全 文 ：第 26卷 ,第 1期 光　谱　实　验　室 Vol . 2 6 , No . 1
2 0 0 9年 1月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory January , 2 0 0 9
中药陆英 HPLC指纹图谱研究①
① 江西省教育厅科技项目 (赣教技字 [2006 ]267号 ) ,国家“ 863”计划资助项目 ( 2002AA2Z3217)
② 联系人 ,手机: ( 0) 13507058127; E-mail: zsqycxy@ 163. com
作者简介:邹盛勤 ( 1970— ) ,男 ,江西省奉新县人 ,副教授 ,主要从事天然药物成分提取与分析研究。
收稿日期: 2008-07-07;接受日期: 2008-08-11
邹盛勤② a　黄宏伟b　刘名权a　陈 武a ,b
a (宜春学院生物工程研究所　江西省天然药物活性成分研究重点实验室　江西省宜春市学府路 576号　 336000)
b(宜春学院化学与生物工程学院　江西省宜春市　 336000)
摘　要　建立了中药陆英高效液相色谱指纹图谱 ,为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。色谱
柱为 Kromasil C18 ( 250mm× 4. 6mm , 5μm)柱 ,流动相为乙腈 -0. 2%磷酸水溶液 ( 80∶ 20) ,光电二极管阵列
检测器 ,检测波长 215nm,流速 0. 8m L /min,柱温 30℃。建立的陆英指纹图谱中共确定了 10个共有峰 ,各陆
英样品指纹图谱与对照指纹图谱相似度均在 0. 9以上 ,可用于陆英药材的定性鉴别。 HPLC指纹图谱具有
良好的精密度、重现性和稳定性 ,可以作为陆英质量评价的主要依据之一 ,同时为深入研究中药陆英的质
量标准提供了实验基础。
关键词　陆英 ,高效液相色谱 ,指纹图谱 ,熊果酸。
中图分类号: O657. 7+ 2　　　文献标识码: A　　　文章编号: 1004-8138( 2009) 01-0100-04
1　前言
陆英 ( Sambusus chinensis Lindl. )为忍冬科接骨木属植物 ,又称接骨木、八棱麻、七叶金等。产于
全国各地 ,资源丰富 ,全草入药 ,为民间常用草药 ,具有活血散淤、消炎止痛、利尿消肿、祛风活络之
功效 ,常用于治疗跌打损伤 ,风湿疼痛 ,肾炎水肿 ,急性菌痢及肺炎等 [1, 2 ]。陈武等 [3 ]从陆英的脂溶部
分分离出T-香树脂醇 ,U-香树脂醇 ,U-谷甾醇 ,齐墩果酸及熊果酸 5种成分 ,其煎剂、糖浆、冲剂治疗
甲、乙型急性病毒性肝炎具有显著疗效。经药理和临床试验证实 ,陆英所含的熊果酸、齐墩果酸、U-
谷甾醇是其抗肝炎的有效成分 ,其中熊果酸是主要有效成分 [ 4, 5 ]。目前已有文献报道陆英药材的质
量控制方法 [5— 8 ] ,但未见以熊果酸和齐墩果酸为指标性成分的 HPLC指纹图谱的研究。为了制订中
药陆英的质量标准 ,以提高药材质量的可控性及其植物资源的开发利用程度 ,本研究首次采用反相
高效液相色谱法建立了中药陆英的指纹图谱分析方法 ,以期为中药陆英的质量控制和合理开发利
用提供科学依据。
2　实验部分
2. 1　仪器
Waters高效液相色谱仪 (美国 Waters公司 ) ( 515泵 , 2996光电二极管矩阵检测器 ( PAD) ,
7725i手动进样器 ,柱温箱 , Empow er中文色谱工作站 ) ; SK- 2510HP超声提取仪器 (上海汉克科
学仪器有限公司 ) ; Sartorius CP225D电子分析天平 (北京赛多利斯仪器有限公司 ) ; UPWS-1-10T
高纯水机 (杭州永洁达膜分离设备厂 ) ;指纹图谱计算机辅助相似性评价系统软件 (国家药典委员会
推荐使用软件 )。
2. 2　试药
陆英药材于 2007年 5— 7月 [9 ]分别采自湖南、湖北、广东、江西 (见表 1) ,经鉴定为忍冬科植物
陆英的全草 ;熊果酸和齐墩果酸对照品 (中国药品生物制品检定所 ,批号: 110709-200304, 110742-
200314,供含量测定用 ) ;乙腈 (色谱纯 ,天津市大茂化学试剂厂 ) ;实验用水为超纯水 ;其余试剂均为
分析纯。
表 1　陆英 (Sambusus chinensis Lindl. )药材样品来源
样品编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13
产地 广东清远
江西
南昌
湖北
荆门
湖北
武汉
江西
九江
江西
新余
江西
宜丰
江西
萍乡
江西
万载
湖南
岳阳
江西
奉新
江西
宜春
江西
宜春
2. 3　溶液的制备
2. 3. 1　对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的熊果酸对照品 4. 43 mg、齐墩果酸对照品 2. 47mg置 10mL容量瓶中 ,
加入适量甲醇超声溶解 ,定容 ,得含熊果酸 0. 443mg /mL和齐墩果酸 0. 247mg /mL的对照品混合
溶液。
2. 3. 2　供试品溶液的制备
取陆英样品于 70℃干燥至恒重后粉碎 ,过 20目筛。准确称取样品粉末约 3g,置于具塞三角烧
