全 文 ：(TLC) ，在荧光 366 nm 下显紫红色。IR ν / cm －1:
3 433，2 928，1 457，1 383(CH3) ，1 693。TOF-MS-ES
m/z:911. 9034［2M － H］－，455. 4270［M － H］－。经
与熊果酸对照品进行三种溶剂系统共薄层，Rf 值完
全一致，混合熔点不下降，故确定该化合物为熊果酸
(ursolic acid)。
化合物 9:黄色粉末(甲醇) ，mp 214 ～ 216 ℃。
AlCl3-EtOH(TLC)喷雾，黄色荧光(366 nm 下检视)
加强。盐酸-镁粉反应呈阳性，Molish 反应为阳性。
UV λMeOHmax nm:206，253，349。 TOF-MS-ES m/z:
447. 1695［M － 1］－，255. 2617，227. 2063;木犀草苷
对照品在相同条件下显示 447. 1464［M － 1］－，
255. 2538，227. 2159，经与木犀草苷对照品共薄层，
Rf值完全一致。在相同 HPLC 条件下，与木犀草苷
对照品保留时间一致，混合熔点不下降，故确定该化
合物为木犀草苷(luteoloside)。
参 考 文 献
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收稿日期:2011-03-02
作者简介:程轩轩(1978-) ，女，博士，讲师，主要从事中药有效成分及药理活性研究;Tel:020-39352327，E-mail:xuanxuanch@ gmail. com。
高速逆流色谱法分离岩黄连中的生物碱类成分
程轩轩1，杨得坡2，王冬梅2，蒋 林2
(1. 广东药学院中药学院，广东 广州 510006;2. 中山大学药学院，广东 广州 510006)
摘要 目的:从岩黄连的粗提物中快速分离生物碱类成分。方法:采用高速逆流色谱技术，以正丁醇-乙酸乙
酯-水-甲酸(5∶ 1∶ 5∶ 0. 01)和正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸(5∶ 5∶ 1∶ 9∶ 0. 05)作为两相溶剂系统分离岩黄连中的主
要生物碱。结果:经过连续三次色谱分离，从岩黄连的正丁醇粗提物(300 mg)中得到 6 个纯度较高的生物碱，分别
为:scoulerine(3. 6 mg，质量分数:71%)、isocorydine(9. 2 mg，质量分数:92%)、dehydrocheilanthifoline(5. 5 mg，质量
分数:85%)、dehydrocavidine(7. 5 mg，质量分数:76%)、palmatine(20. 4 mg，质量分数:90%)、berberine(20. 9 mg，质
量分数:97%)。结论:采用高速逆流色谱法制备分离岩黄连中的生物碱，省时、方便、产物得率和纯度较高。
关键词 高速逆流色谱;岩黄连;生物碱
中图分类号:R284. 1 /R284. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2011)07-1062-03
Isolation of Alkaloids from Corydalis saxicola by High-speed
Counter-current Chromatography
CHENG Xuan-xuan1，YANG De-po2，WANG Dong-mei2，JIANG Lin2
(1. School of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China;2. School of Pharma-
ceutical Sciences，Sun Yat-sen University，Guangzhou 510006，China)
Abstract Objective:To develop a method for the rapid isolation of alkaloids from the crude extract of Corydalis saxicola. Meth-
ods:High-speed counter-current chromatography (HSCCC)was applied for the separation of alkaloids from Corydalis saxicola，with the
biphase solvent systems comprised n-butanol-ethyl acetate-water-formic acid (5∶ 1∶ 5∶ 0. 01)and n-butanol-ethyl acetate-methanol-wa-
ter-formic acid (5∶ 5∶ 1∶ 9∶ 0. 05). Results:About 300 mg of crude extract was isolated by HSCCC，yielding 3. 6 mg of scoulerine，9. 2
mg of isocorydine，5. 5 mg of dehydrocheilanthifoline，7. 5 mg of dehydrocavidine，20. 4 mg of palmatine and 20. 9 mg of berberine，with
purities of 71%，92%，85%，76%，90%，97%，respectively. Conclusion:It is time-saving and simple to isolate alkaloids from Corydalis
saxicola by HSCCC with high yields and purities.
