全 文 :来稿日期:1999-05-13
责任编校:尹淑清
文章编号:1001-9499 (2000)01-0054-04
蓝花大叶醉鱼草组培快速繁殖的研究
任东岁 段新玲 贺忠群
(新疆塔里木农业大学植科院 , 塔里木 843300)
摘要:通过蓝花大叶醉鱼草组培快繁的试验 , 研究了对外植体的不同取材部位及不同激素种类 、
浓度对芽诱导及培殖的影响。结果表明:采用母株基部的茎段作外植体诱导率高 , 增殖系数大 ,
在做不同激素的比较中 , 生长素起着决定因素。同时 , 筛选出最佳分化培养基 MS+6-BA
1.0mg/ l+IBA 0.05mg/ l或 MS+6-BA 1.0mg/ l+NAA 0.5mg/ l , 并对蓝花大叶醉鱼草组培中
的一些问题进行了讨论。
关键词:蓝花大叶醉鱼草;组培
中图分类号:S 722 文献标识码:B
蓝花大叶醉鱼草(Buddleja dav idii)为
马钱科醉鱼草属的灌木 , 高可达 5m;小枝
略呈四棱形 , 开展;幼叶密被白色星状毛 ,
单叶对生 , 卵状披针形 , 长 5 ~ 20cm , 端渐
尖;多数小聚伞花序集成穗状圆锥花絮 , 花
冠淡紫色 , 芳香 , 极为美丽 , 花期 6 ~ 10个
月;蒴果长圆形 。作为一种耐旱 、 耐瘠薄的
绿化品种 , 对其组培快繁技术进行研究 , 将
有助于该品种的推广应用 。
1 材料与方法
试验材料采自北京林业大学花卉所院内
的蓝花大叶醉鱼草母株 , 外植体取秋季带侧
芽的茎段 , 同一枝条分为基部和梢部 , 分别
用 5种不同方法进行消毒处理 。蓝花大叶醉
鱼草嫩茎外部密被白色星状毛 , 消毒前一定
要用毛刷刷掉上面的绒毛 , 再用洗衣粉浸泡
15min , 用清水冲洗干净方可在超净工作台
上进行植体的消毒处理 。5 种消毒处理方法
是:①在 70%的酒精中浸泡 1min , 用无菌
水冲洗 3次 。 ②在 70%的酒精中浸泡 30s ,
用无菌水冲洗 3 次 , 再用 0.1%升汞浸泡
5min , 用无菌水冲洗 3 次。 ③在 70%的酒
精中浸泡 30s , 用无菌水冲洗 3 次 , 再用
0.1%升汞加土温浸泡 3min , 用无菌水冲洗
7 ~ 8 次。 ④用 70%酒精浸泡 20s , 用无菌
水冲洗 3 次 , 用 0.1%升汞加土温浸泡
3min , 然后用无菌水冲洗 7 ~ 8 次 , 再用
25mg/ml 的四环素液浸泡 10min 。 ⑤先用
70%酒精浸泡 20s , 用无菌水冲洗 3次 , 再
用10%次氯酸钠溶液滴加土温浸泡 20min ,
用无菌水冲洗 5次 。
本实验培养基为 MS 培养基 , pH 为
6.0 , 培养室内温度保持在 25℃左右 , 日光
辐射照明每天 12h , 强度2 000lx 左右 。
2 结果分析
2.1 不同消毒处理对外植体的影响
对 5种消毒处理的外植体培养 15d后的
第 25卷 第 1期
2 0 0 0 年 1 月
林 业 科 技
FORESTRY SCIENCE &TECHNOLOGY
Vol.25 No.1
Jan. 2 0 0 0
统计 (见表 1)结果表明 , 对嫩茎基部采用
方法④效果最佳;对嫩茎梢部采用方法③和
④均可。它们既不损伤植物材料 , 又可基本
杀死微生物。
2.2 无菌苗的建立
本实验采用 1/ 2MS 培养基 , 添加不同
浓度的细胞分裂素 6-BA 和生长素 NAA ,
以及庶糖 30g/ L , 琼脂6g/ L 。结果 (表2)
表明 , 外植体接种 1 周后 , 腋芽开始膨大 、
萌动 , 随后长出叶片。NAA 对蓝花大叶醉
鱼草的萌动影响很大 , 当 NAA 浓度超过
0.05mg/ L 时 , 茎段基部开始形成愈伤组
织 , 而且随着培养时间的延长 , 腋芽长势减
慢;但当 NAA 超过 0.1mg/ L 时 , 已开始
抑制芽的萌动。由于 NAA 在诱导启动过程
中起决定作用 , 因此 , 在启动培养基上 6-
BA的浓度应选为 0.5mg/ L。生长素 0.03
~ 0.05mg/ L 时 , 腋芽萌动最快 , 芽粗壮 ,
颜色浓绿 , 分化的节数最多 , 腋叶萌动率达
90%以上 , 经培养 5周后 , 可达到 4 ~ 5个
节;生长素低于 0.03mg/ L 时 , 苗的长势
细弱 , 颜色稍黄。本实验选出的最佳启动培
养基 为 1/2MS + 6 - BA0.5mg/ L +
NAA0.03-0.05mg/ L。
表 1 不同消毒方法对蓝花大叶醉鱼草组培的影响
序号 总数(个) 污染数(个) 污染率(%) 死亡数(个) 死亡率(%) 成活数(个) 成活率(%)
