全 文 ：竹节人参皂苷对乙醇致肝细胞 L-O2 损伤的保护作用
李有贵1，2，计东风2，钟 石2，郑贤林2，时连根1
(1． 浙江大学动物科学学院特种经济动物科学系，浙江 杭州 310029;2． 浙江省农业科学院
蚕桑研究所，浙江 杭州 310021)
摘要:目的 考察竹节人参皂苷对乙醇损伤肝细胞 L-O2 的保护作用，并探讨其作用机制。方法 高效
液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)分离纯化竹节人参皂苷，MTT 法测定细胞存活率，分光光度法测
定肝细胞内液丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果
经分离纯化鉴定获得了 6 个竹节人参皂苷单体 Rg1，Re，Rf，F3，Rg2 和 Rd;其中 Rg1 0． 16 g·L
－1，Re 1． 28
g·L －1和 Rf 0． 64 g·L －1可促进正常肝细胞 L-O2 增殖，增殖率分别为 22． 7%，34． 8%和 28． 5%(P ＜ 0． 01) ;Rd
0． 16 g·L －1和 F3 1． 28 g·L
－1对正常肝细胞生长表现出明显的抑制作用，抑制率分别为 49． 7%和 43． 3%(P ＜
0． 01)。Rg1 0． 16 g·L
－1，Re 1． 28 g·L －1和 Rf 0． 64 g·L －1对乙醇 200 mmol·L －1损伤的肝细胞 L-O2 具有明显
的保护作用，对细胞生长的抑制率由乙醇损伤模型组的 50． 4%分别降低为 23． 3%，26． 9%和 26． 6%
(P ＜ 0． 01) ;Rd 0． 16 g·L －1和 F3 1． 28 g·L
－1则加强乙醇对肝细胞的损伤，抑制率高达 83． 2%和64． 8%(P ＜
0． 01)。乙醇损伤模型组肝细胞 L-O2 乙醇代谢产生 MDA 含量升高、SOD 和 GSH-Px 降低;Rg1 0． 16 g·L
－1，
Re 1． 28 g·L －1和 Rf 0． 64 g·L －1可明显改善乙醇损伤导致的肝细胞 L-O2 内 MDA 含量升高，增强 SOD 和
GSH-Px活性(P ＜ 0． 01)。结论 人参皂苷 Rg1，Re 和 Rf 对乙醇损伤肝细胞 L-O2 具有明显的保护作用，抗
氧化活性可能是其发挥保护作用的机制之一。
关键词:竹节人参;皂苷;乙醇;肝细胞;损伤
中图分类号:R285，R963 文献标志码:A 文章编号:1000-3002(2011)03-0289-07
DOI:10． 3867 / j． issn． 1000-3002． 2011． 03． 014
竹节人参(Panax japonicus C． A． Mey)系五加科
植物，为《中国药典》收载的名贵常用中药，其主要
化学成分为竹节人参皂苷［1 － 2］，具有保护乙醇性胃
黏膜损伤和抗氧化等多方面的作用 ［3 － 4］。近年来，
本课题组研究发现，人工栽培竹节人参总皂苷具有
显著的体外清除自由基的作用［5］，可降低乙醇性肝
损伤小鼠血清和肝组织中丙二醛(malondialdehyde，
MDA)含量，提高谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione
peroxidase，GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide
dismutase，SOD)活性;细胞实验研究发现，其可通过
上调 GPX3，SOD1 和 SOD3 的 mRNA 水平，从而发
挥抗氧化作用［5］。但竹节人参皂苷单体对乙醇性
肝细胞损伤的作用尚未见报道。因此，本研究对通
过高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)
分离纯化得到的纯度大于98%的竹节人参皂苷
基金项目:浙江省科技厅基金资助项目(2004C32077)
作者简介:李有贵(1980 －) ，男，助理研究员，主要从事
天然药物药理学研究。
通讯作者:时连根，E-mail:slgsilk@ zju． edu． cn，Tel:
(0571)86971723
单体，观察其对人源性肝细胞 L-O2 的生长、细胞内
MDA含量及 GSH-Px 和 SOD活性的影响，探讨竹节
人参皂苷对乙醇损伤肝细胞的保护作用及可能的作
用机制，为竹节人参的开发利用提供科学依据。
1 材料与方法
1． 1 细胞株、试剂和仪器
