全 文 ：２０１３年
第３３卷　第２期
河北大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｂｅｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）
２０１３
Ｖｏｌ．３３Ｎｏ．２
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－１５６５．２０１３．０２．０１４
苦丁茶对 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞的体外抗癌效果
刘芳容１，王强２，张静１，赵欣２，３
（１．重庆市肿瘤医院 妇瘤科，重庆　４０００３０；２．重庆第二师范学院 生物与化学工程系，重庆　４０００６７；
３．釜山国立大学 食品科学与营养学科，韩国 釜山　６０９－７３５）
　　摘　要：对市售的苦丁茶进行 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞体外抗癌效果和体内抗转移效果评价．通过 ＭＴＴ
实验、ＤＡＰＩ荧光染色分析和ＲＴ－ＰＣＲ分析说明其体外抗癌效果．２００μｇ／ｍＬ苦丁茶（８１％抑制率）水提物表
现出对 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞较强的生长抑制效果 ．２００μｇ／ｍＬ比１００和５０μｇ／ｍＬ苦丁茶水提物具有更
强的细胞诱导凋亡效果，Ｂａｘ，ｃａｓｐａｓｅ－３和ｃａｓｐａｓｅ－９的 ｍＲＮＡ表达得到增强，Ｂｃｌ－２表达减弱．苦丁茶水提
物处理后炎症相关因子ＮＦ－κＢ，ｉＮＯＳ和ＣＯＸ－２表达减弱，展示了苦丁茶的抗炎特性．由此得出，一定质量浓
度的苦丁茶具有良好的抗癌预防效果．
关键词：苦丁茶；ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞；抗癌
中图分类号：Ｑ８１３　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１０００－１５６５（２０１３）０２－０１８５－０８
Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｉｌｅｘ　ｋｕｄｉｎｇｃｈａ
Ｔｓｅｎｇ　ｉｎ　ＭＣＦ－７　ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｓ
ＬＩＵ　Ｆａｎｇｒｏｎｇ１，ＷＡＮＧ　Ｑｉａｎｇ２，ＺＨＡＮＧ　Ｊｉｎｇ１，ＺＨＡＯ　Ｘｉｎ２，３
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０００３０，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，
Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０００６７，Ｃｈｉｎａ；３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，
Ｐｕｓａｎ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｕｓａｎ　６０９－７３５，Ｒｅｐｕｂｌｉｃ　ｏｆ　Ｋｏｒｅａ）
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｎｅ　Ｉｌｅｘ　ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　Ｔｓｅｎｇ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｗａｓ　ｐｕｒｃｈａｓｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ
ｅｆｆｅｃｔ　ｉｎ　ＭＣＦ－７ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｓ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ａｎｔｉ－ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ．Ｉｎ　ＭＴＴ　ａｓｓａｙ，ａｐ－
ｏｐｔｏｓｉｓ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｂｙ　ＤＡＰＩ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ａｎｄ　ＲＴ－ＰＣＲ，ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｅｍｐｌｏｙｅｄ　ｔｏ　ｃｈｅｃｋ
ｔｈｅｉｒ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　ｅｆｆｅｃｔ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ａｎｔｉ－ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ａ　ａｎｉｍａｌ　ｍｏｄｅｌ．Ａｔ
ｔｈｅ　ｍａｓｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　２００μｇ／ｍＬ，Ｉ．ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　Ｔｓｅｎｇ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ（８１％ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｅ）ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ
ｂｅｓｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ＭＣＦ－７ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｓ．Ｉ．ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　Ｔｓｅｎｇ
ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ（２００μｇ／ｍＬ）ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｂａｘ，
ｃａｓｐａｓｅ－３ａｎｄ　ｃａｓｐａｓｅ－９，ａｎｄ　ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　Ｂｃｌ－２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｃｏｍｐａｒｄ　ｗｉｔｈ　１００ａｎｄ　５０μｇ／ｍＬ　ｏｆ　Ｉ．ｋｕｄ－
ｉｎｇｃｈａ　Ｔｓｅｎｇ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｅｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ＮＦ－κＢ，ｉＮＯＳ，ａｎｄ
　收稿日期：２０１２－０９－１２
　基金项目：重庆市自然科学基金资助项目（ＣＳＴＣ２０１２ｊＡ８０００２）；重庆教委科学技术研究项目（ＫＪ１２１５０４）
　第一作者：刘芳容（１９７２－），女，重庆人，重庆市肿瘤医院主管护师，主要从事肿瘤护理研究．
　通信作者：赵欣（１９８１－），男，蒙古族，重庆人，重庆第二师范学院讲师，主要从事保健食品抗癌功能性研究．
Ｅ－ｍａｉｌ：ｆｏｏｄｓ＠ｌｉｖｅ．ｃｎ
河北大学学报（自然科学版） 第３３卷
ＣＯＸ－２ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　Ｉ．ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　Ｔｓｅｎｇ，ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎｇ　ｉｔｓ　ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ
ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．Ｔｈｅｓｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｕｇｇｅｓｔ　ｔｈａｔ　Ｉ．ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　Ｔｓｅｎｇ　ｓｈｏｗｅｄ　ｇｏｏｄ　ｃａｎｃｅｒ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｉｌｅｘ　ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　Ｔｓｅｎｇ；ＭＣＦ－７ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｓ；ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ
　　苦丁茶（Ｉｌｅｘ　ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　Ｔｓｅｎｇ）是野生冬青科冬青属常绿乔木，俗称茶丁、富丁茶、皋卢茶，是中国南方
地区经常饮用的一类茶，是传统的药用植物［１］．苦丁茶作为传统饮品和药用植物，在传统医学上具有清热消
暑、明目益智、生津止渴、利尿强心、润喉止咳、降压减肥、抑癌防癌、抗衰老、活血脉等多种功效，是一种很好
的医药保健饮料［２］．
苦丁茶中含有丰富的水提物，包括多酚类物质、氨基酸，胡萝卜素和维生素等，由于这些功能性成分的存
在，在近年的研究中已经表明苦丁茶具有抗菌消炎、调节心血管、生殖和免疫系统的功效［３－５］．此外，还有研
究表明苦丁茶对胃癌患者化疗后静脉炎有预防和治疗作用［６］，并且还可以诱导鼻咽癌细胞凋亡，起到抗癌效
果［７］．
乳腺癌是女性排名第一的常见恶性肿瘤，恶性肿瘤与一些标志物有关［８］，恶性肿瘤细胞到达其他部位继
续生长发生肿瘤转移从而危及病患生命，因此减少癌细胞增殖和防止肿瘤转移是癌症治疗的途径，除了医学
的治疗手段外，通过坚持食用保健食品预防和帮助治疗乳腺癌已经得到证实［９］．为了验证苦丁茶的抗癌效
果，本研究初步验证苦丁茶对 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞（ＭＣＦ－７ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｓ）体外抗癌
功能性作用和利用小鼠动物模型进行苦丁茶的抗肿瘤转移的研究．
１　材料与方法
１．１　样品准备
苦丁茶：市售苦丁茶，进行冷冻干燥后用沸水３次提取后使用旋转蒸发仪（Ｒ－１１４，瑞士Ｂｕｃｈｉ公司）蒸干
后得到水提物，将提取物用二甲基亚砜（ＤＭＳＯ，日本纯正化学公司）溶解后待用．
１．２　癌细胞株培养
ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞购自ＡＴＣＣ（美国典型培养物保藏中心，美国）．癌细胞在加有体积分数１０％的胎牛血
清（ＦＢＣ）和体积分数１％的青霉素－链霉素溶液ＲＰＭＩ　１６４０培养基（美国ＧＩＢＣＯ公司）中置于含体积分数为５％
二氧化碳的培养箱（ＭＣＯ９６，日本三洋电机公司）中培养．每周更换２～３次培养基，６～７ｄ传代１次．
１．３　４，６－二脒基－２－苯基吲哚（ＤＡＰＩ）荧光染色法观察癌细胞凋亡情况
ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞培养２４ｈ后，加入不同质量浓度苦丁茶水提取物样品后再培养４８ｈ，癌细胞用体
积分数为０．０５％脻蛋白酶－０．０２％乙二胺四乙酸（美国ＧＩＢＣＯ公司）消化后，再用ＰＢＳ洗后使用体积分数为
３．７％的多聚甲醇（ｐａｒａｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ，美国Ｓｉｇｍａ公司）常温下用１０ｍｉｎ进行细胞固定，然后用质量浓度为
１μｇ／ｍＬ的４，６－二脒基－２－苯基吲哚（ＤＡＰＩ，美国Ｓｉｇｍａ公司）溶液染色１０ｍｉｎ．最后用ＰＢＳ溶液漂洗染色
后的细胞２次，荧光显微镜下（ＢＸＳＯ，日本奥林巴斯公司）进行形态学观察并拍照分析［１０］．
１．４　３－（４，５－二甲基噻唑－２）－２，５－二苯基四氮唑嗅（ＭＴＴ）法检测癌细胞抑制效果
将培养的 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞稀释在培养基中并按１×１０４　ｍＬ－１接种在９６孔培养板上，每孔加入
１８０μＬ含癌细胞的培养基．在二氧化碳培养箱中培养２４ｈ．实验时，每个样品设３个剂量组，质量浓度分别
为５０，１００，２００μｇ／ｍＬ，细胞贴壁后每孔加入不同质量浓度的２０μＬ苦丁茶水提物．加入样品继续培养４８ｈ
后，每孔加入５ｍｇ／ｍＬ的 ＭＴＴ试剂２０μＬ，再置于二氧化碳培养箱中培养４ｈ后，将各孔内上清液弃去，按
每孔１５０μＬ加入二甲基亚砜后震荡３０ｍｉｎ，用酶标仪（Ｅｌｘ８００，美国Ｂｉｏ　Ｔｅｋｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ公司）在５４０ｎｍ波
长下测定各孔ＯＤ值，并按公式（抑制率＝［（空白孔ＯＤ值－样品孔ＯＤ值）／空白孔ＯＤ值］×１００％）计算
细胞增殖抑制率［１１－１２］．
１．５　Ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ－ＰＣＲ）分析
用ＤＡＰＩ分析法相同的程序准备一定量的苦丁茶水提物处理后的 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞，用ＲＮＡｚｏｌ试
·６８１·
第２期 刘芳容等：苦丁茶对 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞的体外抗癌效果
剂（美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）提取癌细胞中的总ＲＮＡ．将分离的ＲＮＡ定量后，以ｏｌｉｇｏ　ｄＴ为引物，在ＡＭＶ逆
转录酶作用下制备ｓｓ　ｃＤＮＡ，再以制备好的ｃＤＮＡ为模板，用ＲＴ－ＰＣＲ法扩增凋亡基因Ｂａｘ，Ｂｃｌ－２，ｃａｓｐａｓｅ－
３，ｃａｓｐａｓｅ－９和炎症基因 ＮＦ－κＢ，ＩκＢ－α，ｉＮＯＳ，ＣＯＸ－２（表１）．ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ
（ＧＡＰＤＨ）持家基因作为内参照标准．然后按每ｍＬ琼脂液中加入０．０５μＬ溴化乙锭配制的质量分数为１％
的琼脂电泳检查ＰＣＲ扩增产物［１３－１４］．
表１　ＲＴ－ＰＣＲ引物序列
Ｔａｂ．１　Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｏｆ　ＲＴ－ＰＣＲ
基因 引物序列
Ｂａｘ
同义：５－ＡＡＧ　ＣＴＧ　ＡＧＣ　ＧＡＧ　ＴＧＴ　ＣＴＣ　ＣＧＧ　ＣＧ－３
反义：５－ＣＡＧ　ＡＴＧ　ＣＣＧ　ＧＴＴ　ＣＡＧ　ＧＴＡ　ＣＴＣ　ＡＧＴ　Ｃ－３
Ｂｃｌ－２
同义：５－ＣＴＣ　ＧＴＣ　ＧＣＴ　ＡＣＣ　ＧＴＣ　ＧＴＧ　ＡＣＴ　ＴＧＧ－３
反义：５－ＣＡＧ　ＡＴＧ　ＣＣＧ　ＧＴＴ　ＣＡＧ　ＧＴＡ　ＣＴＣ　ＡＧＴ　Ｃ－３
Ｃａｓｐａｓｅ－３
同义：５－ＣＡＡＡＣＴ　ＴＴＴ　ＴＣＡ　ＧＡＧ　ＧＧＧ　ＡＴＣ　Ｇ－３
反义：５－ＧＣＡ　ＴＡＣ　ＴＧＴ　ＴＴＣ　ＡＧＣ　ＡＴＧ　ＧＣＡ－３
Ｃａｓｐａｓｅ－９
同义：５－ＧＧＣ　ＣＣＴ　ＴＣＣ　ＴＣＧ　ＣＴＴ　ＣＡＴ　ＣＴＣ－３
反义：５－ＧＧＴ　ＣＣＴ　ＴＧＧ　ＧＣＣ　ＴＴＣ　ＣＴＧ　ＧＴＡ　Ｔ５－３
ＮＦ－κＢ
同义：５－ＣＡＣ　ＴＴＡ　ＴＧＧ　ＡＣＡ　ＡＣＴ　ＡＴＧ　ＡＧＧ　ＴＣＴ　ＣＴＧ　Ｇ－３
反义：５－ＣＴＧ　ＴＣＴ　ＴＧＴ　ＧＧＡ　ＣＡＡ　ＣＧＣ　ＡＧＴ　ＧＧＡ　ＡＴＴ　ＴＴＡ　ＧＧ－３
ＩκＢ－α
同义：５－ＧＣＴ　ＧＡＡ　ＧＡＡ　ＧＧＡ　ＧＣＧ　ＧＣＴ　ＡＣＴ－３
反义：５－ＴＣＧ　ＴＡＣ　ＴＣＣ　ＴＣＧ　ＴＣＴ　ＴＴＣ　ＡＴＧ　ＧＡ－３
ｉＮＯＳ
同义：５－ＡＧＡ　ＧＡＧ　ＡＴＣ　ＧＧＧ　ＴＴＣ　ＡＣＡ－３
反义：５－ＣＡＣ　ＡＧＡ　ＡＣＴ　ＧＡＧ　ＧＧＴ　ＡＣＡ－３
ＣＯＸ－２
同义：５－ＴＴＡＡＡＡ　ＴＧＡ　ＧＡＴ　ＴＧＴ　ＣＣＧＡＡ－３
反义：５－ＡＧＡ　ＴＣＡ　ＣＣＴ　ＣＴＧ　ＣＣＴ　ＧＡＧ　ＴＡ－３
ＧＡＰＤＨ
同义：５－ＣＧＧ　ＡＧＴ　ＣＡＡ　ＣＧＧ　ＡＴＴ　ＴＧＧ　ＴＣ－３
反义：５－ＡＧＣ　ＣＴＴ　ＣＴＣ　ＣＡＴ　ＧＧＴ　ＣＧＴ　ＧＡ－３
１．６　数据处理
根据３次独立实验结果，数据表示为ｘ±ＳＤ，数据分析运用ＳＡＳ　ｖ９．１统计学软件采取Ｄｕｎｃａｎｓ　ｍｕｌｔｉ－
ｐｌｅ　ｒａｎｇｅ　ｔｅｓｔｓ，Ｐ＜０．０５有显著性差异．
２　结果
２．１　苦丁茶诱发 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞凋亡效果的形态观察
ＤＡＰＩ细胞染色后，凋亡细胞核能发出蓝色荧光，据此可以判断细胞是否凋亡．对照组 ＭＣＦ－７细胞染色
后细胞核边缘清晰、着色均匀．经不同质量浓度苦丁茶水提物处理后的癌细胞均出现细胞边缘不规则、细胞
核浓染、凋亡小体等典型的细胞凋亡现象，而２００μｇ／ｍＬ苦丁茶水提物作用后最为明显（图１）．可见苦丁茶
