±5.66 45.75±5.50 15.75±4.00 ＜0.05
黄皮果水提物总糖含量与体外抗氧化活性的研究
许文举1    唐小荷2    庄  丽1
（1 中国海洋石油南海西部医院，广东 湛江 524002；2 湛江市第二人民医院，广东 湛江 524000）
【摘要】目的  研究黄皮果水提物的体外抗氧化作用，并测定其还原糖含量。方法  苯酚 - 硫酸比色法测定黄皮果水提取物的总糖含量；
Fenton法 和 FRAP（Ferric Reducing Antioxidant Powder）法，以维生素 C为阳性对照、比色法测定，评价黄皮果水提取物的抗氧化作用。
结果  黄皮果提取物中总糖含量为 58.20％，且体外能明显清除羟自由基、和还原 Fe3+，并且体外抗氧化作用存在剂量依赖关系。结论  黄
皮果水提物中糖类物质是主要的抗氧化活性物质。
【关键词】黄皮果；总糖；含量测定；抗氧化
中图分类号：R282.710.5 文献标识码：B 文章编号：1671-8194（2012）11-0112-03
黄皮果为芸香科黄皮属黄皮（Clausena lansium）的果实，具有健
脾开胃、行气解郁之功效，现代药理学研究也发现了其中的有效成分
黄皮具有保肝、促智、抗氧化等作用[1-3]。对于抗氧化作用物质基础
的研究，主要以多糖、黄酮、有机酸类为主。黄皮果的果实不但有黄
酮、有机酸，且富含糖，果胶等物质，若作为天然的抗氧化保健食品
开发具有较高的社会及经济价值。有资料显示，黄皮果水提取物中黄
DOI:10.15912/j.cnki.gocm.2012.11.042
• 实验研究 • 1132012 年 4 月第 10 卷 1 期 中 国 医 药 指 南
酮的含量不足0.01%[4]，不宜作为有效物质的指控指标。而黄皮果水提
物中富含大量的糖物质，评价其抗氧化作用的量效关系，并测定其含
量，可为进一步开发黄皮果相关的保健食品提供依据。
1 材料与方法
1.1 主要材料与试剂
黄皮果（市售）、葡萄糖标准品（中国药品生物制品检定所）、
TPTZ（2，4，6-三吡啶基三嗪，sigma公司）、其他相关试剂均为国
产分析纯。
1.2 主要仪器
UV-265紫外-可见分光光度计（日本岛津）；AY-120电子分析天
平（日本岛津）、手动单道可调式移液器（上海大龙）。
1.3 方法
1.3.1  FCW制备 
取黄皮果干品（去核）用刀切成小块，50℃鼓风干燥，粉碎，过
80目筛。称取样品100 g，水煎3 次，每次2h，抽滤并过滤，合并滤
液，浓缩至1g/mL供试品，放置4℃冰箱备用。
1.3.2 苯酚-硫酸比色法测定FCW总糖含量 
葡萄糖标准曲线制备：精密称取105℃干燥的葡萄糖标准品50 
mg，双蒸水定容至50mL，得1mg/mL对照品供试液备用。分别移取
供试液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL定容至100mL。并各取2.0mL稀释
液，加入6％ 苯酚1.0mL、浓硫酸5.0mL，静置10min，摇匀，室温放
置20min，分光光度法在波长490nm处测定吸光度值，以蒸馏水为空
白对照，求得吸光度A值与葡萄糖浓度C的标准曲线方程。准确吸取
1g/mL黄皮果水提物供试液0.5mL，加水定容至50mL容量瓶，同上述
苯酚-硫酸法测出吸光度A值，代入标准曲线，算出总糖浓度C。总糖
含量的计算依据以下公式：总糖（%）= 100Cf/0.5 ×100％ ；式中，C
为供试品溶液中葡萄糖质量浓度，F为多糖的校正系数（取0.9），0.5
为黄皮果质量。
1.3.3  Fenton法测定FCW清除羟自由基的能力 
取6mmol/L FeSO4溶液1mL，分别加入5、10、20、40、80μL浓
度黄皮果提取物水溶液，60mmol/L H2O2溶液0.5mL，定容至3mL，
10min后离心，取2mL上清液，加入6mmol/L水杨酸溶液1mL，摇匀，
静置30min，作供试品溶液；用1mL蒸馏水代替H2O2 溶液，按上述步
骤制备空白溶液；在5l5nm处分别测出其吸光度值Ai（n）。以1.5mL
蒸馏水代替FCW水溶液按上述操作配制样品溶液；同时用蒸馏水
0.5mL代替H2O2 溶液，同上操作配制空白溶液；在517nm处测其吸光
度值As。用Vc溶液以同样方法测定作为阳性对照。按以下公式计算：
清除率％ =（As-Ai）/As×100%。
