全 文 ：书 ［收稿日期］ ２０１４－０９－２８；２０１５－０３－２３修回
［基金项目］ 公益性行业（农业）科研专项“热带药用植物资源保护利用技术研究与示范”（２０１３０３１１７）；国家科技支撑计划课题“海南黎药现
代化关键技术研究”（２０１３ＢＡＩ１１Ｂ０４）；海南省重大科技项目课题“特色南药黎药活性成分及其产品研发”（ＺＤＺＸ２０１３００８－４）
［作者简介］ 杨 丹（１９８４－），女，在读博士，研究方向：天然产物化学及活性。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｇｄａｎ８４１２＠１６３．ｃｏｍ
＊通讯作者：赵友兴（１９７４－），男，研究员，博士，从事活性天然产物化学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｏｙｏｕｘｉｎｇ＠ｉｔｂｂ．ｏｒｇ．ｃｎ
［文章编号］１００１－３６０１（２０１５）０４－０１８６－０１００－０４
茯苓皮中三萜成分的分离鉴定及其生物防治活性
杨 丹１，２，马青云１，程忠泉２，黄圣卓１，莫明和３，赵友兴１＊
（１．中国热带农业科学院 生物技术研究所 农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室，
海南 海口５７１１０１；２．桂林师范高等专科学校，广西 桂林５４１００１；３．云南大学 生物资源保护与
利用重点实验室，云南 昆明６５００９１）
［摘 要］为进一步研究茯苓皮中三萜成分的生物防治活性，采用硅胶柱层析色谱方法从茯苓皮中分离
三萜类化合物，并通过波谱分析进行鉴定。结果表明：分离得到的９种三萜类化合物，分别为去氢齿孔酸
（１）、去氢齿孔酸乙酰酯（２）、去氢齿孔酮酸（３）、３－ｅｐｉ－去氢土莫酸（４）、茯苓酸Ｄ（５）、茯苓酸Ｃ（６）、２５－羟基－３－
ｅｐｉ－去氢土莫酸（７）、１６－脱氧茯苓酸Ｂ（８）、３α，１６α－二羟基羊毛甾－７，９（１１），２４－三烯－２１－羧基（９）。化合物４－７
对烟草青枯病菌（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）的抑菌圈范围为３．００～５．９０ｍｍ，化合物（１～５）和（９）对杀线虫
（Ｐａｎａｇｒｅｌｌｕｓ ｒｅｄｉｖｉｖｕｓ）活性的校正致死率在１５．６％～３０．３％。
［关键词］茯苓皮；三萜；烟草青枯病菌；全齿复活线虫；生物防治活性
［中图分类号］Ｓ５６７ ［文献标识码］Ａ
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ
Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｐｅｅｒ ｏｆ Ｐｏｒｉａ ｃｏｃｏｓ
ＹＡＮＧ Ｄａｎ１，２，ＭＡ Ｑｉｎｇｙｕｎ１，ＣＨＥＮＧ Ｚｈｏｎｇｑｕａｎ２，
ＨＵＡＮＧ Ｓｈｅｎｇｚｈｕｏ１，ＭＯ Ｍｉｎｇｈｅ３，ＺＨＡＯ Ｙｏｕｘｉｎｇ１＊
（１．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｃｒｏｐｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｕｔｉｌｉｔｙ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ
Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｉｋｏｕ，Ｈａｉｎａｎ
５７１１０１；２．Ｇｕｉｌｉｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕｉｌｉｎ，Ｇｕａｎｇｘｉ ５４１００１；３．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｂｉｏ－Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｙｕｎｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ ６５００９１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｆｏｒ ｔｈｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐｅｅｌ ｏｆ Ｐ．ｃｏｃｏｓ，ｎｉｎｅ
ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐｅｅｒ ｏｆ Ｐ．ｃｏｃｏｓ ｂｙ ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ．
Ｔｈｅｉｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ ｄｅｈｙｄｒｏｅｂｕｒｉｃｏｉｃ ａｃｉｄ（１），ｄｅｈｙｄｒｏｅｂｕｒｉｃｏｉｃ ａｃｉｄ ｍｏｎｏａｃｅｔａｔｅ（２），
ｄｅｈｙｄｒｏｅｂｕｒｉｃｏｎｉｃ ａｃｉｄ（３），３－ｅｐｉ－ｄｅｈｙｄｒｏｔｕｍｕｌｏｓｉｃ ａｃｉｄ（４），ｐｏｒｉｃｏｉｃ ａｃｉｄ Ｄ（５），ｐｏｒｉｃｏｉｃ ａｃｉｄ Ｃ（６），２５－
ｈｙｄｒｏｘｙ－３－ｅｐｉｄｅｈｙｄｒｏｅｔｕｍｕｌｏｓｉｃ ａｃｉｄ （７），１６－ｄｅｏｘｙｐｏｒｉｃｏｉｃ ａｃｉｄ Ｂ （８），３α，１６α－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｌａｎｏｓｔａ－７，９
１１），２４－ｔｒｉｅｎ－２１－ｏｉｃ ａｃｉｄ（９）ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ ｄａｔａ ａｎａｌｙｓｅｓ．Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ４－７ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ｄｅｆｉｎｉｔｅ
ｔｏｘｉｃｉｔｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｚｏｎｅ ３．００～５．９０ｍｍ ａｎｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ
１－５ａｎｄ ９ｈａｄ ｔｈｅ ｍａｒｇｉｎａｌ ｔｏｘｉｃｉｔｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｐａｎａｇｒｅｌｕｓ ｒｅｄｉｖｉｖｕｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ
ｒａｔｅ １５．６％～３０．３％．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｐｏｒｉａ ｃｏｃｏｓ；ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ；Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ；Ｐａｎａｇｒｅｌｌｕｓ ｒｅｄｉｖｉｖｕｓ；ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ
ａｃｔｉｖｉｔｙ
世界各国农作物因病害导致的损失非常惨重，
有效控制病害一直是农业发展和作物种植的重要科
学问题。长期以来，抗病育种和化学防治一直是控
制植物病害的有效措施。然而，在抗病品种缺乏和
重视化学合成农药负面影响的情况下，生物防治成
为替代措施的首选。目前，生物防治主要是进行拮
抗菌的筛选［１］及其菌物毒素、天然抗生素的发现等，
研究者已把注意力转移到基于天然产物的生物防
治［２］，从植物中发掘生防活性天然产物（先导化合
物）并开发成安全有效的农药已是病虫害防治的重
要研究领域。茯苓又名茯菟、茯灵、松苓等，为多孔
菌科（Ｐｏｌｙｐｏｒａｃｅａｃｅ）多孔属真菌茯苓［Ｐｏｒｉａ ｃｏｃｏｓ
（Ｓｃｈｗ．）Ｗｏｌｆ．］的菌核，生于松根上，中国大部分地
区都有分布，且已人工培育，具渗湿利水，益脾和胃，
宁心安神之功效，为我国传统中药，是多种方剂及中
成药的原料，有十药九茯苓之说。茯苓皮为茯苓菌
核外皮，具利水、消肿之功效［３］。三萜类成分是茯苓
（皮）的主要化学成分类型［４－５］。茯苓三萜类成分具
有广泛的药理活性，主要包括抗肿瘤、抗炎、提高免
