全 文 ：第４１卷　第１１期
２０１３年１１月
西北农林科技大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）
Ｖｏｌ．４１ Ｎｏ．１１
Ｎｏｖ．２０１３
网络出版时间：２０１３－１０－２２　１６：５８
网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／６１．１３９０．Ｓ．２０１３１０２２．１６５８．０１１．ｈｔｍｌ
辽东丁香枝体外抗氧化活性及对小鼠
酒精性肝损伤的保护作用
　［收稿日期］　２０１２－１２－１３
　［基金项目］　吉林省高等学校大学生创新训练计划项目（２０１２０２２）
　［作者简介］　韩佳宏（１９８８－），女，黑龙江双鸭山人，在读硕士，主要从事天然产物化学成分研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｑｃｇ１２６６２１＠１２６．ｃｏｍ
　［通信作者］　张　晶（１９７１－），女，吉林长春人，教授，主要从事天然产物化学成分研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｊｉｎｇ０７０１＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
韩佳宏，杨文华，蔡恩博，宛　瑛，陈秋连，赵红丹，张　晶
（吉林农业大学 中药材学院，吉林 长春１３０１１８）
［摘　要］　 【目的】研究辽东丁香枝体外抗氧化能力及对小鼠酒精性肝损伤的保护作用，为该植物的开发利用
提供参考。【方法】制备辽东丁香枝乙醇提取物，通过对其总酚含量以及清除ＤＰＰＨ、ＡＢＴＳ＋·能力和还原性能的测
定，评估辽东丁香枝醇提取物的体外抗氧化活性；建立小鼠酒精性肝损伤模型，灌胃高（２０ｇ／ｋｇ）、中（１０ｇ／ｋｇ）、低（５
ｇ／ｋｇ）剂量（以生药计）的辽东丁香枝水提取物，研究其对小鼠肝脏系数、血清ＡＬＴ和ＡＳＴ活性及肝组织中 ＭＤＡ含
量的影响。【结果】辽东丁香枝醇提取物具有一定的抗氧化活性，其清除ＤＰＰＨ、ＡＢＴＳ＋·的ＩＣ５０值分别为０．０７０　１
和０．３０８ｍｇ／ｍＬ；辽东丁香枝醇提取物具有较强的还原性，其总酚含量为６４．８μｇ／ｍｇ。高、中、低剂量的辽东丁香枝
水提物均能显著降低酒精性肝损伤小鼠血清中的ＡＬＴ和ＡＳＴ活性以及肝组织中的ＭＤＡ含量（Ｐ＜０．０５），其中高剂
量灌胃还可使小鼠肝脏系数明显降低（Ｐ＜０．０５）。【结论】辽东丁香枝具有较好的体外抗氧化活性和保肝作用，并且
对小鼠酒精性肝损伤保护作用的剂量依赖性不强，可将其开发为保肝新药。
［关键词］　辽东丁香枝；自由基；体外抗氧化；酒精性肝损伤
［中图分类号］　Ｒ２８５．５；Ｑ９４５．９５ ［文献标志码］　Ａ ［文章编号］　１６７１－９３８７（２０１３）１１－００２６－０６
Ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｓｙｒｉｎｇａ　ｗｏｌｆｉ　Ｃ．Ｋ．Ｓｃｈｎｅｉｄ　ｂｒａｎｃｈ
ａｎｄ　ｉｔｓ　ｅｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｅｔｈａｎｏｌ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ
ＨＡＮ　Ｊｉａ－ｈｏｎｇ，ＹＡＮＧ　Ｗｅｎ－ｈｕａ，ＣＡＩ　Ｅｎ－ｂｏ，ＷＡＮ　Ｙｉｎｇ，
ＣＨＥＮ　Ｑｉｕ－ｌｉａｎ，ＺＨＡＯ　Ｈｏｎｇ－ｄａｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｊｉｎｇ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｍａｔｅｒｉａｌ，Ｊｉｌｉｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ，Ｊｉｌｉｎ１３０１１８，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ａｉｍｅｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｓｙｒｉｎｇａ　ｗｏｌｆｉｉ　Ｃ．Ｋ．
Ｓｃｈｎｅｉｄ　ｂｒａｎｃｈ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ａｌｃｏｈｏｌｉｃ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎ　ｍｉｃｅ，ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｒｅｆｅｒ－
ｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｐｌａｎｔ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｅｘ－
ｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍＳ．ｗｏｌｆｉｉ　ｂｒａｎｃｈ　ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ＤＰＰＨ　ａｎｄ　ＡＢＴＳ＋·ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｓｓａｙｓ，ａｎｄ　ｒｅ－
ｄｕｃｉｎｇ　ｐｏｗｅｒ　ａｎｄ　ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｓ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｔｈｅ　ｅｔｈａｎｏｌ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ　ｍｏｄｅｌ　ｗａｓ　ｅｓ－
ｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｇａｖａｇｉｎｇ　ｈｉｇｈ（２０ｇ／ｋｇ），ｍｉｄｄｌｅ（１０ｇ／ｋｇ），ａｎｄ　ｌｏｗ（５ｇ／ｋｇ）ｄｏｓａｇｅｓ（ｃａｌ－
ｃｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｃｒｕｄｅ　ｄｒｕｇ）ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍＳ．ｗｏｌｆｉｉ　ｂｒａｎｃｈ　ｏｎ　ｌｉｖｅｒ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ＡＬＴ　ａｎｄ　ＡＳＴ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
ｉｎ　ｓｅｒｕｍ　ａｎｄ　ＭＤＡ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｍｉｃｅ．【Ｒｅｓｕｌｔ】Ｔｈｅ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍＳ．ｗｏｌｆｉｉ　ｂｒａｎｃｈ　ｈａｄ
ｃｏｍｐａｒａｂｌｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ＩＣ５０ｖａｌｕｅｓ　ｆｏｒ　ＤＰＰＨ　ａｎｄ　ＡＢＴＳ＋·ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｓｓａｙｓ
ｗｅｒｅ　０．０７０　１ｍｇ／ｍＬ　ａｎｄ　０．３０８ｍｇ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍＳ．ｗｏｌｆｉｉ　ｂｒａｎｃｈ　ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ
ｓｔｒｏｎｇ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｐｏｗｅｒ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｓ　ｗａｓ　６４．８μｇ／ｍｇ．Ｓｅｒｕｍ　ＡＬＴ，ＡＳＴ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ，ａｎｄ
ＭＤＡ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｗｉｔｈ　ａｌｃｏｈｏｌｉｃ　ｌｉｖｅｒ　ｄａｍａｇｅ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ａｌ　ｄｏｓａｇｅ
ｇｒｏｕｐｓ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍＳ．ｗｏｌｆｉｉ　ｂｒａｎｃｈ（Ｐ＜０．０５）．Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｒｅｍａｒｋａｂｌｙ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｔｈｅ　ｌｉｖｅｒ　ｃｏｅｆ－
ｆｉｃｉｅｎｔ（Ｐ＜０．０５）．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｔｈｅ　ｂｒａｎｃｈ　ｏｆ　Ｓ．ｗｏｌｆｉｉ　ｓｈｏｗｅｄ　ｇｏｏｄ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｈｅｐ－
ａｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ　ｏｎ　ｄｏｓｅ　ｗａｓ　ｎｏｔ　ｓｔｒｏｎｇ．Ｔｈｕｓ，ｉｔ　ｉｓ　ａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｈｅｐａｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｎｅｗ
ｄｒｕｇ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｔｈｅ　ｂｒａｎｃｈｅｓ　ｏｆ　Ｓｙｒｉｎｇａ　ｗｏｌｆｉｉ　Ｃ．Ｋ．Ｓｃｈｎｅｉｄ；ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ；ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃ－
ｔｉｖｉｔｉｅｓ；ｃｈｒｏｎｉｃ　ａｌｃｏｈｏｌｉｃ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｉｎｊｕｒｙ
　　辽东丁香（Ｓｙｒｉｎｇａ　ｗｏｌｆｉｉ　Ｃ．Ｋ．Ｓｃｈｎｅｉｄ）为木
犀科（Ｏｌｅａｃｅａｅ）丁香属（Ｓｙｒｉｎｇａ）植物，落叶灌木或
小乔木，多生于杂木林内或林缘等处［１］，广泛分布于
东北及内蒙古地区［２］。辽东丁香花淡紫红色［３］，花
絮大而花朵多，有芳香气味，常被作为庭院观赏植
物［２］。２０１１年，笔者对不同采收期辽东丁香枝中的
黄酮及多糖含量进行了研究，发现不同采收期辽东
丁香枝中的总黄酮和多糖含量差异显著［４］。
适量的自由基对机体有益，过量则可引发ＤＮＡ
损伤、老年化、癌症、心血管疾病［５－８］、肝损伤等病症。
酒精性肝损伤（Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ　ｌｉｖｅｒ　ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＬＤ）是指
长期或大量饮用含乙醇饮料造成的肝脏疾患，常见
的此类疾病有酒精性肝炎、酒精性脂肪肝和肝硬化
等。酒精的摄入可使肝内产生大量的超氧阴离子自
由基［９］，而氧自由基和脂质过氧化介导的损伤是导
致酒精性肝病的重要机制［１０］。目前国内外对辽东
丁香枝药理活性的研究尚鲜有报道，本试验对辽东
丁香枝的体外抗氧化活性及其对昆明小鼠酒精性肝
损伤的保护作用进行了研究，旨在探讨辽东丁香枝
的药理作用，并为其开发利用提供依据。
１　材料与方法
１．１　材　料
１．１．１　植物材料　供试植物采自长春市净月潭国
家森林公园，经吉林大学从登立副教授鉴定为木犀
科 （Ｏｌｅａｃｅａｅ）丁香属 （Ｓｙｒｉｎｇａ）植物辽东丁香
（Ｓ．ｗｏｌｆｉｉ　Ｃ．Ｋ．Ｓｃｈｎｅｉｄ　ｂｒａｎｃｈｅｓ，ＳＷＣ－Ｂ）的枝。
１．１．２　试验动物　６～８周龄的昆明种小鼠，体质
量１８～２２ｇ／只，购于吉林大学基础医学院实验动物
中心，合格证号：ＳＣＸＫ（吉）２０１１－０００１。所有小鼠放
置在同一个实验室内饲养，自然光照，提供足够的食
物和水。室内温度保持在２０～２５℃，相对湿度为
４０％～７０％。
１．１．３　试剂与仪器　２，２－联氮－二（３－乙基－苯并噻
唑－６－磺酸）二铵盐（２，２′－ａｚｉｎｏ－ｂｉｓ（３－ｅｔｈｙｌｂｅｎｚｏ－ｔｈｉ－
ａｚｏｌｉｎｅ－６－ｓｕｌｐｈｏｎｉｃ　ａｃｉｄ，ＡＢＴＳ）、２，６－二叔羟基苯
甲酚 （Ｂｕｔｙｌａｔｅｄ　ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅ，ＢＨＴ），ＳＩＧＭＡ－
ＡＬＤＲＩＣＨ公司；１，１－二苯基－２－三硝基苯肼（１，１－
Ｄｉｐｈｅｎｙｌ－２－ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ，ＤＰＰＨ），Ｂｏｍｅｉ公司；考
马斯亮蓝，大连美仑生物技术有限公司；护肝片，吉
林修正药业产品；牛血清白蛋白、ＡＬＴ试剂盒、ＡＳＴ
试剂盒、ＭＤＡ试剂盒，南京建成生物工程研究所；
５６°红星二锅头，北京红星酿酒有限公司；Ｆｏｌｉｎ－Ｃｉ－
ｏｃａｌｔｅｕ试剂、过硫酸钾、铁氰化钾、三氯乙酸、三氯
化铁、无水碳酸钠、无水乙醇、甲醇等，均为国产分析
纯试剂。
ＬＰＺ５－２型离心机，北京医用离心机厂；Ｔ６新世
纪紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责
任公司；１０１－Ａ型数显式电热恒温干燥箱，上海阳光
实验仪器有限公司；ＬＡ１１４型电子天平，常熟市百
灵天平仪器有限公司；ＫＱ－２５０ＤＢ型数控超声波清
洗器，昆山市超声仪器有限公司。
１．２　辽东丁香枝提取物的抗氧化试验
１．２．１　辽东丁香枝乙醇提取物的制备　称取干燥
粉碎后的辽东丁香枝６ｋｇ，先用１２倍量的体积分数
