全 文 ：收稿日期：２０１２－１２－２８
作者简介：黄　艳（１９８７－），助理研究员，硕士研究生，主要从事中药、天
然药化学成分与质量标准研究。
＊广西卫生厅重点课题，广西中药质量标准研究重点实验室系统性研
究项目（桂中重系２０１２０１）资助。
＊＊通讯作者：刘布鸣，男，研究员，硕士研究生导师，主要从事中药、天
然药化学成分与质量标准研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｕｂｕｍｉｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ。
广西科学Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　２０１３，２０（１）：７９～８１
亮叶杨桐叶中山茶苷Ａ对照品的制备及鉴定＊
Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ　ｏｆ
Ｃａｍｅｌｉａｎｉｎ　Ａ　ｆｒｏｍ　Ｌｅａｖｅ　ｏｆ　Ａｄｉｎａｎｄｒａ　ｎｉｔｉｄａ　Ｍｅｒｒ．ｅｘ
Ｌｉ
黄　艳１，２，李文琪１，２，刘　元１，２，张宁宁１，２，李振麟１，２，刘布鸣１，２＊＊
ＨＵＡＮＧ　Ｙａｎ１，２，ＬＩ　Ｗｅｎ－ｑｉ　１，２，ＬＩＵ　Ｙｕａｎ１，２，ＺＨＡＮＧ　Ｎｉｎｇ－ｎｉｎｇ１，２，ＬＩ　Ｚｈｅｎ－ｌｉｎ１，２，
ＬＩＵ　Ｂｕ－ｍｉｎｇ１，２
（１．广西中药质量标准研究重点实验室，广西南宁　５３００２２；２．广西壮族自治区中医药研究院，广
西南宁　５３００２２）
（１．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｔｉｔｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｓｔａｒｄａｎｄｓ，Ｎａｎｎｉｎｇ，
Ｇｕａｎｇｘｉ，５３００２２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｍｅｄｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉ－
ｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｎｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ，５３００２２，Ｃｈｉｎａ）
摘要：为了研究从亮叶杨桐（Ａｄｉｎａｎｄｒａ　ｎｉｔｉｄａ　Ｍｅｒｒ．ｅｘ　Ｌｉ）叶中制备山茶苷Ａ对照品的方法，利用硅胶柱层析、
重结晶和反相制备高效液相色谱对亮叶杨桐乙醇提取物进行分离纯化，以 ＨＰＬＣ对山茶苷 Ａ进行纯度检查和
含量测定，并通过各种波谱手段等对其进行结构确证。结果从亮叶杨桐叶分离、纯化出山茶苷 Ａ对照品，质量
分数＞９９．０％。该方法制备出的山茶苷Ａ对照品符合中药化学对照品的相关要求，可以作为亮叶杨桐药材和
含亮叶杨桐成药质量控制，以及中药药效物质基础用的化学对照品。
关键词：亮叶杨桐　山茶苷Ａ　对照品　制备
中图法分类号：Ｒ２８４．２，Ｏ６５７　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００５－９１６４（２０１３）０１－００７９－０３
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　ｃａｍｅｌｉａｎｉｎ　Ａ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｖｅ
ｏｆ　Ａｄｉｎａｎｄｒａ　ｎｉｔｉｄａ　Ｍｅｒｒ．ｅｘ　Ｌｉ，ｅｔｈａｎｏｌ－ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｅａｖｅ　ｏｆ　Ａｄｉｎａｎｄｒａ　ｎｉｔｉｄａ　Ｍｅｒｒ．ｅｘ　Ｌｉ
ｗａｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ＲＰ－ＨＰＬＣ　ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｃｏｌｕｍｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ａｎｄ　ｒｅｃｒｙｓｔａｌｉ－
ｚａｔｉｏｎ．Ｉｔｓ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｓｐｅｃｔｒａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　Ｃａｍｅｌｉａｎｉｎ　Ａ
ｗａｓ　ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｖｅ　ｏｆ　Ａｄｉｎａｎｄｒａ　ｎｉｔｉｄａ　Ｍｅｒｒ．ｅｘ　Ｌｉ．Ｔｈｅ　ｐｕｒｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｆｅｒ－
ｅｎｃｅ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｌｅｓｓ　ｔｈａｎ　９９．０％．Ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ａｂｏｖｅ－ｍｅｎｔｉｏｎｅｄ　ｍｅｔｈ－
ｏｄ　ｉｓ　ａｃｃｏｒｄｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｄｅｍａｎｄｓ　ｏｆ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ　ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｍａｔｅｒｉａ
ｍｅｄｉｃａ．Ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ａ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｈｅｒｂａｌ
ｍｅｄｉｃｉｎｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｄｉｎａｎｄｒａ　ｎｉｔｉｄａ　Ｍｅｒｒ．ｅｘ　Ｌｉ，ｃａｍｅｌｉａｎｉｎ　Ａ，ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ，ｐｒｅｐｅｒａｔｉｏｎ
　　亮叶杨桐（Ａｄｉｎａｎｄｒａ　ｎｉｔｉｄａ　Ｍｅｒｒ．ｅｘ　Ｌｉ）系山
茶科（Ｔｈｅａｃｅａｅ）杨桐属（Ａｄｉｎａｎｄｒａ）植物，又名亮
叶黄瑞木，亮叶红淡木，俗称石崖（芽）茶［１］，主要分布
在我国广西、广东和贵州等省区，资源丰富。广西民
间使用亮叶杨桐叶作为代茶饮料已有悠久历史，并具
有较明显的消炎、解毒、止血和降压等功效［２］。民间
还常用以治疗腮腺炎、痢疾和高血压等疾病［３］。亮叶
杨桐中主要含有黄酮类、三萜皂苷等化合物［４～７］，其
中黄酮类成分具有抑菌、抗氧化、抗 肿 瘤 等 活
性［８～１２］。其中，山茶苷 Ａ是亮叶杨桐叶中主要的黄
酮类物质，含量可高达２５％以上［１３］。袁尔东［１０］等人
９７广西科学　２０１３年２月　第２０卷第１期
DOI:10.13656/j.cnki.gxkx.2013.01.012
采用大孔树脂法对亮叶杨桐叶中山茶苷Ａ进行分离
纯化，但是其纯度只达到９１．７％，未能达到对照品纯
度（大于９８％）的要求。目前山茶苷Ａ对照品的研究
未见有报道，亮叶杨桐药材和含亮叶杨桐的复方药物
均缺乏有效的特征成分定量的质量控制手段。因此，
本实验采用８０％乙醇提取亮叶杨桐叶子得到浸膏，
再经硅胶柱色谱、重结晶和制备 ＨＰＬＣ等方法制备
山茶苷Ａ对照品，方法简便，为药材及相关制剂的质