疫等［６］，而茯苓三萜的生物防治活性还未见报道。
为发现茯苓皮中天然产物新的生物功能，更好地利
用茯神（菌核）废弃的茯苓皮资源，笔者首次对茯苓
皮中三萜类成分的生物防治活性进行研究。
贵州农业科学 ２０１５，４３（４）：１００～１０３
Ｇｕｉｚｈｏｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
１ 材料与方法
１．１ 材料与仪器
茯苓皮（干重２０ｋｇ），购于昆明菊花村药材市
场，经昆明植物研究所周俊研究员鉴定为多孔菌科
（Ｐｏｌｙｐｏｒａｃｅａｃｅ）多 孔 属 真 菌 茯 苓 ［Ｐｏｒｉａ ｃｏｃｏｓ
（Ｓｃｈｗ．）Ｗｏｌｆ．］。
质谱由英国 Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ产ＶＧ Ａｕｔｏ－Ｓｐｅｃ－３０００
质谱仪测定；１ Ｈ－，１３ Ｃ－ＮＭＲ谱用Ｂｒｕｋｅｒ ＡＭ－４００
ＭＨｚ和 ＤＲＸ－５００型核磁共振仪测定（ＴＭＳ为内
标）。柱层析材料为青岛海洋化工厂生产的１００～
２００目、２００～３００目硅胶；薄层层析材料为青岛海洋
化工厂生产的硅胶Ｇ和ＧＦ２５４型硅胶。
１．２ 茯苓皮三萜类化合物的提取分离
取茯苓皮２０ｋｇ，用９５％的乙醇回流提取３次，
每次３ｈ，合并３次的醇提物并浓缩至无醇味，加少
量水稀释，然后依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取得到乙
酸乙酯萃取物５７０ｇ，正丁醇萃取物１３０ｇ。取正丁
醇萃取物１００ｇ，经硅胶中压柱色谱，氯仿－甲醇
（１００∶０～１∶１）常压梯度洗脱，薄层色谱检测合并
相同流分，得到Ｆｒ１～５部分。Ｆｒ１部分（８ｇ）经硅
胶柱色谱，石油醚－丙酮（８∶１）洗脱，再经丙酮重结
晶，得到化合物４（７１ｍｇ）、５（６ｍｇ）、６（２１ｍｇ）、７
（１４ｍｇ）。Ｆｒ２（３８ｇ）经硅胶柱层析，以石油醚－丙酮
（６∶１）洗脱，丙酮重结晶，得化合物１（２２９ｍｇ）、２
（７ｍｇ）、３（２７ｍｇ）、８（１８ｍｇ）和９（１５ｍｇ）。
１．３ 烟草青枯病菌拮抗活性测定
烟草青枯病菌用牛肉膏固体培养基活化，用其
液体培养基培养病原菌备用（浓度约１×１０７个／
ｍＬ）。刚灭菌的固体牛肉膏培养基冷却至５０～
６０℃，在每３３０ｍＬ培养基中加１００μＬ烟草青枯病
菌培养液，充分摇匀倒平板，待培养基凝固后在平板
上滴加５μＬ待测样品（样品终浓度为２．５ｍｇ／ｍＬ）
或对照溶剂（二甲亚砜，ＤＭＳＯ），各处理３次重复。
将上述处理平板于３０℃下培养２ｄ，用抑菌圈直径
大小表示样品的拮抗活性。
１．４ 杀线虫活性测定
线虫用燕麦片培养基。燕麦片２０ｇ、水６０ｍＬ
混匀分装于２５０ｍＬ锥形瓶中，１２１℃灭菌３０ｍｉｎ后
培养。按贝曼漏斗法用无菌水在４层擦镜纸上过滤
线虫２次，获得线虫悬液。测定杀线虫活性时，在
９６孔板的每孔中加３０μＬ线虫悬液（约１５０条），并
加入溶于ＤＭＳＯ的待测样品，使样品终浓度为２．５
ｍｇ／ｍＬ，用等量的ＤＭＳＯ替代样品溶液作为对照，
各处理３次重复。９６孔板室温下混匀后于室温下
培养２４ｈ，在解剖镜下观察线虫死亡数并计算死亡
率，统计的线虫数量不少于１００条。线虫死亡率＝
（死亡线虫数／计数线虫总数）×１００％；线虫校正死
亡率＝［（处理线虫死亡率－对照线虫死亡率）／（１－
对照线虫死亡率）］×１００％。
２ 结果与分析
２．１ 茯苓皮９种三萜类化合物的鉴定
从茯苓皮中分离得到９种三萜类化合物，分别
鉴定为：去氢齿孔酸（１），去氢齿孔酸乙酰酯（２），去
氢齿孔酮酸（３），３－ｅｐｉ－去氢土莫酸（４），茯苓酸 Ｄ
（５），茯苓酸Ｃ（６），２５－羟基－３－ｅｐｉ－去氢土莫酸（７），
１６－脱氧茯苓酸 Ｂ（８），３α，１６α－二羟基羊毛甾－７，９
（１１），２４－三烯－２１－羧基（９）。
由表１可知茯苓皮９种三萜类化合物的碳谱数
据，其结构鉴定如下：
化合 物 １：无 色 针 晶 （ＣＨＣｌ３），分 子 式 为
Ｃ３１Ｈ４８Ｏ３，ＥＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ４６８［Ｍ］＋。１ Ｈ－ＮＭＲ（Ｃ５Ｄ５
Ｎ，５００ＭＨｚ）δ１．００（３Ｈ，ｓ，Ｈ－１８），１．０１，１．０４（２×
