全 文 ：　　收稿日期:2008-12-08;修订日期:2009-02-10
　　基金项目:广西科技厅攻关项目(桂科攻 0719002-2-4)
　　通讯联系人:王立升(1965-), 男 ,黑龙江汤原人 , 广西大学教授 ,博士;E-mail:wlsheng@163.com。
文章编号:1001-7445(2009)03-0332-04
HPLC法测定广西指天椒中
三种辣椒碱类物质的含量
王立升1 ,张　阳1 ,庞　丽2 ,周永红1 ,刘雄民1
(1.广西大学 化学化工学院 ,广西 南宁 530004;2.广西花红药业股份有限公司 ,广西 南宁 530000)
摘要:用 HPLC 法测定了广西指天椒中的辣椒碱 、二氢辣椒碱和降二氢辣椒碱含量。指天椒中辣椒碱类物质
用 65%乙醇溶液提取经膜过滤 ,采用 Graces C18 柱 , 以甲醇—水—磷酸(65∶35∶0.1)为流动相 ,流速 0.6 mL·
min-1 ,检测波长 281 nm , 柱温为 30℃时直接测定。辣椒碱 、二氢辣椒碱 、降二氢辣椒碱线性范围分别为
77.23 ～ 407.15 μg·mL-1(r=0.9999)、14.03 ～ 75.80 μg·mL-1(r=0.9999)、1.62 ～ 10.00 μg·m L-1(r=
0.9999),回收率在 98%～ 100.5%之间 , RSD(n =4)为 0.95 ～ 2.2%。实验结果表明 , 该法快速 、简便 、准确
可靠。
关键词:高效液相色谱;指天椒;辣椒碱;二氢辣椒碱;降二氢辣椒碱
中图分类号:O657.72　　　文献标识码:A
Determination of three capsaicinoids in dried capsicum of Guangxi by HPLC
WANG Li-sheng1 , ZHANG Yang1 , PANG Li2 ,ZHOU Yong-hong1 , LIU Xong-min1
(1.Colleg e of Chemistry and Chemical Enginering , Guangxi Univ ersity , Nanning 530004 , China;
2.Co., Lit.Huahong Pharmaceutical , Nanning 530000 , China)
Abstract:A simple , rapid and reliable HPLC method for the determination of capsaicin , dihydro-
capsaicin and nordihydrocapsaicin in dried capsicum of Guangxi w as developed.By extrationing
w ith 65% ethanol and the membrane filt ration , the sample w as obtained.The determination con-
di tion w ere:Graces C18 ,30 ℃,methanol-water-phospho ric acid(65∶35∶0.1)w ith a flow rate of
0.6 mL·min-1 and detection w aveleng th 281 nm.The linear ranges of the calibration curves w ith
correlation coef ficients of 0.9999 w ere 77.23 ～ 407.15 μg·mL-1 ,14.03 ～ 75.80 μg·mL-1 and
1.62 ～ 10.00 μg ·mL -1 for Capsaicin , dihydrocapsaicin and no rdihydrocapsaicin respectively .
Their recoveries w ere in the range of 98%～ 100.5%, and their average RSD(n =4)were
0.95%～ 2.2%.
Key words:HPLC;Capsicum ;capsaicin;Dihydrocapsaicin;Nordihydrocapsaicin
辣椒包括辣椒和甜椒 ,又名番椒 、辣子 、海椒 、辣角 、辣茄 、指天椒等 ,属茄科辣椒属植物[ 1] 。国内外
的研究表明 ,辣椒碱类物质是辣椒中引起辛辣味的主要化学物质 ,具有多种生理药理活性 ,已被收载于
美国药典的 29版 ,主要用作减肥美容剂 、健胃消食剂 、外用止痛剂 、戒毒镇痛剂 、止痒剂 、预防心脏病药 、
天然抗氧化剂 、杀虫剂以及军事等[ 2-6] 。广西是蒜头果和辣椒等的一个重要产地[ 7] 。广西以指天椒而
