全 文 ：高效液相色谱法同时测定蒙药齿缘草中槲皮素和山奈素的含量
巴俊杰， 布 仁， 马丽娟， 苗 娜， 贾心语
( 内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010110)
摘 要:目的:建立蒙药齿缘草中槲皮素和山奈素含量的测定方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱以
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂; 流动相为甲醇 ～ 0． 4%磷酸溶液 ( 45 ∶ 55 ) ; 检测波长为 368 nm; 流速为 1． 0
mL /min．结果:槲皮素在 31． 4 ～ 314 ng 范围内有良好的线性关系 ( r = 0． 9997 ) ，平均回收率为 96． 96%，( RSD
=1． 54% ) ; 山奈素在 30 ～ 300 ng 范围内有良好的线性关系 ( r = 0． 9999 ) ，平均回收率为 97． 92% ( RSD
=1． 91% ) 。结论:该方法简便，准确，重复性好，可作为齿缘草中槲皮素和山奈素含量的测定方法。
关键词:齿缘草;槲皮素;山奈素;含量测定;高效液相色谱法
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:2095－512X(2013)02－0132－04
SIMULTANEOUS DETERMINATION OF QUERCETIN
AND KAEMPFEROL IN ERITRICHII HERBA BY HPLC
BA Jun－jie， BU Ren， MA Li－juan， et al．
(Inner Mongolia Medical University，Hohhot 010110 China)
Abstract:Objective:To establish a determination method of quercetin and kaempferol in
Eritrichii Herba． Methods:HPLC was applied． The column was Eighteen alkyl silane bonded silica
gel，the mobile phase was methanol ～ 0． 4% phosphoric acid(45 ∶ 50) ，the flow rate was 1． 0 mL / min
and the detection wavelength was 368nm． Result:The linear range of Quercetin was 31． 4 ～ 314 ng(r
=0． 9997) ，the average recovery was 96． 96%(RSD=1． 54%)． The linear range of kaempferol was 30
～ 300 ng(r =0． 9999) ，the average recovery was 97． 92%(RSD=1． 91%)． Conclusion:The method
is simple，accurate，reproducible and can be used for the determination of quercetin and kaempferol in
Eritrichii Herba．
Key words:eritrichii herba;quercetin;kaempferol;determination;HPLC
齿缘草，蒙药名额布森－瓦德，为紫草科植物
石生齿缘草 Eritrichium rupestre(Pall．)Bunge 的干
燥地上部分，分布于我国的东北、华北和西北的东
部，西伯利亚和蒙古也有分布，主产于内蒙古的中
西部和甘肃、宁夏等地［1 ～ 3］。该蒙药收载于《中华
人民共和国卫生部药品标准》蒙药分册，有杀
“粘”，清热，解毒之功能，用于治疗瘟热流感，“协
日”人脉症，“协日”热，为常用蒙药［4］。目前尚未
见有关齿缘草含量测定方面的报道，本研究建立了
高效液相色谱法同时测定齿缘草中槲皮素和山奈
素含量的测定方法，这对提高该药材的质量标准和
质量控制水平具有重要意义。
·231· Journal Of Inner Mongolia Medical University Apr． 2013 Vol． 35 No． 2
收稿日期:2012－11－15;修回日期:2013－01－17
基金项目:国家药典委员会 2010 年度药品标准提高项目(453)
作者简介:巴俊杰(1957－)男，蒙古族，内蒙古医科大学教授。
DOI:10.16343/j.cnki.issn.2095-512x.2013.02.002
1 仪器与试药
1． 1 仪器
Agilent1200 型高效液相色谱仪、Agilent 化学
工作站、VWD 检测器;色谱柱:Hypersil ODS C18
(5μm，4． 6mm×200mm)、Kromasil C18(5μm，4． 6mm×
250mm)、Agilent C18(5μm，4． 6mm×250mm) ;TD型
