全 文 ：收稿日期:2010-01-29;　修订日期:2010-05-19
作者简介:刘朝亮(1978-),男(汉族),山西大同人 ,现
任中北大学化工与环境学院讲师 , 博士学位 ,主要从
事生物制药研究工作.
＊通讯作者简介:程轩轩(1978-),女(汉族), 辽宁抚
顺人 ,现任广东药学院中药学院讲师 ,博士学位 ,主要
从事中草药化学成分与药理活性研究工作.
高速逆流色谱法制备岩黄连中的脂溶性生物碱
刘朝亮 1 ,程轩轩2＊
(1.中北大学化工与环境学院 ,山西 太原　030051;
2.广东药学院中药学院 ,广东 广州　510006)
摘要:目的 采用高速逆流色谱法对岩黄连中的脂溶性生物碱进行制备分离。方法 经过筛选确定溶剂系统为正己烷-醋
酸乙酯-甲醇-水(3∶7∶5∶5;1.5∶5∶1.5∶5)、正己烷-醋酸乙酯-甲醇-0.2 mol/L盐酸(1∶3.5∶2.5∶4.5), 上相作固
定相 , 下相作流动相 ,转速 860 r/min,流速 1.2 ml/min。结果 经连续 3次高速逆流色谱分离 , 可直接从岩黄连的醋酸乙
酯粗提物(300 mg)中得到 4个纯度较高的脂溶性生物碱 ,经过与对照品比较保留时间及质谱鉴别 , 确定产物为 Cheilan-
thifoline(12.3mg,纯度:76.1%)、Thalictrifoline(3.6mg,纯度:83.1%)、Tetrahydropalmatine(13.7mg, 纯度:85.5%)、Cana-
dine(8.7 mg, 纯度:78.5%)。结论 采用高速逆流色谱法制备分离岩黄连中的脂溶性生物碱 , 快速 、简便 、产物得率和纯
度较高。
关键词:高速逆流色谱;　岩黄连;　生物碱
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.11.148
中图分类号:R283　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)11-3027-01
　　岩黄连系罂粟科紫堇属多年生草本植物石
生黄堇 CorydalissaxicolaBunting的全草。作为
黔桂高寒山区的特效草药 , 长期以来岩黄连一
直被广泛应用于治疗热毒痈疮 、急性腹痛 、急性
黄疸型肝炎等症。经过系统分离方法 , 我们已
经确定岩黄连的主要成分为生物碱 [ 1] 。鉴于
其中的化合物结构相似 , 制备纯化过程耗时长 、
溶剂消耗大 , 化合物得率低 ,本研究采用高速逆
流色谱法探索岩黄连中生物碱的快速制备方
法。
高速逆流色谱法(high-speedcountercour-
rentchromatography, HSCCC)是在 20 世纪 80
年代由美国 YoichiroIto教授首先研究和发展
起来的一种现代色谱分离制备技术 [ 2] 。 HSC-
CC不使用固相载体作固定相 ,克服了固相载体
带来的样品吸附 、损失 、污染和峰形拖尾等缺
点 [ 3] , 可在短时间内实现高效分离和制备。据
报道 , HSCCC制备分离生物碱的经典溶剂系统
为氯仿-甲醇体系;考虑到该溶剂对仪器的损
耗 , 本研究根据溶剂平衡时间 、化合物分配系数
等参数对多组溶剂系统进行筛选 , 建立了快速
制备分离岩黄连中脂溶性生物碱的 HSCCC方
法。
1　材料与仪器
1.1　试剂及药品 色谱纯试剂:乙腈(Tedia
Company, Fairfield, USA)分析纯试剂:正己烷 ,
醋酸乙酯 , 甲醇 , 盐酸(天津市红岩化学试剂
厂)。 对 照品:Cheilanthifoline, Thalictrifoline,
Tetrahydropalmatine, Canadine为实验室自制(HPLC检测纯度 >95%)。
1.2　仪器 QuilPrepTMChassisMKV500/SeriesIIHPLCPump高速逆流色谱仪(英
国 /AECS美国 SSI),配有四组不锈钢线圈(110 ml×42 mm)和 5 ml定量环;Waters