Key words High-speed counter-current chromatography;Corydalis saxicola Bunting;Alkaloids
·2601· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 7 期 2011 年 7 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2011.07.024
高速逆流色谱法(high-speed counter-current
chromatography，HSCCC)建立在一种特殊的流体动
力学平衡基础上，利用螺旋管的高速行星式运动产
生的不对称离心力场，实现两相溶剂体系的充分保
留和有效混合及分配，可以在短时间内实现高效分
离和制备。因其不使用固相载体作固定相，克服了
固相载体带来的样品吸附、损失、污染和峰形拖尾等
缺点〔1〕。此项技术已被应用于生化、生物工程、医
药、天然产物化学、环境分析、地质等领域〔2，3〕。
岩黄连为罂粟科紫堇属植物石生黄堇 Corydalis
saxicola Bunting的全草，有清热解毒、利湿止痛、止
血之功效，是黔桂高寒山区珍贵的民间草药。经过
证实，生物碱类化合物是岩黄连中的主要活性成分，
具有抗病毒、抗炎、抗肿瘤、保肝利胆等作用。本研
究采用高速逆流色谱技术，通过对溶剂系统的组成、
比例的筛选以及色谱条件的优化，从岩黄连粗提物
中快速高效地分离出 6 个生物碱单体，分别为:
scoulerine(3. 6 mg，质量分数:71%)、isocorydine
(9. 2 mg，质量分数:92%)、dehydrocheilanthifoline
(5. 5 mg，质量分数:85%)、dehydrocavidine(7. 5 mg，
质量分数:76%)、palmatine(20. 4 mg，质量分数:
90%)、berberine(20. 9 mg，质量分数:97%)。
1 仪器与材料
QuilPrepTM Chassis MK V 500 /Series II HPLC
Pump高速逆流色谱仪(英国 /AECS 美国 SSI) ，配有
四组不锈钢线圈(110 mL × 4，2 mm)和 5 mL 定量
环;Waters Fraction Collector III 自动流分收集器;
Waters 600E型高效液相色谱仪，Waters 996 二极管
阵列检测器;Thermo LCQ DECA XP 高效液相色谱-
质谱联用仪(ESI-MS) ;JY 98-Ш 超声波细胞粉碎机
(宁波新芝生物科技有限公司)。
岩黄连药材采自广西省东兰县 GAP 种植基地，
经中山大学药学院杨得坡教授鉴定为罂粟科紫堇属
植物石生黄堇 Corydalis saxicola Bunting 的全草。
scoulerine、isocorydine、dehydrocheilanthifoline、de-
hydrocavidine、palmatine、berberine 对照品为实验室
自制(HPLC 检测质量分数 ＞ 95%)。色谱纯乙腈
(Tedia Company，Fairfield，USA) ;分析纯试剂:正丁
醇、乙酸乙酯、甲醇、甲酸等(天津市红岩化学试剂
厂)。
2 方法与结果
2. 1 供试品的制备 取适量岩黄连药材，粉碎过
60 目筛，用 6 倍量 95%乙醇超声提取 3 次(30 min /
次) ，过滤，合并滤液浓缩至无醇味，将浸膏混悬于
水中，用水饱和正丁醇萃取 3 次，合并萃取液，回收
溶剂，干燥后得提取物备用。正丁醇萃取物的纯化:
取大孔树脂 Diaion HP-20 约 66 g装柱，取 10 g正丁
醇萃取物上样。先用水洗脱至近无色，然后用 60%
MeOH洗脱，收集洗脱液，蒸干后得干膏 3. 5 g，备用。
2. 2 溶剂系统的制备 每次称取纯化后的正丁醇
萃取物约 2 mg置于试管中，分别取上相、下相溶液
各 2 mL溶解样品，充分震荡溶解。待两相平衡后，
分别取上相、下相溶液，挥干，再用甲醇溶解，进行
HPLC分析。计算不同溶剂系统中目标化合物的分
配系数 K值和两相溶剂系统的“平衡时间”。结果
见表 1。
表 1 不同溶剂系统的平衡时间及主要化合物在溶剂中的 K值
溶剂系统-固定相保留率 /% 组成比例 ST0/s
ST1
/s
目标化合物的分配系数 K值
1 2 3 4 5
正丁醇-乙酸乙酯-水-甲酸 /85% 5∶ 1∶ 5∶ 0. 01 18 16 0. 58 0. 86 1. 06 1. 37 2. 20
正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸 /70% 5∶ 5∶ 1∶ 9∶ 0. 05 17 29 0. 27 0. 39 0. 48 0. 64 1. 06
注:ST0 为加样品前溶剂系统的平衡时间，ST1 为加样品后溶剂系统的平衡时间，化合物1 ～ 5 分别为:isocorydine、dehydrocheilanthifoline、de-
hydrocavidine、palmatine、berberine
2. 3 HSCCC分离过程 将溶剂系统置分液漏斗
中，混匀，静置过夜，分成固定相(上层)和流动相
(下层)。使用前超声 30 min。称取纯化后的正丁
醇萃取物 300 mg，用 5 mL 的下相溶液溶解，作为
HSCCC的样品，备用。首先将固定相(上相)泵入高
速逆流色谱仪，待线圈内充满固定相后，调转速至
860 r /min。然后将流动相泵入色谱仪，待流动相从
管柱出口流出，基线稳定，即达到平衡时，将 5 mL样
品溶液(300 mg /5 mL)注入高速逆流色谱仪。流
速:1. 2 mL /min。紫外检测波长:270 nm。流分由自
动接收器收集，进样 130 min 后，停止主机转动，用