1.3.4  FRAP法测定FCW的总还原力 
加入Fe3+-TPTZ 工作液4.4mL（300mmol/LpH 3.6醋酸盐缓冲液
25mL，10mmol/L TPTZ溶液2.5mL，20 mmol/LFeC13溶液2.5mL），
5、10 、20、40、80μL的FCW水溶液，摇匀，静置10min作为供试品
溶液；用蒸馏水2.5mL代替FeC13溶液，同上述步骤操作配制空白溶
液，在波长590nm处测定吸光度值，代入以吸光度为纵坐标对Fe3+浓
度为横坐标所得的标准曲线求出FRAP值；阳性对照用Vc溶液以同样
方法测定。
2 结 果
2.1 黄皮果水提取物总糖含量依照
1.3.2的方法，得到标准曲线方程：求得其回归方程为：A490nm= 
0.0561C+0.0207（R=0.9971）；计算得出黄皮果水提取物的总糖含量
为58.20％。
2.2 黄皮果水提取物清除羟自由基的能力
由图1、图2可见，FCW和Vc对羟自由基的清除作用都存在剂量依
赖关系，清除作用明显。从效价分析，FCW的效价仅为Vc的十分之
一。这提示FCW中存在能有效清除羟自由基的成分。
2.3 黄皮果水提取物总还原力的测定从图3的结果可以看到，FCW和
Vc都能还原Fe3+，还原能力与其浓度成线性关系，但FCW的总抗氧化
能力弱于明显弱于Vc。
3 讨 论
氧化应激（Oxidative Stress，OS）是指机体内氧自由基的产生与清
除失去平衡，或外源性氧化剂的过量摄入导致活性氧（reactive OXygen 
species，ROS）在体内堆积引起细胞毒性[5]，并被认为是导致衰老和疾
病的一个重要因素。因此，通过适量补充外源性活性氧清除剂，可预
防这类损伤和病变的发生与发展。目前通过体外实验评价氧化应激的
定量方法主要包括：Fenton、DPPH和FRAP三种。由于DPPH法以检测
脂溶性成分为主，而我们的提取物主要评估水提取的抗氧化活性，因
此没将其纳入实验体系。实验结果表明，黄皮果水提取物对Fenton和
FARP的2个抗氧化评估体系中，均体现出良好的抗氧化活性，且呈剂
量依赖关系，与文献报道的[6]，•OH自由基的清除率与膳食纤维中多
糖组分有关。但与维生素C相比，其效价有所不如，Vc为单一组分，
其含有的多烯醇结构具有强烈的抗氧化作用，而FCW为混合物，化学
成分及结构尚不明确，这可能是造成二者总抗氧化能力差异的原因之
一。对FCW中总糖物质的含量进行测定，结果发现糖类物质占提取物
总量的50%以上，提示糖类成分是FCW抗氧化体系中的主要成分。
参考文献
[1]  潘瑞乐,朱兆仪.黄皮属药用植物研究进展[J].国外医药植物药
分册,1990,5(6):243-247 .
[2]  黄雪松,罗丽君.黄皮果、黄皮核中黄皮酰胺的测定[J].食品工
业科技,2006,27(6):172-173.
[3]  Wu YQ,Liu LD,Wei HL,et al.Different effects of nine clausenamide
ennatiomers on  liver glutathione biosynthesis and glutathione 
S-transferase activity  in mice[J].Acta Pharmacologica Sinica,
2006,27(8):1024-1028.
[4]  Prasad KN,Hao J,Yi C,et al.Antioxidant and Anticancer Activities 
图1  FCW清除羟自由基的能力 图2  Vc清除羟自由基的能力 图3  FCE与维生素C的还原力比较
114 • 实验研究 • April 2012, Vol.10, No.11 Guide of China Medicine
of Wampee (Clausena lansium (Lour.) Skeels) Peel[J].J Biomed 
Biotechnol,2009,11(55):1-6.
[5]  Simonian NA,Coyle JT Oxidative stress  in neurodegenerative 
diseases[J].Ann Rev Phmamaol Toxico1,1996,36:83-106.
[6]  程安玮,杜方岭.膳食纤维抗氧化作用及其机理的研究[J].农产
品加工,2009,(1):68.
