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生命科学仪器 2008 第6卷/ 10月刊
研究报告
陆英（Sambusus chinensis Lind1.）为忍冬科接骨
木属植物，又称接骨木、八棱麻、珊瑚花、臭草、七叶
金等[1]。产于全国各地，资源丰富，全草入药。早
在《神农本草经》就有记载，为民间常用草药，具有活
血散淤、消炎止痛、利尿消肿、祛风活络之功效，常用
于治疗跌打损伤，风湿疼痛，肾炎水肿，急性菌痢及肺
炎等[2-4]。江西宜春采用陆英煎剂、糖浆、冲剂治疗
甲、乙型急性病毒性肝炎，取得显著疗效，从陆英的脂
溶部分提取分离出α-香树脂醇（α-amyrin），β-香
树脂醇（β-amyrin），β-谷甾醇（β-sitosterol），齐
墩果酸（oleanolic acid）及熊果酸（ursolic acid）5
种成分[5]，经药理和临床试验证实，陆英所含的熊
果酸、齐墩果酸、β-谷甾醇是其抗肝炎的有效成
分，其中熊果酸是主要有效成分[6-8]。目前已有文献
报道陆英药材与陆英制剂的质量控制方法研究[9-14]，
但未见以熊果酸和齐墩果酸为指标性成分的HPLC
指纹图谱的研究。为了制订中药陆英的质量标准，
以提高药材质量的可控性及其植物资源的开发利用
程度，本研究首次采用反相高效液相色谱法建立了
中药陆英的指纹图谱分析方法，以期为中药陆英的
科学质量控制和合理开发利用提供科学依据。
1 仪器与试药
1.1仪器
Waters高效液相色谱仪（515泵，2996光电二
极管矩阵检测器（PAD），7725i手动进样器，柱温箱，
Empower中文色谱工作站）；SK-2510HP超声提取
仪器(上海汉克科学仪器有限公司)；Sartorius CP225D
型十万分之一电子分析天平（北京赛多利斯仪器有
限公司）；UPWS-1-10T高纯水机(杭州永洁达膜分
离设备厂)；DHG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱
（上海一恒科学仪器有限公司）；指纹图谱计算机
辅助相似性评价系统软件(国家药典委员会推荐使用
软件)。
1.2试药
陆英药材于2007年5~7月[15]分别采自湖南、湖
北、广东、江西（见表1），经鉴定为忍冬科植物陆英
的全草；熊果酸和齐墩果酸对照品（中国药品生物制
品检定所，批号：110709-200304，110742-200314，
供含量测定用）；乙腈（色谱纯，天津市大茂化学试
剂厂）；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。
中药陆英高效液相色谱指纹图谱的研究
邹盛勤，刘名权，陈　武
（宜春学院生物工程研究所，江西省天然药物活性成分研究重点实验室，江西 宜春，336000）
摘要 目的：建立中药陆英高效液相色谱指纹图谱，为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。方法：采用高
效液相色谱法，色谱柱为Kromasil C18（250 mm×4.6 mm, 5 μm）柱，流动相为乙腈-0.2 %磷酸水溶液（80∶20），
光电二极管阵列检测器，检测波长215 nm，流速0.8 mL/min，柱温30 ℃。结果 建立了中药陆英的指纹图谱，确定了
10个共有峰，各陆英样品指纹图谱与对照指纹图谱相似度均在0.9以上，可用于陆英药材的定性鉴别。结论 所建立的
HPLC指纹图谱具有良好的精密度、重现性和稳定性，可以作为陆英质量评价的主要依据之一，同时为深入研究中药陆
英的质量标准提供了实验基础。
关键词 陆英；高效液相色谱；指纹图谱；熊果酸
基金项目：江西省教育厅科技项目(赣教技字[2006]267号)，国家“863”计划资助项目(2002AA2Z3217)。
作者简介：邹盛勤(1970- )，男(汉族)，江西奉新人，副教授，主要从事天然药物成分提取与分析研究。
表1　陆英（Sambusus chinensis Lind1.）药材样品来源
样品编号 产地 样品编号 产地
S1 广东清远 S8 江西萍乡
S2 江西南昌 S9 江西万载
S3 湖北荆门 S10 湖南岳阳
S4 湖北武汉 S11 江西奉新
S5 江西九江 S12 江西宜春
S6 江西新余 S13 江西宜春
S7 江西宜丰
2 方法与结果
2.1对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的熊果酸对照品4.43 mg、
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齐墩果酸对照品2.47 mg置10 mL容量瓶中，加入适
量甲醇超声溶解，定容，得含熊果酸0.443 mg/mL和
齐墩果酸0.247 mg/mL的对照品混合溶液。
2.2供试品溶液的制备
取陆英样品于70℃干燥至恒重后粉碎，过20目
筛。精密称取样品粉末约3 g，置于具塞三角烧瓶中，
加入95 %乙醇40 mL，称定重量，超声提取30 min，
