全 文 ：　表 2 　正交实验结果及分析
实验号 A B C D 得率(%)
1 1 1 1 1 0.148
2 1 2 2 2 0.167
3 1 3 3 3 0.164
4 2 1 2 3 0.158
5 2 2 3 1 0.156
6 2 3 1 2 0.161
7 3 1 3 2 0.147
8 3 2 1 3 0.139
9 3 3 2 1 0.136
K1 0.160 0.151 0.149 0.147
K2 0.159 0.154 0.153 0.159
K3 0.141 0.155 0.158 0.153
R 0.019 0.001 0.010 0.012
总生物碱的平均得率为 0.126%,低于超临界 CO2
流体萃取得率。
4 　讨论
与传统溶剂萃取工艺相比 ,超临界 CO2萃取具
有工艺简单 、步骤少 、耗时短 、无溶剂残留 、常温操作
不会破坏活性组分等优点 ,同时菊三七总生物碱的
提取率要远大于索氏提取。因此 ,利用超临界 CO2
萃取技术不仅可以较好地提取菊三七生物碱 ,亦具
有较好的应用前景 。
参 考 文 献
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(2008-05-19收稿)
正交设计优选石吊兰中石吊兰素的提取工艺
盛卫国 ,熊　阳 ,徐莲英
(上海中医药大学中药学院 ,上海 201203)
　　摘要　目的:通过正交设计优选石吊兰中石吊兰素的最佳提取工艺。方法:以提取液中石吊兰素含量为指标 ,
采用 L9(34)正交设计安排实验 ,考察乙醇用量 、提取时间 、提取次数对其的影响。 结果:最佳工艺条件为 A1B2C3 ,
即药材加 4倍量 95%乙醇提取 3次 , 每次回流 1.5小时 , 该结果在验证试验中得到验证。结论:正交设计优化的提
取工艺可较好的提取石吊兰中石吊兰素 ,是石吊兰素提取的较理想方法。
关键词　石吊兰;石吊兰素;高效液相色谱法;正交设计;提取工艺
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)11-1751-03
作者简介:盛卫国(1972-),男,博士 ,研究方向:中药制剂新剂型与新技术;Tel:021-51322685, E-mail:sss3215@sina.com。
　　石吊兰为苦苣苔科(Gesneriacee)吊石苣苔属植
物吊石苣苔(LveicnotuspauciflorusMaxim.)的全草 ,
始载于 《植物名实图考》石草类 ,功能祛痰止咳 、清
热利湿 、活血调经 ,主治肺热咳嗽 、支气管炎 、痢疾 、
钩端螺旋体病 、风湿痹痛 、跌打损伤等 〔1〕。其所含
脂溶性成分石吊兰素(nevadensin)是具有抗结核杆
菌作用的母核结构 ,有显著的抗结核杆菌的作用 ,是
临床用于治疗结核病的有效成分 〔2-6〕 ,目前尚无其提
取工艺的报道 。本文根据石吊兰素的理化性质 ,用
95%乙醇作为提取溶剂回流提取 , HPLC法测定提
取液中石吊兰素含量 ,通过正交设计考察了其最佳
提取工艺 。
·1751·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 11期 2008年 11月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.11.014
1　材料与仪器
1.1　材料　石吊兰 ,采自云南文山州 ,经上海中医
药大学李西林教授鉴定为苦苣苔科吊石苣苔属植物
吊石苣苔 (LyeicnotuspauciflorusMaxim.)的全草 。
石吊兰素对照品 ,自制 ,纯度 99.8%。甲醇为色谱
纯 ,其余试剂为分析纯 。
1.2　仪器 　Agilent1200 Series高效液相色谱仪
(包括四元泵 、真空脱气机 、柱温箱 、紫外检测器),
Agilent色谱工作站 , AgilentZORBAXSB-C18(5μm,
