全 文 ：沙枣叶中提取的总黄酮化合物对羟基
自由基的清除作用
阎 娥 ,石玉萍 ,王永宁 ,李锦业
(青海师范大学化学系 ,青海西宁 810008)
摘要:以青海本地沙枣叶为原料 ,利用水作为提取介质对黄酮类化合物进行了提取 ,并对提取
液中黄酮类化合物对羟基自由基的清除作用进行了研究。结果表明:当黄酮浓度为 400 μg mL
时 ,对羟基自由基的清除率为 22.3%;黄酮浓度在 50 ～ 400 μg mL 范围内其清除率与浓度剂量
呈正相关。
关键词:沙枣叶;黄酮类化合物;羟基自由基;清除率
中图分类号:O622.4 文献标识码:A 文章编号:1006-8996(2006)03-0065-03
Hydroxyl radical eliminating activities of flavonoid extracted from
foliages of Elaeagnus angustifolia L
YAN E , SHI Yu-ping ,WANG Yong-ning ,LI Jin-ye
(Chemistry Department of Qinghai Normal University ,Xining 810008 ,China)
Abstract:In this paper , the hydroxyl radical eliminating activities of flavonoid extracted from Qinghai s
foliages of Elaeagnus angustifolia L by waterwas studied.The results indicate that the eliminating ratio of
hydroxyl radical reached 22.3%when flavonoid concentration is 400μg mL.The flavonoid concentration
in the range of 50 ～ 400μg mL is in proportion to eliminating ratio.
Key words:foliages of Elaeagnus angustifolia L;flavonoid;hydroxyl radical;eliminating ratio
沙枣(Elaeagnus angustifolia L)属胡颓子科(Elacgnaceac),具有保持水土和固定流沙的性能 ,主要分
布在西北地区 ,青海有着较为广泛的种植。经测定 ,沙枣花中黄酮类化合物的含量为 0.68%,比沙棘中
的0.00354%含量要高得多[ 1] 。本文测定了沙枣叶中黄酮类化合物对羟基自由基的清除作用 ,为沙枣叶
保健食品的开发提供理论依据 。
黄酮类化合物是具有酚羟基结构的一类还原性的化合物 ,其生理作用具有多种多样性。在复杂的
生物化学反应过程中由于黄酮类化合物的自身氧化而使其具有较强的抗氧化性[ 2] ,所以黄酮类化合物
在食品工业中也常作为抗氧化剂[ 1] 。
羟基自由基属于活性氧族 ,是正常有氧代谢的副产物 。在生理条件下 ,线粒体中的 H2O2 酶和过氧
化物酶的活性降低时 ,增多的 H2O 2和超氧化物可形成活性更强的·OH 可致脂质氧化链式反应 ,进一步
扩大细胞损伤。此外羟基自由基对氨基酶的攻击不仅破坏了细胞膜的通透性 ,引起细胞内外离子浓度
失衡 ,而且可抑制细胞间隙通讯(gapjunction intercerlular communication ,GJIC)使细胞信息传递通路发生障
碍。有研究表明[ 3] ,羟基自由基通过破坏间隙结构即所谓“连接蛋白质”而抑制 GJIC ,GJIC 的丧失或受
抑制 ,使转化细胞脱离正常细胞的控制无限生长而癌变;并且羟基自由基(·OH)会引起 DNA 的损伤或
调节细胞调亡相关基因而诱导细胞调亡 。
1 材料与方法
收稿日期:2005-10-28
作者简介:阎 娥(1963—),女 ,山西绛县人 ,副教授。主要从事分析化学的教学和研究。
第 24卷 第 3期
2006年 6月
青 海 大 学 学 报 (自 然 科 学 版)
Journal of Qinghai University(Nature Science)
Vol.24 No.3
Jun.2006
DOI :10.13901/j.cnki.qhwxxbzk.2006.03.021
1.1 芦丁标准溶液
准确移取 1.0 mL 、2.0 mL、3.0 mL 、4.0 mL 、5.0 mL 芦丁标准溶液 ,分别置于 25 mL 比色管中 ,加入
30%的乙醇溶液定溶于 10 mL ,然后依次加入 5%的NaN02 溶液 ,10%的A1(N03)3 溶液 ,10%的NaOH溶