人胚肝细胞 L-O2，中国科学院上海生物化学
与细胞生物学研究所。噻唑蓝(MTT)和二甲亚砜
(DMSO) ，美国 Sigma公司;RPMI 1640 培养基，美国
Gibco BRL 公司;胎牛血清(fetal bovine serum，
FBS) ，杭州四季青生物材料研究所;胰蛋白酶和磷
酸盐缓冲液，美国 Amresco 公司;MDA 含量、SOD 和
GSH-Px活性测定试剂盒，南京建成生物工程研究
所(批号 20100520)。CO2 培养箱，美国 Thermo 公
司;Leica-DM2500 正置显微镜，德国 Leica 公司;
Nikon-TS100 型倒置光学显微镜，日本 Nikon 公司;
Infinite M200 酶标仪，瑞士 TECAN 公司;超低温冰
箱，日本 Sanyo公司;96 和 6 孔培养板，美国 Corning
公司;Agilent 1200 液相系统，包括四元泵，自动进样
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器，自动收集器，真空脱气机，蒸发光散射检测器
(Sedex 85) ，法国 Sedere 公司;操作软件为 Agilent
chemstation，美国 Agilent 公司;micrOTOF QⅡ型质
谱仪，德国 Bruker Daltonics 公司。针式过滤器，美
国 Pall公司。
1． 2 竹节人参总皂苷的提取
竹节人参采自浙江临安青凉峰自然保护区人工
种植的 3 年生根茎，由浙江省农业科学院农信所洪
林副研究员鉴定，65℃干燥，常温粉碎过 120 目筛备
用。准确称取竹节人参粉末 10 g，加入乙醚(料液
比 1 g∶ 40 ml) ，超声波提取4 h，弃去乙醚液，取残渣
挥发乙醚，加甲醇(料液比 1 g∶ 40 ml)超声波提取
4 h，取甲醇提取液，挥发干燥。提取物加去离子水
50 ml溶解后置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇萃取
5 次，每次 30 ml，合并正丁醇萃取液。正丁醇萃取
液先用 1%氢氧化钠溶液洗涤 3 次，每次 50 ml，弃
去碱液，再用正丁醇洗涤 3 次，每次 50 ml，弃去水
液。取正丁醇萃取液，蒸干，加甲醇溶解，即得竹节
人参总皂苷粗提液［6］。
1． 3 竹节人参皂苷的纯化及质谱分析
竹节人参总皂苷粗提液过0． 45 μm过滤器，滤过
液上机进行 HPLC 分离。色谱柱:ZORBAX SB-C18
(150 mm ×2． 1 mm，5 μm) ;柱温:35℃;流动相:0． 1%
醋酸水溶液 (A)和乙腈(B) ，梯度洗脱〔(0 ～ 20 min，
(17% ～20%)B;20 ～21 min，(20% ～24%)B;21 ～30
min，(24% ～ 29%)B;30 ～ 40 min，(29% ～ 33%)B;
40 ～45 min，(33% ～ 41%)B;45 ～ 57 min，(41% ～
55%)B;57 ～ 58 min，(55% ～ 90%)B;58 ～ 63 min，
95% B;63 ～ 64 min，(95% ～ 17%)B;64 ～ 70 min，
17% B〕，流速 0． 6 ml·min －1，蒸发光散射检测器，蒸
发温度 40℃，载气为压缩空气，压力 0． 34 MPa，增益
系数为 1。对每一个皂苷组分进行自动收集，同时进
行质谱分析。
质谱分析条件:micrOTOF QⅡ型质谱仪采用
ESI离子源;扫描方式:负离子;流速 0． 3 ml·min －1;
喷雾气体 60 kPa及干燥气体(6． 0 L·min －1)均为氮
气(N2) ;干燥温度 220℃;毛细管电压 3500 V，毛细
管出口电压 － 170． 0 V;以氩气作为碰撞气体对各个
物质进行碰撞诱导解离电压在 30 ～ 50 eV 间变化，
扫描质荷比(mass-to-charge ratio，m/z)范围为 50 ～
3000。
1． 4 竹节人参皂苷样品溶液的制备
精密称取纯化的竹节人参皂苷 Rg1，Re，Rf，
F3，Rg2 和 Rd，用无血清培养液(含 0． 1% DMSO)
溶解后，依次稀释配制成 0． 32，0． 64，1． 28，2． 56 和
5． 12 g·L －1梯度的样品溶液，针式过滤器除菌后使
用，现配现用。
1． 5 细胞培养
人胚肝细胞 L-O2 采用 RPMI 1640 培养基(加
10%灭活 FBS，不含抗生素)置于 37℃，5% CO2 培