量控制和药效基础研究提供对照物质。
１　仪器和材料
　　日本岛津ＵＶ－２５５０型紫外光谱仪；德国Ｂｒｕｋｅｒ
ＴＥＮＳＯＲ　２７ＦＴ　ＩＲ 红外光谱仪；德国 ＢＲＵＫＥＲ
ＡＶＡＮＣＥ　６００核磁共振波谱仪；美国Ｔｈｅｒｍｏ　ｆｉｓｈｅｒ
ＬＴＱ　Ｏｒｂｉｔｒａｐ　Ｖｅｌｏｓ质谱仪；美国 Ｗａｔｅｒｓ　１５２５、Ｗａ－
ｔｅｒｓ　２９９８检测器液相色谱仪。２００～３００目柱层析硅
胶（青岛海洋化工公司出品），氘代甲醇，内标 ＴＭＳ；
甲醇、乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水；其它溶媒为分析
纯。亮叶杨桐药材经广西中医药研究院助理研究员
黄云 峰 鉴 定 为 山 茶 科 杨 桐 属 植 物 亮 叶 杨 桐
（Ａｄｉｎａｎｄｒａ　ｎｉｔｉｄａ　Ｍｅｒｒ．ｅｘ　Ｌｉ），采自广西金秀。
２　方法和结果
２．１　对照品的制备
２．１．１　药材提取和化合物分离
　　亮叶杨桐叶子１０ｋｇ，粉碎，８０％的乙醇回流提取
２次，滤过，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得亮叶杨
桐浸膏。
　　将浸膏经硅胶柱色谱（２００～３００目柱层析硅
胶），用醋酸乙酯－甲醇（１００∶５～１００∶２０）梯度洗脱，
收集醋酸乙酯－甲醇（１００∶２０）洗脱部分，用ＴＣＬ检
测，收集含有山茶苷Ａ的流分，合并，浓缩，用甲醇氯
仿重结晶，得到山茶苷Ａ粗结晶。
２．１．２　制备 ＨＰＬＣ分离纯化山茶苷Ａ对照品
　　将粗结晶用适量８０％甲醇溶解，上制备 ＨＰＬＣ，
色谱条件：色谱柱为 Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃ－１８柱（１０ｍｍ×
２５０ｍｍ，１０#ｍ），流动相为乙腈－水（２１∶７９），检测波
长为３３０ｎｍ，流速为６ｍｌ／ｍｉｎ，柱温为室温，进样量为
１ｍｌ，按色谱峰收集山茶苷 Ａ组分，并对所收集的每
一份洗脱液利用分析 ＨＰＬＣ检测，色谱条件：色谱柱
为Ｃ－１８柱；流动相为乙腈∶０．２％磷酸溶液＝２１∶
７９；检测波长３３０ｎｍ；流速１ｍｌ／ｍｉｎ）合并保留时间相
同而且纯度大于９８％以上的山茶苷Ａ，减压浓缩，得
到纯度大于９８％以上的山茶苷Ａ对照品。该对照品
为白色粉末。
２．２　对照品的结构确证
　　将制备得到的白色粉末热溶于甲醇，ｍｐ　１９６～
１９７℃。ＵＶλＥｔＯＨ　ｍａｘ　ｎｍ：２６３，３３０。ＩＲν ＫＢｒｍａｘ
ｃｍ－１：３３８５（－ＯＨ），１７３２（－Ｏ－Ｃ＝Ｏ），１６３２（共轭
－Ｃ＝Ｏ），１６００、１５１５、１４９５、１４５０（苯环）。ＭＳ（ＥＳＩ）
ｍ／ｚ：６４３［Ｍ＋Ｎａ］＋，６２１［Ｍ＋Ｈ］＋，４７５，２７１。１　ＨＮ－
ＭＲ（ＭｅＯＤ，６００ＭＨｚ，ＴＭＳ）δｐｐｍ：１．２０（３Ｈ，ｄ，Ｃ６″
－Ｈ３），１．８５（３Ｈ，ｓ，ＡｃＣＨ３），３．３０～４．４５（１０Ｈ，ｍ），
５．３０（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１），５．４４（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１″），６．５１（１Ｈ，
ｓ，Ｈ－６），６．５４（１Ｈ，ｓ，Ｈ－３），６．６３（１Ｈ，ｓ，Ｈ－８），
６．９２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８，Ｈ－３′，Ｈ－５′），７．１８（２Ｈ，ｄ，Ｊ
＝８．８，Ｈ－２′，Ｈ－６′）。１３　Ｃ　ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，１２５ＭＨｚ，
ＴＭＳ）δｐｐｍ：１６４．５（Ｃ－２），１０６．６（Ｃ－３），１７９．５（Ｃ
－４），１５８．９（Ｃ－５），１００．９（Ｃ－６），１６２．４（Ｃ－７），