瓶中 ,加入 95%乙醇 40mL,称定重量 ,超声提取 30min,放冷 ,用 95%乙醇补足减失重量 ,摇匀后用
微孔滤膜 ( 0. 45μm)滤过 ,取续滤液为样品溶液。
2. 4　色谱条件
色谱柱为 Kromasil C18柱 ( 250mm× 4. 6mm, 5μm);乙腈-0. 2%磷酸水溶液 ( 80∶ 20) ;检测波长
为 215nm;流速为 0. 8mL /min;柱温为 30℃。 对照品的 HPLC色谱图见图 1。
图 1　对照品 HPLC图谱
OLA—— 齐墩果酸 ; UA—— 熊果酸。
3　结果与讨论
3. 1　精密度试验
准确吸取 S8药材样品的供试品溶液 10μL
进样分析 ,重复进样 6次 ,比较各主要色谱峰的
保留时间和峰面积。 结果 6次进样的色谱图中
各共有峰保留时间和峰面积的 RSD分别为
0. 20%— 1. 12%和 0. 32%— 1. 09% ,表明仪器
精密度良好。
3. 2　稳定性试验
取同一供试品溶液 ,在样品制备完成后第
0, 1, 2, 4, 8, 24h分别进样 10μL,结果 6次进样的色谱图中各共有峰保留时间和峰面积的 RSD分别
为 1. 15%— 2. 14%和 1. 27%— 2. 08% ,表明供试品溶液在 24h内稳定。
3. 3　重现性试验
取同一批次陆英药材样品 5份制备供试品溶液 ,分别准确吸取 10μL进样分析 ,结果 5次进样
101第 1期 邹盛勤等:中药陆英 HPLC指纹图谱研究
的色谱图中各共有峰保留时间和峰面积的 RSD分别为 0. 53%— 2. 06%和 1. 04%— 2. 12% ,表明
该测定方法的重复性良好。
3. 4　陆英指纹图谱的建立及相似度分析
3. 4. 1　检测结果
按 2. 3. 2项下方法制备 13批次陆英药材的供试品溶液 ,在 2. 4项下的色谱条件下 ,依次进样
检测 ,获得 13批次陆英高效液相色谱叠加图。
图 2　陆英样品 HPLC指纹图谱
R——对照指纹图谱 (平均值 ) ; S1— S13—— 陆英样品 ;
8—— 齐墩果酸 ; 9——熊果酸。
3. 4. 2　共有特征峰的标定
根据 13批次供试品测定结果所给出的峰
数、峰值 (积分值 )和峰位 (相对保留时间 )等相
关参数进行分析、比较 ,陆英高效液相色谱可分
离出 10多个色谱峰 ,通过对照品 (熊果酸 )保留
时间和紫外光谱检测结果的对照 ,并比较所有
测定和记录的色谱图 ,选取 10个共有峰作为指
纹图谱的特征峰 ,其中 8号峰为齐墩果酸色谱
峰 , 9号峰为熊果酸色谱峰 (见图 2)。
3. 4. 3　共有图谱模式的建立
将各批次样品的测试数据导入计算机辅助
相似性评价系统软件 ,经选峰 ,设定匹配模板 ,
将谱峰自动匹配 ,建立其共有图谱标准模板 ,然
后进行各样品的相似度评价。
3. 4. 4　图谱相似度分析
采用计算机辅助相似性评价系统软件分析
各批次样品指纹图谱的相似度 ,结果见表 2。经分析 , 13批次不同产地的陆英样本中 10个共有峰保
留时间的 RSD均小于 1. 95% , HPLC色谱图相似度值均大于 0. 9。
表 2　陆英高效液相色谱指纹图谱相似度
样品
编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13
对照指
纹图谱
相似度 0. 986 0. 984 0. 979 0. 917 0. 905 0. 913 0. 969 0. 948 0. 973 0. 987 0. 988 0. 962 0. 943 1. 000
4　结论
( 1)本实验比较了不同提取溶剂如乙醚、甲醇、乙醇的冷浸提取、索氏提取、回流提取、超声提
取等不同提取方法的提取效果 ,以 95%乙醇超声提取 30min的总体效果为佳 ,采用该方法陆英中
主要成分的提取率高 , 所得图谱峰较多且分离良好。
( 2)在流动相体系的选择中 ,本实验曾试用甲醇 -水、乙腈 -水、甲醇 -0. 2%磷酸水溶液、乙腈 -
0. 2%磷酸水溶液以不同体积分数、不同比例分别进行等度和梯度洗脱试验 ,根据所得图谱表明 ,采
用乙腈 -0. 2%磷酸水溶液 ( 80∶ 20)流动相体系等度洗脱时各个色谱峰的峰形和分离度较好 ,保留
时间适中 ,且基线平稳 ,不易漂移 ,有利于指纹图谱的分析 ;实验中记录了 120min色谱图 ,发现
40min后无色谱峰出现 ,故确定采集时间为 40min。
( 3)综合陆英药材 HPLC指纹图谱的相对保留时间、相对峰面积以及相似度可以看出 ,不同来
102 光谱实验室 第 26卷
源陆英药材样品的指纹图谱整体面貌基本一致 ,反映了不同批次陆英药材的同源性及其群体化学
组分的相似性 ,揭示出陆英指纹图谱具有自身化学条码特征 ,是其内在化学成分种类的反映。但同
时也反映出其共有成分的含量存在较大差异 ,说明不同来源的陆英药材内在质量与产地因素密切
相关。通过对 13批不同来源陆英药材样品的高效液相色谱检测 ,初步构建了陆英 HPLC指纹图谱
分析方法 ,陆英中有效活性成分能在色谱图中得到宏观、综合地体现 ,能充分反映陆英各化学成分
特征 ,为制订中药陆英质量评价标准提供了科学依据。
参考文献
[1 ]江苏新医学院 .中药大辞典 (下册 ) [M ].上海:上海人民出版社 , 1977. 2456.
