全 文 ：·中草药· 北方园艺２０１５（２０）：１３８～１４２
第一作者简介：苏江（１９８０－），女，广西宁明人，硕士，讲师，现主要
从事植物组织培养及生物技术等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｏｎｇｙｏｎｇ２０
＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：广西教育厅科研资助项目（２００９１１ＭＳ２２１）；河池学院引
进人才科研启动费资助项目（２０１０ＱＳ－Ｎ００８）；广西高校重点实验
室桂西北特色资源研究与开发实验室资助项目（桂教科研［２００６］
６号）。
收稿日期：２０１５－０５－２５
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１５２００３４
抗坏血酸对岩黄连愈伤组织褐化及
抗氧化酶活性的影响
苏 江，岑 忠 用，奉 艳 兰，简 志 超
（河池学院 化学与生物工程学院，广西 宜州５４６３００）
摘 要：以岩黄连愈伤组织为试材，采用固体培养方法，研究不同浓度的抗坏血酸对岩黄连
愈伤组织褐化及抗氧化酶活性的影响。结果表明：培养第２０天添加抗坏血酸的各处理岩黄连愈
伤组织的褐化率均低于对照，其中抗坏血酸浓度为１７５ｍｇ／Ｌ的处理岩黄连愈伤组织的褐化率最
低，其褐化率仅为１８．５％；在整个培养阶段，添加抗坏血酸的各处理岩黄连愈伤组织的抗氧化酶
活性均比对照的高，在培养第３０天各处理岩黄连愈伤组织的ＰＯＤ和ＳＯＤ活性均为最高值，其中
抗坏血酸浓度为１７５ｍｇ／Ｌ的处理岩黄连愈伤组织的ＰＯＤ和ＳＯＤ活性均为最高，分别达到
３５．２４Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１、１６２．７９Ｕ·ｇ－１；在培养第２０天添加抗坏血酸的各处理ＣＡＴ活性均为最
大值，分别比对照高了２．２８、３．２１、５．３３、３．５１Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１。
关键词：抗坏血酸；岩黄连；愈伤组织；褐化；抗氧化酶
中图分类号：Ｓ ５６７．５＋２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１５）２０－０１３８－０５
愈伤组织是植物组织中常见的培养形态和再生植
株的重要阶段，同时也是研究植物生长发育及分化机制
的良好器官［１］。但在培养过程中，愈伤组织常常发生褐
化现象，从而抑制细胞中一些抗氧化酶的活性，影响细
胞的正常代谢，最终可导致组织的死亡。因此，缓解防
止愈伤组织褐化的发生和发展，是植物组织培养中急需
解决的重要问题。目前已有许多学者对植物组织培养
中愈伤组织的褐化现象及抗氧化酶活性的变化进行了
不同程度的研究。闫桂琴等［２］对翅果油树愈伤组织诱
导中褐化问题的研究表明，抗氧化剂维生素 Ｃ和
Ｎａ２Ｓ２Ｏ３能减轻翅果油树外植体和愈伤组织的褐化程
度。郑超等［３］研究发现，抗氧化剂维生素Ｃ和柠檬酸处
理曼地亚红豆杉愈伤组织，能有效抑制总酚的积累，降
低其褐化程度。常云霞等［４］对大豆愈伤组织抗渗透胁
迫的研究表明，培养基中添加抗坏血酸可以显著提高超
氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化物酶（ＰＯＤ）活性，降低膜
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ｂｅｔｔｅｒ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ ｔｈｅ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ａｄａｐｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｒｕｂｕｓ ｃｈｉｎｇｉ ｆｒｏｍ Ｄｅｘｉｎｇ，Ｊｉａｎｇｘｉ，ｔｈｅ ａｎａｔｏｍｉｃａｌ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ ｏｆ ｉｔｓ ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ ｏｒｇａｎｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｗｉｔｈ ｏｐｔｉｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ｐａｒａｆｉｎ ｓｅｃｔｉｏｎ，ｆｒｅｅｈａｎｄ ｓｅｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ
ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ ｗｉｔｈ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｘｙｌｅｍ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｐｈｅｌｅｍ ｌａｙｅｒ ｗｅｒｅ
ｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｘｙｌｅｍ ｗａｓ ｈｅｌｐｆｕｌ ｆｏｒ ａｄｄｉｎｇ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ’ａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｍｉｎｅｒａｌ ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ ａｎｄ
ｗａｔｅｒ．Ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｐｈｅｌｅｍ ｌａｙｅｒ ｃｏｕｌｄ ｐｒｏｔｅｃｔ ｒｏｏｔｓ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｈｅａｔ ｉｎｊｕｒｙ ｔｏ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｒｏｏｔｓ’
ｄｒｏｕｇｈｔ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ．Ｉｔ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｌｏｔｓ ｏｆ ｘｙｌｅｍ ｐａｒｅｎｃｈｙｍａ ｃｅｌｓ，ｗｏｏｄ ｒａｙｓ，ｐｈｌｏｅｍ ｒａｙｓ ａｎｄ ｐｈｌｏｅｍ
ｐａｒｅｎｃｈｙｍａ ｃｅｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ ｗｈｅｒｅ ｒｅｓｅｒｖｉｎｇ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ．Ｖｅｓｓｅｌ ｅｌｅｍｅｎｔ ｗａｓ ｎｏｔ ｏｎｌｙ
ｂｉｇ ｄｉａｍｅｔｅｒ ｂｕｔ ａｌｓｏ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｅｍ；ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｐｉｔｈ ｗａｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ
ｓｔｅｍ．Ｌｅａｆ ｗａｓ ｔｙｐｉｃａｌ ｂｉｆａｃｉａｌ，ｔｈｅ ｕｐｐｅｒ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｃｅｌｓ ｗｅｒｅ ｎｅａｔｌｙ ａｒｒａｎｇｅｄ ｃｌｏｓｅｒ；ｒａｒｅ ｓｔｏｍａｔａ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｏｎ ｕｐｐｅｒ
ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ．Ｍｏｒｅ ｓｔｏｍａｔａ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｓ ｕｎｄｅｒ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ．Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｐａｌｉｓａｄｅ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ｓｐｏｎｇｙ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎ ｌｅａｆ．Ｔｈｅ
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｓｐｂｅｒｒｙ ｌｅａｆ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｓｕｎ ｌｅａｖｅｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｒｕｂｕｓ ｃｈｉｎｇｉ；ｐａｒａｆｉｎ ｓｅｃｔｉｏｎ；ａｎａｔｏｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ；ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ａｄａｐｔａｂｉｌｉｔｙ