３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ－２６，２７），１．１１，１．２０（２×３Ｈ，ｓ，
Ｈ－１９，３０），１．２０（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２９），１．４５（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２８），
２．１５（Ｈ，ｍ，Ｈ－２５），２．５１（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２０），３．４２（１Ｈ，
ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ－３），４．８２（２Ｈ，ｓ，Ｈ－３１），５．３７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｈ－１１），５．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，
Ｈ－７）；１３Ｃ－ＮＭＲ（表１，下同）。以上数据对照文献
［７］，鉴定化合物１为去氢齿孔酸（ｄｅｈｙｄｒｏｅｂｕｒｉｃｏｉｃ
ａｃｉｄ）。
化合 物 ２：无 色 针 晶 （ＣＨＣｌ３），分 子 式 为
Ｃ３３Ｈ５０Ｏ４，ＥＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ５１０［Ｍ］＋。１ Ｈ－ＮＭＲ（Ｃ５Ｄ５
Ｎ，５００ ＭＨｚ）δ０．８７ （３Ｈ，ｓ，Ｈ－１８），０．９８
（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２９），１．００，１．０４（６Ｈ，Ｈ－２６，２７），１．２７
（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２９），１．６０（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２８），２．０５（３Ｈ，ｓ，
ＣＨ３ＣＯ），２．２６（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２５），３．２５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝
７．８Ｈｚ，Ｈ－３），４．６４（２Ｈ，ｓ，Ｈ－３１），５．３１（１Ｈ，ｓ，
Ｈ－７），５．５４（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１１）。以上数据对照文献［７］，
鉴定化合物２为去氢齿孔酸乙酰酯（ｄｅｈｙｄｒｏｅｂｕｒｉ－
ｃｏｉｃ ａｃｉｄ ｍｏｎｏａｃｅｔａｔｅ）。
化合 物 ３：无 色 针 晶 （ＣＨＣｌ３），分 子 式 为
Ｃ３１Ｈ４６Ｏ３，ＥＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ４６６［Ｍ］＋。１ Ｈ－ＮＭＲ（Ｃ５Ｄ５
Ｎ，５００ＭＨｚ）δ０．９６（３Ｈ，ｓ，Ｈ－１８），１．０１，１．０３（２×
３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ－２６，２７），１．１２，１．２０（２×３Ｈ，ｓ，
Ｈ－１９，３０），１．２０（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２９），１．５９（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２８），
２．１５（Ｈ，ｍ，Ｈ－２５），２．３０（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２０），４．７９（２Ｈ，
ｓ，Ｈ－３１），５．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，Ｈ－１１），５．５６（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，Ｈ－７）。以上数据对照文献［８］，鉴定化