５０％乙醇浸泡１２ｈ，３０ ℃超声（１００Ｈｚ）提取６０
ｍｉｎ，抽滤得滤液。将滤渣再分别用１０和８倍体积
的乙醇浸提２次，合并滤液，减压浓缩后６０℃水浴
蒸成浸膏。
１．２．２　总酚含量的测定［１１］　１）总酚标准曲线绘
制。精确称取标准品没食子酸０．００４　０ｇ于１００ｍＬ
容量瓶中，甲醇定容。分别移取０．５，１．０，２．０，４．０，
８．０ｍＬ上述没食子酸标准液于２５ｍＬ容量瓶中，
加入Ｆｏｌｉｎ－Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ试剂２．５ｍＬ，摇匀；在０．５～８
ｍｉｎ内加无水Ｎａ２ＣＯ３ 溶液（７５ｇ／Ｌ）２ｍＬ，５０℃水
浴加热５ｍｉｎ，冷却后蒸馏水定容，摇匀，静置，于
７６０ｎｍ波长下测定吸光度值（ＯＤ７６０），以蒸馏水作
空白。以没食子酸质量浓度为Ｘ轴，吸光度为Ｙ 轴
绘制标准曲线，求得其回归方程为：Ｙ＝０．１５６　２　Ｘ－
０．０４５，Ｒ２＝０．９９９，在０．８～１２．８μｇ／ｍＬ内线性关
系良好。
２）样品溶液的配制及总酚含量测定。精确称
７２第１１期 韩佳宏，等：辽东丁香枝体外抗氧化活性及对小鼠酒精性肝损伤的保护作用
取辽东丁香枝浸膏０．０２０　０ｇ于１０ｍＬ容量瓶中，
用甲醇溶解定容后，吸取０．５ｍＬ置于２５ｍＬ容量
瓶，之后按照１．２．２节方法测定吸光度值，用蒸馏水
作空白对照，计算辽东丁香枝提取物中的总酚含量。
１．２．３　对 ＤＰＰＨ 自由基的清除活性　参照文献
［１２］的方法并加以改进。精确称取上述浸膏及对照
品ＢＨＴ 各 ０．０７５０ｇ，分别配制成质量浓度为
０．００９，０．０１８，０．０３７，０．０７５，０．１５０，０．３１０，０．６２０
ｍｇ／ｍＬ的样品溶液。按表１方法加样，反应３０
ｍｉｎ，在５１５ｎｍ波长处测定吸光度值（ＯＤ５１５），以甲
醇为空白，平行３次试验（此过程需避光，ＤＰＰＨ溶
液的质量浓度为０．０４ｍｇ／ｍＬ）。
ＤＰＰＨ 自由基清除率 ＝（Ａ－Ｂ＋Ｃ）／Ａ×
１００％，其中Ａ、Ｂ、Ｃ分别代表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组试验所测
得的吸光值（ＯＤ５１５）。采用ＳＰＳＳ１６．０软件计算辽
东丁香枝提取物清除ＤＰＰＨ的ＩＣ５０值。
表１　辽东丁香枝提取物清除ＤＰＰＨ自由基加样表
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｄｅｓｉｇｎ　ｏｆ　ｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇ　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ
ｒａｄｉｃａｌ　ｕｓｉｎｇ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍＳ．ｗｏｌｆｉｉ　ｂｒａｎｃｈ
组别
Ｇｒｏｕｐｓ
加样量
Ａｄｄ　Ｓａｍｐｌｅ
Ⅰ ３ｍＬ
甲醇＋３ｍＬ　ＤＰＰＨ溶液
３ｍＬ　ｍｅｔｈａｎｏｌ＋３ｍＬ　ＤＰＰＨ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ
Ⅱ
３ｍＬ样品或ＢＨＴ溶液＋３ｍＬ　ＤＰＰＨ溶液
３ｍＬ　ｓａｍｐｌｅ　ｏｒ　ＢＨＴ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ＋３ｍＬ　ＤＰＰＨ　ｓｏｌｕ－
ｔｉｏｎ
Ⅲ ３ｍＬ
样品或ＢＨＴ溶液＋３ｍＬ甲醇
３ｍＬ　ｓａｍｐｌｅ　ｏｒ　ＢＨＴ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ＋３ｍＬ　ｍｅｔｈａｎｏｌ
１．２．４　对ＡＢＴＳ＋·的清除活性　参照文献［１２］的
方法并加以改进。精确称取１．２．１中的浸膏及对照
品ＢＨＴ 各０．０３０　０ｇ，分别配制成质量浓度为
０．０１８，０．０３７，０．０７５，０．１５０，０．３１０，０．６２０，１．２４０
ｍｇ／ｍＬ的样品溶液。按表２方法加样，反应６ｍｉｎ，
在７３４ｎｍ波长处测定吸光度值，以无水乙醇为空
白，平行３次试验（此过程需避光，ＡＢＴＳ＋·溶液在
７３４ｎｍ处的吸光度为０．７０±０．０２）。
表２　辽东丁香枝提取物清除ＡＢＴＳ＋·加样表
Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｄｅｓｉｇｎ　ｏｆ　ｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇ　ＡＢＴＳ＋·
ｕｓｉｎｇ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍＳ．ｗｏｌｆｉｉ　ｂｒａｎｃｈ
组别
Ｇｒｏｕｐｓ