养箱中饱和湿度培养，2 d 换液 1 次。实验中所用
细胞均处于对数生长期，活细胞数大于 95%。
1． 6 MTT法检测 L-O2 细胞存活率
取对数生长期细胞 L-O2 经胰酶消化后，用
RPMI 1640 培养液吹打配成细胞 1 × 108 L －1悬液，
加入 96 孔培养板，每孔 100 μl，在 5% CO2，37℃培
养箱中培养 24 h。待细胞完全贴壁后，分别加入 6
种人参皂苷 100 μl，终浓度分别为 0． 16，0． 32，0． 64
和 1． 28 g·L －1，每组 8 孔;正常对照孔(含细胞 100
μl)加入含 0． 1% DMSO 的无血清培养液 100 μl;空
白对照孔(不含细胞)加入等量的含人参皂苷无血
清培养液，用于 MTT测定调零。培养箱中孵育 48 h
后，加入 20 μl MTT 5 g·L －1，继续培养 4 h，去上清
液，加入 DMSO 150 μl，在摇床上振动摇匀，在酶标
仪 570 nm波长下测得各孔吸光度(absorbance，A)
值。实验重复 3 次。按下式计算肝细胞的存活率。
存活率(%) = (实验组 A570 nm －正常对照组 A570 nm)/
正常对照组 A570 nm × 100%。
1． 7 选择损伤人胚肝细胞 L-O2 乙醇浓度
在 96 孔培养板中加入 1 × 108 L －1 L-O2 细胞悬
液，每孔 100 μl。待细胞完全贴壁后，实验孔分别加
入 100 μl 乙醇溶液，终浓度分别为 25，50，75，
100，200，400 和 800 mmol·L －1，正常对照孔加入
含 0． 1%DMSO的无血清培养液 100 μl，空白对照孔
加入等量的含人参皂苷无血清培养液。每组 8 孔。
培养箱中孵育48 h后，按 1． 6 方法测定各孔 A 值。
按下式计算对肝细胞的抑制率。抑制率(%) =
(正常对照组 A570 nm －实验组 A570 nm)/ 正常对照组
A570 nm × 100%，以确定损伤 L-O2 细胞的乙醇浓度。
1． 8 乙醇损伤的人胚肝细胞 L-O2 存活的测定
在 96 孔培养板中加入 L-O2 细胞 1 × 108 L －1悬
液 100 μl。待细胞完全贴壁后，实验孔加入 50 μl
乙醇溶液，终浓度为 200 mmol·L －1，同时加入 50 μl
竹节人参皂苷样品液，终浓度分别为 0． 16，0． 32，
0． 64 和 1． 28 g·L －1，每个浓度设 8 个复孔，并设正
常对照组(细胞，未加乙醇)、乙醇损伤模型组(细
胞，加乙醇，不加药物)和空白对照孔(不含细胞，用
于 MTT测定调零)。培养箱孵育 48 h，按 1． 6 方法
测定各孔 A 值。按 1． 7 方法计算对肝细胞的抑制
率。
·092· 中国药理学与毒理学杂志 2011 年 6 月第 25 卷第 3 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 25，No 3，Jun 2011
1． 9 肝细胞 L-O2 MDA 含量、SOD 活性和
GSH-Px活性的测定
取对数生长期的细胞经胰酶消化后，分别用
RPMI 1640 培养液吹打制成细胞 1 × 109 L －1悬液，
分别加入 24 孔培养板，在 5% CO2，37℃培养箱培养
24 h，待细胞完全贴壁后，按 1． 8 方法加入乙醇终浓
度 200 mmol·L －1和 Rg1 0． 16，Rf 0． 64 和 Re 1． 28
g·L －1，每个浓度设 4 个复孔，并设正常对照组(细
胞未加乙醇)和乙醇损伤模型组(细胞加乙醇，不加
药物)。培养箱孵育 48 h 后收集细胞，用生理盐水
配置成相同细胞浓度，超声波破碎后，按 MDA，SOD
和 GSH-Px测定试剂盒方法测定 MDA含量、SOD 活
性和 GSH-Px活性。
1． 10 统计学分析
实验结果数据以 珋x ± s 表示，采用 SPSS 12． 0 软
件多重方差分析进行组间比较。
2 结果
2． 1 竹节人参皂苷的组成和结构鉴定
由图 1 所示，从人工种植的竹节人参中分离获
得 6 个皂苷组分，通过标准品比对，结合高效液相色
谱-电喷雾电离-质谱(high performance liquid chro-
matography-electrospray ionization-mass spectroscope，
HPLC-ESI-MS)分析，认为分别是 Rg1，Re，Rf，F3，