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北方园艺２０１５（２０）：１３８～１４２ ·中草药·
脂过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）含量。
岩黄连（Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｓａｘｉｃｏｌａ Ｂｕｎｔｉｎｇ）是黔桂高寒山
区珍贵的中草药材，其全草含脱氢卡维汀（岩黄连碱）等
活性成分；具有显著的抗菌、消炎、镇痛和强安定作用，
并有抑制肿瘤细胞作用；主治肝炎特别是乙型肝炎、肝
硬化、肝癌等，疗效显著［５］，由于岩黄连有巨大的经济价
值，目前产品供不应求，由此引起人们大量采挖和收购，
导致岩黄连资源日益匮乏，野生类型的岩黄连对环境条
件要求十分苛刻，只生长在石灰岩地区阴湿的岩洞口，
温度在１５～２５℃之间，属石山特有种，产量极低，列入中
国南部濒危植物名录［６］。目前，人工栽培主要是引种野
生种，并通过种子育苗繁殖，而种子育苗繁殖周期长，种
子萌发率低，只有１５％～３０％［７］，这对其大面积的人工
栽培产生了一定的限制，也无法满足岩黄连产品生产所
需的药源。因此，挽救岩黄连野生资源已成为当务之
急，结合现代生物技术进行组织培养、工厂化育苗已成
为解决其快速繁殖的重要途径。
国内外学者对岩黄连的组织培养进行了一定的研
究，程华等［８］分别用岩黄连的叶、茎、根作为外植体诱导
愈伤组织，发现叶片诱导率最高，诱导速度最快，表明叶
片最适合诱导愈伤组织。陆瑞群等［９］研究发现，岩黄连
茎尖消毒效果较好的灭菌时间是６ｍｉｎ，Ｂ５是较好的诱
导芽的培养基。苏江等［１０］研究表明，叶柄和叶片的愈伤
组织诱导率明显高于茎节和茎尖，其中叶片诱导率最高
为４６．６７％。目前，关于岩黄连愈伤组织褐化及抗氧化
酶活性的研究尚鲜见报道。该研究以抗坏血酸为抗氧
化剂，研究不同浓度的抗坏血酸对岩黄连愈伤组织褐化
及抗氧化酶活性的影响，旨在为解决其组织培养过程的
褐化问题提供参考，从而加速其工厂化育苗的进程。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
供试所用的岩黄连植株购于广西靖西县中药材市
场，并经河池学院覃勇荣教授鉴定。
１．２ 试验方法
１．２．１ 材料处理 取生长健壮的植株，分别切取长３～
４ｃｍ的茎尖、茎节（带侧芽）、叶柄和完整的叶片作为组
织培养的外植体材料。将茎尖、茎节（带侧芽）、叶柄、叶
片４种外植体分别接种到诱导愈伤组织的培养基ＭＳ＋
ＴＤＺ ０．２ｇ／ｍＬ＋ＮＡＡ ０．１ｇ／ｍＬ＋ＢＡ ０．０５ｇ／ｍＬ上，
在弱光２５℃ 条件下培养２０～６０ｄ形成愈伤组织。取愈
伤组织接种于培养基１／２ＭＳ＋ＴＤＺ ０．４ｇ／ｍＬ＋ＮＡＡ
０．２ｇ／ｍＬ＋ＢＡ ０．１ｇ／ｍＬ上进行增殖培养，备用。
１．２．２ 试验设计 挑选生长状况一致的岩黄连愈伤组
织，转接到不同抗坏血酸浓度处理培养基上，处理培养
基配方详见表１。每个处理接种岩黄连愈伤组织２０
瓶，每瓶接种愈伤组织８～１０团，于弱光２５℃条件下
培养。
表１ 处理及培养基种类
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ａｎｄ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
培养基成分
Ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ／（ｍｇ·Ｌ－１）
ＣＫ １／２ＭＳ＋ＴＤＺ ０．４＋ＮＡＡ ０．２＋ＢＡ ０．１
Ｔ１ １／２ＭＳ＋ＴＤＺ ０．４＋ＮＡＡ ０．２＋ＢＡ ０．１＋抗坏血酸７５
Ｔ２ １／２ＭＳ＋ＴＤＺ ０．４＋ＮＡＡ ０．２＋ＢＡ ０．１＋抗坏血酸１２５
Ｔ３ １／２ＭＳ＋ＴＤＺ ０．４＋ＮＡＡ ０．２＋ＢＡ ０．１＋抗坏血酸１７５
Ｔ４ １／２ＭＳ＋ＴＤＺ ０．４＋ＮＡＡ ０．２＋ＢＡ ０．１＋抗坏血酸２２５
１．３ 项目测定
于培养后１０、２０、３０、４０、５０ｄ测定过氧化物酶、过氧
化氢酶、超氧化物歧化酶等活性及丙二醛含量，并于培
养后２０ｄ统计不同处理愈伤组织的褐化率。丙二醛
（ＭＤＡ）含量测定采用硫代巴比妥酸（ＴＢＡ）法［１１］；ＰＯＤ
活性测定采用愈刨木酚法［１２］；ＳＯＤ活性测定采用氮蓝
四唑法［１２］；ＣＡＴ活性测定采用过氧化氢法［１１］。