放冷，用95 %乙醇补足减失重量，摇匀后用微孔
滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液为样品溶液。
2.3色谱条件
色谱柱为Kromasil C18柱（250mm×4.6mm,
5μm, 带保护柱）；乙腈-0.2%磷酸水溶液（80:20）；
检测波长为215 nm；流速为0.8 mL/min；柱温为30 ℃。
对照品的HPLC色谱图见图1。
2.5陆英指纹图谱的建立及相似度分析
2.5.1检测结果
按2.2项下方法制备13批次陆英药材的供试品溶
液，在2.3项下的色谱条件下，依次进样检测，获得
13批次陆英高效液相色谱叠加图。
2.5.2共有特征峰的标定
根据13批次供试品测定结果所给出的峰数、峰
值(积分值)和峰位(相对保留时间)等相关参数进行分
析、比较，陆英高效液相色谱可分离出10多个色谱
峰，通过对照品（熊果酸）保留时间和紫外光谱检测
结果的对照，并比较所有测定和记录的色谱图，选取
10个共有峰作为指纹图谱的特征峰，其中8号峰为齐
墩果酸色谱峰，9号峰为熊果酸色谱峰（见图2）。
2.5.3共有图谱模式的建立
OLA-齐墩果酸，UA-熊果酸
图1　对照品HPLC图谱
2.4方法学考察
2.4.1精密度试验
精密吸取S8药材样品的供试品溶液10 μL进样分
析，重复进样6次，比较各主要色谱峰的保留时间和峰
面积。结果6次进样的色谱图中各共有峰保留时间和峰
面积的RSD分别为0.20 %~1.12 %和0.32 %~1.09 %，表
明仪器精密度良好。
2.4.2 稳定性试验
取同一供试品溶液，在样品制备完成后第0，
1，2，4，8，24 h分别进样10 μL，结果6次进样
的色谱图中各共有峰保留时间和峰面积的RSD分别
为1.15~2.14 %和 .27~2.08 %，表明供试品溶液在
24 h内稳定。
2.4.3重现性试验
取同一批次陆英药材样品5份制备供试品溶液，
分别精密吸取10 μL进样分析，结果5次进样的色
谱图中各共有峰保留时间和峰面积的RSD分别为
0.53~2.06 %和1.04~2.12 %，表明该测定方法的重
复性良好。
R-对照指纹图谱（平均值）；S1~S13-陆英样品；
8-齐墩果酸；9-熊果酸
图2　陆英样品HPLC指纹图谱
将各批次样品的测试数据导入计算机辅助相似性
评价系统软件，经选峰，设定匹配模板，将谱峰
自动匹配，建立其共有图谱标准模板，然后进行各
样品的相似度评价。
2.5.4图谱相似度分析
采用计算机辅助相似性评价系统软件分析各批次
样品指纹图谱的相似度，结果见表2~表4。经分析，
11批次不同产地的陆英样本HPLC色谱图相似度值
大于0.9。
3 讨论
3.1本实验比较了不同提取溶剂
如乙醚、甲醇、乙醇的冷浸提取、索氏提取、
回流提取、超声提取等不同提取方法的提取效果，以
95 %乙醇超声提取30 min的总体效果为佳，采用该
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样品 峰号
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9（S） 10
S1 0.2610.2690.2950.3060.3460.4760.8850.9611.0001.381
S2 0.2450.2540.2790.2900.3190.4640.8820.9601.0001.388
S3 0.2580.2670.2920.3030.3320.4730.8840.9611.0001.382
S4 0.2630.2730.2980.3100.3370.4800.8880.9621.0001.374
S5 0.2640.2730.3000.3100.3390.4820.8890.9621.0001.378
S6 0.2640.2730.3000.3090.3380.4820.8880.9621.0001.380
S7 0.2650.2740.3000.3110.3380.4820.8900.9631.0001.380
S8 0.2630.2720.2980.3090.3370.4800.8880.9621.0001.380
S9 0.2620.2710.2970.3080.3360.4790.8890.9631.0001.384
S10 0.2610.2710.2950.3080.3360.4780.8870.9621.0001.382
S11 0.2620.2700.2970.3080.3360.4790.8880.9621.0001.383
S12 0.2600.2700.2950.3060.3340.4770.8860.9611.0001.380
S13 0.2600.2690.2950.3040.3330.4760.8870.9611.0001.381
平均值 0.2610.2700.2960.3060.3360.4780.8870.9621.0001.381
