全 文 ：. Reference ranges for uterine arterymean pulsatility index at 11
－ 41 weeks of gestation. J Ultrasound Obstet Gynecol 2008，32:
128 － 132．
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mester serum alpha － fetoprotein or human chorionic gonadotro-
pin. J Obstet Gynaecol Can 2008，30:198 － 206．
* 基金项目: 贵州省科技基金( 黔科合中药字［2011］LKZ7051 号) 。
* 通讯作者:靳凤云，女，教授，硕士研究生导师，研究方向为中药质量控制与新药开发。
收稿日期: 2012 － 11 － 20
用固相微萃取结合气相色谱 －质谱联用技术法测定
果上叶挥发性化学成分的报告*
赵留存，靳凤云* ，马四补，郑 豪
( 贵阳中医学院实验中心，贵州贵阳 550002)
摘要:目的:研究贵州民族药物果上叶挥发性化学成分。方法:固相微萃取法提取挥发油，气相色谱 －质谱联用技术
对挥发油成分进行分离鉴定，并采用面积归一化法确定各成分的相对质量分数。结果:共鉴定出 48 种化合物，占总峰面
积的 53. 84%. 主要化学成分为 2，6 －二叔丁基对甲酚( 17. 490) 、十六烷( 10. 478) 、石竹烯( 3. 566) 、柏木脑( 3. 536) 。结
论:本方法可用于果上叶中挥发性成分的快速分析，为进一步开发贵州民族药物果上叶提供了理论依据。
关键词:固相微萃取;气相色谱 －质谱联用技术;果上叶;挥发性成分
Doi: 10. 3969 / j. issn. 1002 － 1108. 2013. 04. 0015
中图分类号:R248. 1 文献标识码:A 文章编号:1002 － 1108( 2013) 04 － 0033 － 03
果上叶收载于 2003 年版《贵州省中药材、民族药材质
量标准》，为兰科石仙桃属植物云南石仙桃(Pholidota yun-
nanensis Rolfe)及兰科石仙桃属植物细叶石仙桃(Pholidota
cantonensis Rolfe)的干燥根状茎和假鳞茎［1］。果上叶以假
鳞茎为主全株入药，是治疗咳嗽的草药［2］，在贵州民间已
有较长的历史;云南石仙桃(Pholidota yunnanensis Rolfe)
在云南、贵州、四川等地作为民间用药，具有养阴、清肺、利
湿、消瘀等功效［3］;细叶石仙桃(Pholidota cantonensis
Rolfe)全草入药，同样具有养阴清肺、利湿消淤等功效，用
于肺结核、眩晕头痛，咳嗽吐血、痢疾等［4］。本品又称子上
叶、石枣子、岩果等，为土家族、苗族等民间常用药物，多用
于治疗风湿、肺炎、跌打损伤等［5，6］。目前国内只对果上叶
(Bulbophyllum odoratissimum)挥发性成分有报道［6］，但对
果上叶(Pholidota yunnanensis Rolfe)未见有报道，为更好
地利用果上叶的药用价值，以期对果上叶的合理利用和科
学研究提供实验依据，本实验以果上叶(Pholidota yun-
nanensis Rolfe)为原料，采用固相微萃取结合气相色谱 －质
谱联用技术(SPME － GC /MS)对果上叶挥发性成分进行分
析，现报告如下。
1 材料与仪器
1. 1 材料 药材采自六盘水市六枝特区，由贵阳中医学
院生药教研室孙庆文副教授鉴定为兰科石仙桃属植物云
南石仙桃(Pholidota yunnanensis Rolfe)的根状茎和假
鳞茎。
1. 2 仪器 HP6890 － 5973GC － MS 联用仪(美国安捷伦
公司) ，GMAGHST 磁力搅拌器、GMAGHST 温度传感器
(IKA公司) ，手动固相微萃取(SPME)装置(美国 Supelco
公司) ，100μm 聚二甲基硅氧烷纤维萃取头(PDMS －
DVB)。
2 方法
2. 1 SPME对样品萃取 先在磁力搅拌器上设置好萃取
样品所需要的温度，然后将 SPME的 100μm萃取纤维头在
气相色谱的进样口老化 3min，载气体积流量为 1. 0 mL /min
。待磁力搅拌器上的温度稳定好后，将放有样品的萃取瓶
放到磁力搅拌器上，将萃取纤维头插入萃取瓶中，分别在
萃取温度 50℃、60℃、70℃、80℃、85℃下顶空萃取 30min，
取出后在气相色谱仪进样口于 250℃气化脱附 3min 后，供
GC － MS 分析。
2. 2 气相色谱条件 HP5 － MS 石英弹性毛细管色谱柱(
30m × 0. 25 mm ×0. 25μm) ;载气为高纯氦气(99. 999%) ，