２ 结果与分析
２．１ 不同处理对岩黄连愈伤组织褐化的影响
由表２可知，培养２０ｄ后对照的岩黄连愈伤组织大
部分已经发生了褐化，其褐化率高达７５．９％，添加抗坏
血酸的各处理岩黄连愈伤组织的褐化率均低于３０％，说
明抗坏血酸能有效减缓岩黄连愈伤组织褐化的发生，其
中抗坏血酸浓度为１７５ｍｇ／Ｌ处理的岩黄连愈伤组织褐
化率最低，仅为１８．５％。
表２ 不同处理对岩黄连愈伤组织褐化的影响
Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｏｆ
ｃａｌｕｓ ｏｆ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｓａｘｉｃｏｌａ Ｂｕｎｔｉｎｇ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
接种愈伤组织数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｃａｌｕｓ／团
褐变愈伤组织数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｂｒｏｗｎｉｎｇ
ｃａｌｕｓ／团
褐变率
Ｂｒｏｗｎｉｎｇ
ｒａｔｅ／％
ＣＫ １６６ １２６ ７５．９
Ｔ１ １７５ ４６ ２６．３
Ｔ２ １６８ ３９ ２２．６
Ｔ３ １７３ ３２ １８．５
Ｔ４ １７９ ３７ ２０．７
２．２ 不同处理对岩黄连愈伤组织过氧化物酶活性的
影响
过氧化物酶（ＰＯＤ）是广泛存在于植物体内且功能
较多的酶类，在水分胁迫等逆境中可清除活性氧对细胞
膜过氧化，可参与吲哚乙酸水平调节、膜透性的调节、脂
肪酸氧化以及抗病、抗感染的伤害，减少膜脂过氧化，稳
定膜系统。
从图１可知，在培养５０ｄ内，对照岩黄连愈伤组
织的过氧化物酶活性均为下降趋势且都比添加抗坏血
酸的处理低，添加抗坏血酸的各处理岩黄连愈伤组织
的过氧化物酶活性呈先上升后下降的趋势，在培养后
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·中草药· 北方园艺２０１５（２０）：１３８～１４２
第３０天添加抗坏血酸的各处理过氧化物酶活性均为
最大值，其中抗坏血酸浓度为１７５ｍｇ／Ｌ的处理为
３５．２４Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１，比对照高３２．７９Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１；
抗坏血酸浓度为２２５ｍｇ／Ｌ的处理为２０．３２Ｕ·ｇ－１·
ｍｉｎ－１，比对照高１７．８７Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１；抗坏血酸浓度为
１２５ｍｇ／Ｌ的处理为１３．２１Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１，比对照高
１０．７７Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１；抗坏血酸浓度为７５ｍｇ／Ｌ的处理
为９．８４Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１，比对照高７．４１Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１。
在整个培养过程中，抗坏血酸浓度为１７５ｍｇ／Ｌ的处理
其岩黄连愈伤组织的过氧化物酶活性均为最高，其次是
抗坏血酸浓度为２２５ｍｇ／Ｌ的处理。在培养５０ｄ后，添
加抗坏血酸的各处理岩黄连愈伤组织的过氧化物酶活
性仍高于处理前水平。
图１ 不同处理对岩黄连愈伤组织
过氧化物酶活性的影响
Ｆｉｇ．１ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｏｎ ＰＯＤ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ
ｃａｌｕｓ ｏｆ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｓａｘｉｃｏｌａ Ｂｕｎｔｉｎｇ
２．３ 不同处理对岩黄连愈伤组织过氧化氢酶（ＣＡＴ）活
性的影响
ＣＡＴ 是植物清除 Ｈ２Ｏ２的关键酶之一。从图２可
知，在培养５０ｄ内，添加抗坏血酸的各处理岩黄连愈伤
组织的过氧化氢酶活性均高于对照，在培养后第２０天
添加抗坏血酸的各处理过氧化氢酶活性均为最大值，分
别比对照高了２．２８、３．２１、５．３３、３．５１Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１。