对诱导癌细胞凋亡具有一定的效果，并且质量浓度越高作用越明显．
·７８１·
河北大学学报（自然科学版） 第３３卷
ａ．对照；ｂ．５０μｇ／ｍＬ苦丁茶；ｃ．１００μｇ／ｍＬ苦丁茶；ｄ．２００μｇ／ｍＬ苦丁茶．
图１　苦丁茶水提物对 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞凋亡效果
Ｆｉｇ．１　Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｉｌｅｘ　ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　Ｔｓｅｎｇ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｎ　ＭＣＦ－７ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｓ
２．２　苦丁茶对 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞体外增殖的抑制效果
采用ＭＴＴ法，检测苦丁茶对ＭＣＦ－７细胞的体外抗癌效果．结果显示，苦丁茶水提取物对 ＭＣＦ－７细胞具有一
定的抑制作用，且抑制效果随样品质量浓度增加呈梯度增加．以２００μｇ／ｍＬ的苦丁茶水提物处理 ＭＣＦ－７细胞时，
表现出很强的抑制率（８１％）．以１００，５０μｇ／ｍＬ的苦丁茶水提物处理 ＭＣＦ－７细胞时，癌细胞生长抑制率为５８％和
１９％（表２）．由此可见，苦丁茶对ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞具有抑制增殖效果，浓度越高抑制效果越显著．
表２　ＭＴＴ法测定苦丁茶水提物对 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞的生长抑制效果
Ｔａｂ．２　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ＭＣＦ－７ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｓ　ｂｙ
Ｉｌｅｘ　ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　Ｔｓｅｎｇ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｓ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｂｙ　ａ　ＭＴＴ　ａｓｓａｙ
组别
ＯＤ５４０
５０μｇ／ｍＬ　 １００μｇ／ｍＬ　 ２００μｇ／ｍＬ
对照　 ０．５３１±０．００５ａ　１） 　
苦丁茶
Ｉｌｅｘ　ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　Ｃ．Ｊ．Ｔｓｅｎｇ
０．４３０±０．００７ｂ（１９）２） ０．２２３±０．００９ｃ（５８） ０．１０１±０．００８ｄ（８１）
　　　　１）均值±标准偏差；２）抑制率（％）；
　　　　ａ－ｄ．根据Ｄｕｎｃａｎｓ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｒａｎｇ　ｔｅｓｔ，带不同字母的平均值有显著性差异（Ｐ＜０．０５）．
２．３　苦丁茶对 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞的Ｂａｘ和Ｂｃｌ－２基因的ｍＲＮＡ表达影响
以不同质量浓度的苦丁茶水提取物处理 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞，以２００μｇ／ｍＬ质量浓度水提物处理过
的ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞Ｂａｘ表达最强，以１００和５０μｇ／ｍＬ质量浓度处理过的ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞中Ｂａｘ
表达呈现递减的趋势；Ｂａｌ－２的ｍＲＮＡ表达中，经不同质量浓度苦丁茶水提物处理后，随着质量浓度的升高
表达减弱（图２）．
图２　经苦丁茶水提物处理后 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞的Ｂａｘ和Ｂｃｌ－２的ｍＲＮＡ表达
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｉｌｅｘ　ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　Ｔｓｅｎｇ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｂａｘ　ａｎｄ　Ｂｃｌ－２ｉｎ
ＭＣＦ－７ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｏｍａ　ｃｅｌｓ
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第２期 刘芳容等：苦丁茶对 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞的体外抗癌效果
２．４　苦丁茶对 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞的ｃａｓｐａｓｅ－３和ｃａｓｐａｓｅ－９基因的ｍＲＮＡ表达影响
以苦丁茶水提取物处理 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞，观察癌细胞的ｃａｓｐａｓｅ－３和ｃａｓｐａｓｅ－９表达，得到与Ｂａｘ
表达相似的结果，随着处理细胞样品质量浓度的增加ｃａｓｐａｓｅ－３和ｃａｓｐａｓｅ－９也随之增加，２００μｇ／ｍＬ质量浓