加样量
Ａｄｄ　ｓａｍｐｌｅ
Ⅰ ３ｍＬ　ＡＢＴＳ
＋·溶液＋１５８μＬ无水乙醇
３ｍＬ　ＡＢＴＳ＋·ｓｏｌｕｔｉｏｎ＋１５８μＬ　ｐｕｒｅ　ａｌｃｏｈｏｌ
Ⅱ
３ｍＬ　ＡＢＴＳ＋·溶液＋１５８μＬ样品或ＢＨＴ溶液
３ｍＬ　ＡＢＴＳ＋·ｓｏｌｕｔｉｏｎ＋１５８μＬ　ｓａｍｐｌｅ　ｏｒ　ＢＨＴ
ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ａｌｃｏｈｏｌ
Ⅲ
３ｍＬ无水乙醇＋１５８μＬ样品或ＢＨＴ溶液
３ｍＬ　ｐｕｒｅ　ａｌｃｏｈｏｌ＋１５８μＬ　ｓａｍｐｌｅ　ｏｒ　ＢＨＴ　ｓｏｌｕ－
ｔｉｏｎ
　　ＡＢＴＳ＋·清除率＝（Ａ－Ｂ＋Ｃ）／Ａ×１００％，其
中Ａ、Ｂ、Ｃ分别代表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组试验所测得的吸光
度值（ＯＤ７３４）。采用ＳＰＳＳ１６．０软件计算辽东丁香
枝提取物清除ＡＢＴＳ＋·的ＩＣ５０值。
１．２．５　还原能力测定　参考Ｉｓａｂｅｌ等［１３］的方法并
加以改进。准确称取１．２．１中制备的浸膏及对照品
ＢＨＴ各０．０３０　０ｇ，分别配成质量浓度为０．００９，
０．０１８，０．０３７，０．０７５，０．１５０，０．３１０，０．６２０ｍｇ／ｍＬ
的样品溶液。分别移取各浓度样品液２．５ｍＬ于试
管中，加入等体积ｐＨ＝６．６的磷酸盐缓冲液和铁氰
化钾溶液（质量分数为１％），混匀，５０℃水浴反应２０
ｍｉｎ。取出，冷却，加１００ｇ／Ｌ三氯乙酸溶液２．５ｍＬ，
于２００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ。移取上清液２．５ｍＬ，按Ｖ
（上清液）∶Ｖ（蒸馏水）∶Ｖ（１ｇ／Ｌ　ＦｅＣｌ３ 溶液）＝５∶
５∶１的比例加入相应试剂，摇匀，静置１０ｍｉｎ。以
ＢＨＴ为对照，甲醇为空白，平行３次试验，采用紫外
分光光度法，于７００ｎｍ处测定吸光度值（ＯＤ７００）。
１．３　辽东丁香枝的保肝作用
１．３．１　辽东丁香枝水提取物的制备　称取干燥粉
碎后的辽东丁香枝１００ｇ，用１０倍体积的蒸馏水浸提
１ｈ后，沸水浴３０ｍｉｎ，冷却，过滤。滤渣再重复此操
作２次，合并３次滤液，浓缩成浸膏状，并称质量。
１．３．２　小鼠酒精性肝损伤模型的建立　小鼠适应
性喂养３ｄ后，选出健康者，随机分成６组：对照组、
阳性组、阴性组及辽东丁香枝水提取物高、中、低剂
量组，每组小鼠雌雄各半。按成人剂量折算小鼠的
灌胃剂量为：高剂量组２０ｇ／ｋｇ，中剂量组１０ｇ／ｋｇ，
低剂量组５ｇ／ｋｇ；阳性组灌胃修正护肝片 １．６
ｇ／ｋｇ；对照组、阴性组每天分别用生理盐水（２０
ｍＬ／ｋｇ）、５６°红星二锅头（２０ｍＬ／ｋｇ）灌胃。各组小
鼠每天灌胃１次，阳性组和辽东丁香枝提取物高、中、
低剂量组４ｈ后再灌胃５６°红星二锅头１次。连续１０
ｄ，末次灌胃后，各组小鼠均进行禁食不禁水处理。
１．３．３　各生化指标的检测　１）各组小鼠一般活动
情况观察。试验期间观察并记录各组小鼠的进食、
体温、毛色、精神等状况。
２）各组小鼠血清中丙氨酸转氨酶（Ａｌａｎｉｎｅ
ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＡＬＴ）及谷草转氨酶（Ａｓｐａｒｔａｔｅ
ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＡＳＴ）的检测。各组小鼠禁食不
禁水处理１６ｈ后，摘除眼球取血，将血液静置１ｈ
后，用低温高速离心机在４℃、３　５００ｒ／ｍｉｎ的条件
下离心１０ｍｉｎ后，分离血清，置于－２０℃冰箱保
存，取出后按照试剂盒说明书中的方法进行测定，计
算血清中的ＡＬＴ和ＡＳＴ活性。
３）各组小鼠肝脏系数及肝组织中 ＭＤＡ含量
的测定。摘除眼球的同时，颈椎脱臼处死小鼠，剖腹
８２ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４１卷
取肝脏，用４℃生理盐水冲洗，滤纸吸干，称质量，计
算各组小鼠的肝脏系数。然后准确称取０．４ｇ肝
脏，剪碎后置于玻璃匀浆器中，以肝脏质量／生理盐
水体积为１∶９的比例制成肝匀浆。将匀浆液在４
℃、３　５００ｒ／ｍｉｎ的条件下离心２０ｍｉｎ。取上清液，按
照试剂盒说明书中的方法测定并计算 ＭＤＡ含量。
１．４　统计方法
试验数据用 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ　Ｅｘｃｅｌ软件进行处理，并
用ＳＰＳＳ１６．０统计软件包进行统计与分析，各组数
据均以“平均值±标准差（珚ｘ±ｓ）”表示。组间比较采
用方差分析，０．０１＜Ｐ＜０．０５表示差异显著。
２　结果与分析
２．１　辽东丁香枝乙醇提取物的抗氧化能力
经测定，辽东丁香枝乙醇提取物中的总酚含量