氮气将固定相推出，测固定相的保留率(见表 1)。
2. 4 HPLC 分析条件 色谱柱:GeminiTM C18(250
mm ×4. 6 mm，5 μm，Phenomenex Inc. ，USA) ，保护
柱 SecurityGuardTM C18(40 mm ×3. 0 mm，5 μm)。流
动相:A(乙腈)和 B(20 mmol /L的乙酸胺水溶液，冰
醋酸调至 pH 4. 5)。梯度洗脱程序为:0 ～ 10 min，
15% ～20% A;10 ～ 20 min，20% ～ 22% A;20 ～ 25
·3601·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 7 期 2011 年 7 月
min，22% A;25 ～ 30 min，22% ～ 24% A;30 ～ 45
min，24% ～29% A;45 ～ 65 min，29% ～ 80% A。流
速:1. 0 mL /min;检测波长:270 nm;柱温:室温;进样
量:10 μL。
2. 5 结果
2. 5. 1 两相溶剂系统的筛选:本实验分别对正丁
醇-甲醇-水-甲酸、正丁醇-乙醇-水-甲酸、正丁醇-乙
酸乙酯-水-甲酸、正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸、正
丁醇-乙酸乙酯-乙醇-水-甲酸、正丁醇-甲醇-水-冰醋
酸、正丁醇-乙酸乙酯-水-冰醋酸和正丁醇-乙酸乙
酯-甲醇-水-冰醋酸等溶剂系统进行了筛选。在不同
组成、配比的溶剂系统中，根据两相溶液的平衡时间
以及目标化合物在上相、下相中的分配系数情况，并
配合 HSCCC预试验的结果，最后确定正丁醇-乙酸
乙酯-水-甲酸(5∶ 1∶ 5∶ 0. 01)和正丁醇-乙酸乙酯-甲
醇-水-甲酸(5 ∶ 5 ∶ 1 ∶ 9 ∶ 0. 05)作为正丁醇萃取物的
HSCCC分离体系。
2. 5. 2 HSCCC 制备分离与产物鉴定:第一次
HSCCC分离:溶剂系统为正丁醇-乙酸乙酯-水-甲酸
(5∶ 1∶ 5∶ 0. 01) ，取纯化后的正丁醇提取物(300 mg)
溶解于 5 mL 的流动相中，HSCCC 分离后可将收集
到的流分合并为三段:Fr. I(46. 2 mg)、Fr. II ～ III
(69. 8 mg)、Fr. IV(20. 9 mg)。经过质谱鉴别及与
对照品比较保留时间，证实 Fr. IV为 berberine，ESI-
MS m/z:336［M］+(质量分数:97%)。
第二次 HSCCC 分离:溶剂系统为正丁醇-乙酸
乙酯-水-甲酸(5∶ 1 ∶ 5 ∶ 0. 01) ，将 Fr. I(46. 2 mg)溶
解于 5 mL的流动相中，经过分离得到四段组分:Fr.
V(3. 6 mg，质量分数:71%)、Fr. VI(9. 2 mg，质量分
数:92%)、Fr. VII(5. 5 mg，质量分数:85 %)、Fr.
VIII(7. 8 mg，质量分数:90%)。经过质谱鉴别及与
对照品比较保留时间，证实上述组分依次为:
scoulerine，ESI-MS m/z:328 ［M + H］+、isocorydine，
ESI-MS m/z:342［M + H］+、dehydrocheilanthifoline，
ESI-MS m/z:322［M］+、palmatine，ESI-MS m/z:352
［M］+。
第三次 HSCCC 分离:溶剂系统为正丁醇-乙酸
乙酯-甲醇-水-甲酸(5 ∶ 5 ∶ 1 ∶ 9 ∶ 0. 05) ，将 Fr. III
(69. 8 mg)溶解于 5 mL的流动相中，经过分离得到
两段组分:Fr. IX(7. 5 mg，质量分数:76%)、Fr. X
(12. 6 mg，质量分数:90%)。经过质谱鉴别及与对
照品比较保留时间，证实上述组分依次为:dehydro-
cavidine，ESI-MS m/z:350 ［M］+ 和 palmatine，ESI-
MS m/z:352［M］+。
综上，经过三次 HSCCC分离从岩黄连的正丁醇
提取物中得到 6 个生物碱化合物:scoulerine(3. 6
mg，质量分数:71%)、isocorydine(9. 2 mg，质量分
数:92%)、dehydrocheilanthifoline(5. 5 mg，质量分
数:85 %)、dehydrocavidine(7. 5 mg，质量分数:
76%)、palmatine(20. 4 mg，质量分数:90 %)、ber-
berine(20. 9 mg，质量分数:97 %)。
3 讨论
岩黄连中的生物碱含量较低，且多以原小檗型
结构为主。据文献〔4〕报道，岩黄连化学成分的分离
曾经采用硅胶、离子交换树脂、氧化铝柱色谱等传统
方法，操作繁琐、耗时长、样品损失大、产物得率低。
本研究将高速逆流色谱技术首次应用于岩黄连生物
碱的分离。据报道“氯仿-甲醇-盐酸”溶剂体系一直
以来被视为分离原小檗型生物碱的经典系统，但是
该溶剂体系不利于仪器保养，对于多组分生物碱同
时分离的效率不够理想。本实验筛选了系列两相溶
剂体系、优化了色谱条件，建立的 HSCCC 分离方法
具有快速、高效、制备量较大、纯度较高等特点。
参 考 文 献
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櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠櫠
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9-10.
《中药材》杂志为中国科技核心期刊。
·4601· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 7 期 2011 年 7 月