流量:1. 0mL /min;程序升温:初始温度 50℃，保持 2min，以
4℃ /min 升至 300℃，保持 2min. 进样口温度:250℃，不分
·33·
第 35 卷 第 4 期
2013 年 7 月
贵阳中医学院学报
JGCTCM
No. 4 Vol. 35
July 2013
流，柱前压 7. 61psi，溶剂延迟 3min。
2. 3 质谱条件 电离方式:EI源，电子能量 69. 9eV;离子
源温度 230℃;四极杆温度 150℃;传输线温度 280℃;质量
扫描范围 50 － 550amu;电子倍增器电压 1200V。
3 结果
用固相微萃取结合气相色谱 － 质谱(SPME － GC －
MS)联用技术分析果上叶的挥发性化学成分，通过反复优
化萃取温度得最佳果上叶挥发性化学成分总离子流图，结
果见(图 1) ，用峰面积归一化法计算各组分的相对百分含
量，结果见(表 1) ，共鉴定出 48 个化学成分，占总量
的 53. 84%。
图 1 果上叶挥发性成分总离子流图
表 1 果上叶挥发性化学成分分析(%)
NO． RT /min 化合物 分子式 相对分子质量 相对含量 /%
1 2. 05 Acetic acid醋酸 C2H4O2 60. 05 0. 316
2 3. 25 1 － Pentanol 1 －戊醇 C5H12O 88. 15 0. 054
3 4. 40 Hexanal 正己醛 C6H12O 100. 16 0. 029
4 4. 95 Ethanol，2，2＇－ oxybis －二乙二醇 C4H10O3 106. 12 0. 315
5 5. 52 Butanoic acid，3 － methyl －异戊酸 C5H10O2 102. 13 0. 017
6 6. 13 1 － Hexanol 正己醇 C6H14 O 102. 18 0. 093
7 6. 70 Cyclohexanol 环己醇 C6H12O 100. 16 0. 013
8 8. 09 . alpha. － Pinene α －蒎烯 C10H16 136. 23 0. 016
9 11. 19 Pulegone 胡薄荷酮 C10H16O 152. 24 0. 414
10 11. 29 Benzene，1 － methyl － 4 －(1 － methylethyl)－ 对伞花烃 C10H14 134. 22 0. 012
11 11. 46 1 － Hexanol，2 － ethyl － 2 －乙基己醇 C8H18O 130. 22 0. 196
12 11. 56 Eucalyptol 桉叶油醇 C10H18O 154. 25 0. 325
13 12. 79 Acetophenone 苯乙酮 C8H8O 120. 15 0. 021
14 12. 99
cis － alpha，alpha，5 － trimethyl － 5 － vinyltetrahydrofuran － 2 －
methano顺 － α，α － 5 －三甲基 － 5 －乙烯基四氢化呋喃 － 2
－甲醇
C10H18O2 170. 25 1. 183
15 13. 02 1 － Octanol 辛醇 C8H18O 130. 23 0. 054
16 14. 09 1，6 － Octadien － 3 － ol，3，7 － dimet hyl － 芳樟醇 C10H18O 154. 24 1. 940
17 14. 23 Nonanal 壬醛 C9H18O 142. 24 0. 228
·43· 贵阳中医学院学报 第 35 卷
NO． RT /min 化合物 分子式 相对分子质量 相对含量 /%
18 14. 55 Phenylethyl Alcohol苯乙醇 C8H10O 122. 16 0. 024
19 15. 79 Camphor 樟脑 C10H16O 152. 23 0. 214
20 16. 11
Cyclohexanone，5 － methyl － 2 － (1 － methylethyl)－，(2R －
cis)－ N /A
C10H18O 154. 24 0. 117
21 16. 69 1 － Nonanol 壬醇 C9H20O 144. 25 0. 120
22 16. 75 (－)－ Borneol (－)－莰醇 C10H18O 154. 24 0. 061
23 16. 95 DL － Menthol DL －薄荷醇 C10H20O 156. 27 0. 273
24 17. 40 Methyl Salicylate 水杨酸甲酯 C8H8O3 152. 15 0. 013
25 17. 57 alpha. － Terpineol α －松油醇 C10H18O 154. 25 0. 464
26 17. 91 Decanal 正癸醛 C10H20O 156. 27 0. 274