９７．７（Ｃ－８），１６０．９（Ｃ－９），１０８．８（Ｃ－１０），１２３．３（Ｃ
－１′），１２９．１（Ｃ－２′，６′），１１７．０（Ｃ－３′，５′），１６３．７（Ｃ
－４′），１０１．８（Ｃ－１″），７４．２（Ｃ－２″），７８．３（Ｃ－３″），
７９．６（Ｃ－４″），７５．０（Ｃ－５″），６４．１（Ｃ－６″），９９．４（Ｃ－
１），７１．７（Ｃ－２），７２．３（Ｃ－３），７２．２（Ｃ－４），７０．３
（Ｃ－５），１８．１（Ｃ－６），１７２．６（ＯＣＯＣＨ３），２０．４
（ＯＣＯＣＨ３）。以上数据与文献［４］报道的山茶苷 Ａ
一致，因此确证该化合物为山茶苷 Ａ（Ｃａｍｅｌｉａｎｉｎ
Ａ）。结构见图１。
图１　山茶苷Ａ的结构式
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｃａｍｅｌｉａｎｉｎ　Ａ
２．３　对照品的纯度检查
２．３．１　薄层色谱法检查
　　取制备得到的对照品山茶苷 Ａ适量，用甲醇制
１ｍｇ／ｍｌ的溶液，在同一聚酰胺薄膜上，按不同的点
样量梯度点样，点样量分别为０．５#ｇ、１#ｇ、３#ｇ、５#
ｇ、１０#ｇ。用３个不同系统的展开剂：（１）乙醇－丙酮－
水（７∶５∶６）；（２）甲醇 －冰醋酸 －水（９∶０．５∶０．５）；
（３）乙醇－水（１∶１）进行展开，喷以３％三氯化铝乙醇
溶液，晾干，１０５℃加热１ｍｉｎ，置紫外灯（３６５ｎｍ）下检
视。结果在薄层色谱中，可见蓝色的单一荧光斑点，
均未见有杂质斑点。
０８ Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．２０Ｎｏ．１，Ｆｅｂｒｕａｒｙ　２０１３
２．３．２　高效液相色谱法纯度检查
　　精密称取于１０５℃干燥至恒重的对照品山茶苷
Ａ适量，加８０％甲醇水溶液制成每１ｍｌ含１ｍｇ的溶
液，色 谱 条 件：Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃ１８ 色 谱 柱 （４．６ｍｍ×
２５０ｍｍ，１０#ｍ），流动相为乙腈－０．２％磷酸溶液（２１
∶７９）；检测波长３３０ｎｍ；进样量１０#ｌ；流速为１ｍｌ／
ｍｉｎ，柱温为室温。在该色谱条件下，对照品山茶苷
Ａ的 ＨＰＬＣ色谱见图２，用二级管阵列检测器ＤＡＤ
进行峰纯度检查为单一纯物质峰，用面积归一化法计
算山茶苷Ａ含量为９８．５％。改变流动相和波长，甲
醇－０．２％磷酸溶液（４６∶５４），３３０ｎｍ为检测波长和乙
腈－０．２％磷酸溶液（２１∶７９），２６０ｎｍ为检测波长分别
检测，结果对照品为１个主峰，改变流动相分析未见
有异常峰。
图２　山茶苷Ａ的 ＨＰＬＣ色谱
Ｆｉｇ．２　ＨＰＬＣ　ｏｆ　Ｃａｍｅｌｉａｎｉｎ　Ａ
３　结束语
　　山茶苷Ａ为亮叶杨桐的特征和有效成分，适合
作为中药化学对照品。本实验提取、分离、纯化得到
的山茶苷Ａ，符合中药化学对照品的相关要求，可以
作为亮叶杨桐药材和含亮叶杨桐中成药质量控制，以
及中药药效物质基础研究用的化学对照品。
参考文献：
［１］　中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志：第５０
卷［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９８：２８－２９．
［２］　陈美珍，余杰，佘纲哲，等．野生石芽茶营养成分与药用
成分的分析［Ｊ］．天然产物研究与开发，１９９６，８（１）：８５．
［３］　袁萍，王国亮，钱少华，等．石崖茶活性活性成分分析
［Ｊ］．食品科学，１９９９（８）：７５．
［４］　王英，陈四宝，倪洁，等．亮叶杨桐的化学成分研究［Ｊ］．
中国药科大学学报，２００３，３４（５）：４０７－４０９．
［５］　王英，叶文才，殷志琦，等．亮叶杨桐的三萜皂苷类成分
［Ｊ］．药学学报，２００８，４３（５）：５０４－５０８．
［６］　刘元，李振麟，张宁宁，等．亮叶杨桐叶的化学成分研究
