全 文 ：HPLC法测定蜜柑草中槲皮素的含量
禹琦 ,曾振中
(娄底市中心医院 ,湖南　娄底　417000)
[摘要 ] 　目的:建立蜜柑草中槲皮素的含量测定方法。方法:色谱柱:kromasilC18柱;流动相:甲醇 -0.4%磷酸溶液(50
：50);检测波长:360nm;流速:1.0ml· min-1。结果:槲皮素线性范围为 0.20 ～ 3.06 mg· ml-1 , r=0.9998, 平均回收率为
99.32%, RSD%为 1.48%。结论:本方法简便 、可靠 、重现性较好 ,为蜜柑草的质量控制提供了快速 、准确的测定方法。
[关键词 ] 　蜜柑草;槲皮素;高效液相色谱法;含量测定
[中图分类号 ] R927.2　[文献标识码 ] A　[文章编号 ] 1672-951X(2008)01-0058-02
DeterminationofQuercetininMatsumuraLeaflowerHerbWithHPLC
YUQi, ZENGZhen-zhong
CentralHospitalofLoudiCity, Loudi, Hunan, China, 410007
[ Abstract] 　Objective:ToestablishHPLCmethodforthedeterminationofquercetininmatsumuraleafflowerherb.Methods:the
chromatographicbarwaskromasilC18 columnwithmethanol-0.4%phosphoricacid(50：50)asmobilephase, thedetectionwave-
lengthwas360 nm, theflowratewas1.0 ml· min-1.Results:Thelinearrangeofquercetinwaswithin0.20 ～ 3.06 mg· ml-1 , r=
0.9998, theaveragerecoveryofquercetinwas99.32%, RSD%=1.48%.Conclusion:Themethodissimple, rapid, accurateand
reproducible.Soitprovidesarapidandaccurateassaymethodforqualitycontrolofmatsumuraleaflowerherb.
[ Keywords] 　Matsumuraleaflowerherb;Quercetin;HPLC;ContentDetermination
　　蜜柑草(PhyllanthusmatsumuraeHayata)为大戟科叶下
珠属植物 , 主要分布于我国长江以南各省 ,具有清肝明目 、消
疳止痢 、渗湿利尿之功效。民间常用于治疗肾炎水肿 、黄疸
型肝炎 、尿路感染 、肠炎等多种疾病。现代研究证明 , 蜜柑草
具有一定的抗肿瘤的作用 , 从中已分离出具抗癌活性的成
分 , 如槲皮素 [ 1 , 2] 。目前为止 ,还没有有关蜜柑草的含量测定
报道。本文采用 HPLC法测定蜜柑草中槲皮素的含量 , 为该
药材的质量控制提供了快速 、准确的测定方法。
1　仪器与试药
1.1　仪器　日本岛津高效液相色谱仪(LC-10AT泵 , SPD
-10A紫外检测器);N2000色谱工作站(浙江大学智能信息
研究);FA1104电子分析天平。
1.2　试剂　甲醇为色谱纯 ,其余试剂为分析纯。
1.3　样品　样品采集于湖北 , 经湖南中医药大学周小江教
授鉴定为大戟科植物蜜柑草(PhyllanthusmatsumuraeHaya-
ta)。
1.4　对照品　槲皮素化学对照品(中国药品生物制品检验
所 , 供含量测定用 ,批号:081-9903)
2　方法与结果
2.1　色谱条件 　色谱柱为 kromasilC18柱 (4.6 mm×
250mm, 5 μm);流动相:甲醇 -0.4%磷酸溶液(50：50);流
速 1.0 ml· min-1;柱温 35 ℃;检测波长 360 nm;进样量 20
μl。此条件下供试品中槲皮素与其他组分均能达到基线分
离。 (见图 1、2)
图 1　对照品溶液色谱图
图 2　供试品溶液色谱图
2.2　对照品溶液的制备　取槲皮素对照品 20.4 mg, 精密称
定 , 置 10 ml量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 , 制成含槲皮
素 2.04 mg· ml-1的对照品溶液。
2.3　供试品制备　将药材粉碎 ,过 20目筛 , 取样 1.5 g精密
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第 14卷第 1期　　　　　　　　　　　　　　中　医　药　导　报　　　　　　　　　　2008年 1月
Vol.14　 No.1　　　　　　　　　　　　　　GuidingJournalofTCM　　　　　　　　　January.2008
DOI :10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2008.01.029
称定 , 至具塞锥形瓶中 ,加入 50 ml甲醇 ,水浴回流 1 h, 称定
重量 , 用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 ,滤过。精密量取续滤液
20 ml,加盐酸 1 ml, 置 90 ℃水浴中加热回流 1.5 h, 取出 ,迅
速冷却 , 转移至 25 ml量瓶中 , 加 80%甲醇至刻度 , 摇匀 , 用
0.45 μm滤膜过滤 ,取续滤液作为供试品溶液。
2.4　线性关系考察　将 2.04 mg· ml-1的对照品溶液稀释
成浓度为 0.204、 0.408、 0.816、 1.224、 2.040、 3.060 mg·
ml-1 , 进样 ,记录峰面积 , 以槲皮素浓度为横坐标 , 色谱峰面
积为纵坐标 , 得回归方程为:Y=4244.55X-75.22, r=0.