RSD%1.9471.8991.8621.7751.791.0210.2520.0890.0000.235
样品 峰号
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9（S） 10
S1 1.2591.3260.0370.0481.0970.0470.9930.2801.0000.245
S2 0.7490.8840.0540.0560.7770.0460.8790.3011.0000.203
S3 0.5490.4380.0360.0470.4840.0240.5470.2911.0000.111
S4 0.5410.4920.0450.0650.4840.0540.9890.2821.0000.151
S5 0.7160.6590.0430.0490.4740.0770.8250.2831.0000.248
S6 0.3200.2450.0440.0520.4050.0490.2250.2681.0000.053
S7 0.1600.1600.0280.0370.4470.0320.0400.3811.0000.029
S8 0.6120.5790.0600.0520.6970.0720.6900.3131.0000.116
S9 1.1751.0190.0450.0611.1250.0740.5630.3241.0000.173
S10 1.2650.9550.0940.1141.2320.0880.7660.3831.0000.174
S11 0.8550.5880.0500.0560.6590.0580.7940.2681.0000.127
S12 1.0180.8270.0780.0761.010.0820.6610.2801.0000.158
S13 0.6610.3380.0520.0500.9090.0410.2430.2581.0000.098
平均值 0.7600.6550.0510.0590.7540.0570.6320.3011.0000.145
样品 对照指
编号 纹图谱
相似度 0.9860.9840.9790.9170.905.9130.9690.9480.9730.9870.9880.9620.9431.000
表2　陆英指纹图谱中共有指纹峰的相对保留时间
表3　陆英指纹图谱中共有指纹峰的相对峰面积
表4　陆英高效液相色谱指纹图谱相似度
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10S11 S12S13
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方法陆英中主要成分的提取率高, 所得图谱峰较多且分
离良好。
3.2在流动相体系的选择中
本实验曾试用甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.2 %
磷酸水溶液、乙腈-0.2 %磷酸水溶液以不同体积分数、
不同比例分别进行等度和梯度洗脱试验，根据所得图
谱表明，采用乙腈-0.2 %磷酸水溶液（80∶20）流动相
体系等度洗脱时各个色谱峰的峰形和分离度较好，保
留时间适中，且基线平稳，不易漂移，有利于指纹
图谱的分析；实验中记录了120 min色谱图，发现40
min后无色谱峰出现，故确定采集时间为40 min；在
检测波长选择中，通过PAD检测器记录40 min内
190～500 nm波段的三维图谱，比较各波长下的色谱
图，由于熊果酸和齐墩果酸为陆英主要活性成分，而
该两组分多在215 nm波长处有较强吸收，色谱峰数
目较多，所得图谱信息量大且峰值分布合理，故检测
波长选定为215 nm。
3.3综合陆英药材HPLC指纹图谱的相对保留时
间、相对峰面积以及相似度
可以看出，不同来源陆英药材样品的指纹图谱
整体面貌基本一致，反映了不同批次陆英药材的同源
性及其群体化学组分的相似性，揭示出陆英指纹图谱
具有自身化学条码特征，是其内在化学成分种类的反
映，但同时也反映出其共有成分的含量存在较大差异。
这说明，不同来源的陆英药材内在质量与产地因素密
切相关。因此，采用HPLC指纹图谱的质量控制模式
来控制中药陆英质量，对保证其临床疗效的稳定具有
重要意义。
3.4通过对13批不同来源陆英药材样品的高效液相
色谱检测
初步构建了陆英HPLC指纹图谱分析方法，陆
英中有效活性成分能在色谱图中得到宏观、综合地体
现，所建立的色谱指纹图谱的精密度、稳定性和重
复性均符合指纹图谱研究的技术要求，且陆英药材
指纹图谱的共有特征峰整体分离度较好，能充分反
映陆英各化学成分特征，为制订中药陆英质量评价
标准提供了科学依据。
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生命科学仪器 2008 第6卷/ 10月刊
研究报告
Fingerprint chromatograms of Sambucus chinensis Lindl. by HPLC
Shengqin　Zou, Mingquan Liu, Wu Chen