Rg2 和 Rd，其分子结构图及基团见图 2 和表 1，
ESI-MS和相应的碰撞诱导解离(collision induced
dissociation，CID)数据见表 2，其中 ESI-MS-CID图谱
以 Re为例(图 3)。
利用四级杆飞行时间质谱分析(以人参皂苷
Re为例) ，在ESI / MS一级质谱检测中，加合离子
图 1 高效液相色谱-电喷雾电离-质谱分析竹节人参皂苷粗
提物． 峰 1:Rg1;峰 2:Re;峰 3:Rf ;峰 4:F3;峰 5:Rg2;峰 6:Rd．
Fig． 1 High performance liquid chromatography-electros-
pray ionization-mass spectroscope profile of saponins from
P． japonicus．
图 2 竹节人参皂苷的化学结构式． R1，R2 和 R3 见表 1．
Fig． 2 Chemical structures of saponins from P． japonicus．
［M-H］－为人参皂苷-氢离子、［M + AcO］－为人参皂
苷 +醋酸根，即 m/z 945，1005． 5 分别代表 Re的 945
［M-H］－和 1005． 5［M + AcO］－;在(-)-ESI /MS 二
级质谱检测中，负离子 CID 产生系列脱糖碎片离
子，m/z 945，799，783，637 和 475 分别代表 Re 的
945［M-H］－，799［M-Rha-H］－，783［M-Glc-H］－，
637［M-Glc-Rha-H］－和 475［M-2Glc-Rha-H］。
表 1 竹节人参皂苷结构式基团
Tab． 1 Structural information on saponins from P． japonicus
人参皂苷 R1 R2 R3 相对分子质量 分子式
Rg1 H Glc-O- Glc- 800 C42H72O14
Re H Rha-Glc-O- Glc- 946 C48H82O18
Rf H Glc-Glc-O- H 800 C42H72O14
F3 H HO- Ara-Glc- 770 C41H70O13
Rg2 H Rha-Glc-O- H 784 C42H72O13
Rd Glc-Glc- H Glc- 946 C48H82O18
Glc:β-D-葡萄糖;Ara:阿拉伯糖;Rha:鼠李糖．
·192·中国药理学与毒理学杂志 2011 年 6 月第 25 卷第 3 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 25，No 3，Jun 2011
表 2 电喷雾电离-质谱(ESI-MS)和碰撞诱导解离(CID)竹节人参皂苷分析结构
Tab． 2 Electrospray ionization-mass spectroscope (ESI-MS)and corresponding collision induced dissociation (CID)data in
the negative ion mode of saponins from P． japonicus
人参皂苷
保留时间 /
min
［M + AcO］－
(m/z)
［M-H］－
(m/z)
CID
(m/z)
Rg1 16． 679 859 799 637［M-Glc-H］－，475［M-2Glc-H］－
Re 17． 631 1005 945 799［M-Rha-H］
－，783［M-Glc-H］－，637［M-Glc-Rha-H］－，475
［M-2Glc-Rha-H］－
Rf 28． 663 859 799 637［M-Glc-H］－，475［M-2Glc-H］－
F3 30． 259 829 769 637［M-Ara-H］－，475［M-Glc-Ara-H］－
Rg2 32． 087 843 783 637［M-Rha-H］－，475［M-Glc-Rha-H］－
Rd 40． 512 1005 945 783［M-Glc-H］－，621［M-2Glc-H］－，459［M-3Glc-H］－
图 3 人参皂苷 Re ESI-MS 图谱(A)和 CID 图谱(B)．
Fig． 3 ESI-MS spectrum (A)and CID spectrum (B)of
saponin Re from P． japonicus obtained in the negative ion
mode．
2． 2 竹节人参皂苷对正常人胚肝细胞 L-O2 增殖