液 ,用 30%的乙醇溶液定溶于 25 mL。于 510 nm 处测量吸光值 ,采用最小二乘法 ,得线性回归方程为
C=0.08632A+0.0005189 ,相关系数 R=0.9979。
1.2 黄酮类化合物的水提取
1.2.1 叶绿素的去除
摘取市场上买回的新鲜的沙枣枝上的沙枣叶 ,在自然条件下风干 ,称取干鲜沙枣叶 100.0 g ,采用豆
浆机的干磨功能进行粉碎 。由于叶子中叶绿素对比色法测定黄酮类化合物的影响 ,首先应去除叶绿素。
具体方法是加入一定量的石油醚浸取 60 min ,过滤后用蒸馏水进行洗涤 ,凉干后准确称重 ,得到 64.36 g
去除叶绿素的沙枣叶 。
1.2.2 黄酮类化合物的水提取
按新鲜干沙枣叶 5.0 g 的比例 ,准确称取除叶
绿素的沙枣叶 3.218 g ,装入带有回流冷凝的蒸馏
烧瓶中 ,考虑到干鲜沙枣花在浸取过程中的溶胀作
用使其体积膨大 ,要保持固液充分的接触 ,且有利
于采用分光光度法分析 ,通过实验确定最高固液比
为1:15。在不同温度下用不同的时间和不同的固
液比进行水提取。提取条件和方法按三因素三水
平设计(见表1)。提取液冷却至室温后进行抽滤 ,
用量筒准确量取滤液体积 ,装入磨口三角瓶中备
用 ,固体部分按上述方法在相同条件下进行第二 、
三 、四次浸提。
表 1 正交试验因素水平表
编号 温度(℃)
A
浸提固液比
B
浸提时间(min)
C
1 沸腾 1:15 30
2 沸腾 1:10 45
3 沸腾 1:5 60
4 75 1:15 45
5 75 1:10 60
6 75 1:5 30
7 55 1:15 60
8 55 1:10 30
9 55 1:5 45
2 提取液中黄酮类化合物对(·OH)的清除效果
2.1 黄酮类化合物对羟基自由基清除的原理
沙枣叶中提取的黄酮化合物对羟基自由基清除的原理:参照 Fenton反应方法建立·OH 自由基产生
体系模型 。H2O2 与二价铁离子混合后产生·OH 的Fenton反应为:
H2O2+Fe2+※·OH+OH-+Fe3+
·OH具有很高的反应活性 ,存活时间短 ,但在反应体系中加入水扬酸 ,能有效地捕捉·OH 并产生有
色产物。
该产物在 510 nm 处有强吸收 ,若加入具有清除·OH 功能的被测物(黄酮类化合物),可与水杨酸竞
争·OH ,从而使有色产物的生成量减少。采用固定时间反应法 ,在 510 nm 处测量被测物反应液的吸光
度 ,并与空白液比较 ,便能测定被测物对·OH的清除作用 。其清除率计算公式为:
清除率(%)=(AO-AX) AO×100%
式中AX为加入提取液后吸光度 ,AO为空白对照吸光度。
2.2 黄酮类化合物对(·OH)清除效果测定
66 青海大学学报 第 24卷
在25 mL 比色管中依次加入2 mmol L FeSO4 5 mL ,6 mmol L H2O2 5mL 摇匀后 ,再加入 6mmol L 水扬
酸至刻度并摇匀 ,于 37℃水浴中 15 min 取出 ,测其吸光度 AO ,然后加入一定浓度的粗提液 1 mL 摇匀。
水浴继续加热 15 min取出测其吸光度Ax ,结果见表 2和图 1。
表 2 黄酮浓度与清除自由基效果关系
试验编号 黄酮浓度(ug mL)
空白液吸
光度 AO
被测液
吸光度 AX 清除率(%)
1 0 0.48
2 0 0.48
3 50 0.48 0.432 10.0
4 100 0.50 0.438 12.5
5 150 0.50 0.429 14.2
6 200 0.50 0.425 15.0
7 250 0.49 0.420 16.4
8 300 0.49 0.408 18.7
9 350 0.49 0.403 19.8
10 400 0.51 0.386 22.3
图 1 不同浓度的黄酮类物质对羟基自由基清除的相关性
3 结论
以水为提取剂 ,在不同温度条件下 ,对沙枣叶中的有效成分进行提取 ,采用 Fenton 反应方法建立的
·OH自由基体系模型 ,对·OH 自由基进行清除。试验表明 ,沙枣叶提取物中不同浓度的黄酮类物质对羟
基自由基具有较好的清除能力 ,同时浓度与清除率之间具有较好的相关性 , 黄酮类物质浓度为
400 μg mL时清除率为 22.3%,浓度在 50 ～ 400 μg mL 范围内与清除率呈正相关 。
参考文献:
[ 1] 董世林.植物资源学[M] .哈尔滨:东北农业大学出版社 , 1994.176-186.
[ 2] 赵继红 ,梁 宇 ,颜达予.黄酮类化合物抗氧化性的结构因素[ J] .北方工业大学学报 , 2001 , 13(1):36-43.
[ 3] 夏世钧 ,吴中亮.分子毒理学基础[ M] .武汉:湖北科学技术出版社 ,2001.84-96.
(责任编辑 唐宏伟)
67第 3期 阎 娥等:沙枣叶中提取的总黄酮化合物对羟基自由基的清除作用