合物３为去氢齿孔酮酸（ｄｅｈｙｄｒｏｅｂｕｒｉｃｏｎｉｃ ａｃｉｄ）。
化合 物 ４：无 色 针 晶 （ＣＨＣｌ３），分 子 式 为
Ｃ３１Ｈ４８Ｏ４，ＥＩ－ＭＳｍ／ｚ４８４［Ｍ］＋。１ Ｈ－ＮＭＲ（Ｃ５Ｄ５Ｎ，
５００ＭＨｚ）δ０．８４（３Ｈ，ｓ，Ｈ－１８），０．９４（３Ｈ，ｓ，Ｈ－１９），
０．８１（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２６），０．８３（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２７），０．５９（３Ｈ，
ｓ，Ｈ－２９），１．０８（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２８），１．５６（３Ｈ，ｓ，Ｈ－３０），
·１０１·
杨 丹 等 茯苓皮中三萜成分的分离鉴定及其生物防治活性
ＹＡＮＧ Ｄａｎ ｅｔ ａｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｐｅｅｒ ｏｆ Ｐｏｒｉａ ｃｏｃｏｓ
２．１２（Ｈ，ｍ，Ｈ－２５），３．２２（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２０），３．４０（１Ｈ，
ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｈ－３），４．０２（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，
Ｈ－１６），５．１０（２Ｈ，ｓ，Ｈ－３１），５．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，
Ｈ－１１），５．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，Ｈ－７）。以上数据对
照文献［８］，鉴定化合物４为３－ｅｐｉ－去氢土莫酸
（３－ｅｐｉ－ｄｅｈｙｄｒｏｔｕｍｕｌｏｓｉｃ ａｃｉｄ）。
化合 物 ５：无 色 针 晶 （ＣＨＣｌ３），分 子 式 为
Ｃ３１Ｈ４６Ｏ６，ＥＩ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ５１５［Ｍ］＋。１ Ｈ－ＮＭＲ
（Ｃ５Ｄ５Ｎ，５００ＭＨｚ）δ０．７１（３Ｈ，ｓ，Ｈ－１９），０．８９（３Ｈ，
ｓ，Ｈ－１８），０．９７（３Ｈ，ｓ，Ｈ－３０），１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２６），
１．０２（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２７），１．３０（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２９），２．４１（３Ｈ，
ｍ，Ｈ－１７），２．１２（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２５），２．５６（１Ｈ，ｍ，
Ｈ－２０），４．０５（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ－１６），４．７７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，Ｈ－７），４．７１，４．７８（ｅａｃｈ１Ｈ，ｂｒｓ，
Ｈ－２８），４．８５，４．９０（ｅａｃｈ１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ－３１），５．３６（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，Ｈ－１１）；。以上数据对照文献［９］，鉴定
化合物５为茯苓酸Ｄ（ｐｏｒｉｃｏｉｃ ａｃｉｄ Ｄ）。
化合 物 ６：无 色 针 晶 （ＣＨＣｌ３），分 子 式 为
Ｃ３１Ｈ４６Ｏ４，ＥＩ－ＭＳｍ／ｚ４８２［Ｍ］＋。１ Ｈ－ＮＭＲ（Ｃ５Ｄ５Ｎ）
δ１．００（３Ｈ，ｓ，Ｈ－１９），１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ－１８），１．５８（３Ｈ，