的影响
由图 4可知，不同竹节人参皂苷单体与细胞 L-O2
共孵育 48 h，其对正常 L-O2 细胞增殖的影响明显不
同，其中 Rg1 和 Re 表现出明显的促肝细胞 L-O2 增
殖的作用 (P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01) ;Rf 浓度在
0． 16 ～ 0． 64 g·L －1时具有促肝细胞 L-O2 增殖的作
用，其中 Rf 0． 64 g·L －1组细胞增殖率达 28． 5%
(P ＜ 0． 01) ，但随着浓度的升高则表现出一定的抑
制作用(P ＜ 0． 05) ;Rd在浓度高于0． 16 g·L －1时，
图 4 竹节人参皂苷对正常人胚肝细胞 L-O2 增殖的影响．
于对数生长期的人胚肝细胞分别加入不同浓度的人参皂苷，正常对
照孔加入等量含 0． 1%DMSO的无血清培养液，培养 48 h 后用 MTT
法测定 A570 nm ． 珋x ± s，n = 8． * P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01，与正常对照组
(0)比较．
Fig． 4 Effect of saponins from P． japonicus on normal
L-O2 cells．
具有明显的抑制肝细胞 L-O2 增殖的作用，Rd 0． 16
g·L －1时抑制率高达 49． 7%(P ＜ 0． 01) ;F3 ＞ 0． 64
g·L －1时则显著抑制细胞 L-O2 生长(P ＜ 0． 01) ，F3
0． 64 g·L －1时抑制率达 31． 1%;Rg2 0． 16 ～ 1． 28
g·L －1对肝细胞 L-O2 则无明显作用。
2． 3 竹节人参皂苷对乙醇损伤肝细胞的保护作用
当乙醇浓度较低时(＜ 50 mmol·L －1) ，其对肝
细胞 L-O2 并不表现出抑制作用，相反可以促进细
胞增殖，可能是由于细胞 L-O2 以乙醇作为能量从
而加速了细胞增殖;随着浓度的不断升高，乙醇对细
胞 L-O2 表现出明显的抑制作用，其 IC50约为 200
mmol·L －1 (图 5)。因此，本研究采用乙醇 200
mmol·L －1制备乙醇损伤细胞模型。
·292· 中国药理学与毒理学杂志 2011 年 6 月第 25 卷第 3 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 25，No 3，Jun 2011
图 5 乙醇对人胚肝细胞 L-O2 的损伤． 于对数生长期的人胚
肝细胞分别加入乙醇 50 ～ 1600 mmol·L －1，培养 48 h． 珋x ± s，n = 8．
Fig． 5 Injury to L-O2 cells induced by ethanol．
由图 6 可知，不同竹节人参皂苷单体对乙醇损
伤肝细胞 L-O2 的作用不同，其中在 Rg1 和 F30． 16
g·L －1时可显著降低乙醇对细胞 L-O2 的损伤(P ＜
0． 01) ，但随浓度的增加其保护作用逐渐降低;
Rf ＜ 0． 64 g·L －1时对乙醇损伤肝细胞L-O2的保护
图 6 竹节人参皂苷对乙醇损伤肝细胞 L-O2 的保护作用．
于对数生长期的人胚肝细胞分别加入乙醇溶液终浓度为 200 mmol·L －1，
同时分别加入终浓度为0． 16 ～1． 28 g·L －1竹节人参皂苷，培养 48 h后用
MTT法测定 A570 nm． 珋x ± s，n = 8． ＊＊ P ＜ 0． 01，与正常对照组比较;
#P ＜0．05，##P ＜0． 01，与乙醇损伤模型组(0)比较．
Fig． 6 Protective effect of saponins from P． japonicus
against ethanol-induced cytotoxicity on L-O2 cells．
作用逐渐增大，但 Rf ＞ 0． 64 g·L －1时则表现出明显
的毒性作用(P ＜ 0． 01) ;Re 0． 16 ～ 1． 28 g·L －1可减
轻乙醇对肝细胞 L-O2 的抑制，对乙醇损伤肝细胞
L-O2 具有明显的保护作用(P ＜ 0． 01) ;Rg2 对乙醇
损伤肝细胞 L-O2 无明显影响;Rd 则可增强乙醇对
肝细胞 L-O2 的损伤(P ＜ 0． 01) ，Rd 浓度 ＞ 0． 32
g·L －1时，可使细胞 L-O2 几乎全部死亡。