度处理时，表达最强（图３）．由此可以看出，在２００μｇ／ｍＬ质量浓度处理下苦丁茶对ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞的
凋亡作用强于其他质量浓度．
图３　经苦丁茶水提物处理后 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞的ｃａｓｐａｓｅ－３和ｃａｓｐａｓｅ－９的ｍＲＮＡ表达
Ｆｉｇ．３　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｉｌｅｘ　ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　Ｔｓｅｎｇ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｓｐａｓｅ－３ａｎｄ　ｃａｓｐａｓｅ－９
ｉｎ　ＭＣＦ－７ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｓ
２．５　苦丁茶对 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞的ＮＦ－κＢ和ＩκＢ－α基因的ｍＲＮＡ表达影响
通过苦丁茶水提取物处理 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞观察苦丁茶的抗炎效果，以２００μｇ／ｍＬ质量浓度处理
过的 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞ＮＦ－κＢ表达最弱，以１００和５０μｇ／ｍＬ质量浓度处理过的 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞
中Ｂａｘ表达呈现随质量浓度减小表达增加的趋势；ＩκＢ－α的ｍＲＮＡ表达中，经不同质量浓度样品处理后，表
现出与ＮＦ－κＢ表达相反的趋势，随着质量浓度的升高表达增加（图４）．
图４　经苦丁茶水提物处理后 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞的ＮＦ－κＢ和ＩκＢ－α的ｍＲＮＡ表达
Ｆｉｇ．４　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｉｌｅｘ　ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　Ｔｓｅｎｇ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＮＦ－κＢ　ａｎｄ　ＩκＢ－αｉｎ
ＭＣＦ－７ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｓ
２．６　苦丁茶对 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞的ｉＮＯＳ和ＣＯＸ－２基因的ｍＲＮＡ表达影响
以苦丁茶水提取物处理 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞，观察癌细胞炎症相关因子ｉＮＯＳ和ＣＯＸ－２，发现随着处
理细胞样品质量浓度的增加表达随之减弱，２００μｇ／ｍＬ质量浓度处理时，表达最弱，１００和５０μｇ／ｍＬ质量
浓度处理的细胞表达也弱于没有经过样品处理过的对照细胞（图５）．由此可以看出，经苦丁茶水提物处理过
·９８１·
河北大学学报（自然科学版） 第３３卷
的 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞的抗炎作用强于未经处理的癌细胞，并且随苦丁茶水提物质量浓度的增加，抗
炎效果也增加．
图５　经苦丁茶水提物处理后 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞的ｉＮＯＳ和ＣＯＸ－２的ｍＲＮＡ表达
Ｆｉｇ．５　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｉｌｅｘ　ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　Ｔｓｅｎｇ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｉＮＯＳ　ａｎｄ　ＣＯＸ－２ｉｎ
ＭＣＦ－７ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｓ
３　讨论
苦丁茶作为一种保健茶叶饮品，其部分功能已经得到证实．对癌细胞增值的体外作用可以从一定程度上
证明保健食品的癌预防效果．本文中随着苦丁茶样品质量浓度的增加 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞的增值减少，证
明苦丁茶可以明显地在体外抑制癌细胞的生长．细胞凋亡是在生理或病理条件下，由基因调控的细胞主动程
序化死亡的过程［１５］．在癌症发生过程中凋亡相关基因的突变或表达异常可以阻断癌细胞的凋亡，促使癌症
发生［１６］．Ｂｃｌ－２基因是一种原癌基因，它具有抑制凋亡的作用．Ｂｃｌ－２可与促凋亡Ｂａｘ形成二聚体，Ｂａｘ相对
量高于Ｂｃｌ－２时，Ｂａｘ同二聚体的数量增多，从而促进细胞死亡［１７］．本研究中随着处理癌细胞的苦丁茶水提
物质量浓度的增加，癌细胞的Ｂａｘ表达加强，Ｂｃｌ表达减弱，可以认为苦丁茶能促进癌细胞的凋亡，从而起到
对乳腺癌的预防作用．Ｃａｓｐａｓｅ基因选择性地切割某些蛋白质，从而造成细胞凋亡，ｃａｓｐａｓｅ－９为凋亡途径的
上游ｃａｓｐａｓｅ，ｃａｓｐａｓｅ－３为下游ｃａｓｐａｓｅ，ｃａｓｐａｓｅ－９作为启动性ｃａｓｐａｓｅ，随着表达的加强可以加强对下游
ｃａｓｐａｓｅ－３的激活，ｃａｓｐａｓｅ－３可直接降解胞内的结构蛋白和功能蛋白，引起凋亡［１８］．由此可以看出苦丁茶对