第 34卷 第 3期
2009年 6月　
广西大学学报:自然科学版
Journal of Guangxi Univ ersity:Nat Sci Ed
Vol.34 , No.3
June 2009
DOI :10.13624/j.cnki.issn.1001-7445.2009.03.026
闻名 ,但大部分仅用于食品调料 ,没有实现更深层价值 ,因此从指天椒中提取辣椒碱 ,拓展其用途 ,具有
重要的研究意义 。辣椒碱类物质包含辣椒碱(capsaicin)、二氢辣椒碱(dihydrocapsaicin)和降二氢辣椒碱
(nordihydrocapsaicin)等香草酰胺类生物碱混合物[ 8] 。目前 ,纯化后辣椒碱类化合物的测定方法主要有
可见分光光度法 、FAO 紫外双比色法 、高效液相色谱法 、气-质联用测定法等[ 9-11] 。但还未见对不纯化
就直接同时测定辣椒碱 、二氢辣椒碱 、降二氢辣椒碱这 3种辣椒碱类化合物含量的文献报道。由于降二
氢辣椒碱在指天椒中含量较低 ,但美国药典 29版标准要求除辣椒碱和二氢辣椒碱外的降二氢辣椒碱等
含量不能超过 15%。为此 ,本文研究建立了 HPLC法同时直接测定广西指天椒中辣椒碱 、二氢辣椒碱
和降二氢辣椒碱等 3种成分的含量的方法 。实验结果表明 ,该方法快速 、简便 、准确度高 ,结果令人满
意。
1　实验部分
1.1　主要仪器与试剂
Waters 510高效液相色谱仪 ,配有 SPD-10A 紫外检测器(日本岛津公司)。索氏提取器(上海建强
玻璃仪器有限公司).陶瓷膜分离机(合肥世杰膜有限公司)。对照品:辣椒碱 、二氢辣椒碱和降二氢辣椒
碱 ,均为 SIGMA公司产品 ,纯度≥98%。广西指天椒(广西横县),购于广西南宁市场。
甲醇(HPLC 级),水(双蒸水),其余所用试剂均为分析纯 。
1.2　色谱条件
色谱柱:Graces C18 柱(250 mm ×4.6 mm , 5 μm);流动相:甲醇 —水 —磷酸(65∶35∶0.1);流速:
0.6 mL·min-1;检测波长:281 nm;柱温为 30℃;进样量:20μL 。
1.3　实验方法
1.3.1　标准溶液的制备
精密称取对照品辣椒碱 1.7500 g 、二氢辣椒碱 0.5750 g 和降二氢辣椒碱 0.1750 g(精确到 0.0001
g),置于 500 mL容量瓶中 ,加 65%乙醇溶解并稀释至刻度。取 10 mL 该溶液 ,置于 100 mL 容量瓶中 ,
加 65%乙醇溶解并稀释至刻度 ,得三种辣椒碱类物质总浓度为 500.0 μg·mL-1的对照品贮备液 。分别
精密吸取 2.0 , 3.0 , 4.0 , 5.0 , 6.0 , 7.0 ,8.0 ,9.0 ,10.0 mL 的对照品贮备液 ,分别置于 10.0 mL 容量瓶
中 ,用 65%乙醇稀释至刻度 ,得三种辣椒碱类物质总浓度为 100.0 , 150.0 , 200.0 , 250.0 , 300.0 , 350.0 ,
400.0 ,450.0 ,500.0 μg·mL-1的对照品溶液 。
1.3.2　样品的制备
按国标GB10465-89选优质干辣椒;在(60±1)℃烘干 4 ～ 8 h ,使含水量小于 8%;粉碎 40 ～ 100目 ,
置干燥器内备用 。取待测干辣椒粉约 100.00 g ,用 200 目滤布包住 ,置于索氏提取器中 ,用 900 mL
65%乙醇(V∶V)提取 10.0 h ,用 0.50 μm 陶瓷膜过滤 ,并用 65%乙醇定溶至 2 000 mL ,作为供试品溶
液备用。
1.3.3　样品测定
取供试品溶液 ,用 0.45 μm 滤膜过滤后 ,按色谱条件上机测定 。
2　结果与讨论
2.1　色谱条件的选择
2.1.1　检测波长的确定
取 3种辣椒碱类物质总浓度为 300.0μg·mL -1对照品溶液 ,用 65%乙醇溶液做参比 ,置紫外可见
分光光度仪中 ,用 200 ～ 600 nm 波长扫描 ,分析辣椒碱 、二氢辣椒碱和降二氢辣椒碱的吸收波长 ,综合
考虑各因素 ,选择在 281 nm 作为三种辣椒碱类物质混合物的检测波长。
333第 3 期 王立升等:HPLC 法测定广西指天椒中三种辣椒碱类物质的含量
2.1.2　流动相的选择
我们曾参考相关文献 ,尝试用乙腈 —水(1∶1)作为流动相[ 10 , 11] 。但试验发现 ,降二氢辣椒碱和辣椒
碱这两个组分的峰不能分离开 ,即使调整流速和改进样品前处理方法后 ,仍无法将这两个组分的峰分
离。因此 ,对流动相条件进行改进 ,结果甲醇 —水 —磷酸(65∶35∶0.1)能使降二氢辣椒碱和辣椒碱及其
他组分分离开 ,且峰形良好(图 1 ～ 2)。降二氢辣椒碱和相邻辣椒碱色谱峰的分离度约为 1.65;理论板