9998,说明槲皮素在浓度为 0.204 ～ 3.060 mg· ml-1之间呈
良好的线性关系。
2.5　精密度试验　精密吸取槲皮素对照品溶液 20 μl, 按上
述色谱条件 , 平行测定 6次 , 记录峰面积。 结果 RSD% =
1.33%(n=6),说明其精密度良好。
2.6　重现性试验　同一批样品 , 取约 1 g, 共 6份 , 按上述供
试品制备法制备 , 分别按上述色谱条件测定 , 记录峰面积。
结果 RSD% =1.77%(n=6),说明其重现性良好。
2.7　稳定性试验　取同一供试品溶液 ,分别在 0, 1, 3, 5, 8 h
分别进样 20 μl, 按上述色谱条件测定 , 记录峰面积。 计算
RSD%=1.28%(n=5)。结果表明 ,供试品溶液在 8 h之内
稳定。
2.8　加样回收率试验　取已知含量的蜜柑草药材粉碎 , 过
20目筛 , 精密称取 1 g, 分别加入一定量的槲皮素对照品 ,挥
干溶剂 , 按上述供试品制备法制备成加样供试品溶液 , 再按
上述色谱条件测定。结果表明 , 本方法具有较好的回收率。
(见表 1)
表 1　加样回收率试验结果　(n=3)
取样
量(g)
样品中的槲皮
素含量(mg)
加入槲皮素
量(mg)
测得槲皮素
总量(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1.5024 0.2404 0.204 0.4438 99.71
1.5105 0.2417 0.204 0.445 99.66
1.4976 0.2396 0.204 0.4437 100.05
1.4788 0.2366 0.204 0.4385 98.97 99.32 1.48
1.4924 0.2388 0.204 0.4401 98.68
1.5112 0.2418 0.204 0.4435 98.87
2.9　样品测定　取蜜柑草药材 , 按上述供试品制备法制备。
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 20 μl, 注入液相
色谱仪 , 按上述色谱条件测定 , 记录峰面积 , 以外标法计算样
品中槲皮素的含量。 (见表 2)
表 2　样品含量测定结果　(n=5)
样品号 槲皮素含量(%) RSD(%)
1 0.018 0.89
2 0.016 1.25
3 0.010 0.91
4 0.014 0.85
5 0.015 1.03
3　讨　　论
本研究分别考察了几种不同提取方法:(1)酸水提取 -
有机溶剂萃取法;(2)甲醇提取 -水解法;(3)95%乙醇提取
-聚酰胺柱层析法制备供试液。经比较 , 用甲醇提取黄酮类
较为完全 , 再水解得到槲皮素 , 其它成分干扰小。
比较了水 -甲醇 -冰醋酸(55：45：1), 甲醇 -0.4%磷
酸(50：50), 甲醇 -0.4%磷酸(40：60)等流动相 。经比较 ,
以甲醇 -0.4磷酸(50：50)系统对待测成分的分离效果较
好。
测定结果表明 ,本法具有回收率好 , 精密度 、重现性高 ,
样品处理简便 ,分析快速的优点 , 可作为蜜柑草中测定槲皮
素含量的方法 。
参考文献:
[ 1]陈玉武 , 任丽娟.蜜柑草抗癌有效成分研究Ⅰ ·黄酮类成
分的分离与鉴定 [ J] .中草药 , 1997, 28(1):5-7
[ 2]陈玉武 , 任丽娟.蜜柑草抗癌有效成分研究Ⅱ ·多酚类成
分的分离与鉴定 [ J] .中草药 , 1997, 28(4):198-202
(收稿日期:2007-08-14　编辑:湘泉)
具有 5年临床经验医生可兼职 “坐堂”
“为了使居民在社区和家门口就诊更方便 , 我们还
是鼓励`坐堂医 的发展 , 让居民享受到更简便的中医
药卫生保健服务。”国家中医药管理局医政司许志仁昨
天表示 ,目前 , 国家中医药管理局已在全国 9个省的药
品零售企业开展了 “坐堂医”试点 , 这意味着 “被禁 ” 6
年的 “坐堂医”将以正规 、合法的身份再现药店。
国家中医药管理局日前出台了 《中医坐堂医诊所
管理办法》, “新出台的《管理办法》对`坐堂医 提出了
更明确的标准和要求。”据介绍 , 《办法》提出 ,申请设置
中医坐堂医诊所的药品零售企业 , 必须有独立的中药
饮片营业区 ,饮片区面积不得少于 50m2;中药饮片数量
不少于 400种 。设置的诊室不超过 2个 , 每个诊室的建
筑面积不少于 15平方米。同一时间坐诊的中医执业
医师不超过 2人。中医坐堂医诊所对患者就诊要有登
记。中医坐堂医诊所应在显著位置悬挂 《医疗机构执
业许可证》、诊疗科目 、诊疗手段 、诊疗时间以及收费标
准。此外 ,坐堂医诊所只允许提供中药饮片处方服务 ,
不得随意改变或扩大执业范围。一旦发现 “坐堂医”违
规 ,立即被吊销行医执照。
据介绍 ,此次试点的地区尚未包括北京。 许志仁
表示 ,今年 4月底完成试点工作之后将进行研究总结 ,
并依据此次试点情况 , 继续扩大试点范围。 (赵新培)
[ 2008年 01月 25日 10:18来源:北京青年报 ]
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第 14卷第 1期　　　　　　　　　　　　　　中　医　药　导　报　　　　　　　　　　2008年 1月
Vol.14　 No.1　　　　　　　　　　　　　　GuidingJournalofTCM　　　　　　　　　January.2008