27 21. 56 Naphthalene，2 － methyl － 2 －甲基萘 C11H10 142. 21 0. 085
28 22. 73 Terpinyl acetate 乙酸松油酯 C12H20O2 196. 29 0. 523
29 24. 50 Tetradecane 十四烷 C14H30 198. 39 0. 744
30 24. 69 Naphthalene，1，3 － dimethyl － 1，3 －二甲基萘 C12H12 156. 22 0. 240
31 24. 82 Longifolene 长叶烯 C15H24 204. 35 0. 541
32 25. 01 (+)－ BETA － CEDRENE B －柏木烯 C15H24 204. 35 0. 438
33 25. 03 alpha － Cedrenealpha －柏木烯 C15H24 204. 36 1. 194
34 25. 14 Caryophyllene 石竹烯 C15H24 204. 35 3. 566
35 25. 99 (E)－ Geranylacetone 香叶基丙酮 C13H22O 194. 31 0. 579
36 26. 20 Naphthalene，1，2 － dimethyl － 1，2 －二甲萘 C12H12 156. 22 0. 056
37 26. 97 β － Ionone beta －紫罗酮 C13H20O 192. 30 0. 086
38 27. 33 β － selinene Β －瑟林烯 C15H24 204. 35 0. 280
39 27. 66 Pentadecane 十五烷 C15H32 212. 41 2. 290
40 27. 73 ButylatedHydroxytoluene 2，6 －二叔丁基对甲酚 C15H24O 220. 35 17. 490
41 28. 18 (+)－ DELTA － CADINENE δ －杜松烯 C15H24 204. 35 0. 242
42 28. 40 Naphthalene，1，6，7 － trimethyl － 2，3，5 －三甲基萘 C13H14 170. 25 0. 242
43 30. 14 Caryophyllene oxide 石竹素 C15H24O 220. 35 0. 844
44 30. 65 Hexadecane 十六烷 C16H34 226. 44 10. 478
45 30. 97 Cedrol 柏木脑 C15H26O 222. 37 3. 536
46 40. 26 n － Hexadecanoic acid棕榈酸 C16H32O2 256. 42 0. 243
47 47. 94 Tridecane 十三烷 C13H28 184. 37 0. 097
48 51. 59 Eicosane 二十烷 C20H42 282. 54 3. 263
4 讨论
4. 1 从表 1 果上叶挥发油成分中所占比率较大的有酚类
17. 490%，烷烃类 16. 872，烯烃类 16. 755%，其中含量较高
的化学成分有 2，6 － 二叔丁基对甲酚 17. 490，十六烷
10. 478，石竹烯 3. 566，柏木脑 3. 536，二十烷 3. 263，十五烷
2. 290，芳樟醇 1. 940，(1S，2R，5S)－ 2，6，6，8 －四甲基三环
［5. 3. 1. 01. 5］十一碳 － 8 －烯 1. 194，顺 － α，α － 5 －三甲基
－5 －乙烯基四氢化呋喃 － 2 －甲醇 1. 183，石竹素 0. 844，
十四烷 0. 744，香叶基丙酮 0. 579，长叶烯 0. 541，乙酸松油
酯 0. 523，这十四个化合物的含量占总量的 48. 171%。
4. 2 运用 GC － MS在对果上叶进行分离测定时，在萃取温
度上进行了反复优化，分别在 50℃，60℃，70℃，80℃，85℃
进行 萃 取，所 获 得 的 色 谱 峰 分 别 是 (49targets)
433components、(59targets)417components、(74targets)
448components、(86targets)563components、(78targets)
559components;从而确定了萃取温度在 80℃时为最佳萃取
温度，所获得的色谱峰最多，本实验为云南石仙桃的开发
提供了一些实验依据。
·53·第 4 期 赵留存，靳凤云，马四补，等．用固相微萃取结合气相色谱 －质谱联用技术法测定果上叶挥发性化学成分的报告
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* 基金项目: 2011 年贵州省科技厅基金课题，黔科合中药字［2011］LKZ7004 号．
* 通讯作者:唐良华，男，E － mail: tlhyyd@ 21cn. com.