在整个培养过程中，对照岩黄连愈伤组织的过氧化氢酶
活性越来越低，培养３０ｄ后除抗坏血酸浓度为１７５ｍｇ／Ｌ
的处理外，其余各处理岩黄连愈伤组织的过氧化氢酶活
性均低于处理前水平。
２．４ 不同处理对超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性的影响
ＳＯＤ是植物体内一种重要的抗氧化酶，是植物体内
清除活性氧自由基的关键酶，其活性的强弱与植物的抗
氧化能力和抗逆性强弱密切相关。同时，ＳＯＤ也是愈伤
组织内重要的保护酶之一，参与各项重要的生理活动，
其活性的高低反映了愈伤组织的生理活性状况［１３］。
从图３可知，在培养５０ｄ内，各处理岩黄连愈伤组
织超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性的变化与其过氧化物酶
活性的变化相似，即对照岩黄连愈伤组织的超氧化物歧
图２ 不同处理对岩黄连愈伤组织
过氧化氢酶活性的影响
Ｆｉｇ．２ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｏｎ ＣＡＴ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ
ｃａｌｕｓ ｏｆ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｓａｘｉｃｏｌａ Ｂｕｎｔｉｎｇ
化酶活性为下降趋势且比添加抗坏血酸处理的低，添加
抗坏血酸的各处理岩黄连愈伤组织的超氧化物歧化酶
活性均呈先上升后下降的趋势。在培养后第３０天添加
抗坏血酸的各处理超氧化物歧化酶活性均为最大值，分
别比对照高了３７．９２、４７．４７、６０．１５、４４．１８Ｕ／ｇ。在整个
培养过程中，抗坏血酸浓度为１７５ｍｇ／Ｌ的处理其岩黄连
愈伤组织的超氧化物歧化酶活性均为最高，其次是抗坏
血酸浓度为２２５ｍｇ／Ｌ的处理。在培养５０ｄ后，添加抗
坏血酸的各处理岩黄连愈伤组织的超氧化物歧化酶活
性仍高于处理前水平。
图３ 不同处理对岩黄连愈伤组织
超氧化物歧化酶活性的影响
Ｆｉｇ．３ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｏｎ ＳＯＤ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ
ｃａｌｕｓ ｏｆ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｓａｘｉｃｏｌａ Ｂｕｎｔｉｎｇ
２．５ 不同处理对丙二醛（ＭＤＡ）含量的影响
ＭＤＡ是在逆境条件下发生膜脂过氧化作用或植物
器官衰老的产物，会严重损害生物膜，通常利用它作膜
脂过氧化指标，表示细胞膜脂过氧化程度及对逆境的抵
抗强弱。从图４可知，在培养５０ｄ内，对照的岩黄连愈
伤组织丙二醛含量为上升趋势且都比添加抗坏血酸的
处理高，添加抗坏血酸的各处理岩黄连愈伤组织的丙二
醛含量均呈先下降后上升的趋势。在培养后０～２０ｄ，
添加抗坏血酸的各处理岩黄连愈伤组织的丙二醛含量
均低于处理前的水平，且在培养后第１０天添加抗坏血酸
的各处理岩黄连愈伤组织的丙二醛含量均为最低，其中抗
坏血酸浓度为７５ｍｇ／Ｌ的处理为０．１８９μｍｏｌ／ｇ ＦＷ，比对
０４１
北方园艺２０１５（２０）：１３８～１４２ ·中草药·
照低０．１５８μｍｏｌ／ｇ ＦＷ；抗坏血酸浓度为１２５ｍｇ／Ｌ的处
理为０．１９２μｍｏｌ／ｇ ＦＷ，比对照低０．１５５μｍｏｌ／ｇ ＦＷ；抗
坏血酸浓度为１７５ｍｇ／Ｌ的处理为０．１６９μｍｏｌ／ｇ ＦＷ，比
对照低０．１７８μｍｏｌ／ｇ ＦＷ；抗坏血酸浓度为２２５ｍｇ／Ｌ的
处理为０．１６３μｍｏｌ／ｇ ＦＷ，比对照低０．１８４μｍｏｌ／ｇ ＦＷ。
培养３０ｄ后除抗坏血酸浓度为１７５ｍｇ／Ｌ的处理外，其
余各处理岩黄连愈伤组织的丙二醛含量均高于处理前
的水平。培养５０ｄ后各处理岩黄连愈伤组织的丙二
醛含量均为最大值，其中对照岩黄连愈伤组织的丙二
醛含量最高为２．４３２μｍｏｌ／ｇ ＦＷ，而抗坏血酸浓度为
１７５ｍｇ／Ｌ的处理岩黄连愈伤组织的丙二醛含量最低，
仅为０．６７４μｍｏｌ／ｇ ＦＷ。
图４ 不同处理对岩黄连愈伤组织丙二醛含量的影响
Ｆｉｇ．４ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ
ＭＤＡ ｏｆ ｃａｌｕｓ ｏｆ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｓａｘｉｃｏｌａ Ｂｕｎｔｉｎｇ
３ 结论与讨论
褐化是植物组织培养中较为常见的一种现象，在外