2． 4 竹节人参皂苷 Rg1，Rf 和 Re 对肝细胞 L-O2
内液MDA含量、SOD和 GSH-Px活性的影响
根据上述结果筛选出对乙醇损伤肝细胞具有一
定保护作用的竹节人参皂苷 Rg1，Rf 和 Re，进一步
测定其对肝细胞 L-O2 MDA 含量、SOD 和 GSH-Px
活性的影响，发现 Rg1 0． 16 g·L
－1，Re 1． 28 g·L －1
和 Rf 0． 64 g·L －1具有明显的抗氧化作用，能够清除
肝细胞内乙醇代谢产生的 MDA，增加 SOD 和
GSH-Px的活性(表 5)。
3 讨论
肝脏作为体内乙醇代谢的最主要器官，主要通
过乙醇脱氢酶和微粒体乙醇氧化酶系统进行氧化代
谢。乙醇在肝细胞内通过细胞色素 P450CYP2E1 在
铁离子参与下氧化成为乙醛，同时产生大量的氧应
激产物如 OH －，O2
÷和 H2O2 等自由基，这些自由基
可激活磷脂酶及脂质过氧化反应来降低膜磷脂，改
变其通透性和流动性，从而改变与膜结合的酶、受体
和离子通道的微环境，影响其功能［7 － 9］。本研究发
现，乙醇与人胚肝细胞 L-O2 共孵育，当乙醇的浓度
较低时(＜ 50 mmol·L －1) ，其对 L-O2 细胞存活并不
表现出抑制作用，相反可以促进细胞增殖，这可能是
由于 L-O2 细胞以乙醇作为能量从而加速了细胞增
殖;随着乙醇浓度的不断升高，乙醇对 L-O2 细胞
存活表现出明显的抑制作用，推测乙醇可能在代谢
表 5 竹节人参皂苷 Rg1，Rf和 Re对肝细胞 L-O2 内丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘肽过氧化物酶
(GSH-Px)活性的影响
Tab． 5 Effect of saponins Rg1，Rf and Re from P． japonicus on the malondialdehyde (MDA)level，superoxide dismutase
(SOD)and glutathione peroxidase (GSH-Px)activities in ethanol-induced hepatic cells L-O2
组别 MDA/mmol·L －1 SOD /kU·L －1 GSH-Px /kU·L －1
正常对照 0． 98 ± 0． 05 51． 1 ± 4． 0 158． 3 ± 7． 5
乙醇模型 1． 35 ± 0． 05＊＊ 26． 4 ± 2． 8＊＊ 67． 0 ± 4． 3＊＊
乙醇 + Rg1 0． 16 1． 17 ± 0． 04＊＊## 38． 3 ± 4． 8＊＊## 86． 3 ± 5． 7＊＊##
乙醇 + Rf 0． 64 1． 21 ± 0． 03＊＊## 35． 6 ± 4． 4＊＊## 78． 4 ± 3． 5＊＊##
乙醇 + Re 1． 28 1． 21 ± 0． 05＊＊## 39． 0 ± 3． 3＊＊## 84． 2 ± 4． 4＊＊##
细胞处理见图 6． 珋x ± s，n = 4． ＊＊P ＜ 0． 01，与正常对照组比较;##P ＜ 0． 01，与模型组比较．
·392·中国药理学与毒理学杂志 2011 年 6 月第 25 卷第 3 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 25，No 3，Jun 2011
过程中产生了大量的氧应激产物，从而影响了细胞
的生长和增殖。
有研究表明，一定剂量的竹节参总皂苷可显著
提高运动后小鼠肝脏和脑组织中 SOD 和 GSH 活
性，降低 MDA 含量，能直接清除自由基，并抑制脂
质过氧化作用，表明竹节人参总皂苷能促进机体内
源性抗氧化物质的产生，抑制 MDA 生成，是具有开
发价值的天然抗氧化产物［10］。刘红等［11 － 13］通过脂
质过氧化产物含量、MDA 含量、前列腺素 E2 含量、
SOD活性、GSH-Px活性和乳酸脱氢酶活性等指标测
定，发现竹节人参提取物能通过消除和抑制大、小鼠
体内氧自由基的产生，提高组织的抗氧化能力，对
胃、脑和心肌等组织器官缺血再灌注损伤起到保护
作用。
本研究应用 HPLC-ELSD 从竹节人参总皂苷分
离纯化获得了 6 个人参皂苷单体，应用 ESI-MS鉴定
其为 Rg1，Re，Rf，F3，Rg2 和 Rd;通过不同竹节人
参皂苷单体与正常肝细胞 L-O2 共孵育 48 h，测定发
现竹节人参皂苷单体 Rg1 和 Re 表现出明显的促进
L-O2 细胞增殖的作用;Rf ＜ 0． 64 g·L －1时具有促进
