全 文 ：2 32
科 技 通 孤 第 1 1卷第 4期
1 9 9 5 年 7 月
紫花首蓓根原生质体植株再生
黄绍兴 王 慧中 吕德扬
(北京农业大学 生物学院 , 北京 1 0 0 0 9 4) (杭 州师范学院生物系 ) (中国科学院遗传研究所 )
摘 要
用三种酶液游离大量高活力的紫花首楷实生苗根原生质体 . K ao 的原生质体培养基使根原生
质体分裂形成细胞团 . 原生质体形成的愈伤组织在 U M 培养基上分化体细胞胚 . 体细胞胚在无激
素的 M S 琼脂培养基上发育为完整植株 .
关链词 : 紫花首楷 ;原生质体 ;植株再生
紫花首拾 ( M e id ca g o S a it v a L . )是世界上分布最广的一种多年生豆科牧草 ,也是我国最重
要的豆科牧草之一 它不仅产量高而且营养丰富 . 但是 ,紫花首楷也存在一些需要改进的性状 ,
比如 , 紫花首蓓的含硫氨基酸偏低 . 含硫氨基酸的含量直接与动物营养有关 , 并与动物毛产量
成正相关 . 近年来作物遗传工程技术的发展使得作物进行品质 、抗性改 良的遗传操作成为可
能 . 紫花首楷原生质体培养和植株再生体系的建立 ,将为紫花首藉的品质改 良提供一个有效的
途径 . 有关紫花首猎原生质体培养的研究 , 国外 已有若干报道「’一 ’ 〕 , 但国内尚未 见报道 . 本文叙
述紫花首楷根原生质体的游离 、 培养和植株再生的方法 .
1 材料和方法
L l 植物材料
紫花首楷 ( M e id o a g o sa it va L . ) 品种为保定首蓓 , 由中国农业科学院畜牧所饲料室惠赠 .
将种子用 75 写酒精浸泡 , 再用 0 . 1%升汞消毒 , 无菌水洗 3一 4 次 ,接种到 含琼脂 0 . 6%和
蔗糖 2 %的 M S 培养基上 .
1
.
2 原生质体的游离及其培养方法
种子萌发 2 夭后 , 将长约 cI m 的幼根切成厚 l m m 左右的小片段 ,放在含 13 %甘露醇的无
机盐溶液 (简称 C P W 13 M ) 中处理 1一 h2 小时 , 使细胞质壁分离 ,然后放在酶液中 , 保温 ( 28 士
I C )
, 振荡培养 ( S O r / m i n ) 1 2 ~ 1 4 h . 酶液的组成是 : ( l ) 2 %纤维素酶 ( C e l l u l o s e O n o z u k a R S ) ,
1%离析酶 ( M a C e r o z y m e R I O ) , 0 . 5%果胶酶 ( P e e t i n a s e , s e r v a )和含有 9%甘露醇的 C P W 无
机盐溶液 ( 以下简称 C P W g M ) ( E M 一 8 ) ; ( 2 ) 4% 纤维素酶 ( C e l l u l o s e O n o z u k a R 1 0 ) , 2%离析酶
(M a e e r o z y m e R l o )
,
0
.
2%半纤维 素酶 ( H e m i e e l l u l o s e , s i g m a )和 C P W gM ( E M 一 9 ) ; ( 3 ) 4%纤
维 素酶 ( C e l l u l o s e O n o z u k a R l o ) , 2 %离析酶 ( M a e e r o z y m e R z o ) 和 C P W gM ( EM 一 1 0 ) . 含有幼
根原生质体的酶液用 50 拌m 孔径的尼龙膜过滤 , 以除去大块杂质 . 把原生质体先用 C P W g M 离
心漂洗 3 次 ( s o o r /m in , 3m in ) , 然后用血球计数板计算原生质体的产量 , 用于培养 .