电子天平(德国赛多利斯股份公司) ;HH－Z 型数
显恒温水浴锅(金坛市杰瑞尔电器有限公司)。
1． 2 试药
槲皮素对照品、山奈素对照品(中国药品生物
制品检定所，批号分别为 10081－200907、110861－
200808) ;甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯;水为
超纯水;药材由本项目组采集和委托采集，均经内
蒙古医科大学蒙药学教授那生桑、药用植物学教授
鞠爱华鉴定为石生齿缘草。
2 方法与结果
2． 1 测定方法
2． 1． 1 色谱条件和系统适用性试验 以十八烷
基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇 ～ 0． 4%磷酸溶
液(45 ∶55)为流动相;检测波长为 368nm;柱温为
25℃;理论板数按槲皮素峰计算应不低于 6000。
在上述色谱条件下，对照品和样品的高效液相色谱
见图 1。
A
B
A．对照品 B．齿缘草 1．槲皮素 2．山奈素
图 1 HPLC 图谱
Fig． 1 HPLC Chromatograms
2． 1． 2 对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减
压干燥 12h的槲皮素对照品和山奈素对照品适量，
精密称定，加 80%甲醇制成每 1mL 各含 6μg 的溶
液，即得。
2． 1． 3 供试品溶液的制备 取本品粉末(过三
号筛)约 1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入
甲醇－盐酸(4 ∶1)混合溶液 50mL，密塞，称定重量，
置水浴中加热回流 1h，冷却，再称定重量，用甲醇
补足减失的重量，摇均，滤过，即得。
2．1．4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试
品溶液各 20μL，注入液相色谱仪，依法测定，即得。
2． 2 方法学考察
2． 2． 1 线性关系的考察 精密吸取槲皮素浓度
为 0． 0157mg /mL 和山奈素浓度为 0． 0150mg /mL
的对照品溶液 1． 0、2． 0、4． 0、6． 0、8． 0、10． 0mL，分
别置入 10mL 棕色量瓶中，80%甲醇稀释至刻线。
分别精密吸取 20μL，注入高效液相色谱仪，依法测
定，记录峰面积，以峰面积(Y)对浓度(X)进行回
·331·内蒙古医科大学学报 2013 年 4 月 第 35 卷 第 2 期
归分析，结果槲皮素在 31． 4 ～ 314ng 范围内呈线性
关系，回 归 方 程 为:Y =92． 296x －3． 6893，r
=0． 9997;山奈素在 30 ～ 300ng 范围内呈线性关
系，回归方程为:Y=95． 508x－14． 105，r =0． 9999。
2． 2． 2 精密度试验 精密吸取同一供试品(呼
和浩特市武川县)溶液，重复进样 6 次，测定峰面
积积分值。结果槲皮素峰面积的 RSD 为 0． 95%;
山柰素峰面积的 RSD为 0． 71%。表明本方法有良
好的精密度。
2． 2． 3 稳定性试验 精密吸取同一供试品(呼
和浩特市武川县)溶液 20μL，分别于配制后 0、2、
4、6、8、12h 进样，依法测定。结果槲皮素峰面积的
RSD为 0． 73%;山柰素峰面积的 RSD 为 1． 39%，
表明供试品溶液在 12h内基本稳定。
2． 2． 4 重复性试验 取同一批号供试品(呼和
浩特市武川县)6 份，精密称定，依法制成供试品溶
液，依 法 测 定。结 果 槲 皮 素 含 量 平 均 值
为 0． 05703%，RSD为 0． 67%;山柰素含量平均值
为 0． 04402%，RSD为 0． 76%，表明该方法重复性
良好。
2． 2． 5 回收率试验 采用加样回收法。取已知
含量的同一批号供试品(呼和浩特市武川县)6 份，
每份约 0． 5g，精密称定，精密加入甲醇 30mL、盐酸
10mL，摇均，精密加入槲皮素浓度为 0． 02824mg /mL
和山奈素浓度为 0． 01972mg /mL 的对照品混合甲
醇溶液 10． 0mL，按供试品溶液制备方法依法制备
并依法测定，结果见表 1 和表 2。槲皮素和山奈素
的平均回收率分别为 96． 96%、97． 92%，RSD 分别
为 1． 54%、1． 91%，表明回收率良好。
2． 3 样品测定
取 10 个产地的样品，依法制备供试品溶液并
依法测定槲皮素、山奈素含量，结果见表 3，齿缘草
所含槲皮素和山奈素总量在 0． 041% ～0． 103%
之间。
表 1 槲皮素回收试验结果
Tab． 1 The recoveries result of quercetin
试验序号 样品中含量(mg) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均值(%) RSD(%)
1 0． 2854 0． 2824 0． 5579 96． 49
2 0． 2852 0． 2824 0． 5572 96． 30