4.6mm×250 mm)色谱柱。
2　方法与结果
2.1　色谱条件及系统适用性　Agilentl1200 Series
高效液相色谱仪 , AgilentZORBAXSB-C18 (5 μm,
4.6mm×250 mm)色谱柱 ,紫外检测器。流动相组
成和梯度见表 1,检测波长 284 nm,柱温 25℃,流速
1.0ml/min,定量环体积 20 μl,所有成分均在 35
min内洗脱出柱 。在此色谱条件下检测 ,石吊兰素
的保留时间是 14.11 min。以石吊兰素计算 ,理论塔
板数大于 10000 ,石吊兰素峰与相邻峰分离度大于
1.5。
　表 1 　流动相的组成和梯度
时间(min) 1%醋酸(%) 甲醇(%)
0 52 48
6 40 60
11 20 80
25 0 100
28 0 100
35 52 48
2.2　对照品溶液的制备　精密称取 11.2mg石吊
兰素对照品 ,甲醇定容于 25 ml量瓶中 , 得 0.448
mg/ml的石吊兰对照品溶液 ,备用。
2.3　标准曲线的制备　精密吸取石吊兰素对照品
溶液 0.2、0.6、1、1.4、1.8 ml于 5 ml量瓶中 ,甲醇定
容 ,按照 “色谱条件 ”项下操作 ,进样量 20 μl,由低
浓度到高浓度进样 ,记录峰面积 , 以石吊兰素峰面
积积分值对石吊兰素进行线性回归。回归方程为 Y
=-98.965 +74.523X, r=0.9999,在 17.92 μg/ml
(0.358 μg)～ 161.28 μg/ml(3.23 μg)范围内线性
关系良好。
2.4　提取方法和因素水平的确定　石吊兰素为含
3个甲氧基的黄酮苷元 ,不溶水 ,脂溶性强 ,参考文
献和预实验 ,确定用 95%乙醇作为提取溶剂 。以石
吊兰素含量为指标 ,用 L9(34)正交实验方案 ,选取
A:乙醇用量(药材量倍数)、B:提取时间 、C:提取次
数为考察因素 ,每个因素选 3个水平 ,对提取工艺进
行筛选。正交实验设计安排见表 2。
　表 2 　影响因素水平表
水平
因素
A:乙醇量(药材量倍数) B:提取时间(h) C:提取次数(n)
1 4 1 1
2 6 1.5 2
3 8 2 3
2.5　样品提取　取石吊兰药材(0.5 cm左右段),
60℃烘干 2h,称取 25 g,按正交设计方案提取 ,提取
液 60℃减压回收乙醇至小体积 ,加 95%乙醇定容于
25 ml量瓶中 ,得样品溶液 。
2.6　正交实验及结果分析　精密移取 1.25 ml量
瓶中 ,用无水乙醇稀释至刻度 ,在以上色谱条件下测
定石吊兰素含量 ,结果见表 3,方差分析结果见表 4。
实验结果直观分析表明:影响石吊兰素提取的
因素大小依次是 C>B>A。从方差分析表可以看
到 ,提取次数对石吊兰素的提取有显著性影响(P<
0.05),乙醇用量 、提取时间的影响不大 。从实验结
果可得出最佳提取工艺为 A1B2C3 ,即优选工艺为 4
倍量 95%乙醇回流提取 3次 ,每次提取 1.5小时 。
　表 3 　L
9
(34)正交实验结果
试验号 乙醇用量A(倍)
提取时间B(h)
提取次数C(n)
误差
D
石吊兰含量(mg/g)
1 1 1 1 1 1.006
2 1 2 2 2 1.691
3 1 3 3 3 1.960
4 2 1 2 3 1.142
5 2 2 3 1 2.031
6 2 3 1 2 1.204
7 3 1 3 2 1.521
8 3 2 1 3 1.414
9 3 3 2 1 1.681
Ⅰ 1.559 1.321 1.214 1.579
Ⅱ 1.551 1.171 1.597 1.472
Ⅲ 1.539 1.613 1.837 1.597
R 0.02 0.391 0.623 0.125
　表 4 　方差分析表
方差来源 离均差平方和 自由度 方差 F值 显著性
A 0.001 2 0.0005 0.037 P>0.05
B 0.248 2 0.124 9.185 P>0.05