达到６４．８μｇ／ｍｇ。从表３可以看出，辽东丁香枝具
有一定的抗氧化活性，并且随着样品质量浓度的增
大，辽东丁香枝对ＤＰＰＨ自由基、ＡＢＴＳ＋·的清除
率逐渐升高，还原能力逐渐增强；在质量浓度为
０．３１０ｍｇ／ｍＬ时，辽东丁香枝乙醇提取物对ＤＰＰＨ
自由 基 的 清 除 率 达 到 ９３．３０％，接 近 ＢＨＴ 的
９４．２７％；在质量浓度为１．２４０ ｍｇ／ｍＬ 时，其对
ＡＢＴＳ＋·的清除率达到９９．００％，接近 ＢＨＴ 的
９９．６９％，说明在某一特定质量浓度下，辽东丁香枝
清除ＤＰＰＨ、ＡＢＴＳ＋·的能力较强。辽东丁香枝乙
醇提取物清除ＤＰＰＨ的ＩＣ５０为０．０７０　１ｍｇ／ｍＬ，说
明其具有较好的抗氧化活性。表４显示，辽东丁香
枝乙醇提取物具有一定的还原能力，且随其质量浓
度的增加，还原能力逐渐增强。
表３　辽东丁香枝乙醇提取物对ＤＰＰＨ、ＡＢＴＳ＋·的清除活性及其ＩＣ５０
Ｔａｂｌｅ　３　Ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍＳ．ｗｏｌｆｉｉ　ｂｒａｎｃｈ　ｏｎ　ｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇ　ＤＰＰＨ　ａｎｄ
ＡＢＴＳ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ＩＣ５０ｖａｌｕｅｓ
质量浓度／
（ｍｇ·ｍＬ－１）
Ｃｎｏｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
清除率／％Ｃｌｅａｒａｎｃｅ　ｒａｔｅ
ＤＰＰＨ
辽东丁香枝Ｓ．ｗｏｌｆｉｉ　 ＢＨＴ
ＡＢＴＳ＋·
辽东丁香枝Ｓ．ｗｏｌｆｉｉ　 ＢＨＴ
０．００９　 ９．７６±０．０７０　 ３０．８２±０．０６２ － －
０．０１８　 ２２．４６±０．０７５　 ４２．６５±０．０５２　 ０．７７±０．０３５　 ７．８２±０．０８９
０．０３７　 ２５．９０±０．０３０　 ５３．０５±０．０３５　 ４．３１±０．０１７　 １２．４２±２．８２３
０．０７５　 ３５．０６±０．０２０　 ８９．４３±０．０３６　 １０．００±３．２９１　 ４２．７９±０．０３６
０．１５０　 ７７．１３±０．０５６　 ９３．３７±０．０１７　 ２１．２３±０．０５３　 ６３．５０±０．０５２
０．３１０　 ９３．３０±０．０４０　 ９４．２７±０．０２０　 ４２．４６±３．８８６　 ８７．２７±０．０７０
０．６２０　 ９２．４８±０．０１７　 ９８．１４±０．０４６　 ７０．３１±０．０６２　 ９７．７０±０．０６６
１．２４０ － － ９９．００±０．０９２　 ９９．６９±０．０４６
ＩＣ５０／（ｍｇ·ｍＬ－１） ０．０７０　１　 ０．０２１　７　 ０．３０８　 ０．０９７
表４　辽东丁香枝乙醇提取物的还原能力（ＯＤ７００）
Ｔａｂｌｅ　４　Ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍＳ．ｗｏｌｆｉｉ　ｂｒａｎｃｈ（ＯＤ７００）
样品
Ｓａｍｐｌｅ
质量浓度／（ｍｇ·ｍＬ－１）Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
０．００９　 ０．０１８　 ０．０３７　 ０．０７５　 ０．１５０　 ０．３１０　 ０．６２０
辽东丁香枝Ｓ．ｗｏｌｆｉｉ　 ０．０６６±０．０１１　０．０９１±０．００８　０．１３７±０．０１０　０．２１７±０．０１４　０．４１６±０．００９　０．７３１±０．０２８　１．２６９±０．０２９
ＢＨＴ　 ０．１４１±０．００２　０．１５０±０．０２０　０．３２８±０．０３９　０．８０６±０．０２９　１．５０１±０．００９　２．３５６±０．０１７　２．８２８±０．０１５
２．２　辽东丁香枝水提取物的保肝作用
２．２．１　对小鼠日常活动的影响　在小鼠酒精性肝
损伤造模前，各小鼠喜食、好动，运动快速，体温正
常，毛密而有光泽，精神状态良好。造模后，对照组
小鼠进食正常，活动与以前无异；阳性组小鼠情况基
本正常；阴性组小鼠进食欠佳，懒于活动，动作迟缓，
弓背喜卧，体温稍微下降，毛稀疏而干，精神萎靡；辽
东丁香枝水提取物高、中、低剂量组小鼠在进食、活
动等方面较阴性组有所好转。
２．２．２　对小鼠血清ＡＬＴ和ＡＳＴ的影响　表５显
示，与对照组相比，阴性组小鼠血清中的 ＡＬＴ和
ＡＳＴ活性均显著升高（Ｐ＜０．０５），说明本试验造模
成功。与阴性组比较，阳性组和辽东丁香枝水提取
物高、中、低剂量组小鼠血清中的 ＡＬＴ和 ＡＳＴ活
性均显著降低（Ｐ＜０．０５）；与辽东丁香枝水提取物
中、低剂量组相比，高剂量组降低 ＡＬＴ、ＡＳＴ的能
力十分显著（Ｐ＜０．０５）。该结果表明，辽东丁香枝
水提取物各剂量组均可显著降低小鼠血清中的
