全 文 ：药 物 研 究
The medicine study
基金项目:国家教育部博士点基金项目 (20112133110001)，沈阳市科委计划项目 (F12 － 277 － 1 － 13)。
作者简介:佟苗苗 (1985 ～)，女，博士研究生，从事中药品质评价研究，E － mail:tilamisu2599@ 126． com
通信作者:翟延君，女，教授，博导，E － mail:lnzyzyj@ sohu． com
荭草花提取物体外抗肿瘤活性研究
佟苗苗 张宇瑶 初正云 翟延君*
辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600
【摘 要】 目的:筛选荭草花中的抗肿瘤活性部位。方法:采用 MTT 法观察荭草花的各提取部位对人宫颈癌 HeLa 细胞、人肝癌
SMMC －7721 细胞株生长的影响。结果:荭草花的乙酸乙酯部位及正丁醇部位对人宫颈癌 HeLa细胞的抑制率约分别为 60%及 40%;对人
肝癌 SMMC －7721 细胞均约为 60%，并具有明显的量效关系。结论:荭草花对人宫颈癌 HeLa细胞及人肝癌 SMMC － 7721 细胞的增值具有
一定的抑制作用，是一类具有开发前景的抗肿瘤中药。
【关键词】 荭草花;MTT法;体外抗肿瘤;活性部位
【中图分类号】Ｒ285. 5 【文献标志码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2013)24 － 0007 － 02
Ｒesearch on Antumor Effect in Vitro of Flowers of Polygonum orientale L．
TONG Miao － miao，ZHANG Yu － yao，CHU Zheng － yun ZHAI Yan － jun
College of Pharmacy，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China
Abstract:Objective To select the antitumor activity of the flowers of Polygonum orientale L． ． Method Observing the influence
of different extracts from the flowers of Polygonum orientale L． on growth of cancer cells HeLa and SMMC －7721 strains by methyl thia-
zolyl etrazolium (MTT)methods． Ｒesult For HeLa cell the inhibition rate of acetic ether part was about 60%，and n － butyl alcohol
was about 40% ． For SMMC －7721 cell both of them the inhibition rates were approximately about 60% ． Conclusion The flowers of
Polygonum orientale L． had inhibitory effect with cell HeLa and SMMC －7721，and it can be a kind of great prospects for the develop-
ment of Chinese medicine．
Key words:the flowers of Polygonum orientale L．;MTT method;Antitumor effect in vitro;Active extraction
荭草花为蓼科植物红蓼 Polygonum orientale L． 的花序，
具有行气活血、消积止痛的功效，用于治疗头痛，心胃气
痛，腹中痞积，小儿疳积等症［1］。现代药理研究表明，荭
草花在抗人结肠癌细胞增殖作用方面效果较好，且红蓼的
果实、茎叶均具有一定的抗肿瘤作用［2、3］。化学成分研究显
示，荭草花的主要成分为黄酮类化合物［4］。黄酮类化合物
对于肿瘤细胞的增长繁殖具有显著的抑制作用［5］。荭草花
的抗肿瘤活性部位的筛选和相关实验研究报道还处于初步
探索阶段。本文采用了 MTT法，对荭草花各不同溶媒萃取
物进行了人宫颈癌 HeLa细胞、人肝癌 SMMC －7721 细胞体
外活性筛选，为荭草花抗肿瘤的临床应用提供科学依据。
1 材料与仪器
1. 1 细胞株 人宫颈癌细胞株 HeLa、人肝癌细胞株 SMMC
－7721 由上海复蒙生物有限公司提供。
1. 2 药物与试剂 荭草花采自辽宁省大连市南关岭，经辽
宁中医药大学翟延君教授鉴定为荭草 Polygonum orientale L．
的花序;胰蛋白酶 (Trypsin)、二甲基亚砜 (DMSO)、四
甲基噻唑蓝 (MTT) (美国 Sigma 公司);DMEM 培养基
(美国 GIBCO公司);胎牛血清 (北京元亨圣马生物技术研
究所);其他试剂皆为分析纯;实验中所用溶液都是由 Mili
－ Q水配制而成。
1. 3 主要仪器 CJT － 808 型超净台 (沈阳市医疗器械二
厂);酶标仪 (瑞士 Tecan 公司);NUAIＲETM US AUTO-
FLOW型二氧化碳培养箱 (德国 NuAir 公司);AE3 型细胞
倒置相差显微镜 (德国 Motic 公司);96 孔培养板 (美国
Corning公司);ACCULAB ALC － 11C． 4 型电子分析天平
(德国 Sartorius Group 公司);Mill － Q 型超纯水机 (美国
Millipore公司)。
2 方法
2. 1 药物制备 称取荭草花 100g 粉碎至 60 目，用 90%、