C 0.592 2 0.286 21.926 P<0.05
误差 D 0.03 2 0.015
　　注:F0.05(2, 2)=19
·1752· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 11期 2008年 11月
2.7　工艺验证实验　取三批石吊兰药材各 25 g,
按照正交设计优选工艺 ,即用 4倍量 95%乙醇回流
提取 3次 ,每次提取 1.5小时 ,提取液同上处理 ,测
定石吊兰素含量 (mg/g), 分别为 1.941、 1.859、
1.855, RSD=2.57%(n=3),证明该工艺合理可行 ,
稳定可靠 ,具有较好的重现性。
3　讨论
3.1　石吊兰素为含 3个甲氧基的黄酮苷元 ,不溶
于水 ,脂溶性强 ,用 95%乙醇提取可比较完全 。正
交试验数据表明最佳提取工艺为 4倍量 95%乙醇
回流提取 3次 ,每次提取 1.5 h。
3.2　从已有文献报道来看 ,石吊兰制剂的提取工
艺均为加水煎煮提取的方法〔3, 7〕。通过与 95%乙醇
提取对比 ,水提液中石吊兰素的含量仅为醇提液中
石吊兰素含量的 10%。石吊兰素不溶于水 ,在水煎
煮过程中复杂的物理 、化学变化使部分石吊兰素增
溶或混悬在水中 ,这可能是石吊兰制剂用水提取工
艺的原因。体外抗结核杆菌试验证实水提液也有抗
结核杆菌作用 ,但其最小抑菌浓度(MIC)明显大于
95%醇提液 ,可能是其所含抗结核杆菌有效成分石
吊兰素含量低的缘故 ,故用水煎煮提取方法制备石
吊兰制剂尚值得商榷。
参 考 文 献
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(2008-03-10收稿)
正交设计法优选蛇床子 CO2 超临界萃取工艺
李明春 ,梁东升 ,李　晓
(解放军第 401医院 ,山东青岛 266071)
　　摘要　目的:优选蛇床子 CO2超临界萃取最佳工艺条件。方法:以蛇床子素的含量和总萃取得率为考察指标 ,
用正交设计法优选蛇床子 CO2超临界萃取最佳工艺条件。结果:萃取温度 、萃取压力及分离釜Ⅰ 温度等 3种因素
对综合评判值有极显著性影响 (P<0.001), 而分离釜 Ⅱ温度无显著性影响(P>0.05), 优选的萃取条件为
A2B3C3D1。结论:蛇床子的 CO2超临界萃取最佳工艺条件为萃取温度 50℃, 萃取压力 30MPa, 分离釜Ⅰ 温度 65℃,
分离釜Ⅱ温度 40℃。
关键词　蛇床子;CO2超临界萃取;工艺;正交设计
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)11-1753-03
作者简介:李明春(1965-),主任药师 ,研究方向:新药制剂的研究与开发;Tel:0532-83970086。
　　蛇床子系伞形科蛇床属植物蛇床 Cnidiummon-
nieri(L.)Cuss.的干燥成熟果实 ,具有温肾壮阳 、燥
湿 、祛风 、杀虫等功能 〔1〕。蛇床子的化学成分比较
复杂 ,目前已知的蛇床子提取物的化学成分可达 40
多种。除挥发油外 ,主要药效活性成分为蛇床子总
香豆素 (TotalcoumarinsofFructusCnidi, TCFC)。
TCFC以蛇床子素(ostho1)和欧前胡素(inperatorin)
为主。本文以蛇床子素的含量和总萃取得率为指
标 ,用正交设计法优选了蛇床子 CO2超临界萃取的
最佳条件 。
1　仪器与材料
HA221-40-11型超临界萃取装置(江苏省南通
市华安超临界萃取有限公司);Agilent1100高效液
相色谱仪;FA1604型电子分析天平(上海衡平仪器
仪表厂)。蛇床子药材(批号:020350071 ,安国市京
兴药业有限公司 ,购于同仁堂药业有限公司青岛分
·1753·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 11期 2008年 11月