[2 ]徐国钧 ,徐珞珊 ,金蓉鸾等 .中国药材学 [M ].北京:中国医药科技出版社 , 1996. 1601.
[3 ]陈武 ,李开泉 ,熊筱娟等 .陆英抗肝炎活性成分的研究 [ J ].南昌大学学报 (理科版 ) , 2001, 25( 2): 165— 167.
[4 ]熊筱娟 ,陈武 ,李开泉等 .乌索酸防治大鼠实验性肝损伤作用的研究 [ J] .宜春医专学报 , 2001, 13( 2): 126— 127.
[5 ]陈武 ,熊筱娟 ,李开泉等 .乌索酸治疗急性病毒性肝炎的临床研究 [ J] .宜春医专学报 , 2001, 13( 1): 1— 3.
[6 ]田晓玲 ,毕开顺 .陆英的 GC指纹图谱研究 [ J] .中药研究与信息 , 2005, 7( 6): 14— 16.
[7 ]田晓玲 .陆英与陆英制剂质量控制方法研究 [D] .沈阳:沈阳药科大学 , 2005.
[8 ]董立莎 ,舒建麟 ,杨桂华 .陆英的质量标准研究 [ J ].中国中药杂志 , 2001, 26( 9): 588— 591.
[9 ]邹盛勤 ,陈武 .陆英中乌索酸和齐墩果酸动态含量的研究 [ J ].安徽农业科学 , 2005, 33( 4): 642— 643, 666.
Study on Fingerprint Chromatograms of Sambucus Chinensis Lindl .
by HPLC
ZOU Sheng-Qin
a　 HU AN G Hong-Weib　 LIU Ming-Quana　 CHEN Wua ,b
a(B ioengineering Research Institute o f Yichun University, Key Laborator y o f Jiang xi Province for Research
on Active Ing red ients in Natural Med icines, Yichun , Jiangx i 336000, P. R. China )
b(College of Chemist ry and B ioeng ineering of Yichun University ,Yich un , J iang xi 336000, P. R. China )
Abstract　 The fingerprint chromatog rams of Sambucus chinensis Lindl. by HPLC was
established, w hich can be applied for quali ty assessment and control of medicinal materials of
Sambucus chinensis lindl. The HPLC analysis was performed on Kromasil C18 column ( 250mm×
4. 6mm , 5μm) using ethanenit rile-0. 2% aqueous solution of phosphoric acid ( 80: 20) as mobile phase
at f low rate of 0. 8mL /min, and UV photodiode a rray detector at 215nm and the column temperature
of 30℃ . The fingerprint chromatog rams of Sambucus chinensis lindl. , 10 common peaks w ere found in
the fingerprint chromatograms of Sambucus chinensis lindl. and good similari ties w ith correlation
coefficients over 0. 9 were found in the fing erprint chromatograms betw een the herbs f rom different
sources and standard fingerprint, which can be utili zed for the identification of Sambucus chinensis
lindl. . The established HPLC fingerprint chromatog rams have desi rable accuracy, repeatability and
stabili ty , and can be used fo r one of the quality control of Sambucus chinensis lindl. , meanwhile,
provide an experimental basis for further quality cont rol of Sambucus chinensis lindl.
Key words　 Sambucus Chinensis Lindl. , HPLC, Fingerprint Chromatograms, Ursolic Acid.
103第 1期 邹盛勤等:中药陆英 HPLC指纹图谱研究