ＡＬＴ及ＡＳＴ活性，其中以高剂量组的作用效果最
佳。
２．２．３　对小鼠肝脏系数及肝组织 ＭＤＡ含量的影
响　表６显示，与对照组相比，阴性组小鼠肝脏系数
９２第１１期 韩佳宏，等：辽东丁香枝体外抗氧化活性及对小鼠酒精性肝损伤的保护作用
及肝组织中的ＭＤＡ含量显著升高（Ｐ＜０．０５）；与阴
性组相比，辽东丁香枝水提取物高剂量组小鼠肝脏
系数明显降低（Ｐ＜０．０５），说明高剂量辽东丁香枝
水提物对小鼠酒精性肝脏肿大的抑制作用较好，并
且与中、低剂量组相比，辽东丁香枝水提取物高剂量
组的作用效果最好（Ｐ＜０．０５）；而与阴性组相比，辽
东丁香枝水提取物各剂量组均可显著降低小鼠肝组
织中的 ＭＤＡ含量（Ｐ＜０．０５），且药效均接近阳性
组，尤以中、低剂量组效果较佳，但二者之间并无显
著性差异。
表５　辽东丁香枝水提取物对小鼠血清ＡＬＴ和ＡＳＴ活性的影响 （ｎ＝８）
Ｔａｂｌｅ　５　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍＳ．ｗｏｌｆｉｉ　ｂｒａｎｃｈ　ｏｎ　ＡＬＴ　ａｎｄ　ＡＳＴ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｉｎ　ｓｅｒｕｍ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｍｉｃｅ　ｇｒｏｕｐ（ｎ＝８）
组别
Ｇｒｏｕｐｓ
ＡＬＴ活性／
（Ｕ·Ｌ－１）
ＡＬＴ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
ＡＳＴ活性／
（Ｕ·Ｌ－１）
ＡＳＴ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
组别
Ｇｒｏｕｐｓ
ＡＬＴ活性／
（Ｕ·Ｌ－１）
ＡＬＴ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
ＡＳＴ活性／
（Ｕ·Ｌ－１）
ＡＳＴ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
对照组
ＣＫ　ｇｒｏｕｐ ３４．６８±４．９０　 １０９．３±１０．２
辽东丁香枝高剂量组
Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ
ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　Ｓ．ｗｏｌｆｉｉ
３９．４３±５．５８ｂｃｄ　 １１９．７±８．４０ａｂｄ
阳性组
Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｇｒｏｕｐ ３７．２９±６．５１ｂ １１５．０±１６．６ｂ
辽东丁香枝中剂量组
Ｍｉｄｄｌｅ　ｄｏｓｅ
ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　Ｓ．ｗｏｌｆｉｉ
４６．２９±５．２２ａｂ　 １２３．９±１６．４ａｂ
阴性组
Ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｇｒｏｕｐ ６０．３０±５．０７ａ １４７．４±８．４６ａ
辽东丁香枝低剂量组
Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｐｕ
ｏｆ　Ｓ．ｗｏｌｆｉｉ
４８．６２±６．３３ａｂ　 １３４．６±１０．９ａｂ
　　注：数据后的ａ，ｂ，ｃ，ｄ分别表示与对照组、阴性组、中剂量组、低剂量组相比差异显著 （Ｐ＜０．０５）。下表同。
Ｎｏｔｅ：ａ，ｂ，ｃ，ａｎｄ　ｄ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｍｉｄｄｌｅ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ，
ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｂｌｏｗ．
表６　辽东丁香枝水提取物对小鼠肝脏系数及肝组织中 ＭＤＡ含量的影响（ｎ＝８）
Ｔａｂｌｅ　６　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍＳ．ｗｏｌｆｉｉ　ｂｒａｎｃｈ　ｏｎ　ｌｉｖｅｒ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ａｎｄ　ＭＤＡ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｍｉｃｅ　ｇｒｏｕｐ（ｎ＝８）
组别
Ｇｒｏｕｐｓ
肝脏系数／％
Ｌｉｖｅｒ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ
ＭＤＡ含量／
（ｎｍｏｌ·ｍｇ－１）
ＭＤＡ　ｃｏｎｔｅｎｔ
组别
Ｇｒｏｕｐｓ
肝脏系数／％
Ｌｉｖｅｒ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ
ＭＤＡ含量／
（ｎｍｏｌ·ｍｇ－１）
ＭＤＡ　ｃｏｎｔｅｎｔ
对照组
ＣＫ　ｇｒｏｕｐ ４．３５０±０．１４　 １０．６５±１．４５
辽东丁香枝高剂量组
Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ
ｏｆ　Ｓ．ｗｏｌｆｉｉ
４．８２６±０．０７ａｂｃｄ　 １３．８３±１．２８ａｂ
阳性组
Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｇｒｏｕｐ ４．４２５±０．１８ｂ １２．４９±２．３２ａｂ
辽东丁香枝中剂量组
Ｍｉｄｄｌｅ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ
ｏｆ　Ｓ．ｗｏｌｆｉｉ
５．１１０±０．１４ａ １３．２３±１．８７ａｂ
阴性组
Ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｇｒｏｕｐ ５．１５１±０．３１ａ ２１．１３±２．２９ａ
辽东丁香枝低剂量组
Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ
ｏｆ　Ｓ．ｗｏｌｆｉｉ
５．１０１±０．１２ａ １３．５５±１．４６ａｂ
３　讨　论
本研究通过测定辽东丁香枝醇提取物清除ＤＰ－
ＰＨ自由基、ＡＢＴＳ＋·的能力及其还原性和总酚含
量，探讨了辽东丁香枝的抗氧化活性。试验结果表
明，辽东丁香枝醇提取物具有较好的抗氧化活性，在
其质量浓度为０．００９～０．６２０ｍｇ／ｍＬ时，随着辽东
丁香枝醇提取物质量浓度的升高，其抗氧化能力也
随之增强。基于辽东丁香枝具有较好的抗氧化能
力，可以将其开发为天然抗氧化剂引入市场，充分发
挥中药作为天然药物的优势，避免使用人工合成剂
带来的毒性和致癌［１４］危害。
在小鼠酒精性肝损伤试验中，灌入酒精可使小
鼠肝脏系数升高，血清 ＡＬＴ和 ＡＳＴ活性明显上
升，同时肝组织 ＭＤＡ含量明显增加，表明本研究造
模成功。辽东丁香枝水提取物各剂量组可使上述指
标明显下降，表明其对小鼠酒精性肝损伤有很好的
保护作用；此外，试验结果还显示，与阴性组相比，辽
东丁香枝水提取物高剂量组可以明显降低小鼠的肝
脏系数及其血清中的 ＡＬＴ、ＡＳＴ活性。值得注意
的是，辽东丁香枝水提取物高剂量组在某些生化指
标，如降低肝组织中的 ＭＤＡ含量方面，其作用效果
不如中、低剂量组好，表明辽东丁香枝在防治小鼠酒
精性肝损伤方面剂量依赖性不强，推测其作为药物
使用时效价强度较小，有望将其开发为保肝新药。
药用植物中多含有能清除自由基、抑制脂质过
氧化的抗氧化成分，能够对肝细胞起到保护作用。
因此，从中药抗氧化作用的角度研究防治酒精性肝
损伤的药物具有重要的现实意义。本研究就是在证
实辽东丁香枝具有较好的体外抗氧化活性的基础
上，探讨其对小鼠酒精性肝损伤的保护作用，结果表
明，辽东丁香枝能够显著降低小鼠血清中的 ＡＬＴ
和ＡＳＴ活性及肝脏系数和肝组织中脂质过氧化终
产物 ＭＤＡ的含量，说明其对酒精性肝损伤有较好
的防治作用。
本课题组研究发现，多种丁香属植物具有较好
０３ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４１卷
的药理活性，比如小叶丁香的皮、暴马丁香的茎与
皮、紫 丁 香 的 叶 均 具 有 较 好 的 体 外 抗 氧 化 活
性［１１，１５－１６］，其中暴马丁香茎、皮对金黄色葡萄球菌、
巴氏菌、沙门氏菌等具有较好的抑制作用［１７］，但是
目前国内外对辽东丁香的化学成分及药理作用尚鲜
有研究。本试验首次对辽东丁香枝的体外抗氧化活
性及其对小鼠酒精性肝损伤的保护作用进行了研
究，结果表明，辽东丁香枝在体外抗氧化及保肝方面
具有较好的活性，此研究成果对于深层次探索辽东
丁香枝在食品和医药行业的应用具有重要意义，有
望将其开发成为天然抗氧化剂及保肝新药。
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ｒｅｔｉｃｕｌａｔｅ：Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ
ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｒａｃｅ　ｅｌｅｍｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，
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