肝细胞 L-O2 增殖的作用，随着浓度的增加表现出
一定的毒性作用;在浓度 ＞ 0． 16 g·L －1时，Rd 具有
显著的抑制 L-O2 细胞增殖的作用，且 Rd 0． 16
g·L －1时抑制率高达49． 7%;F3 在浓度高于 0． 64
g·L －1时则显著抑制L-O2生长，抑制率达 43． 3%;
Rg2 0． 16 ～ 1． 28 g·L
－1对肝细胞 L-O2 则无明显作
用。同时研究发现，Re对乙醇损伤的L-O2细胞具有
明显的保护作用;Rf ＜ 0． 64 g·L －1时对乙醇损伤的
L-O2 细胞具有明显的保护作用，但 Rf ＞ 0． 64 g·L －1
时则表现出明显的毒性作用;在 Rg1 和 F3 0． 16
g·L －1时可降低乙醇对肝细胞 L-O2 损伤，但随着剂
量增加则表现出一定的毒性;Rg2 对乙醇损伤的肝
细胞 L-O2 无明显保护作用，但亦未表现出明显的
毒性作用;Rd则可加强乙醇对 L-O2 细胞的损伤，在
浓度大于 0． 32 g·L －1时，可使 L-O2 细胞几乎全部死
亡。分析肝细胞内液相关生化指标 MDA，SOD 和
GSH-Px发现，Rg1，Rf 和 Re 具有明显的抗氧化性
能，能够清除肝细胞内乙醇代谢产生的 MDA，提高
抗氧化酶 SOD 和 GSH-Px 的活性，这可能是其保护
乙醇性L-O2细胞损伤的一个重要原因。不同人参
皂苷单体对乙醇损伤肝细胞的保护作用有待进一步
研究。
志谢:本课题中竹节人参皂苷分离和质谱分析得到华东师
范大学脑功能基因组学教育部重点实验室胡金锋和赵芸老
师的帮助。
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·492· 中国药理学与毒理学杂志 2011 年 6 月第 25 卷第 3 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 25，No 3，Jun 2011
Protective effect of saponins extracted from Panax japonicus
on ethanol-induced hepatic cells L-O2 injury
LI You-gui1，2，JI Dong-feng2，ZHONG Shi2，ZHENG Xian-lin2，SHI Lian-gen1
(1． Department of Special Animal Science，College of Animal Science，Zhejiang University，
Hangzhou 310029，China;2． Sericultural Research Institute，Zhejiang Academy of
Agricultural Sciences，Hangzhou 310021，China)
Abstract:OBJECTIVE To study the protective effect of saponins from Panax japonicus
against ethanol-induced hepatic cells L-O2 injury and their possible mechanisms． METHODS
Saponins from P． japonicus was purified by HPLC-evaporation light scattering detection (ELSD)．
The survival rate of hepatic cells was determined by MTT assay． The level of malondialdehyde
(MDA) ，the activities of superoxide dismutase (SOD)and glutathione peroxidase (GSH-Px)in
L-O2 cells were measured by spectrophotometer． RESULTS Six major saponins from P． japonicus
were identified by HPLC-ESI-MS:ginsenosides Rg1，Re，Rf，F3，Rg2 and Rd． Rg1 0． 16 g·L
－1，
Re 1． 28 g·L －1 and Rf 0． 64 g·L －1 could promote normal cells L-O2 proliferation(P ＜0． 01) ，at the