文稿收到 日期 : 1 99 4一 0 6一 2 1
DOI : 10. 13774 /j . cnki . kj tb. 1995. 04. 010
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科 技 通 孤 第 1 1卷第 4期
1 9 9 5 年 7 月
紫花首蓓根原生质体植株再生
黄绍兴 王 慧中 吕德扬
(北京农业大学 生物学院 , 北京 1 0 0 0 9 4) (杭 州师范学院生物系 ) (中国科学院遗传研究所 )
摘 要
用三种酶液游离大量高活力的紫花首楷实生苗根原生质体 . K ao 的原生质体培养基使根原生
质体分裂形成细胞团 . 原生质体形成的愈伤组织在 U M 培养基上分化体细胞胚 . 体细胞胚在无激
素的 M S 琼脂培养基上发育为完整植株 .
关链词 : 紫花首楷 ;原生质体 ;植株再生
紫花首拾 ( M e id ca g o S a it v a L . )是世界上分布最广的一种多年生豆科牧草 ,也是我国最重
要的豆科牧草之一 它不仅产量高而且营养丰富 . 但是 ,紫花首楷也存在一些需要改进的性状 ,
比如 , 紫花首蓓的含硫氨基酸偏低 . 含硫氨基酸的含量直接与动物营养有关 , 并与动物毛产量
成正相关 . 近年来作物遗传工程技术的发展使得作物进行品质 、抗性改 良的遗传操作成为可
能 . 紫花首楷原生质体培养和植株再生体系的建立 ,将为紫花首藉的品质改 良提供一个有效的
途径 . 有关紫花首猎原生质体培养的研究 , 国外 已有若干报道「’一 ’ 〕 , 但国内尚未 见报道 . 本文叙
述紫花首楷根原生质体的游离 、 培养和植株再生的方法 .
1 材料和方法
L l 植物材料
紫花首楷 ( M e id o a g o sa it va L . ) 品种为保定首蓓 , 由中国农业科学院畜牧所饲料室惠赠 .
将种子用 75 写酒精浸泡 , 再用 0 . 1%升汞消毒 , 无菌水洗 3一 4 次 ,接种到 含琼脂 0 . 6%和
蔗糖 2 %的 M S 培养基上 .
1
.
2 原生质体的游离及其培养方法
种子萌发 2 夭后 , 将长约 cI m 的幼根切成厚 l m m 左右的小片段 ,放在含 13 %甘露醇的无
机盐溶液 (简称 C P W 13 M ) 中处理 1一 h2 小时 , 使细胞质壁分离 ,然后放在酶液中 , 保温 ( 28 士
I C )
, 振荡培养 ( S O r / m i n ) 1 2 ~ 1 4 h . 酶液的组成是 : ( l ) 2 %纤维素酶 ( C e l l u l o s e O n o z u k a R S ) ,
1%离析酶 ( M a C e r o z y m e R I O ) , 0 . 5%果胶酶 ( P e e t i n a s e , s e r v a )和含有 9%甘露醇的 C P W 无
机盐溶液 ( 以下简称 C P W g M ) ( E M 一 8 ) ; ( 2 ) 4% 纤维素酶 ( C e l l u l o s e O n o z u k a R 1 0 ) , 2%离析酶
(M a e e r o z y m e R l o )
,
0
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2%半纤维 素酶 ( H e m i e e l l u l o s e , s i g m a )和 C P W gM ( E M 一 9 ) ; ( 3 ) 4%纤
维 素酶 ( C e l l u l o s e O n o z u k a R l o ) , 2 %离析酶 ( M a e e r o z y m e R z o ) 和 C P W gM ( EM 一 1 0 ) . 含有幼
根原生质体的酶液用 50 拌m 孔径的尼龙膜过滤 , 以除去大块杂质 . 把原生质体先用 C P W g M 离
心漂洗 3 次 ( s o o r /m in , 3m in ) , 然后用血球计数板计算原生质体的产量 , 用于培养 .