数以辣椒碱峰计算应不低于 16 000 ,保留时间:降二氢辣椒碱在 17.30 ～ 17.40 min 、辣椒碱在 18.35 ～
18.50 min和二氢辣椒碱在 25.90 ～ 25.65 min。
　　
2.2　方法线性范围
按“1.3.1”配制 9个不同总浓度的 3种化合物的混合标准溶液 ,按“1.2”所述条件进行测定 ,以峰面
积(A)对相应的标准质量浓度(C , μg·mL-1)作线性回归 。辣椒碱类物质中辣椒碱的回归方程为:
A =8061.3C+28132 , r=0.9999 ,77.23 ～ 407.15 μg·mL-1;
二氢辣椒碱的回归方程为:A=8060.5C+5158.2 , r=0.9999 ,14.03 ～ 75.80μg·mL-1;
降二氢辣椒碱的回归方程为:A =8076.3C+573.33 , r=0.9999 , 1.62 ～ 10.00 μg·mL-1 。
回归方程虽然可向两端延伸 ,但由于受降二氢辣椒碱在指天椒中含量相对较低和辣椒碱在指天椒
中含量相对较高条件限制 ,被测指天椒提取液浓度不宜太低或太高。实验结果表明 ,3种辣椒碱类物质
总量在 2.00 ～ 10.00 μg 之间与峰面积线性关系良好 。
2.3　溶液放置稳定性试验
2.3.1　标准溶液放置稳定性试验
考虑到许多天然提取物在配成溶液后 ,容易失效及变化的特点 ,对同一份混合标准使用的对照品溶
液 ,进行为期 3个月的稳定性实验 ,观察其峰面积变化情况 ,结果发现 ,放在冰箱内使用的对照品溶液中
3种辣椒碱类物质性质均很稳定 ,3个月内未见明显变化。
2.3.2　样品溶液放置稳定性试验
取广西指天椒供试品溶液在 0 ,5 ,15 , 30 ,50 ,90 d分别进样 20 μL ,观察记录峰面积 , 90 d内未见明
显变化 ,表明在冰箱内 0℃保存的供试品溶液中 3种辣椒碱类物质性质均很稳定 。
2.4　回收率与精密度试验
2.4.1　加样回收率试验
分别称取一定量的 65%乙醇提取液 4份于 25 mL 容量瓶中 ,分别加入 3种辣椒碱类物质混合标
准 ,按实验方法进行测定 ,回收率及 RSD(n =4)结果见表 1。结果表明 , 3种待测物的平均回收率分别
为:辣椒碱 99%,二氢辣椒碱 100.5%和降二氢辣椒碱 98%。
334 广西大学学报:自然科学版 第 34 卷　
表 1　样品的加标回收试验
Tab·1　Results of recovery for capsaicinoids in different sample extracts
Compound Original/ mg Add/mg Found/mg Recovery/ % RSD/ %
Capsaicin
(辣椒碱)
0.154 , 0.149 ,
0.152 , 0.147 0.164
0.312 , 0.305 ,
0.313 , 0.316
98.0 , 97.0 ,
99.0 , 102 2.2
Dihydrocapsaicin
(二氢辣椒碱)
0.028 8 , 0.028 2 ,
0.028 5 , 0.028 0 0.041 6
0.071 1 , 0.070 5 ,
0.071 3 , 0.069 1
100 , 101 ,
102 , 99.0 0.95
Nordihydrocapsaicin
(降二氢辣椒碱)
0.003 7 , 0.003 3 ,
0.003 6 , 0.003 2 0.004 5
0.008 1 , 0.007 7 ,
0.007 7 , 0.007 5
99.0 , 100 ,
97.0 , 97.0 1.6
2.4.2　精密度试验
取浓度为 200μg·mL -1的辣椒碱对照品溶液各 20μL ,连续测定 6次 ,记录峰面积并计算 ,结果辣
椒碱平均峰面积为 1 257 160 ,RSD值为 0.47%,表明仪器精密度良好。
2.5　样品含量测定
按实验方法对广西 65%乙醇溶液提取液样品分别进行 6次平行测定 ,计算出广西指天椒中的辣椒
碱 、二氢辣椒碱和降二氢辣椒碱的含量(对干指天椒粉)分别为 0.1896%、0.0963%和 0.0153%,并求出
3种辣椒碱类物质各自占 62.96%,31.96%和 5.08%。
3　结　论
建立了用 HPLC法同时直接测定广西指天椒提取液中辣椒碱 、二氢辣椒碱和降二氢辣椒碱含量的
方法 。该方法同时能测定纯化后辣椒碱类物质能否达到美国药典 29版标准要求。该方法快速 、简便 、
准确度高 ,为广泛利用和开发广西指天椒提供了科学依据。
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(责任编辑　张晓云)
335第 3 期 王立升等:HPLC 法测定广西指天椒中三种辣椒碱类物质的含量