外植体为嫩茎基部
外植体为嫩茎梢部
① 25 0 0 23 92 2 8
② 40 30 75 2 5 8 20
③ 55 31 56.4 1 1.8 23 41.8
④ 50 10 20 2 4 38 76
⑤ 88 4 4.5 31 35.2 53 60.3
① 42 0 0 42 100 0 0
② 31 16 51.6 4 12.9 11 35.5
③ 50 12 24 2 4 36 72
④ 35 3 8.6 7 20 25 71.4
⑤ 60 1 1.7 42 70 17 28.3
表 2 不同浓度细胞分裂素和
不同浓度生长素对侧芽诱导的影响
细胞分裂素
6-BA浓度(mg/ L)
生长素
NAA 浓度(mg/ L)
接种数
(个)
平 均诱导率(%)
0.5 0.05 21 72
1.0 0.05 23 78
1.5 0.05 18 83
0.5 0.1 21 8.1
1.0 0.1 15 30
1.5 0.1 24 8.1
0.5 0.01 17 87
0.5 0.02 21 94
0.5 0.03 24 91
0.5 0.04 21 91
2.3 继代增殖
将上述无菌苗转到分化培养基上 , 继代
增殖约 5 ~ 6周 1 次。最初转入增殖时嫩茎
增加的倍数较低 , 形成的丛生芽数量少 , 经
过 3 ~ 4次继代后 , 增殖倍率逐渐增加 。
2.3.1 6-BA 和 NAA 、 IBA不同浓度配比
对增殖的影响
实验采用细胞分裂素 6-BA1.0mg/ L
和 2.0mg/ L 分别和不同浓度的 NAA 、 IBA
配合使用两种方法 , 每种方法处理 15 ~ 20
瓶。培养 40d后的统计结果见表 3。
从表 3看出 , 6-BA 和 NAA 、 IBA 配
比 , IBA效果好于 NAA , 分化的芽不仅数量
第 1期 任东岁等:蓝花大叶醉鱼草组培快速繁殖的研究 55
表 3 6-BA和 NAA 不同浓度配比对芽增殖的影响
6-BA (mg/ L) NAA (mg/ L) 平均分化率 (%)
1.0 0 10
1.0 0.05 85
1.0 0.1 20
2.0 0 37
2.0 0.05 93
2.0 0.1 40
表 4 6-BA和 IBA 不同浓度的配比
对芽增殖的影响
6-BA (mg/ L) IBA (mg/ L) 平均分化率 (%)
1.0 0 31
1.0 0.05 90
1.0 0.1 40
2.0 0 29
2.0 0.05 92
2.0 0.1 31
多 , 而且苗木粗壮 , 颜色浓绿 。细胞分裂素
从1.0mg/ L 增加到 2.0mg/ L 时 , 对芽的
增殖作用不明显 , 但从嫩茎伸长和生根移植
全过程考虑 , 增殖阶段以低浓度为宜。从生
长素用量上看 , 芽分化时的最佳培养基为
MS+6-BA 1.0mg/ L +IBA 0.05mg/ L 或
MS+6-BA 1.0mg/ L+NAA 0.05mg/ L。
2.3.2 细胞分裂素对芽增殖的影响
不同浓度的细胞分裂 6-BA 、 KT 、 2-
ip 和生长素 NAA 0.05mg/ L 配比 , 培养
30d后观察所分化的芽数 (表 4)。
表 4 不同浓度细胞分裂素对芽增殖的影响
激素种类 浓度(mg/ L) 增殖系数 苗木生长状况
6-BA 1.0 8 芽粗壮 , 颜色浓绿 , 叶片宽
6-BA 2.0 11 芽粗壮 , 颜色浓绿 , 叶片宽大
KT 1.0 4 芽弱小 , 不均匀 , 较细弱 , 色淡
KT 2.0 5 芽弱小 , 较细弱 , 色淡
2-ip 1.0 0 芽不分化 , 只长高粗
2-ip 2.0 0 芽不分化 , 只长高粗
从表 4看出 , 2-ip对芽分化不起作用;
6-BA 效果最佳 , 不论其浓度多大 , 分化
的芽不仅数量多 , 且大小均匀 , 苗粗壮 , 颜
色深绿;KT 效果不如 6-BA 。
2.3.3 侧芽在茎段位置对芽增殖的影响
在同一培养基上 , 不同部位外植体的增
殖倍数不同 , 基部外植体平均增殖系数为
9.2 , 而梢部仅 3.7 , 这可能与其内源激素
含量有关 。
2.3.4 摘心对芽增殖的影响
在继代培养接种时 , 切去嫩茎的顶芽
后 , 再转接到新鲜的培养基上 , 对嫩芽增殖
有很大影响。摘心后能促使蓝花大叶醉鱼草
形成更多的丛生芽 , 而不摘心所形成的丛生
芽数量少 。
2.4 生根培养
采用不同浓度 NAA和 IBA进行生根培
养的实验结果 (表 5)表明 , IBA 和 NAA
在生根培养中无显著差别 , 两种激素均对生