文稿收到 日期 : 1 99 4一 0 6一 2 1
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科 技 通 孤 第 1 1卷第 4期
9 9 15年 7 月
紫花首蓓根原生质体植株再生
黄绍兴 王 慧中 吕德扬
(北京农业大学 生物学院 , 北京 1 0 0 0 9 4) (杭 州师范学院生物系 ) (中国科学院遗传研究所 )
摘 要
用三种酶液游离大量高活力的紫花首楷实生苗根原生质体 . K ao 的原生质体培养基使根原生
质体分裂形成细胞团 . 原生质体形成的愈伤组织在 U M 培养基上分化体细胞胚 . 体细胞胚在无激
素的 M S 琼脂培养基上发育为完整植株 .
关链词 : 紫花首楷 ;原生质体 ;植株再生
紫花首拾 ( M e id ca g o S a it v a L . )是世界上分布最广的一种多年生豆科牧草 ,也是我国最重
要的豆科牧草之一 它不仅产量高而且营养丰富 . 但是 ,紫花首楷也存在一些需要改进的性状 ,
比如 , 紫花首蓓的含硫氨基酸偏低 . 含硫氨基酸的含量直接与动物营养有关 , 并与动物毛产量
成正相关 . 近年来作物遗传工程技术的发展使得作物进行品质 、抗性改 良的遗传操作成为可
能 . 紫花首楷原生质体培养和植株再生体系的建立 ,将为紫花首藉的品质改 良提供一个有效的
途径 . 有关紫花首猎原生质体培养的研究 , 国外 已有若干报道「’一 ’ 〕 , 但国内尚未 见报道 . 本文叙
述紫花首楷根原生质体的游离 、 培养和植株再生的方法 .
1 材料和方法
L l 植物材料
紫花首楷 ( M e id o a g o sa it va L . ) 品种为保定首蓓 , 由中国农业科学院畜牧所饲料室惠赠 .
将种子用 75 写酒精浸泡 , 再用 0 . 1%升汞消毒 , 无菌水洗 3一 4 次 ,接种到 含琼脂 0 . 6%和
蔗糖 2 %的 M S 培养基上 .
1
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2 原生质体的游离及其培养方法
种子萌发 2 夭后 , 将长约 cI m 的幼根切成厚 l m m 左右的小片段 ,放在含 13 %甘露醇的无
机盐溶液 (简称 C P W 13 M ) 中处理 1一 h2 小时 , 使细胞质壁分离 ,然后放在酶液中 , 保温 ( 28 士
I C )
, 振荡培养 ( S O r / m i n ) 1 2 ~ 1 4 h . 酶液的组成是 : ( l ) 2 %纤维素酶 ( C e l l u l o s e O n o z u k a R S ) ,
1%离析酶 ( M a C e r o z y m e R I O ) , 0 . 5%果胶酶 ( P e e t i n a s e , s e r v a )和含有 9%甘露醇的 C P W 无
机盐溶液 ( 以下简称 C P W g M ) ( E M 一 8 ) ; ( 2 ) 4% 纤维素酶 ( C e l l u l o s e O n o z u k a R 1 0 ) , 2%离析酶
(M a e e r o z y m e R l o )
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2%半纤维 素酶 ( H e m i e e l l u l o s e , s i g m a )和 C P W gM ( E M 一 9 ) ; ( 3 ) 4%纤
维 素酶 ( C e l l u l o s e O n o z u k a R l o ) , 2 %离析酶 ( M a e e r o z y m e R z o ) 和 C P W gM ( EM 一 1 0 ) . 含有幼
根原生质体的酶液用 50 拌m 孔径的尼龙膜过滤 , 以除去大块杂质 . 把原生质体先用 C P W g M 离
心漂洗 3 次 ( s o o r /m in , 3m in ) , 然后用血球计数板计算原生质体的产量 , 用于培养 .
文稿收到 日期 : 1 99 4一 0 6一 2 1