修回日期: 2013 － 03 － 28
泻心汤对表皮葡萄球菌的抑菌
作用及动物实验研究*
敬 戈，杨彦君，唐良华* ，程志刚，熊 屹，易洪城，彭长英，吕 英
( 贵阳中医学院第二附属医院骨二科，贵州贵阳 550002)
摘要:目的:研究泻心汤对表皮葡萄球菌的抑菌效果及观察泻心汤对表皮葡萄球菌所致兔胫骨骨感染的治疗效果。
方法:1. 将直径 5mm的圆形无菌滤纸片浸入无菌的泻心汤中浸透后，置入均匀涂有 1. 5 × 106 CFU /ml 表皮葡萄球菌的
Mueller － Hinton( MH) 琼脂培养皿中，置 37℃温箱培养 24h，取出，观察抑菌效果，并测量抑菌圈大小。继续置 37 ℃培养箱
培养，于不同时相点测量抑菌圈大小，检测其对表皮葡萄球菌的抑制作用; 2. 制备新西兰大白兔胫骨中段表皮葡萄球菌骨
感染模型，动物分组及给药，通过白细胞( WBC) 、血沉( ESR) 、C －反应蛋白( CRP) 和 HE染色等不同时相点的数据检测泻
心汤治疗兔胫骨骨感染的抗感染效果。结果:实验 A组、实验 B组与实验 C组之间有非常显著性差异( P ＜ 0. 01) ;实验 B
组与实验 A组有差异，统计学无意义( P ＞ 0. 05) 。结论:中药方剂 －泻心汤体内体外实验均对表皮葡萄球菌有明显的抑菌
效果。
关键词:泻心汤;感染;抑菌实验;表皮葡萄球菌
Doi: 10. 3969 / j. issn. 1002 － 1108. 2013. 04. 0016
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1002 － 1108( 2013) 04 － 0036 － 06
骨感染作为骨科常见的外伤性疾病，或者术后常见并
发症之一，抗感染治疗贯穿整个治疗过程，而后期对抗生
素治疗反应不敏感，反复复发等特征［1 － 3］，使其不能有效
的控制骨骼组织内的感染，可导致骨的进行性、炎性破坏。
由于西医治疗费用高，对肝肾损伤大等特点，为探求经济，
对机体损伤小的方药，通过文献检索发现泻心汤具有抗感
染作用。为进一步探讨其疗效机制，我们进行了实验研
究，现报告如下。
1 材料与方法
1. 1 动物和材料
1. 1. 1 动物 实验用新西兰大白兔由贵阳医学院动物实
验中心提供，体重 2. 5 ～ 3. 0Kg，共 60 只，雌雄各半。
1. 1. 2 药物 中药方剂 －泻心汤煎剂:由大黄、黄连和黄
芩组成。黄连、大黄、黄芩饮片均由贵阳中医学院第二附
属医院中药房提供。黄连、大黄、黄芩均符合《中国药典》
2005 版一部项下要求，按传统方法煎煮，制备成实验所需
浓度的煎剂，微孔滤器过滤除菌，放置于 4℃冰箱中，保存
备用。
1. 1. 3 菌种 表皮葡萄球菌(批号:CMCC26069)供试菌
株来自贵阳中医学院第二附属医院化验室。表皮葡萄球
菌悬液制备:将表皮葡萄球菌种植于保存培养基中，并置
于 4 ℃冰箱中保存，使用前 1d 复温，置于 Mueller － Hinton
(MH)琼脂培养皿中，37 ℃培养 1d，将细菌用生理盐水配
成菌液，以 VITEK 比浊仪粗测细菌浓度后，血细胞计数板
精确计数，调其浓度为 1 × 106CFU /ml 表皮葡萄球菌悬液，
即刻使用。
·63·
第 35 卷 第 4 期
2013 年 7 月
贵阳中医学院学报
JGCTCM
No. 4 Vol. 35
July 2013