rate of 22． 7%，34． 8% and 28． 5%，respectively． Rd 0． 16 g·L －1 and F3 1． 28 g·L
－1 showed
evident inhibition to normal cells L-O2(P ＜ 0． 01) ，at the rate of 49． 7% and 43． 3% ． Rg1 0． 16
g·L －1，Re 1． 28 g·L －1 and Rf 0． 64 g·L －1 also showed significantly protection against ethanol-in-
duced hepatic cells L-O2 injury(P ＜ 0． 01)． The rate of inhibition decreased to 23． 3%，26． 9%
and 26． 6% compared with the ethanol-induced model control，the inhibition rate of which was
50． 4% ． Rd 0． 16 g·L －1 and F3 1． 28 g·L
－1 showed more evident toxicity to ethanol-induced hepatic
cells L-O2． The inhibition rate was 83． 2% and 64． 8% (P ＜0． 01) ，respectively． Meanwhile，the
content of MDA and the activity of SOD and GSH-Px in ethanol-induced L-O2 cells were (1． 35 ±
0． 05)mmol·L －1，(26． 4 ± 2． 8)kU·L －1 and (67． 0 ± 4． 3)kU·L －1，respectively． Rg1 0． 16 g·L
－1，
Re 1． 28 g·L －1 and Rf 0． 64 g·L －1 could decrease the level of intracellular MDA to (1． 17 ± 0． 04) ，
(1． 21 ± 0． 03)and (1． 21 ± 0． 05)mmol·L －1(P ＜0． 01) ，increase the activity of intracellular SOD
and GSH-Px activity to 38． 3 ± 4． 8，35． 6 ± 4． 4 and (39． 0 ± 3． 3)kU·L －1(P ＜ 0． 01) ，and
86． 3 ± 5． 7，78． 4 ± 3． 5 and (84． 2 ± 4． 4)kU·L －1(P ＜ 0． 01) ，respectively． CONCLUSION
Rg1，Re and Rf have evidently protective effect against ethanol-induced hepatic cells L-O2 injury．
The possible mechanism may be related to the decline of MDA content and increase in antioxidant
enzymes such as SOD and GSH-Px activities．
Key words:Panax japonicus;saponins;ethanol;hepatocytes;injuries
Foundation item:The project supported by Science and Technology Bureau Foundation of Zhejiang Province (2004C32077)
Corresponding author:SHI Lian-gen，E-mail:liangen_shi@ 126． com，Tel: (0571)86971723
(收稿日期:2011-01-04 接受日期:2011-03-07)
(本文编辑:齐春会)
·592·中国药理学与毒理学杂志 2011 年 6 月第 25 卷第 3 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 25，No 3，Jun 2011