癌细胞的ｃａｓｐａｓｅ－３和９的作用是可促进癌细胞凋亡．肿瘤转移是指恶性肿瘤细胞离开原发部位，通过血液、
淋巴运转或直接播散到不连续的组织器官中继续生长，形成与原发肿瘤病理类型相同的肿瘤［１９］．ＣＯＸ－２，
ｉＮＯＳ是启动子区域含ＮＦ－ｋＢ结合位点的２种诱生型酶，三者之间存在着密切的关系．ＮＦ－ｋＢ作为一种重要
的多向性核转录因子，它调控着多种基因的表达，并参与免疫反应、炎症反应、细胞凋亡、肿瘤发生等多种生
物学过程．环氧合酶－２（ＣＯＸ－２）和诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）为２种诱生型酶，在大多数组织中不表达，但
在一些炎症性细胞因子、生长因子、内毒素及促癌剂等的作用下呈现高表达状态，从而发挥其病理作
用［２０－２１］．苦丁茶富含具有抗氧化、清除自由基的维生素Ｃ、维生素Ｅ和生物类黄酮等生物活性物质，能削弱自
由基对人体的危害，增加肌体免疫力，具有防癌抗癌的作用．苦丁茶还含有多种人体必需的微量元素，其中硒
具有抗氧化、抗病毒、抗癌作用［２２］．特别是苦丁茶含有的类黄酮物质可能是抗癌功效最强的成分，这些类黄
酮物质通过抗氧化、自由基清除和对二价阴离子的螯合作用实现抗氧化和抗癌作用［２３］．本文对苦丁茶进
行了体外抗癌效能的比较实验，得出苦丁茶具有抗癌效果的结果．苦丁茶对人体的临床作用有待更深层
次的研究．
·０９１·
第２期 刘芳容等：苦丁茶对 ＭＣＦ－７人乳腺癌细胞的体外抗癌效果
参　考　文　献：
［１］　叶国盛．苦丁茶［Ｊ］．特种经济动植物，２００２，５（３）：２６．
ＹＥ　Ｇｕｏｓｈｅｎｇ．Ｋｕｄｉｎｇ　ｔｅａ［Ｊ］．Ｓｐｅｃ　Ｅｃｏｎ　Ａｎｉｍ　Ｐｌａｎｔ，２００２，５（３）：２６．
［２］　张鲁勉．苦丁茶的微量元素测定及其保健功能初探［Ｊ］．广东微量元素科学，２００２，９（８）：５５－５６．
ＺＨＡＮＧ　Ｌｕｍｉａｎ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｒａｃｅ　ｅｌｅｍｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｈｅａｌｔｈ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｉｌｅｘ　ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　Ｃ．Ｊ．
Ｔｓｅｎｇ［Ｊ］．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｗｅｉｌｉａｎｇ　Ｙｕａｎｓｕ　Ｋｅｘｕｅ，２００２，９（８）：５５－５６．
［３］　鄢东海．苦丁茶名称的演变、植物种类及保健价值［Ｊ］．贵州农业科学，２００７，３５（１）：１１４－１１６．
ＹＡＮ　Ｄｏｎｇｈａｉ．Ｈｅａｌｔｈ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ，ｐｌａｎｔ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ａｎｄ　ｎａｍｅ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｋｕｄｉｎｇ　ｔｅａ［Ｊ］．Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉ　Ｓｃｉ，２００７，３５（１）：１１４－１１６．
［４］　周剑宁，欧阳明安．药用女贞属植物化学成分的研究进展［Ｊ］．天然产物研究与开发，２００３（１）：７７－８６．
ＺＨＯＵ　Ｊｉａｎｎｉｎｇ，ＯＵＹＡＮＧ　Ｍｉｎｇａｎ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｄｖａｎｃｅｍｅｎｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ　Ｒｅｓ
Ｄｅｖ，２００３（１）：７７－８６．
［５］　童华荣，高爱红，袁海波，等．女贞苦丁茶挥发性油成分分析［Ｊ］．植物资源与环境学报，２００４，１３（１）：５３－５５．
ＴＯＮＧ　Ｈｕａｒｏｎｇ，ＧＡＯ　Ａｉｈｏｎｇ，ＹＵＡＮ　Ｈａｉｂｏ，ｅｔ　ａｌ．Ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｏｆ　ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　ｆｒｏｍＬｉｇｕｓｔｒｕｍ　ｈｅｎｒｙｉ　ａｎｄ　Ｌ．ｒｏｂｕｓｔｒｕｍ
［Ｊ］．Ｊ　Ｐｌａｎｔ　Ｒｅｓｏｕｒ　Ｅｎｖｉｒｏｎ，２００４，１３（１）：５３－５５．
［６］　王雪蛟．苦丁茶用于防治胃癌患者化疗后静脉炎的疗效观察［Ｊ］．解放军护理杂志，２００５，２２（１）：９９．
ＷＡＮＧ　Ｘｕｅｊｉａｏ．Ｋｕｄｉｎｇｃｈａ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ａｆｔｅｒ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｐｈｌｅｂｉｔｉｓ　ｅｆｆｉ－
ｃａｃｙ［Ｊ］．Ｎｕｒｓ　Ｊ　Ｃｈｉｎ　ＰＬＡ，２００５，２２（１）：９９．
［７］　黄婵娟，农朝赞，顾国龙，等．苦丁茶熊果酸诱导鼻咽癌细胞凋亡及其对Ｓｕｒｖｉｖｉｎ和ＡＰＣ蛋白表达的影响［Ｊ］．广东医学，
２０１１，３２（７）：８３０－８３２．
ＨＵＡＮＧ　Ｃｈａｎｊｕａｎ，ＮＯＮＧ　Ｃｈａｏｚｈａｎ，ＧＵ　Ｇｕｏｌｏｎｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｓｕｒｖｉｖｉｎ　ａｎｄ　ＡＰＣ　ｉｎ　Ｋｉｎｇｄｉｎｇ　ｔｅａ　ｕｒｓｏｌｉｃ　ａｃｉｄ－
ｉｎｄｕｃｅｄ　ｈｕｍａｎ　ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｍｅｄ　Ｊ，２０１１，３２（７）：８３０－８３２．