根有促进作用 , 浓度以 0.5 ~ 1mg/ L 为宜 。
因此 , 最适宜生根的培养基为 1/ 2MS +
NAA0.5 ~ 1mg/ L 或 1/ 2MS +IBA0.5 ~
1mg/ L 。
表 5 不同浓度生长素对生根率的影响
处理浓度 (mg/ L) 培养株数 生根株数 生根率(%)
0.1 15 7 46
NAA 0.5 15 15 100
1.0 15 11 73
0.1 15 5 30
IBA 0.5 15 15 10
1.0 15 15 100
3 讨 论
3.1 对于木本观赏植物的组织培养 , 外植
体消毒是重要的一环。本实验是秋季取材且
材料在露地栽培 , 又因蓝花大叶醉鱼草的嫩
茎表面密被白色星状毛 , 采用常规消毒处理
其污染率高 , 因此可使用一些辅助手段 , 如
加四环素液浸泡 , 效果会较好 。
3.2 在本实验中 , 启动和分化受细胞分裂
56 林 业 科 技 第 25卷
素和生长素浓度及其配比的影响 , 但起决定
因素 的 是 生 长 素。 生 长素 浓 度 大 于
0.05mg/ L时 , 即产生大量愈伤组织 , 抑制
腋芽萌动 。
3.3 蓝花大叶醉鱼草的组培快速繁殖倍率
很高 , 每 5 ~ 6 周继代 1 次。因此 , 在选用
适当的培养基和植物激素的前提下 , 用组培
方法可以使蓝花大叶醉鱼草达到快速繁殖的
目地 。
参 考 文 献
[ 1] 谭文澄 , 戴策刚 观赏植物组织培养技术 , 北京中国林业出版社 1991.4
[ 2] 陈正华主编 , 木本植物组织培养及其应用 , 北京高等教育出版社 1986.343
[ 3] Dvid , David , H , Matellie , T , 1982 , In vit ro adventi tious budding on pimus pinaster cotyledond and needles physilo 56:
102~ 107
[ 4] 王彭伟 , 肾蕨组织培养快速繁殖的研究 , 北京林业大学学报 1998.2 107~ 109
[ 5] Curumurt i K , In purohit SS , Honnone Regulat ion of plant Grow th and Development India:AGRO Botanical publi shers
1984.387~ 389
[ 6] 罗小芳 , 金丝小枣组织培养快速繁殖的研究 , 北京林业大学学报 1996.(2) 9~ 15
[ 7] 白桦组培再生系统的研究.东北林业大学学报.1998.5.6~ 10
Study of Rapid Propagation of Buddleja Davidii by
Proliferation of Axillary Buds
REN Dong-sui
(X ingjiang Tarim Agriculture University X ingjiang 843300)
Abstract This paper discusses the effects of dif ferent test types and concentrations of ho rmones
on axillary bud and rapid propagation of Buddleja dav idii .Experiment shows that the lateral
axillary buds in vito culture of the stem near the roots has high ratio of axillary buds.It also sug-
ests hormone play a vital role in rapid propagation of the plant.The experiment extablishes the
best proliferations of axlliary buds is resulted in the medium MS +6 -BA1.0mg/ L +
IBA0.05mg/ L or M S+NAA0.05mg/ L+6-BA1.0mg/ L , and best rooting obtained in the
medium 1/ 2MS+IBA0.5mg/ L or 1/ 2M S+NAA0.5mg/ L.
Key words Buddleja davidii ;Tissue culture
第 1期 任东岁等:蓝花大叶醉鱼草组培快速繁殖的研究 57