植体、愈伤组织、细胞培养等常有发生。褐化产物的产
生会导致外植体、愈伤组织、细胞、培养基的褐变，而且
对会一些酶的活性产生影响，从而抑制培养材料的生长
与分化，严重时甚至导致材料死亡［１４］。因此，控制褐化
的产生是部分植物组织培养中急需解决的问题。目前，
关于抑制或降低组织培养中褐化的途径有很多种［１５－１７］，
而使用抗氧化剂是防止褐变较好的方法。在植物组培
中用于抑制褐化常用的抗氧化剂有硫代硫酸钠、抗坏血
酸、柠檬酸等。
抗坏血酸是一种抗氧化剂，直接参与植物体内活性
氧的清除，也可通过抗坏血酸－谷胱甘肽循环清除过氧化
氢，从而保护植物有机体及其正常代谢，防止氧化胁迫
造成的伤害［４］。因此，在植物组织培养中抗坏血酸常被
用于减缓外植体及愈伤组织等的褐化问题。该研究以
不同浓度的抗坏血酸添加到培养基中，结果表明，添加
抗坏血酸的各处理岩黄连愈伤组织的过氧化物酶
（ＰＯＤ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）的
活性均高于对照，且在培养５０ｄ内各处理岩黄连愈伤组
织的过氧化物酶（ＰＯＤ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性
均比处理前的高，在培养３０ｄ内各处理岩黄连愈伤组织
的过氧化氢酶（ＣＡＴ）的活性均高于处理前的水平，说明
添加抗坏血酸后可以提高岩黄连愈伤组织的抗氧化酶
活性。此外，在整个培养阶段，抗坏血酸浓度为１７５ｍｇ／Ｌ
的处理，其岩黄连愈伤组织的抗氧化酶活性高于其它各
处理。抗氧化酶活性的提高将有利于减缓活性氧对细
胞的氧化和损害，从整个培养阶段看，添加抗坏血酸的
各处理岩黄连愈伤组织的膜脂过氧化产物ＭＤＡ含量均
低于对照，且在培养后２０ｄ内各处理岩黄连愈伤组织的
ＭＤＡ含量均低于处理前的水平；抗坏血酸浓度为
１７５ｍｇ／Ｌ的处理其岩黄连愈伤组织的 ＭＤＡ含量在整
个培养阶段均为最低，且在培养后３０ｄ其岩黄连愈伤组
织的ＭＤＡ含量仍低于处理的水平，说明添加抗坏血酸
后可以在一定时间内减缓膜脂的过氧化。ＭＤＡ含量可
以反映岩黄连愈伤组织受损的程度，而愈伤组织受损后
可促进其褐化的产生，该研究的结果表明，在培养２０ｄ
内各处理岩黄连愈伤组织的褐化率都明显低于对照，其
中抗坏血酸浓度为１７５ｍｇ／Ｌ的处理，其岩黄连愈伤组
织的褐化率最低，说明添加抗坏血酸可以在一定程度上
抑制岩黄连愈伤组织褐化现象的产生，这可能是抗坏血
酸提高了岩黄连愈伤组织的抗氧化酶活性，从而可以提
高岩黄连愈伤组织的抗氧化能力，减缓其细胞膜脂的过
氧化并抑制其发生褐化。
该研究以不同浓度的抗坏血酸分别添加于培养基
中，各处理均在一定程度上提高岩黄连愈伤组织的抗氧
化酶活性，降低了其褐化率，但综合各方面，该研究认为
抗坏血酸浓度为１７５ｍｇ／Ｌ的效果最佳。
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Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ａｓｃｏｒｂｉｃ Ａｃｉｄ ｏｎ Ｂｒｏｗｎｉｎｇ ａｎｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ
Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ Ｅｎｚｙｍｅ ｏｆ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｓａｘｉｃｏｌａ Ｂｕｎｔｉｎｇ Ｃａｌｕｓ
ＳＵ Ｊｉａｎｇ，ＣＥＮ Ｚｈｏｎｇｙｏｎｇ，ＦＥＮＧ Ｙａｎｌａｎ，ＪＩＡＮ Ｚｈｉｃｈａｏ
（Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｈｅｃｈｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｉｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｘｉ ５４６３００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｂｒｏｗｎｉｎｇ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｅｎｚｙｍｅ ｏｆ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ
ｓａｘｉｃｏｌａ Ｂｕｎｔｉｎｇ ｃａｌｕｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｏｆ ｗｈｉｃｈ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｓａｘｉｃｏｌａ Ｂｕｎｔｉｎｇ ｃａｌｕｓ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｔｈｅ
ｍａｔｅｒｉａｌｓ ａｎｄ ｗａｓ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｏｎ ｓｏｌｉｄ ｍｅｄｉａ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｓａｘｉｃｏｌａ Ｂｕｎｔｉｎｇ
ｃａｌｕｓ ｏｆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｆｔｅｒ ２０ｄａｙｓ ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ，
ａｎｄ ｔｈｅ ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ １７５ｍｇ／Ｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ ｗａｓ ｔｈｅ ｌｏｗｅｓｔ ｗｉｔｈ １８．５％．Ｔｈｅ
ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｅｎｚｙｍｅ ｏｆ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｓａｘｉｃｏｌａ Ｂｕｎｔｉｎｇ ｃａｌｕｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔ ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ ｐｈａｓｅ，ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ＰＯＤ ａｎｄ ＳＯＤ ｒｅａｃｈｅｄ
ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｖａｌｕｅ ａｆｔｅｒ ３０ｄａｙｓ ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ，ａｎｄ ｗｈｉｃｈ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ １７５ｍｇ／Ｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ ｗｅｒｅ
ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｗｉｔｈ ３５．２４Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１ ａｎｄ １６２．７９Ｕ·ｇ－１．Ａｌｓｏ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＣＡＴ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｅｒｅｎｔ
ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒｅａｃｈｅｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｖａｌｕｅ ａｆｔｅｒ ３０ｄａｙｓ ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ
ｗｉｔｈ ２．２８Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１，３．２１Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１，５．３３Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１，３．５１Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ；Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｓａｘｉｃｏｌａ Ｂｕｎｔｉｎｇ；ｃａｌｕｓ；ｂｒｏｗｎｉｎｇ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｅｎｚｙ
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