［８］　杨永滨，黄建霞，宋文娅，等．Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ和ＥＧＦＲｖⅢ与乳腺癌发生及浸润的相关性研究［Ｊ］．医学研究与教育，２０１２，２９（１）：
２１－２４．
ＹＡＮＧ　Ｙｏｎｇｂｉｎ，ＨＵＡＮＧ　Ｊｉａｎｘｉａ，ＳＯＮＧ　Ｗｅｎｙａ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ
ａｎｄ　ＥＧＦＲｖⅢａｎｄ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｖａｓｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ
Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，２０１２，２９（１）：２１－２４．
［９］　齐秀英，张安玉，武光林，等．饮食与乳腺癌发病关系的探讨［Ｊ］．营养学报，１９９０，１２（３）：２２１－２２７．
ＱＩ　Ｘｉｕｙｉｎｇ，ＺＨＡＮＧ　Ａｎｙｕ，ＷＵ　Ｇｕａｎｇｌｉｎ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ａｎｄ　ｄｉｅｔ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｎｕｔｒ　Ｓｉｎｉｃａ，
１９９０，１２（３）：２２１－２２７．
［１０］　赵欣，宋家乐，马玥．韩国淳昌地区清麴酱对 ＡＧＳ人体胃癌细胞的体外抗癌效果［Ｊ］．武汉生物工程学院学报，２００８，
４（４）：１９４－１９７．
ＺＨＡＯ　Ｘｉｎ，ＳＯＮＧ　Ｊｉａｌｅ，ＭＡ　Ｙｕｅ．Ａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｃｈｕｎｇｋｕｋｊａｎｇｓ　ｆｒｏｍ　Ｓｕｎｃｈａｎｇ　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　Ｋｏｒｅａ　ｏｎ　ＡＧＳ　ｈｕｍａｎ
ｇａｓｔｒｉｃ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｊ　Ｗｕｈａｎ　Ｂｉｏｅｎｇ　Ｉｎｓｔ，２００８，４（４）：１９４－１９７．
［１１］　ＳＫＥＨＡＮ　Ｐ，ＳＴＯＲＥＮＧ　Ｒ，ＭＯＮＫＳ　Ｓ　Ａ，ｅｔ　ａｌ．Ｎｅｗ　ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ－ｄｒｕｇｓｃｒｅｅｎｉｎｇ［Ｊ］．
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，１９９０，８２：１１０７－１１１２．
［１２］　孙汉文，许城燕，赵燕燕，等．枸杞多糖硫酸酯化修饰及其对 Ｈｅｌａ细胞的体外抑制作用［Ｊ］．河北大学学报：自然科学版，
２００９，２９（６）：５９１－５９５．
ＳＵＮ　Ｈａｎｗｅｎ，ＸＵ　Ｃｈｅｎｇｙａｎ，ＺＨＡＯ　Ｙａｎｙａｎ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｕｌｆａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｙｃｉｕｍ　ｂａｒｂａｒｕｍ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ａｎｄ
ｉｔｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔ　ｔｏ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｈｅｌａ　ｃｅｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｂｅｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００９，
２９（６）：５９１－５９５．
［１３］　ＺＨＡＯ　Ｘｉｎ，ＫＩＭ　Ｓ　Ｈ，ＱＩ　Ｙｏｎｇｃａｉ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｓａｌｔ　ｉｎ　ｃｏｍｕｔａｇｅｎｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｓ
［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｋｏｒｅａｎ　Ｓｏｃｉｅｔｙ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，２０１２，４１（１）：２６－３２．
［１４］　梁玉玲，姚红宝，曲占良，等．胀果甘草查尔酮合成酶基因ｃＤＮＡ的克隆及序列分析［Ｊ］．河北大学学报：自然科学版，
２０１０，３０（３）：３１３－３１８．
ＬＩＡＮＧ　Ｙｕｌｉｎｇ，ＹＡＯ　Ｈｏｎｇｂａｏ，ＱＵ　Ｚｈａｎｌｉａｎｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｃｈａｌｃｏｎｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｃＤＮＡ
ｉｎ　Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ　ｉｎ　ｆｌａｔａ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｂｅｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１０，３０（３）：３１３－３１８．
·１９１·
河北大学学报（自然科学版） 第３３卷
［１５］　孟明，李春晓，洪洋．细胞自噬与肿瘤、感染和免疫耐受［Ｊ］．医学研究与教育，２０１１，２８（１）：６５－６９．