ｓ，Ｈ－３０），１．６６（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２６），１．７１（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２７），
４．７４，４．８０（ｅａｃｈ１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ－２８），４．８７，４．９１（ｅａｃｈ １Ｈ，ｂｒ
ｓ，Ｈ－３１），５．３０（２Ｈ，ｂｒ ｓ，Ｈ－７，１１）１。以上数据对照文
献［８］，鉴定化合物６为茯苓酸Ｃ（ｐｏｒｉｃｏｉｃ ａｃｉｄ Ｃ）。
化 合 物 ７：无 色 针 晶 （ＣＨＣｌ３），分 子 式 为
Ｃ３１Ｈ４８Ｏ５，ＥＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ５１４［Ｍ］＋。１ Ｈ－ＮＭＲ（Ｃ５Ｄ５
Ｎ，５００ ＭＨｚ）δ１．００（３Ｈ，ｓ，Ｈ－１８），１．０１（３Ｈ，ｓ，
Ｈ－２９），１．２４（３Ｈ，ｓ，Ｈ－１９），１．５９（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２８），
１．６５（３Ｈ，ｓ，Ｈ－３０），１．７１（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２６），１．８６（３Ｈ，
ｓ，Ｈ－１７），３．６０（１Ｈ，ｂｒ ｓ，Ｈ－３），４．１５（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝
７．１Ｈｚ，Ｈ－１６），５．２７（２Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｈ－７，１１），４．９０，
４．７８（２Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ－３１）。以上数据对照文献［８］，鉴
定化合物７为２５－羟基－３－ｅｐｉ－去氢土莫酸（２５－ｈｙ－
ｄｒｏｘｙ－３－ｅｐｉｄｅｈｙｄｒｏｅｔｕｍｕｌｏｓｉｃ ａｃｉｄ）。
化合 物 ８：无 色 针 晶 （ＣＨＣｌ３），分 子 式 为
Ｃ３０Ｈ４４Ｏ４， ＥＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ４６８ ［Ｍ］＋。１ Ｈ－ＮＭＲ
（Ｃ５Ｄ５Ｎ，５００ＭＨｚ）δ０．７７（３Ｈ，ｓ，Ｈ－１８），０．８６（３Ｈ，
ｓ，Ｈ－１９），０．８８（３Ｈ，ｓ，Ｈ－３０），０．９１（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２７），
０．９９（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２６），１．２４（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２９），４．８５（３Ｈ，
ｍ，Ｈ－２８），５．１４，５．２０，５．３４（ｅａｃｈ １Ｈ，ｂｒ ｍ，Ｈ－７，
１１，２４）。以上数据对照文献［１０］，鉴定化合物８为
１６－脱氧茯苓酸Ｂ（１６－ｄｅｏｘｙｐｏｒｉｃｏｉｃ ａｃｉｄ Ｂ）。
表１ 茯苓皮９种三萜类化合物１～９的碳谱数据（吡啶，１２５ＭＨｚ，δｉｎ ｐｐｍ）
Ｔａｂｌｅ １ １３ Ｃ ＮＭＲ ｓｐｅｃｔｒａｌ ｄａｔａ ｆｏｒ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ １～９（Ｃ５Ｄ５Ｎ，１２５ＭＨｚ，δｉｎ ｐｐｍ）
Ｃ编号
Ｎｏ．
化合物
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９
１ ３６．０ ３５．６ ３６．０ ３６．３ ３６．８ ３６．４ ３０．１ ３５．３ ２９．５
２ ２５．８ ２４．５ ３４．９ ２６．２ ３０．１ ３０．２ ２６．５ ２９．６ ２５．７
３ ７８．０ ８０．６ ２１５．１ ７６．４ １７６．０ １７８．５ ７５．１ １７６．９ ７１．３
４ ３７．８ ３７．８ ４４．２ ４４．２ １５０．１ １４９．２ ３７．６ １５０．３ ３７．９
