全 文 ：东北刺人参愈伤组织的诱导
金英善 , 　曹后男 , 　刘继生 , 　朴日子 , 　尹英敏
(延边大学农学院园艺系 ,吉林 龙井 133400)
摘要:将东北刺人参的不同器官及其部位的外植体接种在含有不同激素的培养基中培养 ,对
其愈伤组织诱导条件进行了研究.结果表明:茎段 、叶柄为适宜组培的器官;以 AS 或 1/2M S做
基本培养基 ,并添加 2.0 mg/L 的BA 和0.2 ～ 1.0 mg/L 的 NAA可以获得数量较多 ,质量较好
的愈伤组织;叶所产生的愈伤组织颜色较深 ,数量也较少 ,并在初代培养时易产生不定根.
关键词:东北刺人参;组织培养;愈伤组织;诱导条件
中图分类号:S035.3　　　文献标识码:A　　　文章编号:1004-7999(2003)01- 0016-04
0　前言
东北刺人参(Oplopanax elaus Nakai)属五加科刺人参属 ,是一种珍贵的多年生药用植
物.主产于我国吉林省长白山海拔 1 300 ～ 1600 m 的针叶林带及辽宁东部山区海拔
800 ～ 1 000 m的松杉林下.近年随着民间用药和科研的需要 ,采挖日重 ,自然资源遭受很大
破坏 ,处于濒危状态.另外 ,东北刺人参扦插成活率很低 ,实生繁殖因种子萌发率很低而扩繁
速度很慢.因此 ,开展东北刺人参组织培养研究 ,对加速东北刺人参的繁殖和保护利用有着
极其重要的意义.为此 ,从 1999年开始 ,对东北刺人参组织培养进行了研究.本研究旨在通
过对影响东北刺人参外植体愈伤组织形成的主要因子研究 ,寻找出诱导东北刺人参愈伤组
织的最佳条件.
1　材料与方法
材料为东北刺人参 ,取自 2年生实生苗的茎段 、嫩叶和叶柄 ,分别用 4种不同方法进行消
毒处理.消毒处理方法是:①在 70%的酒精中浸30 min ,再以 0.1%的升汞消毒5 min ,无菌水冲
洗 5次;②在 70%的酒精中浸30 min ,再以 10%的次氯酸钠消毒 10 min ,然后用0.1%的升汞消
毒 5 min ,无菌水冲洗 5次;③在 70%的酒精中浸30 min ,再以 10%的次氯酸钠消毒 10 min ,然
后用 0.3%的升汞消毒 5 min ,无菌水冲洗 5次;④在 70%的酒精中浸30 min ,再以 10%的次氯
酸钠消毒 10 min ,然后用 0.3%的升汞消毒 10 min ,无菌水冲洗 5次.
切取长度约为 5 mm 的茎段 ,接种在培养基上培养.基本培养基含蔗糖 30 g/L ,琼脂
8 g/ L , pH 值为 5.5 ～ 5.8.培养温度为 26±1 ℃,培养期为 28 d.培养期结束后 ,对外植体枯
第 25卷　第 1期
2003年 3月 　 　　　　　 延　边　大　学　农　学　学　报Journal of Agricultural Science Yanbian University 　　　　　Vol.25 No.1　Mar.2003
收稿日期:2003-02-25
作者简介:金英善(1970-), 女(朝鲜族),吉林珲春人 , 延边大学农学院园艺系园艺植物育种教研室讲师 , 硕士.
DOI :10.13478/j.cnki .jasyu.2003.01.004
死率 、愈伤率及色值等进行逐项调查.
2　结果与分析
2.1　不同消毒处理对外植体的影响
对 4种消毒处理的外植体培养 15 d后的统计(表 1)结果表明 ,采用方法③效果最佳 ,既
不损伤植物材料 ,又可基本杀死微生物.
表 1　不同消毒处理对外植体的影响
处理 总数(个)
污染率
(%)
死亡率
(%)
成活率
(%)
1 21 100 0 0
2 28 96.5 0 3.5
3 22 45.5 10 45.5
4 27 11.1 77.8 11.1
2.2　基本培养基种类对愈伤组织诱导的影响
将茎段分别接种在 WPM 、MS 、AS 、1/2MS 等 4种基本培养基上 ,各种培养基对愈伤组
织诱导的影响如表 2 所示.由表 2 可知 ,以 AS 、1/2MS 诱导愈伤组织的效果最好 ,依次是
WPM 、MS.基本培养基之间有一些差别 ,但是差别不太大.
表 2　基本培养基种类对愈伤组织诱导的影响
培养基种类 总数(个) 枯死率(%) 愈伤率(%) 色值(度)
WPM 23 10.7 89.3 1.8
M S 21 13.5 86.5 2.0
AS 22 0 100 1.0
1/2MS 23 0 100 1.2
　　注:＊BA 2.0+NAA 0.2
2.3　生长素对愈伤组织诱导的影响
NAA 、 IBA 和 IAA 及其不同浓度对愈伤组织诱导的影响见表 3.NAA 的诱导效果最
好 ,4种浓度的平均愈伤率高达 92%,愈伤组织的颜色也最浅.其次是 IBA ,而 IAA 的诱导
效果略差一些.NAA 、IBA 和 IAA 的最佳浓度为 0.2 mg/ L.