（Bioengineering Research Institute of Yichun University， Key Laboratory of Jiangxi Province for
Research on Active Ingredients in Natural Medicines，Y chun 336000，Chin）
Abstract　Objective To establish the fingerprint chromatograms of Sambucus chinensis Lindl. by HPLC, which can be applied for
quality assessment and control of medicinal materials of Sambucus chinensis lindl.. Methods The HPLC analysis was performed on
Kromasil C18 column (250 mm×4.6 m, 5 μ ) using ethanenitrile-0.2 % aqueous solution of phosphoric acid (80:20) as mobile
phase at flow rate of 0.8 mL/min. UV detect ive wavelength was at 215 nm of the photodiode array detector and the column temperature
was 30 ℃. Results Establishing the fingerprint chromatograms of Sambucus chinensis lindl., 10 common peaks were found in the
fingerprint chromatograms of Sambucus chinensis lindl. and good similarities with correlation coefficients over 0.9 were found in the
fingerprint chromatograms between the herbs from different sources and standard fingerprint, which can be ut ilized for the identification
of Sambucus chinensis lindl.. Conclusion The established HPLC fingerprint chromatograms have desirable accuracy, repeatability and
stability, it can be used for one of the quality control of Sambucus chinensis lindl., meanwhile, provide an experimental basis for further
quality control of Sambucus chinensis lindl.
Key words　Sambucus chinensis lindl.; HPLC; Fingerprint chromatograms; Ursolic acid
新闻动态
兰州大学研制出一种快速检测三聚氰胺化学试剂
新华网甘肃频道9月28日消息，9月27日，记者从兰州大学化学化工学院了解到，经过该学院三
名教授联合科研攻关，一种能够快速检测出食品中是否含有有毒有害物质三聚氰胺的化学试剂被研制出来，
运用这种化学试剂做检测，具有检测速度快、检测费用低廉的特点。
兰州大学化学化工学院教授、博士生导师陈保华介绍说，对食品中是否含有三聚氰胺进行检测是一
项复杂的过程，目前国内的检测部门主要是用液相色谱仪器分析的方法，需要专业人员操作，耗时较
长，检测费用高昂。
陈保华说，为了实现快速检测食品中三聚氰胺的要求，对食品企业的产品进行“批批检”，受甘
肃省有关部门委托，兰州大学化学化工学院成立了专门的课题组，由他和同事黄国生、张海霞两位教
授领衔，进行科研攻关。课题组成员经过反复实验，研究出了一种化学试剂，将这种化学试剂加入到
牛奶等食品中，通过食品颜色变化就能够快速认定该食品是否含有有毒有害三聚氰胺物质。
课题组成员、兰州大学化学化工学院教授、博士生导师张海霞告诉记者，运用他们研制的化学试
剂对食物进行检测，具有简便快捷、容易操作的特点，经过简单培训，普通奶农就能够掌握该项技
术。她说，以检测牛奶中是否含有三聚氰胺为例，给牛奶中加入该化学试剂，只需要20分钟就能够
完全检测出结果，而且检测的费用非常低廉。
兰州大学化学化工学院副院长涂思龙介绍说，该院将对三聚氰胺快速检测化学试剂进行进一步技术
完善，达到能够对被检测物质定性和定量的要求标准后，将制成简便、易携带的试剂盒，向养殖户和
食品企业推广应用。