FractionColectorIII自动流分收集器;Waters600E型高效液相色谱仪 , Waters996
二极管阵列检测器。 ThermoLCQDECAXP高效液相色谱 -质谱联用仪(ESI-
MS);JY98-Ш超声波细胞粉碎机(宁波新芝生物科技有限公司)。
2　方法
2.1　供试品的制备 取适量岩黄连药材粉碎过 60目筛 ,用 6倍量 95%乙醇超声提
取 3次 ,过滤 , 合并滤液浓缩后混悬于水中 ,用醋酸乙酯萃取 3次 , 合并萃取液 , 回
收溶剂 ,干燥后得提取物备用。
2.2　HSCCC溶剂系统选择 每次称取醋酸乙酯萃取物约 4 mg置于试管中 , 分别
取上相 、下相溶液各 2 ml溶解样品 , 充分振荡溶解。待两相平衡后 , 分别取上相 、
下相溶液 ,挥干 , 再用甲醇溶解 ,进行 HPLC分析。计算不同溶剂系统中 , 目标化合
物的分配系数 K值和两相溶剂系统的 “平衡时间 ”:即当上相与下相溶剂混合时 ,
两相系统达到完全分层的时间 , 该参数与固定相的保留率密切相关。
K=目标化合物在上相溶液中的峰面积值 A1目标化合物在下相深液中的峰面积值 A2
表 1　不同溶剂系统的平衡时间及主要化合物在溶剂中的 K值
溶剂系统 组成比例 ST0/s
ST
1
/
s
目标化合物的分配系数 K值
a b c d
正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水 3∶7∶5∶5 17 16 0.76 0.86 0.58 1.14
正己烷-醋酸乙酯-甲醇-0.2mol/L盐酸 1∶3.5∶2.5∶4.5 18 19 0.58 0.85 1.82 0.99
正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水 1.5∶5∶1.5∶5 13 13 0.71 0.94 1.07 0.99
　　ST。:加样品前溶剂系统的平衡时间;ST1:加样品后溶剂系统的平衡时间
2.3　HSCCC制备分离 将溶剂系统置分液漏斗中 , 混匀 , 静置过夜 , 分成固定相
(上层)和流动相(下层)。使用前超声 30min。称取醋酸乙酯萃取物 300 mg, 用 5
ml的下相溶液溶解 , 作为 HSCCC的样品 , 备用。
首先将固定相(上相)泵入高速逆流色谱仪 , 待线圈内充满固定相后 , 调转速
至 860 r/min。然后将流动相泵入色谱仪 , 待流动相从管柱出口流出 ,基线稳定 , 即
达到平衡时 ,将 5 ml样品(300 mg/5 ml)溶液注入高速逆流色谱仪。流速为 1.2
ml/min, 转速为 860r/min。紫外检测器 , 检测波长为 270 nm。流份由自动接收器
收集。进样 110 min后 ,停止主机转动 , 用氮气将固定相推出 , 测得保留率均大于
80%。
3　结果
本实验中 ,曾先后对溶剂系统:正己烷-甲醇-水 、正己烷 -醋酸乙酯 -甲醇-水 、正
己烷-醋酸乙酯-甲醇-盐酸 、石油醚-醋酸乙酯-水 、石油醚-醋酸乙酯-甲醇-水等进行
·3027·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.11 时珍国医国药 2010年第 21卷第 11期
了筛选。以两相溶液的平衡时间以及目标化合物的分配系数为
参数 , 并结合固定相的保留率 , 最终确定醋酸乙酯萃取物的 HSC-
CC溶剂系统 , 如表 1所示。
按照表 1中的溶剂体系 , 先后对醋酸乙酯萃取物(见图 1)进
行 3次 HSCCC制备分离 ,分离得到的流份进行 HPLC分析 ,将化
学组成相同的流份合并后 , 浓 、缩干燥 , 收集其中纯度较高的 4段
组分(见图 1:a～ d)。经过质谱鉴别及与对照品比较保留时间 ,
确定 4组生物碱分别为:a:Cheilanthifoline, ESI-MS:m/z326
[ M+H] +(12.3mg, 纯度:76.1%);b:Thalictrifoline, ESI-MS:
m/z354 [ M+H] +(3.6mg, 纯度:83.1%);c:Tetrahydropalma-
tine, ESI-MS:m/z356 [ M+H] +(13.7mg, 纯度:85.5%);d:
Canadine, ESI-MS:m/z340 [ M+H] +(8.7mg,纯度:78.5%)。 a.Cheilanthifoline　b.Thalictrifoline　c.Tetrahydropalmatine　d.Canadine
图 1　岩黄连醋酸乙酯萃取物和 HSCCC分离产物的HPLC图谱
4　讨论
采用高速逆流色谱法制备分离岩黄连中的生物碱的研究未
见文献报道。笔者在前期研究中 ,采用系统分离方法对岩黄连的
醋酸乙酯萃取物部分进行多次柱层析 ,脂溶性生物碱的得率仅为
0.1%左右。本文通过优选溶剂系统 ,经 3次 HSCCC分离可从醋
酸乙酯粗提物中直接获得较高纯度的生物碱化合物 ,且产物得率
较高(约 1.2% ～ 4.6%)。与传统的柱层析分离方法相比 , 高速
逆流色谱法耗时短 、步骤简单 、节约溶剂 ,避免了多次反复柱层析
造成的样品损失 ,而且流动相的选择范围较宽 , 在短时间内可以
实现高效分离和制备。
参考文献:
[ 1 ] 　XuanxuanCheng, DongmeiWang, LinJiang, etal.DNATopoisomerase
IInhibitoryAlkaloidsfromCorydalissaxicola[ J] .Chemistry＆Biodi-
versity, 2008, 5(7):1335.
[ 2 ] 　曹学丽.高速逆流色谱分离技术及应用 [ M].北京:化学工业出版
社 , 2005:16.
[ 3 ] 　张天佑.逆流色谱技术 [ M] .北京:科学技术出版社 , 1991:267.
临床报道
收稿日期:2010-01-18;　修订日期:2010-06-10
作者简介:雷丹琼(1965-),女(汉族),湖北武汉人 ,现任黄石理工学院医
学院副教授 ,副主任医师 , 硕士学位 ,主要从事妇产科临床教学和临床研
究工作.
用卡孕栓预防妊高征产后出血 54例方法探讨
雷丹琼
(黄石理工学院·医学院 ,湖北 黄石　435003)
摘要:目的 观察卡孕栓预防妊高征产后出血的临床效果。方法 妊高征卡孕栓组在胎儿胎盘娩出后经阴道分娩用于阴
道后穹窿 , 剖腹产于宫腔置入卡孕栓 1枚(1 mg), 放置 2min待其溶解后退出手指。结果 妊高征卡孕栓组产后 2h出血
量少于妊高征催产素组(P<0.01)。结论 卡孕栓对预防妊高征产后出血效果显著 , 副作用小 ,用药安全 , 不良反应少 , 值
得临床推广应用。
关键词:卡孕栓;　预防;　妊高征;　产后出血
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.11.149
中图分类号:R714　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)11-3028-02
　　产后出血是产科临床常见的严重并发症 ,是导致我国孕产妇
死亡的重要原因之一。产后出血的原因有多种 ,子宫收缩乏力约
占产后出血的 90%[ 1] 。近几年来 , 笔者医院临床上应用卡孕栓
来预防产后出血 ,有一定疗效。产后出血也是妊高征的并发症之
一 , 由于催产素存在较大的个体敏感差异性 ,麦角新碱具有升压
作用 , 使这种药物对妊高征产妇的子宫收缩的疗法不显或应用警
惕。本文采用前瞻性研究方法观察卡孕栓对妊高征产后出血预
防作用 。
1　资料和方法
1.1　研究对象 妊高征产妇 54例和非妊高征产妇 25例 ,均选自
我院产科足月妊娠分娩产妇 , 妊高征分轻 、中 、重度 , 再以随机方
·3028·
时珍国医国药 2010年第 21卷第 11期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.11