60%、30%的乙醇分别回流提取三次，每次 2 h，合并提取
液，回收溶剂得醇提浸膏。依次以石油醚、乙酸乙酯、正
丁醇萃取数次，回收溶剂得乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取
部位。各分部萃取部位制成 10mg /ml 母液，过 0. 22μm 微
孔滤器过滤除菌，放入 4 ℃冰箱保存备用。
2. 2 细胞培养 将细胞按贴壁细胞培养法接种于含 10%灭
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中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
药 物 研 究
The medicine study
活胎牛血清的 DEME 培养液中，于 37 ℃、5% CO2 培养箱
中培养中培养，取对数生长期细胞用于实验。
2. 3 体外抗肿瘤活性实验 采用 MTT 法测定各萃取部位
的抗肿瘤活性。选用对数生长期的贴壁肿瘤细胞，用
0. 25%胰蛋白酶消化制成单细胞悬液后，用含 10%小牛血
清的 DEME培养液调整细胞密度分别为 5 × 104 个 /ml，以
每孔 100μl的细胞悬液接种于 96 孔培养板中，置于 5%CO2
及饱和湿度下的培养箱内 37℃培养细胞 24h。各萃取部位
母液用培养基稀释为 50、150、450μg /ml，每组设 5 个复
孔，同时设对照组 (对照组加等体积溶剂的培养液)，置于
5% CO2 及饱和湿度下的培养箱内 37℃。继续培养 48h。培
养板每孔避光加入 50μl MTT，继续以同样的条件孵育 4h
后，弃去上清液，每孔加入 l50μl DMSO 振荡混匀，10min
后，于酶标仪上 492nm 波长处检测各孔的光密度 OD 值，
按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率［6］。
肿瘤细胞生长抑制率 (%)
= ［1 － D (λ)实验组 /D (λ)对照组］ × 100%
2. 4 统计学处理 采用 SPSS 17. 0 统计软件进行单因素方
差分析和显著性检验，组间比较采用单因素方差分析，P ＜
0. 05 为差异具有统计学意义。
3 结果
由表 1 可知，乙酸乙酯部位和正丁醇部位对人宫颈
癌细胞 HeLa和人肝癌细胞 SMMC － 7721 均具有较好的
抑制作用。从量效关系上看，当药物浓度较低 (50μg /
ml)时，药物对肿瘤细胞的抑制作用不明显。随着用药
浓度的升高，药物对各细胞的抑制作用均增强，且出现
良好的剂量依赖性;在作用浓度为 450μg /ml 时各萃取
部位均具有较好的抑制作用，其中乙酸乙酯部位优于正
丁醇部位，且对于 SMMC － 7721 细胞较为敏感，乙酸乙
酯部位抑制率在 24h 和 48h 分别为 44. 47%，59. 36%;
随着药物作用时间的延长，药物对肿瘤细胞的抑制率也
随之升高。
表 1 荭草花不同提取部位对肿瘤细胞的影响 (n = 5)
组别
剂量
(ug /mL)
抑制率 (﹪)
HeLa SMMC －7721
24 h 48 h 24 h 48 h
乙酸乙酯部位
50 0. 65 － 7. 86 14. 59 27. 57 *
150 8. 77 14. 32 23. 72* 49. 56*
450 44. 47* 59. 36* 51. 29* 74. 29*
正丁醇部位
50 3. 04 － 13. 48 7. 92 33. 83*
150 － 0. 85 － 15. 57 5. 60 41. 78*
450 18. 48 43. 33* 40. 22* 69. 87*
注:与对照组比较，* P ＜ 0. 05
4 讨论
4. 1 近年来，从中药中筛选有效抗肿瘤活性成分已逐渐受
到人们的重视。文献报道从荭草花中分离得到了 9 个化合
物，主要为黄酮类［8］，这些成分对于抗肿瘤活性化合物的
筛选具有广阔的开发前景。荭草花为民间及民族常用中药，
具有行气活血，消积止痛的功效。现代研究表明，荭草花
还具有一定的抗肿瘤作用［2］。但有关荭草花的药理研究文
献极少，尤其是荭草花对人宫颈癌 HeLa 细胞、人肝癌
SMMC －7721 细胞的筛选还未见报道。本实验为荭草花活
性部位的筛选提供了参考，为扩大荭草花的应用提供了药
理研究基础，其药用机理和体内抗肿瘤实验有待深入研究
和探索。
4. 2 实验通过 MTT 法筛选了荭草花的乙酸乙酯部位及正
丁醇部位在三个不同浓度 (50、150、450μg /ml)对肿瘤细
胞的体外抑制作用。实验结果表明荭草花的各萃取部位对
人肝癌 SMMC －7721 细胞比较敏感;乙酸乙酯部位对 HeLa
细胞和 SMMC － 7721 细胞的抑制率分别为 59. 36%、
74. 29%;而正丁醇部位对上述两种肿瘤细胞的抑制率可达
43. 33%和 69. 87%;乙酸乙酯部位的抗肿瘤作用优于正丁
醇部位，但两者均具有不同程度的抗肿瘤活性，对其抗肿
瘤活性成分仍有进一步研究的价值。
4. 3 从量效关系上看，荭草花的不同萃取部位均对细胞具
有增值抑制作用，且肿瘤的抑制率与时间和剂量呈线性关
系;随着给药剂量的增加，肿瘤抑制率也随之增强，给药
剂量为 450μg /ml时的肿瘤抑制率骤然增高，明显高于给药
剂量为 50μg /ml和 150μg /ml。随着作用时间的增加，对肿
瘤细胞的增值抑制作用也随之增强，48h 的抑瘤率明显高
于 24h的抑瘤率。
参考文献
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［8］李勇军，何迅，刘志宝，等． 荭草花化学成分的研究 ［J］． 中国中药杂
志，2009，34 (20):2613 － 2614．
(收稿日期:2013. 11. 10)
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