分散固相萃取——气相色谱法测定五味子中的敌敌畏和甲胺磷的残留量
刘  平 
（丹东市食品药品检验所，辽宁 丹东 110023）
【摘要】目的  建立测定五味子中滴滴畏和甲胺磷残留量的毛细管气相色谱分析方法。方法  五味子样品以分散固相萃取的方法进行处理。
以 FPD 为检测器，色谱柱：DB-1701 石英毛细管柱（25m×0.32mm i.d），载气：高纯氮气，流速 20mL/min；氢气流速 75mL/min； 空气
流速 100mL/min。 程序升温：初始温度：120℃； 最终温度：220℃；升温速率：10℃ /min。进样口温度 250℃；检测器温度 300℃。进样
方式：无分流。结果 滴滴畏和甲胺磷的测定浓度在 0.025~2.0 μg/mL时，浓度与信号呈线性。当信噪比为 2时，滴滴畏的最低检出量为 0.3ng，
甲胺磷的最低检出量为 0.2ng。滴滴畏的平均回收率为：89.5％，RSD为 2.4%；甲胺磷平均回收率为 91.2% RSD为 1.7%。结论 此方法操
作简便、准确、可靠。可用于五味子中滴滴畏和甲胺磷残留量的测定。
【关键词】气相色谱法；五味子；滴滴畏；甲胺磷；残留量
中图分类号：R282.710.3 文献标识码：B 文章编号：1671-8194（2012）11-0114-02
中药材农药残留危害身体健康，引起进国家的高度重视。五味子
是我市主要的地产中药材之一，每年都有大量的产品出口，可由于没
有建立很好的药材种植基地和进行有效的农药残留检测，因此使得五
味子的出口受到很大的限制。本文作者要摸索一种简便快速灵敏的测
定方法，建立五味子中的有机磷农药残留量测定方法。为药材出口提
供有效的数据。查阅相关文献[1,2]，发现提取过程复杂，即浪费时间又
浪费试药。经过很多实验，作者最终选用分散固相萃取技术，运用安
捷伦Agilent Sampliq QuEChERS 分散固相萃取包来处理样品，建立了
下文中测定五味子中滴滴畏和甲胺磷残留量方法。实验过程如下。
1 仪器与试剂
气相色谱仪6890N 及安捷伦色谱工作站；   FPD检测器 ； 离心
机：Sigma 3-18k型，（德国赛多利斯）； Agilent Sampliq QuEChERS 
分散固相萃取包；滴滴畏、甲胺磷标准品：纯度均为99.0％（北京陆
桥公司）。
2 标准溶液制备
精密称取滴滴畏、甲胺磷标准品，共置同一容器中，加二氯甲烷
溶解，制成分别含滴滴畏、甲胺磷1μg/mL的溶液。
3 样品预处理
取样品匀浆，精密称取10.00g，置萃取管中，加入乙腈20.00 mL，
振摇提取40s，再加入硫酸镁氯化钾萃取试剂包，强力震摇1min，静
置分层，用5mol/L氢氧化钠试液调节pH值为5.0。再振摇1min，静置，
精密量取上清液7mL，置净化管中，振摇1min。于8000转/min，离心
5min。
4 色谱条件及测定结果
色谱柱：DB-1701石英毛细管柱（25m×0.32mm i.d）；载气：高纯
氮气，流速20mL/min； 氢气流速75mL/min；空气流速100mL/min；程
序升温：初始温度120℃，升温速率10℃/min。最终温度220℃，进样口
温度250℃；检测器温度300℃；进样方式：无分流。 进样量：1μL。
滴滴畏、甲胺磷标准溶液以及样品测定的色谱图如下（图1和图2）。
5 结果与讨论
5.1 样品预处理条件的选择和优化
采用分散固相萃取，此为安捷伦公司推出的参照方法之一，作者
根据检材的特点优化前处理步骤，如提取溶剂的的用量等，使样品处
理过程简化，提高了提取效率。国家标准[1]中有机磷农药的测定基本
上采用丙酮，二氯甲烷提取净化的方法，浪费时间，而且丙酮不易分
层，容易导致回收率偏低。
5.2 线性关系及最低检出限
精密称取5份匀浆后空白样品，每份10g。分别准确加入标准品溶
液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0mL，按上述样品预处理步骤
进行提取净化，取1μL样品注入气相色谱仪进行测定。结果见表1。
 将上面实验结果，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标进行线性
图1 敌敌畏、甲胺磷标准溶液气相色谱图
tr=2.837min 滴滴畏；tr=3.431min 甲胺磷
图2 被测样品气相色谱图
表1 线性关系测定结果
浓度(C) 0.25μg/mL 0.5μg/mL 1.0μg/mL 2.0μg/mL 3.0μg/mL
滴滴畏(A) 158 289 557 1008 1483
甲胺磷(A) 121 235 432 868 1259