与对照相比 ,添加生长素后能明显地提高愈伤组织诱导效果.
2.4　不同器官及部位对愈伤组织诱导的影响
不同器官及不同部位对愈伤组织诱导的影响见表 4.由表 4可知 ,嫩叶 、茎段 、叶柄愈伤
率均达 100%.但是茎段产生的愈伤组织颜色最浅.不同器官产生的愈伤组织的部位也不
17　第 1期 金英善 ,等:东北刺人参愈伤组织的诱导
同 ,嫩叶接种后 10 d左右从切口处开始产生愈伤组织 ,茎段接种 14 d后与培养基的接触面
开始产生愈伤组织 ,叶柄接种后 10 d左右从基部开始产生浅黄色 、致密的愈伤组织.
表 3　生长素对愈伤组织的影响
生长素 处理浓度(mg/L) 总数(个) 愈伤率(%) 色值(度)
NAA 1.0 20 100 1.8
0.5 22 100 1.5
0.2 25 100 1.0
0.02 25 68 3.9
平均 92 2.03
IBA 1.0 23 87 1.9
0.5 20 90 1.5
0.2 23 95.7 1.2
0.02 23 58.3 3.8
平均 82.8 2.1
IAA 1.0 20 85 2.0
0.5 21 95.2 1.8
0.2 22 95.5 1.5
0.02 21 56.9 4.0
平均 82.1 2.3
0 23 4.5 4.0
　　注:＊AS+BA 2.0+生长素
表 4　不同器官及部位对愈伤组织诱导的影响
器官及部位 总数(个) 愈伤率(%) 色值(度)
嫩叶 27 100 3.0
茎段 31 100 1.2
叶柄 26 100 2.0
2.5　光对愈伤组织诱导的影响
光照对不同外植体愈伤组织形成的影响不一(表 5).在黑暗条件下 ,嫩叶 、茎段 、叶柄的
愈伤率均达 90%以上;色值以茎段 、叶柄最小 ,嫩叶最大.而在光照条件下 ,嫩叶愈伤率只有
22.7%,其颜色加深.光照也同样阻止了茎段 、叶柄的愈伤组织形成.但在该试验的激素水平
下 ,光照不会加深愈伤组织颜色 ,只是使白色愈伤组织产生了叶绿素而变绿 ,这种绿色愈伤
组织转入暗室即变白.
另外 ,暗培养条件促使产生较多的不定根.在光照条件下 ,各器官均未见不定根产生.
18 延　边　大　学　农　学　学　报 第 25卷　
表 5　光对愈伤组织诱导的影响
器官
黑暗
总数
(个)
枯死率
(%)
愈伤率
(%)
色值
(度)
发根率
(%)
光照
总数
(个)
枯死率
(%)
愈伤率
(%)
颜色 发根率
(%)
嫩叶 21 9 91 3.0 85.7 22 77.3 22.7 黑褐 0
茎段 23 4.3 95.7 1.2 47.8 23 10.9 89.1 绿色 0
叶柄 22 9.1 90.9 1.2 59.1 22 69.6 27.3 绿色 0
3　结论
(1)在本试验所采用的 4种基本培养基中 ,以 AS 和 1/2MS的诱导效果最佳.
(2)光对外植体愈伤组织的形成有阻碍作用 ,并易产生黑褐色物质而加深愈伤组织颜色.
(3)叶与其他器官相比 ,其愈伤组织颜色较深 、数量较少 ,且在初代培养时易产生不定根.
(4)本试验中 ,茎段 、叶柄所产生的愈伤组织数量多 、质量好 ,是良好的组培材料.
(5)适当浓度的激素能显著的促进东北刺人参愈伤组织的形成 ,且浓度范围比较广 ,为 2.0
mg/L的 BA 和 0.2 ～ 1.0 m/ L的 NAA.
参考文献:
[ 1] 　何业华.枣树组织培养愈伤组织诱导的研究[ J] .中南林学院学报 ,1997 ,(17)01:13 ～ 18.
[ 2] 　李向高.东北刺人参生药学研究[ J] .吉林农业大学学报 ,1991 ,(13)2:35 ～ 38.
Inducement of calluses in the Tissue Culture of Oplopanax elaus Nakai
JIN Ying-shan , 　CAO Hou-nan , 　LIU Ji-sheng , 　PIAO Ri-zi , 　YIN Ying-min
(Hort iculture Department , Agricul tural Col lege of Yanbian University , Longj ing Ji lin 133400 , China)
Abstract:The inducement conditions of the callus w as studied when different explant cultivated
in different culture medium.The results showed that stem and leafstem were suitable organs for
tissue culture.As or 1/ 2MS add to 20 mg/ L BA and 0.2 ～ 1.0 mg/L NAA could obtain more
and high quility callus;and the callus which from leaf w as dark in color , but less in number , and
easy to produce adventitious roots in their first culture.
Key words:Oplopanax elaus Nakai ;tissue culture;callus;inducement conditions
19　第 1期 金英善 ,等:东北刺人参愈伤组织的诱导