3 0． 2855 0． 2824 0． 5550 95． 44 96． 96 1． 54
4 0． 2853 0． 2824 0． 5669 99． 70
5 0． 2854 0． 2824 0． 5608 97． 52
6 0． 2853 0． 2824 0． 5573 96． 32
表 2 山奈素回收试验结果
Tab． 2 The recoveries result of kaempferol
试验序号 样品中含量(mg) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均值(%) RSD(%)
1 0． 2202 0． 1972 0． 4152 98． 88
2 0． 2203 0． 1972 0． 4170 99． 76
3 0． 2205 0． 1972 0． 4142 98． 20 97． 92 1． 91
4 0． 2201 0． 1972 0． 4097 96． 14
5 0． 2203 0． 1972 0． 4154 98． 94
6 0． 2204 0． 1972 0． 4089 95． 58
3 讨论
3． 1 含量测定成分的选择
文献［5 ～ 8］报道槲皮素和山奈素具有抗炎、
抗菌、抗病毒和镇痛作用，这与齿缘草具有清热、解
毒功能，用于治疗瘟热流感及蒙医的“协日”人脉
症，“协日”热有着密切关系，说明槲皮素和山奈素
是齿缘草的主要有效成分;齿缘草的物质基础研究
文献表明槲皮素和山奈素是该植物的主要成
分［9］。所以选择槲皮素和山奈素为含量测定的测
定成分。
3． 2 供试品溶液制备方法的考察
主要参考 2010 年版中国药典一部瓦松［10］项
下槲皮素、山奈素含量测定中供试品溶液制备方
法，分别考察了提取溶剂浓度、水解酸度、提取水解
时间和提取水解温度的影响。结果显示，以甲醇－
盐酸(4 ∶1)为溶剂、提取水解时间为 60min、提取水
解温度为加热回流状态时槲皮素和山奈素的峰面
积最大。
3． 3 回收率测定液制备方法的考察
·431· Journal Of Inner Mongolia Medical University Apr． 2013 Vol． 35 No． 2
开始做回收率试验时，取供试品约 0． 5g，精密
称定，加已知浓度的对照品溶液 10mL，加甲醇
30mL，最后加盐酸 10mL，按供试品溶液制备方法
依法制备并依法测定，结果回收率明显偏低。经参
考文献［11］和多次试验，发现改变加试剂的顺序，
可以得到正常的回收率，即已知浓度的对照品溶液
最后加，特别是在加盐酸后摇均再加。分析其原因
可能是在非酸性条件下，槲皮素和山奈素易与供试
品中的金属离子络合，造成回收率偏低。
3． 4 样品含量测定结果的分析
本研究测定了不同产地 10 个批次样品的槲皮
素和山奈素含量，从测定结果看，不同产地的样品
所含槲皮素和山奈素的总量有较大差异，最高含量
为 0． 103%，最低为 0． 041%，且槲皮素含量与山奈
素含量也有差异，呼和浩特地区样品槲皮素含量明
显高于山奈素含量，而包头地区样品却恰好相反，
山奈素含量明显高于槲皮素含量，其他地区差异不
大，这些都为制定齿缘草质量标准的含量限度提供
了实验依据。
表 3 样品含量测定结果(n=2)
Tab． 3 The result of sample test
采集地区 槲皮素含量(%) 均值(%) 山奈素含量(%) 均值(%) 总含量(%)
呼和浩特市
武川县
0． 0602
0． 0600 0． 0601
0． 0433
0． 0429 0． 0431 0． 1030
呼和浩特市
和林格尔县
0． 0583
0． 0587 0． 0585
0． 0352
0． 0352 0． 0352 0． 0937
乌兰察布市
卓资县
0． 0461
0． 0469 0． 0465
0． 0324
0． 0330 0． 0327 0． 0792
乌兰察布市
凉城县
0． 0596
0． 0592 0． 0594
0． 0418
0． 0426 0． 0422 0． 1016
包头市
赵长城地区
0． 0121
0． 0121 0． 0121
0． 0297
0． 0299 0． 0298 0． 0419
包头市
五当召地区
0． 0092
0． 0088 0． 0090
0． 0317
0． 0316 0． 0317 0． 0407
包头市
固阳县
0． 0133
0． 0139 0． 0136
0． 0291
0． 0287 0． 0289 0． 0425
乌海市
海勃湾区
0． 0239
0． 0233 0． 0236
0． 0286
0． 0290 0． 0288 0． 0524
乌海市
海南区
0． 0240
0． 0241 0． 0241
0． 0268
0． 0276 0． 0272 0． 0513
银川市
贺兰山地区
0． 0386
0． 0389 0． 0388
0． 0336
0． 0332 0． 0334 0． 0722
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( 责任编辑: 程立新)
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