ＭＥＮＧ　Ｍｉｎｇ，ＬＩ　Ｃｈｕｎｘｉａｏ，ＨＯＮＧ　Ｙａｎｇ．Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ａｕｔｏｐｈａｇｙ　ａｎｄ　ｔｕｍｏｒ，ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ
ｔｏｌｅｒａｎｃｅ［Ｊ］．Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，２０１１，８（１）：６５－６９．
［１６］　徐立红．细胞凋亡相关的组合生物标志物的分子基础及其在环境毒理学中的意义［Ｊ］．水生生物学报，２００５，２９（３）：３２９－３３５．
ＸＵ　Ｌｉｈｏｎｇ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ－ｒｅｌａｔｅｄ　ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｉｎ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｔｏｘｉｏｌｏｇｙ
［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｈｙｄｒｏｂｉｏｌ　Ｓｉｎｉｃａ，２００５，２９（３）：３２９－３３５．
［１７］　ＤＥＬＩＣＲ，ＴＥＦＡＮＯＶＩＣ　Ｍ．Ｏｐｔｉｍａｌ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｐａｎｅｌ　ｆｏｒ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ　ｐｒｅｅｃｌａｍｐｓｉａ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍａｔｅｒｎａｌ－Ｆｅｔａｌ　ａｎｄ
Ｎｅｏｎａｔａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１０，２３（１）：９６－１０２．
［１８］　ＢＬＡＮＣ　Ｃ，ＤＥＶＥＲＡＵＸ　Ｑ　Ｌ，ＫＲＡＪＥＷＳＫＩ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｃａｓｐａｓｅ－３ｉｓ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｆｏｒ　ｐｒｏｃａｓｐａｓｅ－９ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｉｓｐｌａｔｉｎ－ｉｎ－
ｄｕｃｅｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ＭＣＦ－７ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０００，６０：４３８６－４３９０．
［１９］　郑宏强，刘德育．蛇葡萄素抗黑色素瘤侵袭和转移的作用［Ｊ］．癌症，２００３，２２（４）：３６３－３６７．
ＺＨＥＮＧ　Ｈｏｎｇｑｉａｎｇ，ＬＩＵ　Ｄｅｙｕ．Ａｎｔｉ－ｉｎｖａｓｉｖｅ　ａｎｄ　ａｎｔｉ－ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ａｍｐｅｌｏｐｓｉｎ　ｏｎ　ｍｅｌａｎｏｍａ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊ　Ｃａｎｃ－
ｅｒ，２００３，２２（４）：３６３－３６７．
［２０］　李晓丽，林锐，李继昌．胃癌组织中环氧合酶－２、核转录因子－κＢ蛋白的表达及相关性［Ｊ］．中国实用医例，２０１０，３７（２１）：７－９．
ＬＩ　Ｘｉａｏｌｉ，ＬＩＮ　Ｙｕｅ，ＬＩ　Ｊｉｃｈａｎｇ．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ－２ａｎｄ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｆａｃｔｏｒ－ｋａｐｐａＢ　ｉｎ
ｈｕｍａｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊ　Ｐｒａｃｔ　Ｍｅｄ，２０１０，３７（２１）：７－９．
［２１］　高伟敏，檀艳丽，薛娟，等．环氧化酶－２在大肠癌的表达及意义［Ｊ］．医学研究与教育，２０１０，２７（３）：９－１１．
ＧＡＯ　Ｗｅｉｍｉｎ，ＴＡＮ　Ｙａｎｌｉ，ＸＵＥ　Ｊｕａｎ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｏｆ　ＣＯＸ－２ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｃｏｌｏｒｅｃ－
ｔａｌ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，２０１０，２７（３）：９－１１．
［２２］　尹礼国，张伟敏，钟耕．苦丁茶的生理功能与药用价值［Ｊ］．农产品加工，２００５（１）：６－７．
ＹＩＮ　Ｌｉｇｕｏ，ＺＨＡＮＧ　Ｗｅｉｍｉｎ，ＺＨＯＮＧ　Ｇｅｎｇ．Ｔｈｅ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　Ｋｕｄｉｎｇｃｈａ［Ｊ］．Ｆａｒｍ
Ｐｒｏｄ　Ｐｒｏｃｅｓｓ，２００５（１）：６－７．
［２３］　王龙，孙建设．类黄酮的化学结构及其生物学功能［Ｊ］．河北农业大学学报，２００３，２６（增刊１）：１４４－１４７．
ＷＡＮＧ　Ｌｏｎｇ，ＳＵＮ　Ｊｉａｎｓｈｅ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ［Ｊ］．Ｊ　Ａｇｒ　Ｕｎｉｖ　Ｈｅｂｅｉ，２００３，２６（Ｓｌ）：
１４４－１４７．
（责任编辑：赵藏赏）
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