［Ｊ］．中国民族民间医药杂志，２０１２，２１（１７）：６２－６３．
［７］　刘元，宋志钊，李文琪．亮叶杨桐指纹图谱研究［Ｊ］．中国
实验方剂学杂志，２０１１，１７（６）：７１－７３．
［８］　袁尔东，肖仔君，刘本国，等．亮叶杨桐叶总黄酮提取及
抑菌活性的研究［Ｊ］．现代食品科技，２００９，２５（３）：３０５－
３０８．
［９］　余杰，陈美珍．亮叶杨桐中类黄酮提取及其抗氧化、抑菌
作用的研究［Ｊ］．汕头大学学报：自然科学版，１９９７，１
（２）：５２－５８．
［１０］　袁尔东，宁正祥，刘本国．亮叶杨桐叶中山茶苷 Ａ的分
离纯化及其抗氧化性能的研究［Ｊ］．食品工业科技，
２００８（４）：２１２－２１４．
［１１］　刘本国，战宇，宁正祥．亮叶杨桐叶黄酮类提取物的鉴
定及其抗氧化活性研究［Ｊ］．林产化学与工业，２００８，２８
（１）：６－１０．
［１２］　袁尔东，王菊芳，刘本国．亮叶杨桐叶类黄酮的提取及
其抗氧化活性研究［Ｊ］．食品科学，２００９（１４）：１０５－１０９．
［１３］　刘本国．亮叶杨桐叶中类黄酮的提取、鉴定与修饰［Ｄ］．
广州：华南理工大学，２００７．
（责任编辑：邓大玉）　　
（上接第７８页Ｃｏｎｔｉｎｕｅ　ｆｒｏｍ　ｐａｇｅ　７８）
社团联等，其中有３个正好在本文选取的５０个用户
之内。综合来看，桂林理工大学学生会和桂工之声在
该条微博中起到核心的作用，这与前面的中间人分
析、派系分析等的结果基本吻合。类似的例子在新浪
微博“桂林理工大学”片区中还有很多，在此不一一
列举。
参考文献：
［１］　刘军．整体网分析讲义：ＵＣＩＮＥＴ软件实用指南［Ｍ］．上
海：上海人民出版社，２００９．
［２］　周涛，汪秉宏，韩筱璞，等．社会网络分析及其在舆情和
疫情防控中的应用［Ｊ］．系统工程学报，２０１０，１２：７４２－
７５３．
［３］　平亮，宗利永．基于社会网络中心性分析的微博信息传
播研究———以Ｓｉｎａ微博为例［Ｊ］．中国科技信息，２０１０，
６：１６３－１６４．
［４］　尹书华．基于复杂网络的微博用户关系网络特性研究
［Ｊ］．西南师范大学学报：自然科学版，２０１１，１２：５７－６１．
［５］　Ｂａｒａｂａｓｉ　Ａ　Ｌ，Ａｌｂｅｒｔ　Ｒ，Ｊｅｏｎｇ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｏｗｅｒ－Ｌａｗ　ｄｉｓ－
ｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗｏｒｌｄ　ｗｉｄｅ　ｗｅｂ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００，２８７
（５６４１）：２１１５．
［６］　Ｗａｓｓｅｍｅｎ　Ｓ，Ｆａｕｓｔ　Ｋ．Ｓｏｃｉａｌ　ｎｅｔｗｏｒｋ　ａｎａｌｙｓｉｓ：ｍｅｔｈｏｄｓ
ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｍ］．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ：Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｐｒｅｓｓ，１９９４．
［７］　Ｂａｒａｂｏｓｉ　Ａ．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｍｅｃｈａｎｉｃｓ　ｏｆ　ｃｏｍｐｌｅｘ
ｎｅｔｗｏｒｋｓ［Ｊ］．Ｒｅｖ　Ｍｏｄ　Ｐｈｙｓ，２００２，７４（１）：４７－９７．
［８］　黄艳．微博的媒体特征以及传播媒体的应对［Ｊ］．东南传
播，２０１１（１）：８４－８７．
［９］　王陆．典型的社会网络分析软件工具及分析方法［Ｊ］．中
国电化教育，２００９（４）：９５－１００．
［１０］　林聚任．社会网络分析：理论、方法与应用［Ｍ］．北京：
北京师范大学出版社，２００９．
（责任编辑：尹　闯）　　
１８广西科学　２０１３年２月　第２０卷第１期