５ ５０．４ ４９．５ ４７．４ ３７．８ ５２．０ ５０．８ ４４．６ ４８．８ ４２．９
６ １７．７ ２３．１ ２２．９ ３９．３ ２９．４ ２８．６ ２３．５ ２９．１ ２３．４
７ １２１．３ １２０．８ １２０．７ １２０．１ １１９．２ １１８．１ １２１．６ １２１．０ １２１．３
８ １３５．０ １４２．８ １４２．９ １４２．７ １４２．２ １４２．０ １４２．２ １４３．３ １４２．０
９ １４２．９ １４５．０ １４４．９ １４４．４ １３８．４ １３７．４ １４６．３ １３７．９ １４６．０
１０ ３７．８ ３７．８ ３７．５ ３７．８ ３９．５ ３８．８ ３７．６ ３７．０ ３７．８
１１ １１６．７ １１７．０ １１７．７ １１６．５ １２０．９ １２０．５ １１５．８ １２１．０ １１８．１
１２ ３１．６ ３６．０ ３６．０ ３６．３ ３７．５ ３６．８ ３６．３ ３７．０ ３７．９
１３ ４９．１ ４９．５ ４４．２ ４４．２ ４６．１ ４４．７ ４４．６ ４４．８ ４３．６
１４ ４８．１ ３７．８ ５０．４ ５０．４ ４９．７ ４９．０ ４９．７ ５１．４ ５０．６
１５ ４２．３ ４８．１ ３１．５ ４９．４ ４３．８ ３８．８ ４４．７ ３０．０ ４３．４
１６ ２７．５ ２７．７ ２７．３ ７８．０ ７７．５ ２７．９ ７８．０ ２８．１ ７５．１
１７ ５０．５ ５０．５ ４８．１ ５７．６ ５７．６ ５０．８ ５７．５ ４８．５ ５６．３
１８ １６．２ １７．１ １６．２ １７．６ １８．５ １７．０ １７．５ １６．７ １６．９
１９ ２３．５ ２２．８ ２２．０ ２３．５ ２２．２ ２２．３ ２２．９ ２２．７ ２３．４
２０ ４８．１ ４８．１ ４９．１ ４８．５ ４８．３ ４８．３ ４９．７ ４８．８ ４６．１
２１ １７８．５ １７８．５ １７８．５ １７８．７ １７８．５ １７８．７ １８０．４ １７８．７ １７８．２
２２ ３１．５ ３１．４ ３１．８ ３１．８ ３１．７ ３２．７ ３２．１ ３２．２ ３２．２
２３ ３３．３ ３４．２ ３２．７ ３３．２ ２９．４ ３０．０ ３０．１ ２９．０ ２６．０
２４ １５０．２ １５０．２ １５５．９ １５６．０ １５５．６ １５５．９ １５６．４ １２８．３ １２３．０
２５ ３６．３ ３４．２ ３４．２ ３４．１ ７４．２ ３４．２ ７３．６ １３７．９ １３２．１
２６ ２３．０ ２２．０ ２２．０ ２２．０ ３０．１ ３１．０ ３０．１ ２４．９ ２５．９
２７ ２３．９ ２１．９ ２１．９ ２１．８ ２２．３ ２２．１ ３０．２ １８．０ １９．１
２８ ２８．７ ２８．２ ２５．６ ２８．８ １１２．６ １１２．１ ２９．９ １１２．８ ２８．６
２９ １６．６ １７．１ ２２．３ ２３．４ ２２．４ ２２．２ ２３．５ ２２．６ ２３．４
３０ ２６．７ ２７．２ ２５．６ ２６．６ ２５．０ ２４．３ ２５．８ ２４．７ ２６．０
３１ １０７．１ １０７．０ １０７．１ １０７．０ １０７．４ １０７．１ １０６．９ － －
ＭｅＣＯ ２１．１ － － － － － － －
ＭｅＣＯ １７０．４ － － － － － － －
·２０１·
贵 州 农 业 科 学
Ｇｕｉｚｈｏｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
表２ 茯苓皮９种三萜化合物对烟草青枯病和线虫的拮抗活性
Ｔａｂｌｅ ２ Ｔｏｘｉｃｉｔｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｒ．ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍａｎｄ Ｐ．ｒｅｄｉｖｉｖｕｓ ｏｆ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐｅｅｒ ｏｆ Ｐｏｒｉａ ｃｏｃｏｓ
化合物
Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ
烟草青枯病菌抑菌圈直径／ｍｍ
Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｚｏｎｅ ｄｉａｍｅｔｅｒ
线虫校正致死率／％
Ｐａｎａｇｒｅｌｕｓ ｒｅｄｉｖｉｖｕｓ Ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｒａｔｅ
１ － ２９．４±３．３
２ － １６．９±２．６
３ － １５．６±２．７
４ ４．２５±０．４７ １９．８±３．０
５ ３．００±０．４１ ３０．３±３．５
６ ５．９０±０．５２ －
７ ３．２５±０．３９ －
８ － －
９ － ２３．２±３．６
注：“－”表示无活性。ｎ＝３。
Ｎｏｔｅ：“－”ｓｔａｎｄ ｆｏｒ ｉｎａｃｔｉｖｅ．ｎ＝３．
化 合 物 ９：无 色 针 晶 （ＣＨＣｌ３），分 子 式 为
Ｃ３０Ｈ４６Ｏ４，ＥＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ４７０［Ｍ］＋。１ Ｈ－ＮＭＲ（Ｃ５Ｄ５
Ｎ，５００ＭＨｚ）δ０．６８（３Ｈ，ｓ，Ｈ－１８），０．８１（３Ｈ，ｓ，Ｈ－
２８），０．８８（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２９），０．９１（３Ｈ，ｓ，Ｈ－１９），０．９４
（３Ｈ，ｓ，Ｈ－３０），１．２５（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２６），１．８３（３Ｈ，ｓ，Ｈ－
２７），５．１５（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，Ｈ－２４），５．２３（１Ｈ，
ｂｒ ｓ，Ｈ－７），５．３５（１Ｈ，ｄＪ＝５．５Ｈｚ，Ｈ－１１），以上数
据对照文献［１１］，鉴定化合物９为３α，１６α－二羟基羊
毛甾－７，９（１１），２４－三烯－２１－羧基（３α，１６α－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ－
ｌａｎｏｓｔａ－７，９（１１），２４－ｔｒｉｅｎ－２１－ｏｉｃ ａｃｉｄ）。
２．２ 茯苓皮９种三萜化合物对抗烟草青枯病和杀
线虫的拮抗活性
从表２看出，在浓度为２．５ｍｇ／ｍＬ时，化合物
４、５、６、７对烟草青枯病菌有拮抗活性，抑菌圈直径
分别为４．２５ｍｍ、３．００ｍｍ、５．９０ｍｍ、３．２５ｍｍ。
表明，茯苓皮三萜类化合物为抗烟草青枯病菌的主
要活性成分。化合物１～５和化合物９对全齿复合
线虫具 有致死活性，线虫死亡率在 １５．６％ ～
３０．３％，显示为弱活性。９种化合物中，化合物４和
化合物５显示出兼抗烟草青枯病菌和线虫的活性。
３ 结论与讨论
病虫害是制约农业发展和作物种植的重要因
素。寻找生物源天然生防活性成分已成为创新绿色
农药研发的重要手段，已成为植物保护研究领域的
热点之一。试验从茯苓皮中分离鉴定出９种三萜类
单体化合物，首次对９种三萜类单体化合物进行了
烟草青枯病菌和线虫生防活性的研究，结果发现４
种化合物具有一定的烟草青枯病菌拮抗活性，６种
化合物具有弱的杀线虫活性，其中２种化合物显示
兼抗活性。茯神和茯苓皮的主要化学成分结构类型
均为三萜类，含有部分相同三萜化合物。茯神具有
抗衰老、增强免疫、抗肿瘤、预防结石、抗排斥、抗菌、
抗炎、抗病毒等［１２］，茯苓皮具有利尿、抗癌、抗炎、抗
菌、抗病毒和抗生育等［１３］。茯苓皮作为中华人民共
和国药典收载品种其应用已经深入到临床，且资源
非常丰富。但迄今为止有关茯苓皮抗病原菌的研究
尚未见报道。天然产物（小分子化合物）是创新农药
发现的重要源泉，从天然资源中挖掘抗病原菌活性
成分是自主知识产权新农药研发的重要手段，也是
绿色农药研发的研究热点之一。此研究从茯苓皮中
发现一些抗烟草青枯病和线虫的活性天然产物，可为
茯苓皮资源在农药研发方面的创新利用提供化学基
础。
［参 考 文 献］
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（责任编辑：孙小岚）
·３０１·
杨 丹 等 茯苓皮中三萜成分的分离鉴定及其生物防治活性
ＹＡＮＧ Ｄａｎ ｅｔ ａｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｐｅｅｒ ｏｆ Ｐｏｒｉａ ｃｏｃｏｓ